一種菜粕中提取的芥子油甙的精製方法

2023-04-24 09:19:46 1

專利名稱：一種菜粕中提取的芥子油甙的精製方法
技術領域：
本發明涉及一種菜粕中提取的芥子油甙的精製方法。
背景技術：
芥子油甙(glucosinolates，GLS)是油菜、芥菜等十字花科植物中一類重要的次生代謝產物，目前已經報導的芥子油甙超過120種。研究表明，芥子油甙及其降解產物具有形成獨特風味、抑制雜草及病蟲害、抗腫瘤等有效功能，因而近年來對芥子油甙及其降解產物的研究已引起人們的廣泛關注。但由於芥子油甙種類繁多，導致其單體很難分離。吳謀成等用弱離子交換劑DEAE即Spehadx A-25陰離子交換樹脂作固定相，K2SO4作流動相，採用自動柱色譜儀分離製備非吲哚類硫代葡萄糖苷和吲哚類硫代葡萄糖苷結晶粗品，並從非吲哚類硫代葡萄糖苷結晶粗品中進一步分離和純化，製得2-羥基-3- 丁烯基硫代葡糖糖苷和3- 丁烯基硫代葡萄糖苷的鉀鹽晶體。目前，從菜粕中提取的芥子油甙都是粗提物，附加值低，應用受到限制。

發明內容
本發明是為了克服現有技術中的不足之處，提供一種菜粕中提取的芥子油甙的精製方法，為芥子油甙的分離提純提供一種新的途徑，提高芥子油甙的純度，擴大芥子油甙的應用。本發明通過下述技術方案實現一種菜粕中提取的芥子油甙的精製方法，其特徵在於，包括下述步驟(DD201GF樹脂的預處理將D201GF樹脂用質量百分比濃度為4%的HCl溶液浸泡4h，之後，將HCl溶液浸泡後的D201GF樹脂水洗至pH值為2_3，再用質量百分比濃度為 2%的NaOH溶液浸泡4h，之後將NaOH溶液浸泡後的D201GF樹脂水洗至pH值為8_10，備用；(2)精製將菜粕以80%甲醇為提取劑，在70°C提取4h，料液比為1 10，製成含有芥子油甙的初提液，之後過濾除去雜質，收集濾液；用濾紙吸乾步驟(1)預處理後的 D201GF樹脂表面，加入到上述收集的含有芥子油甙的濾液中，50°C水浴加熱條件下磁力攪拌4h使樹脂充分吸附芥子油甙；靜置分層，取上清液加入顯色液，震動搖勻，再加入蒸餾水製成上清液的濃度為2. 22%的溶液，之後放入沸水浴中加熱30min，取出，冷水浴冷卻至室溫，得到已經充分吸附芥子油甙的D201GF樹脂；其中，D201GF樹脂與含有芥子油甙的濾液的質量體積比為1 20;(3)芥子油甙的洗脫向步驟(2)得到的已經充分吸附芥子油甙的D201GF樹脂中加入濃度為lmol/L的NaCl溶液，攪拌30分鐘進行洗脫，洗脫液即為芥子油甙的提取物。本發明具有下述技術效果本發明的方法能夠對菜粕中提取的芥子油甙進行精製，為芥子油甙的純化提供了一種新的途徑，產品純度高，附加值高，應用範圍廣。而且，原料來源廣泛，價格低廉，降低了芥子油甙的提取純化成本，為芥子油甙的普通應用提供了可能性。
具體實施例方式以下結合具體實施例對本發明進行詳細說明。實施例(DD201GF樹脂的預處理將D201GF樹脂用質量百分比濃度為4%的HCl溶液浸泡4h，之後，將HCl溶液浸泡後的D201GF樹脂用水洗至pH為2_3，再用質量百分比濃度為 2%的NaOH溶液浸泡4h，之後將NaOH溶液浸泡後的D201GF樹脂水洗至pH為8_10，備用。(2)精製將菜粕以80%甲醇為提取劑，70°C提取4h，菜粕與80%甲醇的質量比為1 10，製成含有芥子油甙的初提液，之後過濾除去雜質，收集濾液；用濾紙吸乾步驟(1) 預處理後的D201GF樹脂表面，加入上述收集的含有芥子油甙的濾液中，50°C水浴加熱條件下磁力攪拌4h使樹脂充分吸附芥子油甙。靜置分層，取其ImL上清液於50mL容量瓶內，加入5mL顯色液，震動搖勻，蒸餾水定容至刻度，在沸水浴中加熱30min，取出，冷水浴冷卻至室溫，得到已經充分吸附芥子油甙的D201GF樹脂。(3)芥子油甙的洗脫將已經充分吸附芥子油甙的D201GF樹脂2g置於IOOmL三角瓶中，加入濃度為 lmol/L的NaCl溶液50mL，攪拌30分鐘進行洗脫，洗脫液即為芥子油甙的提取物。高效液相色譜法分析芥子油甙提取物1、流動相的製備稱量三乙胺0. 5060g，加適量蒸餾水溶解，用50mL容量瓶，加蒸餾水定容，搖勻，即配得0. lmol/L三乙胺溶液。吸取5mL三乙胺溶液於棕色試劑瓶中，加入500mL甲醇與水比例為1 9的混合液。同樣方法再配製甲醇與水比例為3 7的流動相。兩瓶流動相均用 0. 45 μ m的濾膜過濾，備用。2、色譜分析取樣品(即洗脫液，也即是精製後的芥子油甙提取物)稀釋10倍後，用0.45 μ m 的濾膜濾過，備用。HPLC 系統條件高壓泵waters 510HPLC Pump ；進樣系統waters TIT Plus 自動進樣器和六通閥手動進樣器；色譜柱Supelco Discovery C18 4. 6 X 250mm Column (5 μ m catalog No. 504971)；檢測器=Waters 486可調波長紫外檢測器；數據處理系統 Millenium32 Chromatography Manager ；柱溫30°C;流動相為甲醇水=3 7，含0. Imol/ L三乙胺；甲醇水=1 9，含0. lmol/L三乙胺；檢測波長230nm。用超純水和流動相洗色譜柱，待基線穩定，開始進樣10 P L，採集色譜峰。通過靜態樹脂法對芥子油甙提取液進行純化分離，表明D201GF樹脂對芥子油甙的最大飽和吸附量為35. 57 μ mol/g。
權利要求
1. 一種菜粕中提取的芥子油甙的精製方法，其特徵在於，包括下述步驟 (1) D201GF樹脂的預處理將D201GF樹脂用質量百分比濃度為4%的HCl溶液浸泡4h， 之後，將HCl溶液浸泡後的D201GF樹脂水洗至pH值為2_3，再用質量百分比濃度為2%的 NaOH溶液浸泡4h，之後將NaOH溶液浸泡後的D201GF樹脂水洗至pH值為8_10，備用；⑵精製將菜粕以80%甲醇為提取劑，在70°C提取4h，料液比為1 10，製成含有芥子油甙的初提液，之後過濾除去雜質，收集濾液；用濾紙吸乾步驟(1)預處理後的D201GF樹脂表面，加入到上述收集的含有芥子油甙的濾液中，50°C水浴加熱條件下磁力攪拌4h使樹脂充分吸附芥子油甙；靜置分層，取上清液加入顯色液，震動搖勻，再加入蒸餾水製成上清液的濃度為2. 22 %的溶液，之後放入沸水浴中加熱30min，取出，冷水浴冷卻至室溫，得到已經充分吸附芥子油甙的D201GF樹脂；其中，D201GF樹脂與含有芥子油甙的濾液的質量體積比為1 20;(3)芥子油甙的洗脫向步驟(2)得到的已經充分吸附芥子油甙的D201GF樹脂中加入濃度為lmol/L的NaCl溶液，攪拌30分鐘進行洗脫，洗脫液即為芥子油甙的提取物。
全文摘要
本發明公開了一種菜粕中提取的芥子油甙的精製方法，為芥子油甙的分離提純提供一種新的途徑，提高芥子油甙的純度，擴大芥子油甙的應用範圍。將D201GF樹脂用4％的HCl溶液浸泡4h，水洗至pH值為2-3，再用2％的NaOH溶液浸泡4h，水洗至pH值為8-10。將菜粕以80％甲醇為提取劑，在70℃提取4h，過濾收集濾液；用濾紙吸乾D201GF樹脂表面，加入到收集的含有芥子油甙的濾液中，50℃水浴加熱條件下磁力攪拌4h，靜置分層，取上清液加入顯色液，震動搖勻，再加入蒸餾水製成上清液的濃度為2.22％的溶液，放入沸水浴中加熱30min，冷水浴冷卻至室溫，得到已經充分吸附芥子油甙的D201GF樹脂；向D201GF樹脂中加入濃度為1mol/L的NaCl溶液洗脫。
文檔編號C07H15/18GK102286029SQ20111024721
公開日2011年12月21日 申請日期2011年8月24日 優先權日2011年8月24日
發明者卜路霞, 李建穎, 石軍, 董東英, 趙彥巧 申請人:天津商業大學