用於無創性預測或診斷胎膜早破患者的羊水中的炎症和感染的方法
2023-11-11 12:56:57 1
用於無創性預測或診斷胎膜早破患者的羊水中的炎症和感染的方法
【專利摘要】本發明涉及一種通過測量炎症標記物（各種細胞因子）的濃度預測子宮內羊水中炎症標記物的濃度來無創性預測或診斷通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中炎症和/或感染的方法。更特別地，本發明涉及一種通過測量胎膜早破患者中通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中標記物（IL-6、IL-1β、IL-8、MCP-1、GRO-α）的濃度來預測或診斷羊水中炎症和/或感染的方法。與通過使用有創性收集羊水預測或診斷炎症和/或感染的常規方法相比，可更穩定地對孕婦進行本發明的方法。
【專利說明】用於無創性預測或診斷胎膜早破患者的羊水中的炎症和感染的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及用於無創性預測或診斷羊水中的炎症和感染的方法。
【背景技術】
[0002]羊水中的炎症和/或感染是早產和不良的新生兒結果的危險因素，其出現在約50%的早產兒胎膜早破患者中。可以通過微生物培養物和羊水分析進行羊水中的感染/炎症的預測或診斷，例如測量炎症標記物(細胞因子濃度、基質金屬蛋白酶濃度、白細胞計數等)。羊水分析方法是用於預測早產可能性和評估新生兒合併症的風險的最靈敏且特異性的方法。然而，收集用於分析的羊水需要經腹壁羊膜穿刺術，其是一種有創性方法。特別地，由於當胎膜早破患者中羊水體積減少時通常難於進行羊膜穿刺術，所以在美國僅2/3的患者經受該過程。
[0003]儘管優選地使用羊水評定羊水中的炎症，但是因為它是一種有創性方法，提出了使用陰道分泌物用於預測炎症或感染的可替代方法。然而，由於當陰道液暴露於外部時感染的機率較高，所以難於使用陰道液預測羊水中的炎症或感染。也已經證實當與羊水相比較時，炎症標記物的絕對量有顯著性差異。已經證實陰道液不能具有與有創性收集的羊水同樣的可預測性。
[0004]在之前的研究中，本發明人證明了通過Dacron聚酯拭子收集的子宮頸分泌物中的白細胞介素-6 (IL-6)的濃度和通過從診斷為胎膜早破患者經腹壁羊膜穿刺術收集的羊水中的IL-6的濃度之間的強的相關性(Jun JK, Yoon BH等，Am J ObstetGynecoll83:868-873,2000)o然而，由於兩個受試者樣品的絕對濃度之間存在顯著性差異，所以在通過經腹壁羊膜穿刺術收集的羊水中IL-6的截止值難於應用於子宮頸分泌物以分析羊水中的炎症或感染(參見圖1)。其他研究者報導了類似的結果，證實羊水中IL-6的濃度(參見圖2a)低於子宮頸分泌物中IL-6的濃度(參見圖2b)(Rizzo G等,Gynecol ObstetInvestl998 ;46:91-5)(參見圖2)。另外，之前的研究表明通常以pg/ml單位測量子宮頸分泌物中炎症細胞因子的中值或平均值，而以ng/mL單位測量羊水中細胞因子的中值或平均值。由於子宮頸分泌物中炎症細胞因子的濃度比羊水中的低很多，難於直接使用子宮頸液中細胞因子的濃度預測羊水中細胞因子的濃度。
[0005]而且，在本發明人關於用於測量羊水中炎症水平的白細胞計數的之前研究中，本發明人證實通過子宮頸滲漏的羊水中白細胞的數量顯著地高於通過經腹壁羊膜穿刺術收集的羊水中白細胞的數量，表明在通過子宮頸滲漏的羊水中的白細胞計數不適於用作預測炎症或感染的標記物(參見圖3和表I)。已知基質金屬蛋白酶8 (MMP-8)是用於預測炎症水平和早產兒和新生兒併發症的發展的最佳標記物。然而，難於使用通過子宮頸滲漏的液體中的MMP-8作為預測羊水中的炎症或感染的標記物，因為在大多數情況下，即使其在通過經腹壁羊膜穿刺術收集的羊水中的濃度低，但是其在通過子宮頸滲漏的羊水中的濃度顯著增加(參見圖10和表8)。相反，用於確定羊膜水平中炎症水平的IL-1O不適於用作用於預測羊水中的炎症或感染的標記物，因為通過子宮頸滲漏的羊水中IL-1O的濃度顯著地降低，即使該濃度在通過經腹壁羊膜穿刺術收集的羊水中很高(參見圖9和表7)。
[0006]因此，無創性地測量陰道分泌物中炎症標記物的水平以確定的羊水中的炎症或感染。然而，發現用於預測羊水中的炎症或感染的無創性方法並不容易，因為陰道分泌物中的炎症標記物和羊水中的炎症標記物之間的絕對值存在顯著差異。因此，重要的是證實通過經腹壁羊膜穿刺術從胎膜早破患者收集的羊水中炎症標記物與通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中的炎症標記物之間的相關性，並且進一步證實它們的絕對濃度的相似性。這些將通過分析通過子宮頸滲漏的羊水而不需要對胎膜早破患者進行有創性經腹壁羊膜穿刺術，提供預測或診斷羊水中的感染和/或炎症的顯著改善。
[0007][表1]
[0008]根據在通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中的白血球計數的每個截止值預測羊水感染/炎症的靈敏度和特異性。
[0009]
【權利要求】
1.一種用於預測或診斷羊水中的炎症或感染的方法，所述方法包括以下步驟: 1)測量選自由白細胞介素-6(IL-6)、IL-1P、IL-8、單核細胞趨化蛋白-1 (MCP-1)和GRO-Q (生長相關癌基因-a )組成的組中的細胞因子的濃度，所述細胞因子為從胎膜早破患者收集的通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中的炎症標記物；和 2)如果在步驟I)的測量中，IL-6的濃度高於Ing/mL至10ng/mL的截止值、IL-1^的濃度高於100pg/ml至1000pg/ml的截止值、IL-8的濃度高於Ing/mL至30ng/mL的截止值、MCP-1的濃度高於500pg/ml至2500pg/ml的截止值、或GRO-a的濃度高於500pg/ml至5000pg/ml的截止值,則評定為炎症或感染的風險。
2.如權利要求1所述的方法，其中，用羊水收集裝置收集步驟I)的所述通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述羊水收集裝置選自由注射器、移液管、取樣匙、棉拭子、拭子、內拉通氏導管、韓國專利N0.10-0789849的權利要求1或權利要求5中公開的羊水收集裝置、及韓國專利申請N0.2010-0031404的圖2中圖解的羊水收集裝置組成的組中。
4.一種用於預測或診斷通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中的炎症或感染的試劑盒，所述試劑盒包括特異性結合細胞因子的抗體，所述細胞因子選自由IL-6、IL-1P、IL-8、MCP-1和GRO-a組成的炎症標記物的組中，其中，如果結合所述抗體的細胞因子的濃度如下:IL-6的濃度高於Ing/mL至10ng/mL的截止值、IL-1 ^的濃度高於100pg/ml至1000pg/ml的截止值、IL-8的濃度高於Ing/mL至30ng/mL的截止值、MCP-1的濃度高於500pg/ml至2500pg/ml的截止值、或GRO-a的濃度高於500pg/ml至5000pg/ml的截止值,則使用所述試劑盒確定為炎症或感染高風險。
5.如權利要求4所述的試劑盒，其中所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。`
6.如權利要求4所述的試劑盒,其中所述試劑盒進一步包括特異性結合所述抗體的檢測物、洗液和酶反應終止溶液。
7.如權利要求6所述的試劑盒，其中，所述檢測物為用選自由生色酶、螢光物質、放射性同位素和膠體組成的組中的任一種標記的綴合物。
8.如權利要求7所述的試劑盒，其中如果所述綴合物是用所述生色酶標記的，則所述檢測物包括生色底物。
9.如權利要求4所述的試劑盒，其中，所述通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水是用無創性羊水收集裝置收集的。
10.一種用於預測或診斷通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中的炎症或感染的生物晶片，所述生物晶片包括其上整合有生物分子的固體基質，所述生物分子選自由低分子量化合物、配體、適體、肽、多肽、特異性結合蛋白、高分子量化合物和特異性結合細胞因子的抗體組成的組中，所述細胞因子選自由IL-6、IL-P、IL-8、MCP-1和GRO-a組成的炎症標記物的組中，其中，如果結合所述生物分子的細胞因子的濃度如下:IL-6的濃度高於Ing/mL至10ng/mL的截止值、IL-1 ^的濃度高於100pg/ml至1000pg/ml的截止值、IL-8的濃度高於Ing/mL至30ng/mL的截止值、MCP-1的濃度高於500pg/ml至2500pg/ml的截止值、或GRO- a的濃度高於500pg/ml至5000pg/ml的截止值，則使用所述生物晶片確定為炎症或感染聞風險。
11.如權利要求10所述的生物晶片，其中所述固體基質選自由塑料、玻璃、金屬和矽組成的組中。
12.如權利要求4所述的試劑盒的用途，用於預測或診斷通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中的炎症或感染。
13.如權利要求10所述的生物晶片的用途，用於預測或診斷通過子宮頸滲漏到陰道裡的羊水中的 炎症或感染。
【文檔編號】G01N33/58GK103782176SQ201280043651
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年9月5日 優先權日:2011年9月8日
【發明者】尹保鉉, 樸重信, 全鍾官, 樸贊旭 申請人:首爾大學校 產學協力團, Ob Med公司