western blot 膠是用什麼配製的（WesternBlot實驗）

2023-05-25 06:16:05 2

前面已經介紹過蛋白樣品的製備及濃度測定，今天給大家介紹凝膠製備相關問題:

現在一些SDS-PAGE凝膠製備試劑盒操作簡便，得到了廣泛的應用。在實驗室中，我們常用的凝膠製備試劑盒有碧雲天和雅酶的。它們有可調控膠濃度試劑盒，也有固定濃度（eg:10％）凝膠試劑盒。其中碧雲天凝膠試劑盒分離膠和濃縮膠都是無色透明狀，雅酶的濃縮膠是彩色的，更便於看清加樣孔。

[左上]一般我們採用1mm厚的玻璃板制膠，將玻板固定好確認其密封，配製分離膠（也叫下層膠）約5ml，緩緩注入玻板中，然後覆蓋一水層，室溫靜置15～20min待膠凝固；去除水層，配製濃縮膠（也叫上層膠）約2ml，最後插上1mm的梳子，室溫靜置20min左右。

在這裡值得注意的是，分離膠濃度的選擇與蛋白分子量大小、目的蛋白分子量等因素密切相關。同一條件下，膠濃度越高，所需電泳時間越長。蛋白分子量小的蛋白，通常膠濃度選大一些，反之亦然。如果實驗之前無法準確判斷膠濃度如何選擇，可以先用10％或12％的膠先做一次預實驗，後續再根據實際情況優化實驗條件。

濃縮膠一般是5％的濃度，不做其他濃度的調試。

膠注入玻板時，應避免產生氣泡。在靜置待膠凝固時，可根據實驗室實際情況適當延長靜置時間，若凝膠時間短，可能會導致電泳時出問題，進而影響實驗結果。

膠凝固好後，可拔出梳子，儘快將玻板安裝於電泳裝置上，並在其電泳槽凹內加滿1x電泳緩衝液，以形成閉合迴路保證電泳。（也可以先安裝固定玻板，倒滿電泳緩衝液後再拔梳子）如若先拔梳子再加電泳緩衝液，可以使堵塞的膠孔有衝開的可能。