捲曲乳桿菌菌株及其用途

2023-12-01 09:16:16

捲曲乳桿菌菌株及其用途
【專利摘要】本發明提供了一種菌株，該菌株為捲曲乳桿菌（Lactobacillus?crispatus）的菌株，其特徵在於，該菌株的保藏號為CGMCC?No.6360。本發明還提供了上述菌株在製備用於預防和/或治療陰道炎的藥物中的用途、在製備陰道護理用品中的用途和在製備外生殖器衛生用品中的用途。通過上述技術方案，本發明能夠有效地實現對多種致病菌的拮抗作用。此外，本發明的菌株還具有更高的對陰道上皮細胞的粘附能力。因而本發明的菌株能夠較好地滿足實際的臨床應用需求。
【專利說明】捲曲乳桿菌菌株及其用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫藥微生物【技術領域】，具體地，涉及一種捲曲乳桿菌的菌株以及該菌株的用途。
【背景技術】
[0002]健康婦女陰道中存在著一些優勢菌群，這些優勢菌群對維持陰道正常菌群的平衡起著關鍵的作用。優勢菌群通過分泌乳酸、過氧化氫、細菌素等物質起到殺滅致病菌的作用。同時，在陰道黏膜上皮細胞的競爭黏附作用起到生物屏障的作用，阻止了致病菌在陰道的繁殖。
[0003]但是抗生素的使用、不良衛生習慣、環境、放化療、精神壓力等諸多原因可以破壞陰道正常菌群平衡，使優勢菌群數量減少，致病菌大量繁殖，而導致各種陰道疾病如細菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經性陰道炎、老年性陰道炎、混合感染性陰道炎等。
[0004]通過外源菌的介入來恢復陰道乳桿菌優勢，從而達到正常陰道菌群的平衡狀態是預防和/或治療陰道炎症的一種有效手段。但是，已知的外源菌對致病菌的拮抗作用仍然較弱，難以滿足實際的臨床應用需求。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是提供一種對致病菌的拮抗作用較強的外源菌菌株，該菌株能夠較好地滿足實際的臨床應用需求。
[0006]為了實現上述目的，本發明的發明人從志願者的陰道中分離得到了一株乳桿菌，出乎意料地發現該乳桿菌菌株具有較強的對致病菌的拮抗作用，由此得到了本發明。
[0007]一方面，本發明提供了一種菌株，該菌株為捲曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)的菌株，其特徵在於，該菌株的保藏號為CGMCC N0.6360。
[0008]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備用於預防陰道炎的藥物中的用途。
[0009]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備用於治療陰道炎的藥物中的用途。
[0010]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備陰道護理用品中的用途。
[0011]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備外生殖器衛生用品中的用途。
[0012]通過上述技術方案，本發明能夠有效地實現對多種致病菌的拮抗作用。此外，本發明的菌株還具有更高的對陰道上皮細胞的粘附能力以及更高的產乳酸能力。因而本發明的菌株能夠較好地滿足實際的臨床應用需求。
[0013]本發明的其他特徵和優點將在隨後的【具體實施方式】部分予以詳細說明。
[0014]生物保藏
[0015]本發明的捲曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)菌株,於2012年7月17日被保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼:100101)(保藏單位的縮寫為CGMCC)，保藏編號為 CGMCC N0.6360。
【具體實施方式】
[0016]以下對本發明的【具體實施方式】進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的【具體實施方式】僅用於說明和解釋本發明，並不用於限制本發明。
[0017]—方面，本發明提供了一種菌株，該菌株為捲曲乳桿菌(Lactobacilluscrispatus)的菌株，其特徵在於，該菌株的保藏號為CGMCC N0.6360。
[0018]其中，該菌株具有SEQ ID NO:1所示的16S rDNA序列。16S rDNA序列是編碼16SrRNA的DNA序列，在菌株的分類和/或鑑定上具有重要的參考價值。
[0019]其中，該菌株在MRS固體培養基上的菌落形態為圓形菌落，直徑0.5-0.75mm，表面粗糙，在顯微鏡下呈革蘭氏染色陽性短桿菌。
[0020]其中，該菌株的培養條件可以採用已知的捲曲乳桿菌的培養方法，例如，該菌株可以在MRS液體培養基和MRS固體培養基上正常生長。其中，該菌株的生長溫度可以為常規的溫度，例如，生長溫度可以為36-38°C。
[0021]本發明中，MRS液體培養基是指由IOg的蛋白腖、5g的酵母膏、IOg的牛肉膏、20g的葡萄糖、5g的乙酸鈉、2g的檸檬酸銨、ImL的吐溫-80、0.58g的MgSO4.7H20、0.25g的MnSO4 *4H20,2g的K2HPO4和1000mL的蒸餾水混合，調節pH值為6.2-6.4並且經121°C高壓蒸汽滅菌後得到的培養基。
[0022]本發明中，MRS固體培養基是指由IOg的蛋白腖、5g的酵母膏、IOg的牛肉膏、20g的葡萄糖、5g的乙酸鈉、2g的檸檬酸銨、ImL的吐溫-80、0.58g的MgSO4.7H20、0.25g的MnSO4.4H20、2g的K2HP04、20g的瓊脂粉和1000mL的蒸餾水混合，調節pH值為6.2-6.4並且經121°C高壓蒸汽滅菌後得到的培養基。
[0023]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備用於預防陰道炎的藥物中的用途。
[0024]其中，所述陰道炎可以為細菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
[0025]其中，所述陰道炎可以為白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發的陰道炎。
[0026]其中，上述菌株可以通過如下方式發揮預防陰道炎的作用:(I)在MRS液體培養基中接種上述菌株，並且培養為菌體濃度為IO7個菌體/每mL，即得到上述菌株的培養液；(2)用無菌衛生棉球蘸取上述培養液，擦拭陰道，每天1-2次，每次使用3-10mL的培養液。SP，上述菌株的培養液即可作為用於預防陰道炎的藥物。
[0027]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備用於治療陰道炎的藥物中的用途。
[0028]其中，所述陰道炎為細菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
[0029]其中，所述陰道炎可以為白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄 球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發的陰道炎。
[0030]其中，上述菌株可以通過如下方式發揮治療陰道炎的作用:(I)在MRS液體培養基中接種上述菌株，並且培養為菌體濃度為IO7個菌體/每mL，即得到上述菌株的培養液；(2)用無菌衛生棉球蘸取上述培養液，擦拭陰道，每天1-2次，每次使用3-10mL的培養液。SP，上述菌株的培養液即可作為用於治療陰道炎的藥物。
[0031]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備陰道護理用品中的用途。
[0032]另一方面，本發明還提供了上述菌株在製備外生殖器衛生用品中的用途。
[0033]以下將通過實施例對本發明進行詳細描述。
[0034]測試實施例1
[0035]按照文獻(16S rDNA快速鑑定血液製品中汙染細菌的測序方法的建立，應燕玲等，中華微生物學和免疫學雜誌，2009年10期)中的方法，對本發明的捲曲乳桿菌菌株CGMCCN0.6360的16S rDNA的序列進行測序，測序結果證實對本發明的捲曲乳桿菌菌株具有SEQID NO:1所示的16S rDNA序列。
[0036]實施例1
[0037]本實施例用於說明本發明的菌株對白色念珠菌(Candida albicans)的拮抗作用。本實施例中所用的白色念珠菌為購自ATCC的商品號為10231的菌株。
[0038]將捲曲乳桿菌CGMCC N0.6360用MRS液體培養基培養為菌體濃度I X 107CFU/mL的培養液，命名為培養液A。
[0039]將白色念珠菌(Candida albicans)用MRS液體培養基培養為菌體濃度I X IO7CFU/mL的培養液，命名為培養液B。
[0040]將上述培養液A和上述培養液B等體積混合作為實驗組，將單獨的上述培養液B作為對照組。
[0041]分別將ImL的實驗組和對照組培養液，接種到150mL的MRS液體培養基中，37°C下培養24小時，得到共培養的培養液。
[0042]分別取實驗組和對照組的共培養培養液100 μ L，接種到15mL白色念珠菌選擇性培養基平板中(沙氏葡萄糖瓊脂培養基，購自青島高科技園海博生物技術有限公司，貨號:HB0235-5)中，37°C下選擇培養24小時，然後對白色念珠菌進行計數。
[0043]計數結果顯示，實驗組的白色念珠菌菌體濃度僅為7.76 X 105CFU/mL,而對照組的白色念珠菌菌體濃度高達4.67X 106CFU/mL。
[0044]對比例I
[0045]按照實施例1的方法進行測試，不同的是，將實施例1中的捲曲乳桿菌CGMCCN0.6360分別替換為購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌。
[0046]計數結果顯示，對於購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌，實驗組的白色念珠菌菌體濃度也達到了 1.95 X IO6CFUAiL，而對照組的白色念珠菌菌體濃度仍為
4.67X 106CFU/mL。
[0047]實施例2
[0048]本實施例用於說明本發明的菌株對大腸桿菌(Escherichia coli)的拮抗作用。本實施例中所用的大腸桿菌為購自ATCC的商品號為35218的菌株。
[0049]將捲曲乳桿菌CGMCC N0.6360用MRS液體培養基培養為菌體濃度I X 107CFU/mL的培養液，命名為培養液A。
[0050] 將大腸桿菌(Escherichia coli)用MRS液體培養基培養為菌體濃度I X IO7CFU/mL的培養液，命名為培養液B。
[0051]將上述培養液A和上述培養液B等體積混合作為實驗組，將單獨的上述培養液B作為對照組。
[0052]分別將1mL的實驗組和對照組培養液，接種到150mL的MRS液體培養基中，37°C下培養24小時，得到共培養的培養液。
[0053]分別取實驗組和對照組的共培養培養液100 μ L，接種到15mL大腸桿菌選擇性培養基平板中(曙紅亞甲基藍瓊脂培養基，購自青島高科技園海博生物技術有限公司，貨號:HB7010)中，37°C下選擇培養24小時，然後對大腸桿菌進行計數。
[0054]計數結果顯示，實驗組的大腸桿菌菌體濃度僅為2.19X107CFU/mL,而對照組的大腸桿菌菌體濃度高達2.04X 108CFU/mL。
[0055]對比例2
[0056]按照實施例2的方法進行測試，不同的是，將實施例1中的捲曲乳桿菌CGMCCN0.6360分別替換為購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌。
[0057]計數結果顯示，對於購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌，實驗組的大腸桿菌菌體濃度也達到了 7.76X 107CFU/mL，而對照組的大腸桿菌菌體濃度仍為2.04X IO8CFU/mL。
[0058]實施例3
[0059]本實施例用於說明本發明的菌株對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的拮抗作用。本實施例中所用的金黃色葡萄球菌為購自ATCC的商品號為25923的菌株。
[0060]將捲曲乳桿菌CGMCC N0.6360用MRS液體培養基培養為菌體濃度1 X 107CFU/mL的培養液，命名為培養液A。
[0061]將金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)用MRS液體培養基培養為菌體濃度1 X 107CFU/mL的培養液，命名為培養液B。
[0062]將上述培養液A和上述培養液B等體積混合作為實驗組，將單獨的上述培養液B作為對照組。
[0063]分別將ImL的實驗組和對照組培養液，接種到150mL的MRS液體培養基中，37°C下培養24小時，得到共培養的培養液。
[0064]分別取實驗組和對照組的共培養培養液100 μ L，接種到15L的金黃色葡萄球菌選擇性培養基平板上(甘露醇氯化鈉瓊脂培養基，購自青島高科技園海博生物技術有限公司，貨號:ΗΒ4128-1)中，37°C下選擇培養24小時，然後對金黃色葡萄球菌進行計數。
[0065]計數結果顯示，實驗組的金黃色葡萄球菌菌體濃度僅為1.02X 107CFU/mL,而對照組的金黃色葡萄球菌菌體濃度高達7.94X 107CFU/mL。
[0066]對比例3
[0067]按照實施例1的方法進行測試，不同的是，將實施例1中的捲曲乳桿菌CGMCCN0.6360分別替換為購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌。
[0068]計數結果顯示，對於ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌，實驗組的金黃色葡萄球菌菌體濃度也達到了 3.89X 107CFU/mL，而對照組的金黃色葡萄球菌菌體濃度仍為
7.94X 107CFU/mL。
[0069]根據實施例1-3和對比例1-3的結果可以看出，本發明的捲曲乳桿菌CGMCCN0.6360對白色念珠菌(Candida albicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)具有優異的拮抗作用。
[0070]實施例4
[0071]本實施例按照文獻(王紅豔，嗜酸乳桿菌對生殖道上皮細胞的黏附和黏附拮抗作用的研究，中華微生物學和免疫學雜誌，2004年10月第24卷第10期)中的方法測定本發明的捲曲乳桿菌CGMCC N0.6360對陰道上皮細胞的粘附能力。
[0072]經測定，本發明的捲曲乳桿菌CGMCC N0.6360對陰道上皮細胞的粘附指數為16.24±2.17。
[0073]對比例4
[0074]按照實施例4的方法測定購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌。
[0075]經測定，購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌對陰道上皮細胞的粘附指數為
10.37±1.85。
[0076]根據實施例4和對比例4的結果可以看出，本發明的捲曲乳桿菌CGMCCN0.6360具有更高的對陰道上皮細胞的粘附能力。
[0077]實施例5
[0078]本實施例按照文獻(樊永紅，王麗，柳丹，等.米根黴發酵液中乳酸含量的測定方法研究[J].生物技術，2007,17 (I):54-55)中的方法測定本發明的捲曲乳桿菌CGMCCN0.6360的乳酸含量。
[0079]結果本發明的捲曲乳桿菌CGMCC N0.6360的乳酸含量為6.8057g/L。
[0080]對比例5
[0081]按照實施例5的方法測定購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌的乳酸含量。
[0082]經測定，購自ATCC的商品號為33820的捲曲乳桿菌的乳酸含量是6.7834g/L。
[0083]根據實施例5和對比例5的結果可以看出，本發明的捲曲乳桿菌CGMCC N0.6360具有更聞的廣乳酸能力。
[0084]以上詳細描述了本發明的優選實施方式，但是，本發明並不限於上述實施方式中的具體細節，在本發明的技術構思範圍內，可以對本發明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬於本發明的保護範圍。
[0085]另外需要說明的是，在上述【具體實施方式】中所描述的各個具體技術特徵，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重複，本發明對各種可能的組合方式不再另行說明。
[0086]此外，本發明的各種不同的實 施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發明的思想，其同樣應當視為本發明所公開的內容。
【權利要求】
1.一種菌株,該菌株為捲曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)的菌株,其特徵在於，該菌株的保藏號為CGMCC N0.6360。
2.根據權利要求1所述的菌株，其中，該菌株具有SEQID N0:1所示的16S rDNA序列。
3.權利要求1或2所述的菌株在製備用於預防陰道炎的藥物中的用途。
4.根據權利要求3所述的用途，其中，所述陰道炎為細菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
5.根據權利要求3所述的用途,其中，所述陰道炎為白色念珠菌(Candidaalbicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發的陰道炎。
6.權利要求1或2所述的菌株在製備用於治療陰道炎的藥物中的用途。
7.根據權利要求6所述的用途，其中，所述陰道炎為細菌性陰道炎、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、幼兒性陰道炎、月經性陰道炎、老年性陰道炎和混合感染性陰道炎中的至少一種。
8.根據權利要求6所述的用途,其中，所述陰道炎為白色念珠菌(Candidaalbicans)、大腸桿菌(Escherichia coli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的至少一種引發的陰道炎。
9.權利要求1或2所述的菌株在製備陰道護理用品中的用途。
10.權利要求1或2所述的菌株在製備外生殖器衛生用品中的用途。
【文檔編號】C12R1/225GK103911305SQ201310002837
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2013年1月5日 優先權日:2013年1月5日
【發明者】張文杰 申請人:欣力菲生物醫藥技術（天津）有限公司