心肌肌鈣蛋白Ⅰ快速定量測定用標準條及其加工方法
2023-10-09 08:34:29
專利名稱：心肌肌鈣蛋白Ⅰ快速定量測定用標準條及其加工方法
技術領域：
本發明涉及一種用於快速定量測定人體心肌肌鈣蛋白I的標準條及其加工方法。
背景技術：
心肌缺血性損傷，特別是急性心肌梗塞(AMI)是威協人類生命的主要疾病之一，臨床化學家和臨床科學家一直努力尋找和探索特異性好、靈敏度高的血清指標。心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)具有高度的心肌特異性，當心肌細胞受損時，血液中cTnI出現時間早，持續時間長，與心肌損傷程度及預後密切相關。因此，它可作為心肌損傷的一種特異性指標，在心臟病的診斷及預後判斷中具有十分重要的意義。
心肌肌鈣蛋白I測定可分為定性與定量測定兩種方法。定性測定主要運用層析原理，製作試紙片完成，其優點是速度快、操作方便，但其缺點是僅能顯示陽性、陰性結果，無具體數值，不能觀察其動態變化和根據數值判斷梗死時間、面積及預後，且敏感性低，易受多種因素幹擾。定量測定主要依據酶聯免疫與化學發光原理設計，絕大部分運用了二株單克隆抗體(少部分僅用一株單克隆抗體或其中一株用多克隆抗體)，一株單克隆抗體為捕獲抗體，另一株單克隆抗體為標記抗體，二株單克隆抗體與標準品或待測樣本結合，形成酶聯夾心法測定。測定中一般需通過數個從低到高或從高到低的已知標準點來制定標準曲線，再根據標準曲線來精確計算待測樣本的心肌肌鈣蛋白I的含量。已知標準點加樣採取兩種方法(1).給一個最高濃度標準點，測定時對倍稀釋後對應加入；(2).預先配置各個濃度標準點，測定時對應加入酶聯孔內。第一種辦法很繁鎖，第二種辦法增加了試劑盒內瓶子的數量；上述兩種辦法都增加了用戶操作的負擔，且標準品打開後易降解，一般僅能使用一次，不能靈活用於臨床不同數量標本的測定。
發明內容
本發明的目的是提供一種能有效克服上述測定方法的不足，且能快速定量測定人體心肌肌鈣蛋白I的含量的標準條，並提供一種該標準條的加工方法。
本發明是通過如下技術解決方案實現的1、心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標準條，採用8-12孔常用酶聯條，其特徵在於在酶聯條的各孔中附著有濃度按常規量遞增或遞減的心肌肌鈣蛋白I混合物；酶聯條各孔中的混合物系經先後聯結鏈親和素與生物素標記的心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體或直接聯結心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體後，加入不同濃度的心肌肌鈣蛋白I，再經真空乾燥、降解後而得。
2、上述的標準條，所述的選定孔為1-6孔或2-7孔。
3、上述的標準條，所述的選定孔中的心肌肌鈣蛋白I的含量經加工後為0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μg/L；或0、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2μg/L；或0、0.1、0.3、0.9、2.7μg/L；或0、2.7、0.9、0.3、0.1μg/L；等。
4、心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標準條的加工方法，包括如下工藝步驟方案一(1).採用數條8-12孔常用酶聯條(一般用8孔條)，1-6或2-7孔聯結好鏈親和素(5-20μg/ml)，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。
(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封閉液封閉，洗液洗1-3次。
(3).加入1000-3000ng/ml(優選1500ng/ml)含量的生物素標記的捕獲單克隆抗體，孵育一定時間60分鐘)或4℃過夜，洗液洗1-3次。
(4).酶聯條選定孔內加入零濃度與從低到高或從高到低的心肌肌鈣蛋白I標準(高出需要濃度(5-20倍)，37℃孵育一定時間(優選60分鐘)，洗液洗1-3次。
(5).真空乾燥箱內30-45℃(優選37℃)乾燥0.5-2小時(優選1小時)。
(6).密封后置37℃水浴降解12-48小時(優選24小時)。
(7).隨機取出1條降解後標準條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標準品為標準，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標準稀釋液)校標，因不同的血清濃度對標準品有不同的抑制作用，使加工後的標準點成為所需的標準點濃度。
(8).分條密封包裝備用。
方案二(1).採用數條8-12孔常用酶聯條(一般用8孔條)，1-6或2-7孔聯結好抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體(5-20μg/ml)，37℃孵育一定時間(優選60分鐘)或4℃過夜，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。
(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封閉液封閉，洗液洗1-3次。
(3).酶聯條選定孔內加入零濃度與從低到高或從高到低的心肌肌鈣蛋白I標準(高出需要濃度(5-20倍)，37℃孵育一定時間(優選60分鐘)，洗液洗1-3次。
(4).真空乾燥箱內30-45℃(優選37℃)乾燥0.5-2小時(優選1小時)。
(5).密封后置37℃水浴降解12-48小時(優選24小時)。
(6).隨機取出1條降解後標準條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標準品為標準，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標準稀釋液)校標，因不同的血清濃度對標準品有不同的抑制作用，使加工後的標準點成為所需的標準點濃度。
(7).分條密封包裝備用。
本發明的有益效果是標準條內的標準品性能極其穩定，用戶使用極其方便、準確與快速，且試劑盒內配置多條標準條，可靈活分次用於臨床不同數量標本的測定。
附圖為標準條示意圖，圖中1.標準條標記，2.非標準條加工孔，3.標準條加工孔(左1-6孔或右2-7孔)。
具體實施例方式
標準條加工步驟如下方案一(1).數條8孔常用酶聯條2-7孔聯結好鏈親和素(10μg/ml)，洗液(PBS，含0.05％Tween-20)洗2次。
(2).0.5～1％白蛋白封閉，洗液洗2次。
(3).加入1500ng/ml生物素標記的捕獲單克隆抗體，孵育60分鐘)4℃過夜，洗液洗3次。
(4).酶聯條2-7孔內加入0、2、4、8、16、32μg/L的心肌肌鈣蛋白I標準，37℃孵育60分鐘，洗液洗3次。
(5).真空乾燥箱內37℃乾燥1小時。
(6).密封后置37℃水浴降解24小時。
(7).每塊隨機取出1條降解後標準條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標準品為標準，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標準稀釋液)校標，因不同的血清濃度對標準品有不同的抑制作用，使加工後的標準點成為所需的標準點濃度，同時注意檢測其均一性、準確性及標準曲線的質量。
(8).分條密封包裝備用。方案二(1).數條8孔常用酶聯條2-7孔聯結好抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體(10μg/ml)，孵育60分鐘或4℃過夜，洗液洗3次。
(2).酶聯條2-7孔內加入0、2、4、8、16、32μg/L的心肌肌鈣蛋白I標準，37℃孵育60分鐘，洗液洗3次。
(3).真空乾燥箱內37℃乾燥1小時。
(4).密封后置37℃水浴降解24小時。
(5).每塊隨機取出1條降解後標準條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標準品為標準，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標準稀釋液)校標，因不同的血清濃度對標準品有不同的抑制作用，使加工後的標準點成為所需的標準點濃度，同時注意檢測其均一性、準確性及標準曲線的質量。
(6).分條密封包裝備用。
權利要求
1.心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標準條，採用8-12孔常用酶聯條，其特徵在於在酶聯條的各孔中附著有濃度按常規量遞增或遞減的心肌肌鈣蛋白I混合物；酶聯條各孔中的混合物系經先後聯結鏈親和素與生物素標記的抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體或直接聯結抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體後，加入不同濃度的心肌肌鈣蛋白I，再經真空乾燥、降解後而得。
2.根據權利1，上述的標準條所述的選定孔為1-6孔或2-7孔。
3.根據權利1，上述的標準條所述的選定孔中的心肌肌鈣蛋白I的含量經加工後為0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μg/L；或0、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2μg/L；或0、0.1、0.3、0.9、2.7μg/L；或0、2.7、0.9、0.3、0.1μg/L；等。
4.根據權利1，心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標準條的加工方法，包括如下工藝步驟方案一(1).採用數條8-12孔常用酶聯條(一般用8孔條)，1-6或2-7孔聯結好鏈親和素(5-20μg/ml)，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封閉液封閉，洗液洗1-3次。(3).加入1000-3000ng/ml(優選1500ng/ml)含量的生物素標記的捕獲單克隆抗體，孵育一定時間60分鐘)或4℃過夜，洗液洗1-3次。(4).酶聯條選定孔內加入零濃度與從低到高或從高到低的心肌肌鈣蛋白I標準(高出需要濃度(5-20倍)，37℃孵育一定時間(優選60分鐘)，洗液洗1-3次。(5).真空乾燥箱內30-45℃(優選37℃)乾燥0.5-2小時(優選1小時)。(6).密封后置37℃水浴降解12-48小時(優選24小時)。(7).隨機取出1條降解後標準條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標準品為標準，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標準稀釋液)校標，因不同的血清濃度對標準品有不同的抑制作用，使加工後的標準點成為所需的標準點濃度。(8).分條密封包裝備用。方案二(1).採用數條8-12孔常用酶聯條(一般用8孔條)，1-6或2-7孔聯結好抗心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體(5-20μg/ml)，37℃孵育一定時間(優選60分鐘)或4℃過夜，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封閉液封閉，洗液洗1-3次。(3).酶聯條選定孔內加入零濃度與從低到高或從高到低的心肌肌鈣蛋白I標準(高出需要濃度(5-20倍)，37℃孵育一定時間(優選60分鐘)，洗液洗1-3次。(4).真空乾燥箱內30-45℃(優選37℃)乾燥0.5-2小時(優選1小時)。(5).密封后置37℃水浴降解12-48小時(優選24小時)。(6).隨機取出1條降解後標準條，用未降解的心肌肌鈣蛋白I標準品為標準，不同牛血清濃度(20％-40％左右，選定的血清濃度即為試劑盒中的標準稀釋液)校標，因不同的血清濃度對標準品有不同的抑制作用，使加工後的標準點成為所需的標準點濃度。(7).分條密封包裝備用。
全文摘要
本發明涉及一種新的心肌肌鈣蛋白I快速定量測定用標準條及其加工方法。常規方法中，標準點在測定時需臨時加樣，增加了用戶操作的負擔，且標準品打開後易降解。本發明利用心肌肌鈣蛋白I經一定程序加工、乾燥、降解後極其穩定的特性，把零濃度與數個從低到高或從高到低的標準點濃度預先加工在數條酶聯條的反應孔內(此酶聯條稱為標準條)，並應用於心肌肌鈣蛋白I快速定量測定試劑盒，使用戶使用極其方便、準確與快速，且試劑盒內配置多條標準條，可靈活分次用於臨床不同數量標本的測定。附圖為標準條示意圖，圖中1.標準條標記，2.非標準條加工孔，3.標準條加工孔(左1－6孔或右2－7孔)。
文檔編號G01N33/68GK1460856SQ0313193
公開日2003年12月10日 申請日期2003年6月19日 優先權日2003年6月19日
發明者蘇恩本 申請人:蘇恩本