一種鼠疫菌f1抗原膠體金檢測試紙條的製作方法

2023-05-14 04:02:46

專利名稱：一種鼠疫菌f1抗原膠體金檢測試紙條的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物檢測領域，具體涉及一種鼠疫菌F1抗原檢測試紙條及其應用。
背景技術：
目前檢測鼠疫菌抗原的方法有多種如(1)細菌培養，根據細菌的形態、菌落的特徵、噬菌體試驗及對小鼠致病性進行鼠疫菌的檢測，該方法操作複雜、繁瑣、時間長。(2)按臨床病型取樣進行塗片，用抗體螢光染色法檢測抗原，該方法需要螢光顯微鏡。(3)反向血凝集試驗(RIHA)用於疫源地區鼠疫抗原的檢測，2小時出結果，但敏感性差不如螢光方法。(4)酶聯免疫吸附試驗(ELISA)雙抗體夾心法，2小時出結果，需實驗室設備和專業人員。(5)PCR方法是近年來核酸工程最重要的技術，能將微量的目的DNA片段擴增到非常大的數量，敏感性極強，但需國家認證實驗室，需要擴增儀，需專業人員，費用昂貴不易推廣。本試紙條克服了以上方法的不足之處，操作簡便快速10-15分鐘出結果，結果清晰，不需要複雜的儀器設備，不需要冷藏，適合基層單位和邊遠地區的流行病學調查和現埸檢測，滿足生物反恐的需要。

發明內容
(一)、要解決的技術問題本發明的目的是提供一種方便、快捷地用於檢測鼠疫菌F1抗原的試紙條，克服現有技術操作複雜、繁瑣、時間長、需要儀器、需要專門實驗室才能操作的不足。
(二)、技術方案本發明提供了一種檢測試紙條，它包含
(1)包被鼠疫菌F1抗體和抗鼠IgG二條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記鼠疫菌F1單克隆抗體的玻璃纖維膜。
本發明所述的試紙條中，鼠疫菌F1抗體為鼠疫菌F1抗原的單克隆抗體或多克隆抗體。
優選的本發明所述試紙條，它還包含(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
其中反應支持物優選PVC板；吸水墊優選濾油紙；金標抗體保護膜同時具有吸水功能，優選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發明還公開了所述試紙條在檢測鼠疫菌F1抗原中的應用。
本發明的技術方案是採用純化的鼠疫菌F1抗體和抗鼠IgG分別固相於硝酸纖維膜上(NC膜)，結合膠體金標記的鼠疫菌F1抗原單克隆抗體，應用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測標本中的鼠疫菌F1抗原。
(三)、有益效果用本發明的試紙條檢測鼠疫菌F1抗原，方便、快速、操作簡單、結果清晰易辨、不需特殊儀器設備，，不需要冷藏，易於推廣，適合基層，適合於大批量檢測，適合流行病學調查，適合生物反恐的需要。對鼠疫菌引起的鼠疫起到輔助檢測作用。


圖1A本發明試紙條的正面示意圖；B本發明試紙條的側面示意圖；其中，1吸水墊2硝酸纖維膜(T包被鼠疫菌F1抗體的條帶；C包被抗鼠IgG的質控條帶)
3含有膠體金標記鼠疫菌F1抗原單克隆抗體的玻璃纖維膜4金標抗體保護膜5反應支持物圖2檢測結果示意圖。其中，從左至右依次為T、C兩條線顯色為陽性；C一條線顯色為陰性；T、C兩條線均未顯色為無效。
具體實施例方式
通過下面給出的本發明的具體實施例和實驗例可以進一步清楚地理解本發明，但不是對本發明的限定。
實施例1鼠疫菌F1抗原檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、鼠疫F1抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的鼠疫F1單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了鼠疫菌F1抗原檢測試紙條。
實施例2 鼠疫菌F1抗原檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、鼠疫F1抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的鼠疫F1單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了鼠疫菌F1抗原檢測試紙條。
實施例3 鼠疫菌F1抗原檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.＝5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG、鼠疫F1抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的鼠疫F1單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了鼠疫菌F1抗原檢測試紙條。
實施例4 檢測方法(參見圖2)
將鼠肺勻漿或組織液150μl，用滴管加入實施例1試紙條「4」處，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結果如含有鼠疫菌F1抗原，則與試紙條上膠體金標記的鼠疫F1單克隆抗體形成相應的複合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的鼠疫F1抗體結合，形成紅色線條，即在「T」處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應的抗原，膠體金標記單克隆抗體繼續向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉澱線，即在「C」處形成紅色條帶。此線是質控線，如膠體金失效，此線就不會出現，說明試紙條失效。
陽性結果會出現2條紅色沉澱線，陰性結果出現1條紅色沉澱線，如不出現線條說明試紙條失效。
實驗例1臨床檢測結果經檢測3001例疫區鼠肺勻漿標本，鼠疫菌感染，出現兩條帶91例，佔3％。與目前應用的RIHA法(T1a)和ELISA法(T1b)相比較，試紙條法(T2)靈敏度分別為100％、99％，特異度100％。
RIHA法(T1a)和ELISA法(T1b)與試紙條法(T2)對比實驗統計表

權利要求
1.一種檢測試紙條，其特徵在於，它包含(1)包被鼠疫菌F1抗體和抗鼠IgG二條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記鼠疫菌F1單克隆抗體的玻璃纖維膜。
2.根據權利要求1所述的試紙條，其特徵在於鼠疫菌F1抗體為鼠疫菌F1抗原的單克隆抗體或多克隆抗體。
3.根據權利要求1所述試紙條，它還包含(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
4.根據權利要求3所述試紙條，其中反應支持物選用PVC板。
5.根據權利要求3所述試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
6.根據權利要求3所述試紙條，其中金標抗體保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
7.權利要求1-6之任一所述試紙條在檢測鼠疫菌F1抗原中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種用於檢測鼠疫菌F1抗原的快速檢測試紙條。它是在硝酸纖維膜(NC膜)上包被鼠疫菌F1抗體及抗鼠IgG，結合膠體金標記的鼠疫菌F1單克隆抗體，應用膜層析雙抗體夾心法，檢測標本中鼠疫菌F1抗原。應用本發明試紙條檢測，操作簡單，特異準確，且方便快捷，10－15分鐘判讀結果，不需特殊儀器設備，不需要冷藏，適合基層醫療單位，適合大規模的流行病學調查，適合生物反恐的需要。
文檔編號G01N33/569GK1963513SQ200510086848
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優先權日2005年11月10日
發明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫學科技有限公司