一種無邊緣效應的96孔細胞培養板的製作方法

2023-04-23 03:42:21

專利名稱：一種無邊緣效應的96孔細胞培養板的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及生物學中培養細胞使用的細胞培養板，細胞培養板，尤其是一種無邊緣效應的96孔細胞培養板。
背景技術：
目前，在生物學中培養細胞使用的細胞培養板，在細胞培養的過程中，經常會發生邊緣效應，邊緣效應是指在使用多孔板的細胞培養中，周邊孔中的細胞會集中在孔的外側，這種現象在實驗中常用的96孔板中十分明顯；而邊緣孔的數量佔到總數的1/3，這就意味著因為此誤差所導致的影響相當巨大。 由於大多細胞的生長會受周圍接觸細胞的抑制，所以邊緣效應導致邊緣孔內細胞平均生長速度要比其他孔快，從而在實驗過程中引入系統誤差；在很多大規模藥物篩選實驗中，人們甚至棄去周圍孔的實驗結果，這就意味著每三塊96孔培養板只能被當作兩塊板使用。 邊緣效應產生的原因是由於在室溫下的培養板轉移到37t:培養箱後，培養板上
產生的溫度差影響細胞沉降引起的；為證實這一結論，有人做了兩種不同的實驗，第一個實驗是將細胞接種後直接放入37t:培養箱，1小時後取出在顯微鏡下觀察，發現外側孔的大部分細胞都遷移到孔的外側聚集生長，而不是象內部孔一樣平均生長；另一個實驗證
據是細胞培養板在37t:條件下放置一段時間以後取出，加入細胞而不放入37t:環境，發
現細胞呈相反的沉降趨勢；這兩點足以證明產生細胞邊緣效應的決定性因素就是細胞沉降過程中內、外孔之間熱動力學失衡(BETINA KERSTIN LUNDH0LT， KURT M. SCUDDER， andLEN PAGLIAR0， A SimpleTechnique for Reducing Edge Effect in Cell-Based Assays.Journal of BiomolecularScreening 2003 :566-570)。 目前克服該現象的方法是在培養板內分入細胞後，在室溫下放置l-2個小時，讓細胞在沒有溫度差的情況下沉降，然後再轉移到37t:培養箱內，該方法至少適合CH0等在室溫下能貼壁的細胞；該方法的缺陷是對於脆弱的細胞外界環境溫度降低會導致細胞應激反應產生，從而改變細胞的性狀，尤其是原代培養的細胞更加不能承受如此苛刻的生存條件，因此會發生細胞生長狀態不佳、細胞凋亡甚至死亡。 導致目前常規的96孔細胞培養板產生邊緣效應的原因是目前應用的96孔細胞培養板外圈的孔側壁直接與外界接觸，對溫度非常敏感，從而在溫度波動很大時不能調控細胞的遷移；而內側的孔由於僅從底部接觸外界，細胞生長就很均勻；因此如果能夠在外側孔的側面設計結構使其僅從底部感受外界溫度變化，將會避免邊緣效應的產生。

發明內容本實用新型的發明目的是提供了一種無邊緣效應的96孔細胞培養板，該細胞培養板是通過改變原有96孔板的結構，在最外側孔的外側設計了不同寬度及厚度的槽形結構，達到最大程度消除邊緣效應的目的，同時又保證了細胞培養的最佳狀態；為了實現上述
3目的，本實用新型是這樣實現的一種無邊緣效應的96孔細胞培養板，是由上蓋、培養板和培養板孔組成；其特徵在於培養板上有96個培養板孔，培養板孔為8X 12分布，每個孔為大小、形狀均相等的正圓形或方形，底端封閉，上端敞開便於培養液加入，周邊有側壁圍繞孔的周圍；培養板孔的高度稍高於側壁形成的平面；在最外一圈孔與培養板側圍之間存在槽的結構；上蓋平坦，與培養板上面孔形成的平面平行，有裙邊，與培養板之間存在縫隙，間距為0. l-2mm ;孔的分布為矩陣形，每個孔的中心距相等，距離為0. 5-2cm ;培養板；其中培養板上最外一圈培養板孔與培養板側圍之間存在間隔，距離為12孔長邊側l-4mm，8孔短邊側2-6mm ;在培養板上最外一圈培養板孔與培養板側圍之間存在槽結構，該槽結構為四周連通的，四邊可以設計有一條或多條的槽，或者四個轉角處相連通的槽，槽的高度為0-15mm，將孔與外界從底部隔開；其中槽的寬度為12孔長邊側0. 5-3. 5mm，8孔短邊側0. 5-5. 5mm，槽的內徑為12孔長邊側0-3. 5mm，8孔短邊側0-5. 5mm，可以是實心槽，其長度覆蓋周邊所有的孔；槽可拆卸，或者與培養板為一體，槽可以是上端敞開的，或者上端封閉，在一處或多處有孔與外界連通。由於該細胞培養板是通過改變原有96孔板的結構，在最外側孔的外側設計了不同寬度及厚度的槽形結構，因此達到最大程度消除邊緣效應的目的，同時又保證了細胞培養的最佳狀態。

附圖一種無邊緣效應的96孔細胞培養板簡單示意圖。[0009]
以下結合附圖和實施例對本實用新型進一步說明。
具體實施方式下面根據附圖對本實用新型做進一步的說明一種96孔細胞培養板，是由上蓋、培養板和培養板孔組成其特徵在於培養板上有96個培養板孔，培養板孔為8 X 12分布，每個孔為大小、形狀均相等的正圓形，底端封閉，上端敞開便於培養液加入，周邊有側壁圍繞孔的周圍；培養板孔的高度稍高於側壁形成的平面，形成一圈突出的槽；上蓋可以平整地覆蓋在培養板上，保證與每個培養板孔形成的平面平行；上蓋上設計有凸起的圓圈，正好覆蓋在培養板孔的上方並保持O. 15mm的間距；每個培養板孔的中心距相等，距離為lcm ;培養板採用透明塑料製作；其中培養板上最外一圈孔與培養板側圍之間存在間隔，距離為12孔長邊側lmm，8孔短邊側2mm ;在培養板上最外一圈培養板孔與培養板側圍之間存在槽結構，該槽結構為四周連通的12孔長邊側3mm， 8孔短邊側4mm，以達到阻隔外界與外圈孔側壁直接接觸的目的。
權利要求一種無邊緣效應的96孔細胞培養板，是由上蓋、培養板和培養板孔組成；其特徵是孔呈8×12矩陣分布，每個孔為大小、形狀均相等的正圓形或方形，底端封閉，上端敞開便於培養液加入，周邊有側壁圍繞孔的周圍；培養板孔的高度稍高於側壁形成的平面；在最外一圈孔與培養板側圍之間存在槽的結構。
2. 根據權利要求1所述的無邊緣效應的96孔細胞培養板，其特徵是上蓋平坦，與培養板上面孔形成的平面平行，有裙邊，與培養板之間存在縫隙，間距為0. l-2mm。
3. 根據權利要求1所述的無邊緣效應的96孔細胞培養板，其特徵是孔的分布為矩陣形，每個孔的中心距相等，距離為0. 5-2cm ;培養板上最外一圈培養板孔與培養板側圍之間存在間隔，距離為12孔長邊側l-4mm，8孔短邊側2-6mm ;
4. 根據權利要求1所述的無邊緣效應的96孔細胞培養板，其特徵是該槽為四周連通的，或者四邊各有一條或多條的槽，或者四個轉角處相連通的槽，槽的高度為10-15mm，將孔與外界從底部隔開；槽的寬度為12孔長邊側0. 5-3. 5mm，8孔短邊側0. 5_5. 5mm，槽的內徑為12孔長邊側1-3. 5mm，8孔短邊側1_5. 5mm。
5. 根據權利要求1所述的無邊緣效應的96孔細胞培養板，其特徵是槽可以是實心的，其長度覆蓋周邊所有的孔。
6. 根據權利要求1所述的無邊緣效應的96孔細胞培養板，其特徵是槽可拆卸，或者與培養板為一體；槽可以是上端敞開的，或者上端封閉，在一處或多處有孔與外界連通。
專利摘要本實用新型涉及生物學中培養細胞使用的細胞培養板，尤其是一種無邊緣效應的96孔細胞培養板，是由上蓋、培養板和培養板孔組成；其特徵在於培養板上有96個培養板孔，培養板孔為8×12分布，每個孔為大小、形狀均相等的正圓形或方形，底端封閉，周邊有側壁圍繞孔的周圍；在最外一圈孔與培養板側圍之間存在槽的結構；上蓋平坦，與培養板上面孔形成的平面平行，有裙邊，與培養板之間存在縫隙；其中在96孔細胞培養板的外周孔的外側增加了新的槽結構，這種結構可以在細胞培養時減少內、外孔之間的熱動力不平衡問題，使細胞沉降均一，從而消除邊緣效應，使細胞生長更加均一，減少實驗系統誤差。
文檔編號C12M3/00GK201459144SQ20092011040
公開日2010年5月12日 申請日期2009年7月24日 優先權日2009年7月24日
發明者張 傑 申請人:無錫耐思生物科技有限公司