提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法

2024-04-02 16:04:05

專利名稱：：提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法
技術領域：
：本發明涉及一種提高試劑盒穩定性的方法，尤其涉及一種提高含酶的生化試劑盒穩定性的方法。
背景技術：
：穩定性是生化試劑盒必須具有的基本屬性，是確保產品在使用過程中安全有效的重要指標。當前大部分的生化試劑盒幾乎都應用了酶試劑，而酶屬於生物大分子，大多數的酶都是蛋白質，酶的高級結構對環境十分敏感，容易受各種因素影響，穩定性較差，即使在最適反應條件下，隨著反應時間的延長，酶分子也會逐漸失活。因此，酶的穩定性直接影響到含酶試劑盒的穩定性。酶的穩定性(enzymestability)是指酶分子抵抗各種不利因素影響，維持一定空間結構，保持生物活性相對穩定的能力。生物催化功能是酶最重要的特徵，也是我們研究和應用酶的前提。酶分子維持穩定的生物活性，首先要求結構穩定，特別是高級結構的穩定。在細胞內，酶分子受到內膜系統保護，而且處於還原性環境，不易被氧化失活。而試劑盒保存的環境條件比細胞內環境惡劣很多，酶不穩定的缺點顯得尤為突出。在臨床生化含酶試劑盒的生產、提取、精製加工、保存、運輸和使用過程中，其中的酶分子都將受到各種不利因素的影響，其高級結構和生物功能也將發生改變，嚴重情況下發生酶蛋白變性、酶降解，酶活力銳減或完全喪失，甚至可能產生毒害。因此，酶的穩定性關係到含酶試劑盒在臨床應用中的成本和效果，酶的穩定性不足將大大降低含酶試劑盒在臨床使用中的應用範圍。因此，改善和提高臨床生化含酶試劑盒中酶的穩定性對試劑盒本身的穩定性具有重要意義。，當前，改善和穩定酶分子的方法主要通過兩大途徑來實現。一是改造酶分子，即通過破譯高穩定性酶分子的特殊結構規律，就可指導我們利用蛋白質工程或化學修飾手段設計並獲得所需的高穩定性酶。二是通過優化微環境，改良酶的作用體系，改善和提高酶的穩定性。酶分子改造又包括蛋白質工程、化學修飾這兩種手段。蛋白質工程(proteinengineering)是綜合了分子生物學、結構生物學、計算生物學等的一門交叉學科，它以蛋白質結構與功能關係為基礎，按照人們的需要，進行計算機輔助分子設計，採用分子生物學新技術來改造天然蛋白質，並創造出性能更為優良的新蛋白質分子。目前，提高酶分子穩定性是蛋白質工程最活躍、效果最顯著的領域之一，用蛋白質工程方法改造酶分子，可以從根本上塑造出結構和功能穩定的新分子，但經過改造後的酶分子一般只對一種不利因素的穩定性增加，例如對高溫、氧化劑、變性劑或酸鹼中的某一條件具有抗性，而對其它因素的穩定性不足，且穩定性增加的程度有限。化學修飾法是通過化學試劑特異性修飾酶分子的某個或某類胺基酸，從而穩定蛋白質的構象，提高其穩定性。在天然酶分子上接一些化學基團，可望得到多種多樣的修飾酶，只要選擇合適的修飾劑，利用化學修飾法可快速、廉價地提高酶的穩定性，甚至可合成新的酶種。酶分子可離解的基團如氨基(-NH2)、羧基(-COOH)、羥基(-OH)、巰基(-SH)、咪唑基等都可進行修飾。然而，化學修飾法也存在一些問題，例如可能導致酶的生物活性降低，某些耦聯物在不同環境條件下穩定性可能會有較大差異，另外某些有害化學修飾劑的使用還可能影響到含酶試劑盒的使用和正常效果。優化微環境的方法又可藉助以下幾種手段和措施予以實現(1)添加穩定劑。添加穩定劑來穩定酶是一種方便、經濟、有效的方法，對大部分的酶均有效。穩定劑主要包括防腐劑、多羥基化合物、食用膠、鹽類、胺基酸等多種物質。(2)採用緩衝溶液保存。pH值會影響酶的結構的穩定性，過酸、過鹼的微環境會強烈影響酶蛋白的構象，甚至使酶變性，通過添加pH值為6~8的緩衝溶液可有效提高酶分子的穩定性。G)添加共溶劑。糖類、多元醇、胺基酸及其衍生物、無機鹽、甘油、多聚物(如聚乙二醇)等一般稱為蛋白質共溶劑，高濃度的共溶劑能穩定蛋白質，並且共溶劑混合使用時增強蛋白質穩定性的效果遠大於單一共溶劑穩定能力之和。(4)添加抗氧化保護劑和還原劑。一些酶分子表面含Cys，易被空氣中的氧緩慢氧化，使其電荷和形態改變而失活，加入半胱氨酸、巰基乙醇、還原谷光甘肽等巰基試劑可以防止這種破壞。由上可見，酶的穩定性研究已取得長足進展，所以才有今天臨床生化含酶試劑盒應用的突飛猛進。上述的各種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的手段和措施，都具有一定作用和效果，部分手段和措施甚至可合併使用以加強效果。然而即使如此，現有臨床生化含酶試劑盒的穩定性依然不夠高，應用範圍還是受到限制，穩定性的不斷提高、使用期限的不斷延長是本領域技術人員一直所要追求的目標。此外，不同種類的臨床生化含酶試劑盒，提高其穩定性的現有方法可能各不相同，這也為一些臨床生化含酶試劑盒的生產廠家帶來了諸多困難。因此，開發一種低成本、易操作且具有高兼容性和高通用性的提高生化含酶試劑盒穩定性的技術與方法，對於每一個臨床生化含酶試劑盒生產廠家來說都具有重要意義。
發明內容本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種工藝簡單、容易操作、成本低廉、.兼容性強、通用性強、且能有效延長含酶試劑盒使用期的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法。為解決上述技術問題，本發明提出的技術方案為一種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於在製備臨床生化含酶試劑盒的混合攪拌步驟中，向攪拌容器的混合配料中和/或混合配料液面上方持續通入惰性氣體，使混合配料液面上方處於惰性氣體的氣氛保護中。上述技術方案的基本原理是當影響酶試劑活性的其它條件一致時，則與氧的接觸是影響含酶試劑盒穩定性的最終因素，也是最重要的因素；而上述技術方案通過在含酶試劑盒生產的混合攪拌過程中使用惰性氣體進行保護，有效隔斷了混合攪拌配製試劑過程中試劑,氧的接觸，使試劑中酶被氧化的可能性進一步降低，大大延長了成品含酶試劑盒的使用期，相比於普通的含酶試劑盒，經上述技術方案處理後，含酶試劑盒的使用期能延長34個月，明顯提高了含酶試劑盒的穩定性。上述技術方案打破了提高臨床生化含酶試劑盒穩定性常規方法的思路，即不使用穩定性添加劑，也不對試劑本身的組分進行改進，而是通過優化臨床生化含酶試劑盒的製備方法和製備工藝，來達到延緩臨床生化含酶試劑盒失效期的目的。在上述技術方案的同一技術構思下，本發明還提出了另一種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於在臨床生化含酶試劑盒的製備過程中，使混合攪拌後得到的混合配料在惰性氣體的保護下進行灌封，所述灌封的具體操作方式為先向灌裝用的空試劑瓶中充填惰性氣體，待惰性氣體充滿試劑瓶後同時向試劑瓶中灌注配製好的混合配料，直至試劑瓶封蓋。在製備臨床生化含酶試劑盒的灌封過程中用惰性氣體進行保護與在混合攪拌過程中用惰性氣體進行保護的方法，均具有相同的技術思路，即都是通過優化製備工藝的氣體環境來降低含酶試劑盒製備過程中與氧的接觸機會，同時使最後的成品含酶試劑盒也處於缺氧環境中，從而延長成品含酶試劑盒的使用期，提高含酶試劑盒的穩定性。相比於普通試劑盒，上述對灌封過程進行惰性氣體保護後能使試劑盒的穩定期至少延長810個月。作為對上述技術方案的進一步改進和優化，還可將上述兩種方法結合起來，即先6在製備臨床生化含酶試劑盒的混合攪拌步驟中，向攪拌容器的混合配料中和/或混合配料液面上方持續通入惰性氣體，使混合配料液面上方處於惰性氣體的氣氛保護中；再在混合攪拌步驟完成後的灌封試劑步驟中，使所述混合配料在惰性氣體的保護下進行灌封，灌封的具體操作方式為先向灌裝用的空試劑瓶中充填惰性氣體，待惰性氣體充滿試劑瓶後同時向試劑瓶中灌注配製好的混合配料，直至試劑瓶封蓋。通過結合上述兩種方法，能使臨床生化含酶試劑盒成品的穩定期延長至少一年，進一步加強了本發明的技術效果。在上述的各個技術方案中，向攪拌容器的混合配料中持續通入惰性氣體可以通過下述操作實現先在配製混合配料的攪拌容器中植入通氣管道，通氣管道的出氣口應儘量靠近攪拌容器底部，然後在試劑的混合攪拌過程中通過該通氣管道向沒過出氣口的混合配料中持續通入惰性氣體，使混合配料液面上方處於惰性氣體的氣氛保護中。在上述的各個技術方案中，向攪拌容器的混合配料液面上方持續通入惰性氣體可以通過下述操作實現在攪拌容器的頂部靠近容器壁的位置安裝一根通氣管道，並使該通氣管道的出氣口儘量接近混合配料液面但不讓液面沒過出氣口，這樣也能夠使混合配料液面上方處於惰性氣體的氣氛保護中。當配製試劑的量較多、盛裝混合配料的容器體積較大時，優選採用第一種操作方式或合併採用兩種操作方式實現；當配製試劑的量少、容器體積不大時，可採用第二種操作方式實現。上述的各種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法中，所述灌封試劑步驟中的惰性氣體優選是通過針頭充填到試劑瓶中，這樣更易對灌封過程進行操控，更便於實現灌封過程的自動化。控制進入針頭的氣壓優選為0.4Mpa0.6Mpa。灌封過程中以看見試劑瓶中的試劑被惰性氣體吹起小窩窩為佳，且儘量保證試劑瓶中的試劑不溢出，這樣可保證試劑盒成品合格率達到95%100%。如果氣體壓力過大，試劑瓶中的試劑易被吹出而汙染灌裝設備，造成不必要的浪費，且灌裝劑量容易出現較大偏差；如果氣體壓力太小，則試劑瓶內的空氣有可能驅趕不盡，達不到最好的灌封效果。上述^I各種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法中，所述灌封試劑步驟中惰性氣體的充填流量和充填時間優選能夠保證試劑瓶的試劑液面與瓶蓋間的空隙中全部充滿惰性氣體，以盡最大可能減少試劑瓶中氧氣的含量，因為試劑瓶液面上方空隙中的氧含量對試劑的穩定性有很大影響。惰性氣體的充填流量和充填時間可以由本領域普通技術人員根據試劑瓶的容量大小、氣體流量和灌封速度來確定，惰性氣體的充填流量優選控制在2L/min10L/min。上述的各種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法中，所述惰性氣體優選為密度比空氣大的惰性氣體(例如氬氣)，這樣更有利於惰性氣體對攪拌容器中的混合配料和試劑瓶中的試劑形成保護，也更有利於排出攪拌容器或試劑瓶中的空氣成分。上述各技術方案的混合攪拌步驟中，向混合配料中持續通入的惰性氣體優選為氮氣，因為氮氣成本相對便宜，且來源廣泛，氮氣通氣的時間建議不少於10min，通氣時的氮氣流量優選控制在2L/min10L/min;但由於氮氣密度與空氣密度接近(比空氣略小)，最後在液面上方形成的惰性氣體保護層效果達不到最好，因此可在混合配料液面上方再通入一定量的氬氣以形成氬氣為主的惰性氣體保護層，因為氬氣是一種無色、無味、無毒且密度比空氣大的氣體(密度為1.7836kg/m3((TC下)，大於相同條件下的空氣密度1.2928kg/m3)，空氣中的含量為1%，同時氬氣也是一種較為經濟的惰性氣體(但相對於氮氣要稍貴)；氬氣通入量的多少可根據混合配料持續使用和保存時間的長短來確定，使用時間較長則通氬氣的量相對較多；氬氣流量優選控制在2L/min10L/min。如果經濟條件允許，也可在混合攪拌全程中持續通入氬氣，最終在液面上方形成氬氣的惰性氣體保護層。與現有技術相比，本發明的優點在於提供了多種延長含酶試劑盒使用期、提高含酶試劑盒穩定性的方法。本發明的方法不僅非常簡單、容易操作，而且成本低廉，效果顯著，最高能延長臨床生化含酶試劑盒使用期達一倍以上。本發明的方法在突破傳統的思路的基礎上，通過製備工藝上的優化設計，取得了意想不到的技術效果。本發明的方法並不排斥4專統的提高含酶試劑盒穩定性的方法，換言之，本發明的方法完全可以與現有的多種傳統方法合併使用而互不影響，兼容性強，可以在現有方法的基礎上取得更進一步的技術效果。此外，本發明的方法適用於各種臨床生化含酶試劑盒，具有很強的通用性，生產不同種類含酶試劑盒的廠家均可以應用。圖1為本發明實施例1的工藝流程圖；圖2為本發明實施例2的工藝流程圖3》本發明實施例3的工藝流程圖。具體實施例方式實施例l:提高丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒穩定性的方法一種丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒，該診斷試劑盒的主要原料成份包括Rl試劑a.Tris緩衝液(pH=7.8)b.L-丙氨酸c.蘋果酸脫氫酶(MDH)d.乳酸脫氫酶(LDH)啟動液a.煙醯胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)b.a-酮戊二酸80mmol/L450mmol/L>600U/L〉1200U/L0.18mmol/L18mmol/L在該丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒的製備過程中，通過本發明的方法來提高該診斷試劑盒的穩定性，具體工藝流程如圖1所示1、領料從倉庫中領取製備上述丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒所需的各種原料成份，通過傳遞窗傳入潔淨室；2、工藝設備的預處理取試劑瓶，經洗滌、恆溫乾燥箱乾燥後，送入傳遞窗，用紫外燈滅菌，再傳送至分裝間，並按照質檢要求對試劑瓶的質量進行質檢；用稀鹽酸清洗量筒等稱量器具，再用純化水衝洗乾淨，烘乾稱量器具；所有的通氣管道、分裝管道用純化水衝洗，衝洗用的純化水為管道容積的IO倍以上，衝洗完後將管道甩幹備用；3、混合攪拌(1)根據所需的試劑配製總量以及各組分濃度，計算出各組成成分的用量，然後用稱量器具進行準確稱量；(2)準備啟動液先用純化水清洗配料桶，向清洗後的配料桶中加入配製總量80%的純化水，再依次加入NADH和a-酮戊二酸，攪拌至完全溶解，再加入純化水補足至配製總量得到啟動液；G)配製R1試劑清洗配料桶，然後向配料桶中加入配製總量80。/。的Tris緩衝液，再依次加入L-丙氨酸、MDH和LDH，攪拌至完全溶解，最後再加入Tris緩衝液補足至總量，攪拌均勻；將氮氣通氣管道插入配料桶底部並持續通入氮氣，氮氣流量控制在3L/min，通氮氣10min後再利用配料桶頂部設置的一氬氣通氣管道向混合配料的液面上方通入一定量的氬氣，氬氣流量控制在為2L/min,以使得配料桶的液面上方處於氬氣為主的惰性氣氛保護中；最後密封配料桶後進入下一工序；4、灌封試劑將上述配製好的R1試劑和啟動液按常規的灌裝機標準操作規程進行灌裝，將灌裝後的試劑盒半成品裝入周轉籃，送至傳遞窗交下一工序；5、貼印、包裝列印標籤，在灌封好的試劑瓶上貼標，粘貼瓶籤時應對試劑瓶的密封性進行檢測，防止試劑瓶密封不好、試劑洩露而造成包裝汙染；標籤粘貼完後將試劑瓶傳到組裝操作臺上，將已貼標籤的試劑瓶按標示規格裝入包裝盒內，檢驗合格後，用熱收縮機對試劑盒進行覆膜，完成試劑盒的整個製備過程。在上述的整個工藝流程中，操作時應選擇離迴風近的地方，操作過程中如發現通氣管道的通氣壓力不足，應及時停止操作，並把配製好的混合配料密封好。開瓶穩定性實驗-對本實施例1製備的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒進行開瓶穩定性實驗(儀器AU400)，並以未採用本發明方法的普通丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒開瓶作為對比，取同批號同一質控血清(靶值86U/L)連續測定35天，其測試結果如下表l所示-表l:實施例1中試劑盒開瓶穩定性測試對比實驗數據(單位mmol/L)序號本發明試劑盒普通試劑盒序號本發明試劑盒普通試劑盒184.385.11986.685.6285.691.62084.783.2387.384.22185.482.5483.886.02286.291.7584.682.32381.887.0686.084.42486.582.4781.985.82584.681.6887.191.42685.085.5984.583.32786.788.410.82.884.02887.984.31184.786.42989.482.71288.880.13085.581.81381.389.73184.380.31486.284.33288.278.21585.183.63387.175.31685.587.93483.672.11787.482.53586.269.71885.282.5本實施例1的診斷試劑盒結果統計均值(X)=85.4U/L標準差(SD)=1.89U/L變異係數(CV%)=2.21%普通丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒結果統計均值(X)-83.6U/L標準差(SD)=4.77U/L變異係數(CV%)=5.71%以上統計結果顯示，本實施例1製備的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒比未用惰性氣體保護的普通丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒變異係數要小，穩定性更好。10保存期觀察實驗對本實施例1製備的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒進行保存期觀察實驗，用同一批號的本實施例診斷試劑盒，分成24瓶，每月開啟一瓶作留樣觀察，在AU400生化儀上定標，並記錄水空白、標準點的吸光度值(S2ABS)、K因子值和試劑空白值，實驗結果如下表2所示，標準品為羅氏公司產品(ALT為86.00mmol/L)。表2:實施例1製備的試劑盒測定同一校準品16個月內的實驗數據列表tableseeoriginaldocumentpage11根據以上表2、表3的穩定性對比實驗數據，我們分別從水空白、S2ABS、K因子值和試劑空白值幾個方面進行比較-1、本實施例1的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒的水空白變化量在-0.0001-0.0014之間變化，而未加惰性氣體的普通丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒其水空白變化量在-0.0002~-0.0058之間變化。可見未加惰性氣體試劑的水空白變化量較大，說明該試劑的本底值在進行性增高，該試劑在沒有參加化學反應前，自身已經發生了化學變化；而本實施例1方法製備得到的試劑水空白變化量小。兩相比較，本實施例1的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通試劑盒要穩定。2、本實施例1的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒的試劑空白變化量在1.2749~1.4236之間變化，而未加惰性氣體的普通丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒其試劑空白變化量在0.63721.4222之間變化。可見未加惰性氣體試劑的試劑空白變化量較大，說明試劑中的成份NAD.H在進行性降低，且降低幅度大，在第14個月時已超過試劑標準要求的範圍(〉0.9000);而本實施例1方法製備得到的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒試劑空白變化量小，且在試劑穩定期末的試劑空白值還在試劑標準要求的範圍內。兩相比較，本實施例1的診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通診斷試劑盒要穩定。'3、本實施例1的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒的S2ABS變化量在-0.0186~-0.0168之間變化，而未加惰性氣體的普通丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒其S2ABS變化量在-0.0180~-0.0062之間變化。本實施例1的診斷試劑盒K因子值[K—示準液濃度(S)/(S2ABS-水空白)]變化量在-4725-5584之間變化，而未加惰性氣體的普通診斷試劑盒的K因子值在-4859~-215000之間變化。可見，未加惰性氣體試劑K因子值在進行性增高，且幅享較大。而在臨床檢測過程中，K因子值應維持在一較窄的波動範圍內，否則在測定樣本過程中，易造成較大的誤差，誤差造成的原因也主要是因為試劑穩定性不夠。因此兩相比較，得出的結論同樣是本實施例1的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通試劑盒穩定。通過上述工藝製備得到的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒，其在2'C8'C條件下密閉避光Cr存可穩定16個月，開瓶上機2'C8'C條件下避光儲存可穩定35天，而現有的丙氨酸氨基轉移酶診斷試劑盒的穩定期一般只有12個月，開瓶穩定期一般不到20天。實施例2:提高碳酸氫根(HC03')診斷試劑盒穩定性的方法一種可用於定量測定人血清(或血漿)中碳酸氫根含量的碳酸氫根診斷試劑盒，該碳酸氫根診斷試劑盒的主要原料成份包括Tris緩衝液50.0mmol/L磷酸烯醇丙酮酸(PEP)5.0mmol/L煙醯胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)0.5mmol/L磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)2U/mL疊氮化鈉(NaN3)0.03g/L硫酸鎂lO.Ommol/L蘋果酸脫氫酶(MDH)1U/mL。上述診斷試劑盒的PH值範圍為7.60土0.10，在該診斷試劑盒的製備過程中，通過本發明的方法來提高該碳酸氫根診斷試劑盒的穩定性，具體工藝流程如圖2所示1、領料從倉庫中領取製備碳酸氫根診斷試劑盒所需的各種原料，通過傳遞窗傳入潔淨室；2、n:.藝設備的預處理取試劑瓶，經洗滌、恆溫乾燥箱乾燥後，送入傳遞窗，用紫外燈滅菌，再傳送至分裝間，並按照質檢要求對試劑瓶的質量進行質檢；用稀鹽酸清洗量筒等稱量器具，再用去離子純化水衝洗乾淨，烘乾稱量器具；所有的通氣管道、分裝管道用純化水衝洗，衝洗用的純化水為管道容積的IO倍以上，衝洗完後將管道甩幹備用；3、混合攪拌根據所需的試劑配製總量以及各組分濃度，計算出各組成成分的用量，然後用稱量器具進行準確稱量；將稱量後的原料倒入攪拌容器中進行攪拌，混合均勻，配製後各原料成分的濃度滿足上述要求4、灌封試劑將上述配製好的混合配料按常規灌裝機標準操作規程進行灌裝，整個灌封過程是在氬氣保護下進行，具體的操作方式為灌封前先檢査氬氣氣體儲存瓶的壓力是否正爭，如果壓力不足，說明氬氣儲量不足，需及時更換和補充；檢査完畢後連接好氬氣的通氣管道，本實施例設有一根從氬氣儲存瓶接至灌裝試劑瓶處的氬氣通氣管道；該通氣管道固定在注液用的分裝管道上，該通氣管道的管口與分裝管道的管口平行；然後打開供氣閥，檢査通氣管道是否漏氣，如不漏氣，及時關閉閥門，如有漏氣，及時修復；通氣管道的末端需用75%的酒精進行消毒；然後打開氬氣瓶閥門，控制氬氣流量為5L/min，利用通氣管道先向空試劑瓶中充填氬氣，1000ml的試劑瓶12s基本能充滿，500ml的試劑瓶6s能充滿(充填時間完全可根據氣體流量和試劑瓶容積大小進行確定)，但最13低不少於3秒，因為充填時間過短會影響本實施例試劑盒的封存效果；待試劑瓶中的空氣排出後，開啟注液闊並利用分裝管道同時向試劑瓶中分裝配製好的混合配料，分裝過程中繼續通入氬氣，直至試劑瓶封蓋；灌封過程中隨時檢查氣壓，灌封完成後及時關閉各個閥門；將灌封后的試劑盒半成品裝入周轉籃，送至傳遞窗交下一工序；5、貼印、包裝列印標籤，在灌封好的試劑瓶上貼標，粘貼瓶籤時應對試劑瓶的密封性進行檢測，防止試劑瓶密封不好、試劑洩露而造成包裝汙染；標籤粘貼完後將試劑瓶傳到組裝操作臺上，將已貼標籤的試劑瓶按標示規格裝入包裝盒內，檢驗合格後，用熱收縮機對試劑盒進行覆膜，完成試劑盒的整個製備過程。在上述的整個工藝流程中，操作時應選擇離迴風近的地方，操作過程中如發現氬氣通氣管道的通氣壓力不足，應及時停止操作，並把配製好的混合試劑密封好。為了控制灌封過程中的氣體壓力，需要在氬氣的通氣管路上安裝三塊壓力表在氬氣儲存瓶出口附近的管哮上安裝第一塊壓力顯示錶，以便直觀地看到出儲存瓶的氬氣氣壓；第二塊壓力表安裝於灌封設備之前，以顯示進入灌封設備之前的氣體壓力；第三塊壓力表則安裝於灌封設備的流量計上，以便最終控制進入通氣管道末端的氣壓。開瓶穩定性實驗對本實施例2製備的碳酸氫根診斷試劑盒進行開瓶穩定性實驗(儀器AU400)，並以未採用本發明方法的普通碳酸氫根診斷試劑盒開瓶作為對比，取同批號同一質控血清(耙值14.6mmol/L)連續測定35天，其測試結果如下表4所示表4:實施例2中試劑盒開瓶穩定性測試對比實驗數據(單位mmol/L)tableseeoriginaldocumentpage14tableseeoriginaldocumentpage15本實施例2的診斷試劑盒結果統計均值(X)44.4mmol/L標準差(SD)=0.6196mmol/L變異係數(CV%)=4.24%普通碳酸氫根診斷試劑盒結果統計均值(X)=11.42mmol/L標準差(SD)=2.44mmol/L變異係數(CV%)=16.75%以上統計結果顯示，本實施例2的診斷試劑盒比未用惰性氣體保護的普通診斷試劑盒變異係數要小，穩定性更好，且未加惰性氣體的普通診斷試劑盒在第29天就檢測不出結果。保存期觀察實驗對本實施例2的碳酸氫根診斷試劑盒進行保存期觀察實驗，用同一批號的本實施例診斷試劑食，分成24瓶，每月開啟一瓶作留樣觀察，在AU400生化儀上定標，並記錄水空白、標準點的吸光度值(S2ABS)、K因子值和試劑空白值，實驗結果如下表5所示，標準品為四川邁克公司產品(C02為25.00mmol/L)。表5:實施例2製備的碳酸氫根診斷試劑盒測定同一校準品兩年內的實驗數據列表tableseeoriginaldocumentpage15根據上表5兩年內水空白、S2ABS、K因子值和試劑空白數據，其變化量相對穩定，其檢測數據均在可接受範圍內，可見本實施例2的診斷試劑盒在兩年之內穩定性良好。而未採用惰性氣體保護的普通碳酸氫根診斷試劑盒的保存期觀察實驗數據如下表6所示-表6:普通碳酸氫根診斷試劑盒測定同一校準品兩年內的實驗數據列表月份12345678水空白0.00670.00640馬90.00710扁90.00720.00710.0072S2ABS0.03640.03730.03690.03720.03670扁50.0370.0364K因子842809833831839853836856試劑空白1.37251.36481.35891.34631.33491.32711.31381.3066月份910111213141516水空白0駕40細70.0090.00960.01090.01070.01170.0128S2ABS0.03530.03490.03540.0350.03480.03560.03470.0339K因子9299549479841046100410871185試劑空白1.26291.20761.10131.01610.91590.86710.77380.7254月份1718192021222324水空白0.0130.01430.01490.01540.01730.01970扁50.0243S2ABS0.03330.03250.03220.03150扁50.02870.02560.0252K因子123213741445155318942778409227778試劑空白0.70320.66530.62690.58470.54680.53220.51780.5015根據以上表5、表6的穩定性對比實驗數據，我們分別從水空白、S2ABS、K因子值和試劑空白值幾個方面進行比較1、本實施例2的碳酸氫根診斷試劑盒的水空白變化量在0.0065~0.0108之間變化，而未加惰性氣體的普通碳酸氫根診斷試劑盒其水空白變化量在0.00640.0243之間變化。可見未加惰性氣體試劑的水空白變化量較大，說明該試劑的本底值在進行性增高，該試劑在沒有參加化學反應前，自身已經發生了化學變化；而本實施例方法製備得到的碳酸氫根診斷試劑盒水空白變化量小。兩相比較，本實施例2的診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通診斷試劑盒要穩定。2、本實施例2的碳酸氫根診斷試劑盒的試劑空白變化量在1.3703~1.2148之間變化，而未加惰性氣體的普通碳酸氫根診斷試劑盒其試劑空白變化量在1.3725-0.5015之間變化。可見未加惰性氣體試劑的試劑空白變化量較大，說明試劑中的成份NADH在進行性降低，且降低幅度大，已超過試劑標準要求的範圍(〉0.9000);而本實施例方法製備得到的碳酸氫根診斷試劑盒試劑空白變化量小，且在試劑穩定期末的試劑空白值還在試劑標準要求的範圍內。兩相比較，本實施例2的診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通診斷試劑盒要穩定。3、本實施例2的碳酸氫根診斷試劑盒的S2ABS變化量在0.0343-0.0376之間變化，而未加惰性氣體的普通碳酸氫根診斷試劑盒其S2ABS變化量在0.0252~0.0372之間變化。本實施例2的碳酸氫根診斷試劑盒K因子值[K—示準液濃度(S)/(S2ABS-水空白)]變化量在827-1063之間變化，而未加惰性氣體的普通碳酸氫根診斷試劑盒的K因子值在809-27778之間變化。可見，未加惰性氣體試劑K因子值在進行性增高，且幅度較大。而在臨床檢測過程中，K因子值應維持在一較窄的波動範圍內，否則在測定樣本過程中，易造成較大的誤差，誤差造成的原因也主要是因為試劑穩定性不夠。因此兩相比較，得出的結論同樣是本實施例2的診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通試劑盒穩定。由上可見，通過本實施例2工藝製備得到的碳酸氫根診斷試劑盒，其在2。C8。C條件下密閉避光貯存可穩定22個月以上(普通的碳酸氫根試劑盒穩定期一般只有12個月)，而開瓶上機2。C8t:條件下避光儲存可穩定35天。實施例3:提高酶法葡萄糖診斷試劑盒穩定性的方法一種酶法葡萄糖診斷試劑盒，該診斷試劑盒的主要原料成份包括葡萄糖氧化酶(GOD)>15U/ml過氧化物酶(POD)〉1.5U/ml變旋酶〉2.0U/ml4-氨基安替比林0.25mmol/L苯酚0.75mmol/L在該診斷試劑盒的製備過程中，通過本發明的方法來提高該葡萄糖診斷試劑盒的穩定性，具體工藝流程如圖3所示1、領料從倉庫中領取製備葡萄糖診斷試劑盒所需的各種原料，通過傳遞窗傳入潔淨室；2、工藝設備的預處理取試劑瓶，經洗滌、恆溫乾燥箱乾燥後，送入傳遞窗，用紫外燈滅菌，再傳送至分裝間，並按照質檢要求對試劑瓶的質量進行質檢；用稀鹽酸清洗量筒等稱量器具，再用去離子純化水衝洗乾淨，烘乾稱量器具；所有的通氣管道、分裝管道用純化水衝洗，衝洗用的純化水為管道容積的IO倍以上，衝洗完後將管道甩幹備用；3、混合攪拌(1)根據所需的試劑配製總量以及各組分濃度，計算出各組成成分的用量，然後用稱量器具進行準確稱量；(2)首先用純化水清洗配料桶，再向配料桶中加入配製總量80%的純化水；然後加入取用的4-氨基安替比林和苯酚，攪拌至完全溶解；將氮氣通氣管道插入配料桶底部並持續通入氮氣，氮氣流量控制在3L/min，通氣30min以儘可能排除配料桶中的空氣；再依次加入葡萄糖氧化酶、過氧化物酶和變旋酶，攪拌至溶解，最後加入純化水至配製總量，再繼續通氮氣15min;本實施例3設有兩根氬氣通氣管道，進氣口均共同連通至氬氣儲存瓶，一根氬氣通氣管道的出氣口設在配料桶的頂部，管口離配料桶中的液面約2cm，另一根氬氣通氣管道的出氣口接至灌封設備用於充填試劑瓶；在上述的氮氣通氣完畢後，通過配料桶頂部設置的氬氣通氣管道向混合配料的液面上方再持續通入氬氣，氬氣流量控制在為2L/min，以使得配料桶的液面上方保持氬氣氣氛，並進入下一工序；在通上述惰性氣體前應先檢査惰性氣體儲存瓶的壓力是否正常，如果壓力不足，說明惰性氣#儲量不足，需及時更換和補充；4、灌封試劑將上述配製好的試劑按常規灌裝機標準操作規程進行灌裝，整個灌封過程是在氬氣保護下進行，具體的操作方式為將接至試劑瓶的氬氣通氣管道固定在注液用的分裝管道上，該通氣管道的管口與分裝管道的管口平行；然後打開供氣閥，檢查各通氣管道是否漏氣，如不漏氣，及時關閉閥門，如有漏氣，及時修復；通氣管道的末端安裝一針頭，針頭用75%的酒精進行消毒;然後打開管道閥門，控制氬氣流量為5L/min，控制進入針頭的氣壓為0.4Mpa0.6Mpa，利用通氣管道末端的針頭先向空試劑瓶中充填氬氣，待試劑瓶中的空氣排出後，開啟注液閥同時向試劑瓶中分裝配置好的混合配料，分裝過程中繼續通入氬氣，直至試劑瓶封蓋；在灌封過程中，接至配料桶的氬氣通氣管道繼續通入氬氣，以保證灌封時配料桶中待分裝的混合配料也處於氬氣的保護環境中；灌封過程中隨時檢査氣壓，灌封完成後及時關閉各個閥門；將灌封后的試劑盒半成品裝入周轉籃，送至傳遞窗交下一工序；5、貼印、包裝列印標籤，在灌封好的試劑瓶上貼標，粘貼瓶籤時應對試劑瓶的密封性進行檢測，防止試劑瓶密封不好、試劑洩露而造成包裝汙染；標籤粘貼完後將試劑瓶傳到組裝操作臺上，將已貼標籤的試劑瓶按標示規格裝入包裝盒內，檢驗合格後，用熱收縮機對試劑盒進行覆膜，完成試劑盒的整個製備過程。在上述的整個工藝流程中，操作時應選擇離迴風近的地方，操作過程中如發現氮氣或氬氣通氣管道的通氣壓力不足，應及時停止操作，並把配製好的混合配料密封好。為了控制灌封過程中的氣體壓力，需要在氬氣的通氣管路上安裝三塊壓力表在氬氣儲存瓶出口附近的管路上安裝第一塊壓力顯示錶，以便直觀地看到出儲存瓶的氬氣氣壓；第二塊壓力表安裝於灌封設備之前，以顯示進入灌封設備之前的氣體壓力；第三塊壓力表則安裝於寧封設備的流量計上，以便最終控制進入通氣管道末端針頭的氣壓。開瓶穩定性實驗對本實施例3製備的葡萄糖診斷試劑盒進行開瓶穩定性實驗(儀器AU400),並以未採用本發明方法的普通葡萄糖診斷試劑盒開瓶作為對比，取同批號同一質控血清(耙值8.5mmol/L)連續測定35天，其測試結果如下表7所示表7:實施例3中試劑盒開瓶穩定性測試對比實驗數據(單位mmol/L)tableseeoriginaldocumentpage19本實施例3診斷試劑盒結果統計均值(X)=8.49mmol/L標準差(SD)=0.1086mmol/L變異係數(CV%)=1.28%普通葡萄糖診斷試劑盒結果統計-.均值(X)=8.45mmol/L標準差(SD)=0.1555mmol/L變異係數(CV%)=1.83%以上統計結果顯示，本實施例3的診斷試劑盒比普通葡萄糖診斷試劑盒的變異係數要小，穩定性更好。保存期觀察實驗對本實施例3製備的葡萄糖診斷試劑盒進行保存期觀察實驗，用同一批號的本實施例診斷試劑盒，分成24瓶，每月開啟一瓶作留樣觀察，在AU400生化儀上定標，並記錄水空白、標準點的吸光度值(S2ABS)和K因子值，實驗結果如下表8所示，標準品為LEADMAN公司產品(GLU為10.0mmol/L)。表8:-實施例3製備的葡萄糖診斷試劑盒測定同一校準品兩年內的實驗數據列表tableseeoriginaldocumentpage20根據以上表8的實驗數據可知，兩年內的水空白、S2ABS、K因子值的變化量相對穩定，其檢測數據均在可接受範圍內，因此本實施例3的診斷試劑盒在兩年內的穩定性良好。而未採用惰性氣體保護的普通葡萄糖診斷試劑盒的保存期觀察實驗數據如下表9所示表9:普通葡萄糖診斷試劑盒測定同一校準品兩年內的實驗數據列表tableseeoriginaldocumentpage20tableseeoriginaldocumentpage21根據以上表8、表9的穩定性對比實驗數據，我們分別從水空白、S2ABS和K因子值幾個方面進行比較1、本實施例3的葡萄糖診斷試劑盒的水空白變化量在0.03340.0494之間變化，而未加惰性氣體的普通葡萄糖診斷試劑盒其水空白變化量在0.03770.1057之間變化。可見未加惰性氣體試劑的水空白變化量較大，說明該試劑的本底值在進行性增高，該試劑在沒有參加化學反應前，自身己經發生了化學變化，且本底值超過了試劑要求的範圍(<0.1000);而本實施例3方法製備得到的試劑水空白變化量小，本底值還在要求的範圍內。兩相比較，本實施例3的葡萄糖診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通葡萄糖診斷試劑盒要穩定。2、本實施例3的葡萄糖診斷試劑盒的S2ABS變化量在0.1676-0.1759之間變化，而未加惰性氣體的普通葡萄糖診斷試劑盒其S2ABS變化量在0.1526-0.1751之間變化。本實施例3的診斷試劑盒K因子值[&=標準液濃度(S)/(S2ABS-水空白)]變化量在74.46~81.50之間變化，而未加惰性氣體的普通診斷試劑盒的K因子值在76.57~213.22之間變化。可見，未加惰性氣體試劑K因子值在進行性增高，且幅度較大。而在臨床檢測過程中，K因子值應維持在一較窄的波動範圍內，否則在測定樣本過程中，易造成較大的誤差，誤差造成的原因也主要是因為試劑穩定性不夠。因此兩相比較，得出的結論同樣是本實施例3的葡萄糖診斷試劑盒比未加惰性氣體的普通試劑盒穩定。通過上述工藝製備得到的葡萄糖診斷試劑盒，其在2'C8'C條件下密閉避光貯存可穩定2年，開瓶上機2"C8'C條件下避光儲存可穩定35天，而現有的葡萄糖診斷試劑盒的穩定期一般只有12個月，開瓶穩定期一般不到20天。權利要求1、一種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於在製備臨床生化含酶試劑盒的混合攪拌步驟中，向攪拌容器的混合配料中和/或混合配料液面上方持續通入惰性氣體，使混合配料液面上方處於惰性氣體的氣氛保護中。2、根據權利要求1所述的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於在製備臨床生化含酶試劑盒的混合攪拌步驟完成後的灌封試劑步驟中，使所述混合配料在惰性氣體的保護下進行灌封，灌封的具體操作方式為先向灌裝用的空試劑瓶中充填惰性氣體，待惰性氣體充滿試劑瓶後同時向試劑瓶中灌注配製好的混合配料，直至試劑瓶封蘭3、根據權利要求2所述的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於所述灌封試劑步驟中，惰性氣體是通過針頭充填到試劑瓶中，控制進入針頭的氣壓為0.4Mpa0.6Mpa。4、根據權利要求13中任一項所述的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於所述惰性氣體為密度比空氣大的惰性氣體。5、根據權利要求13中任一項所述的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於所述混合攪拌步驟中，向混合配料中持續通入的惰性氣體為氮氣，通氣時間不少於10min，通氣時的氮氣流量控制在2L/min10L/min;所述混合攪拌步驟中，在混合配料液面上方通入的並最終形成氣氛保護的惰性氣體為氬氣，通氣流量控制在2L/min1OL/min。6、一種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於在臨床生化含酶試劑盒的製備過程中，使混合攪拌後得到的混合配料在惰性氣體的保護下進行灌封，所述灌封的具體操作方式為先向灌裝用的空試劑瓶中充填惰性氣體，待惰性氣體充滿試劑瓶後同時向試劑瓶中灌注配製好的混合配料，直至試劑瓶封蓋。7、根據權利要求6所述的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於所述灌封操作中，惰性氣體是通過針頭充填到試劑瓶中，控制進入針頭的氣壓為0.4MpaO掘pa。8、根據權利要求6或7所述的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於所述灌封操作中，惰性氣體的充填流量和充填時間能夠保證灌裝完畢後試劑瓶中試劑液面與瓶蓋間的空隙充滿惰性氣體。9、根據權利要求8所述的提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，其特徵在於所述惰性氣體為密度比空氣大的惰性氣體，惰性氣體的充填流量控制在2L/min10L/min。全文摘要本發明公開了一種提高臨床生化含酶試劑盒穩定性的方法，即在製備臨床生化含酶試劑盒的混合攪拌步驟中，向攪拌容器的混合配料中和/或混合配料液面上方持續通入惰性氣體，使混合配料液面上方處於惰性氣體的氣氛保護中；還可在製備臨床生化含酶試劑盒的混合攪拌步驟完成後的灌封試劑步驟中，使混合配料在惰性氣體的保護下進行灌封，灌封的具體操作方式為先向灌裝用的空試劑瓶中充填惰性氣體，待惰性氣體充滿試劑瓶後同時向試劑瓶中灌注配製好的混合配料，直至試劑瓶封蓋。本發明的方法具有工藝簡單、容易操作、成本低廉、通用性強、且能有效延長生化含酶試劑盒使用期的特點。文檔編號C12Q1/00GK101649345SQ200910044220公開日2010年2月17日申請日期2009年8月31日優先權日2009年8月31日發明者窮吳,進李,籃月華,敏鄧,華鍾,黃石龍申請人:湖南永和陽光科技有限責任公司