一種雞新城疫病毒單克隆抗體製備方法與流程
2023-05-23 10:14:01 1
本發明涉及免疫技術領域，具體涉及一種雞新城疫病毒單克隆抗體製備方法。
背景技術：
雞新城疫病毒在分類上是屬於副粘病毒科(Paramyxoviridae)副粘病毒屬(Paramyxovirus)。成熟的病毒粒子近圓形，多數呈蝌蚪狀，直徑為120-300nm。具有囊膜，內含有一長螺旋狀核衣殼，直徑17-18nm，囊膜外有長約8-12nm的糖蛋白(HN和F)纖突。螺旋形核衣殼是由一個與蛋白相聯結的單股RNA所形成，具有RNA聚合酶活性，它被一個雙層脂質膜所包裹，脂質膜內襯有一層特殊的M蛋白，而脂質膜的外層又被具有纖突的糖蛋白所覆蓋，使外形呈花穗狀。
現有技術中對雞新城疫病毒的免疫主要依靠疫苗實現，而接種疫苗一方面難以保證完全的防護率，同時也存在著發生不良反應的可能。而現有技術的抗雞新城疫病毒單克隆抗體又存在著特異性不佳的技術缺陷。
技術實現要素：
本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種雞新城疫病毒單克隆抗體製備方法，以解決現有技術中相關方法所製備的單克隆抗體特異性不佳。
為實現以上技術目的，本發明採用以下技術方案：
一種雞新城疫病毒單克隆抗體製備方法，包括以下步驟：
1)取雞新城疫疫苗免疫小鼠；
2)取免疫後小鼠的脾臟細胞與造血幹細胞按5:1的細胞量比混合在一支融合管中，1000rpm離心10min，混勻，在37℃水浴中45s內加入1mL PEG到融合管中，混勻，而後在90s內滴加30mL的DMEM培養基，用60mL HAT培養基懸浮沉澱細胞，再加入腹腔巨噬細胞，置37℃5％CO2培養箱內培養；
3)取小鼠，以0.5mL/只的劑量腹腔注射滅菌液體石蠟，1周後以1×106CFU/只的劑量對小鼠腹腔注射步驟3)得到的雜交瘤細胞，而後從小鼠腹腔採集腹水，離心取上清，即得到雞新城疫病毒單克隆抗體。
2、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟2)中所述PEG的溫度是37℃。
3、根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟2)中所述DMEM培養基的溫度是37℃。
本發明技術方案利用雞新城疫病毒製備出雞新城疫病毒單克隆抗體雜交瘤細胞株，其所分泌的抗體為只針對雞新城疫病毒，與其他病毒均不發生反應，從而保證了單抗的特異性。與此同時，本發明利用該株單克隆抗體的特性，建立ELISA方法和免疫膠體金的方法，其特異性和敏感性好。可用於臨床檢測。此外，本發明製備的單抗效價高、特異性較好，尤其適用於進一步製備雞新城疫病毒抗原診斷試劑盒或雞新城疫病毒抗原診斷膠體金試紙。本發明以創新性的技術改進實現了突出的技術效果，同時成本較低、易於實現，因此具有突出的推廣前景。
具體實施方式
以下將對本發明的具體實施方式進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節，在以下實施例中對屬於公知的結構或功能將不進行詳細描述。
實施例1
一種雞新城疫病毒單克隆抗體製備方法，包括以下步驟：
1)取雞新城疫疫苗免疫小鼠；
2)取免疫後小鼠的脾臟細胞與造血幹細胞按5:1的細胞量比混合在一支融合管中，1000rpm離心10min，混勻，在37℃水浴中45s內加入1mL PEG到融合管中，混勻，而後在90s內滴加30mL的DMEM培養基，用60mL HAT培養基懸浮沉澱細胞，再加入腹腔巨噬細胞，置37℃5％CO2培養箱內培養；
3)取小鼠，以0.5mL/只的劑量腹腔注射滅菌液體石蠟，1周後以1×106CFU/只的劑量對小鼠腹腔注射步驟3)得到的雜交瘤細胞，而後從小鼠腹腔採集腹水，離心取上清，即得到雞新城疫病毒單克隆抗體。
在以上技術方案的基礎上，滿足以下條件：
步驟2)中所述PEG的溫度是37℃。
步驟2)中所述DMEM培養基的溫度是37℃。
實施例2
一種雞新城疫病毒單克隆抗體製備方法，包括以下步驟：
1)取雞新城疫疫苗免疫小鼠；
2)取免疫後小鼠的脾臟細胞與造血幹細胞按5:1的細胞量比混合在一支融 合管中，1000rpm離心10min，混勻，在37℃水浴中45s內加入1mL PEG到融合管中，混勻，而後在90s內滴加30mL的DMEM培養基，用60mL HAT培養基懸浮沉澱細胞，再加入腹腔巨噬細胞，置37℃5％CO2培養箱內培養；
3)取小鼠，以0.5mL/只的劑量腹腔注射滅菌液體石蠟，1周後以1×106CFU/只的劑量對小鼠腹腔注射步驟3)得到的雜交瘤細胞，而後從小鼠腹腔採集腹水，離心取上清，即得到雞新城疫病毒單克隆抗體。
以上對本發明的實施例進行了詳細說明，但所述內容僅為本發明的較佳實施例，並不用以限制本發明。凡在本發明的申請範圍內所做的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。