雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉑(ii)及其水合物的製作方法

2024-02-03 14:11:15 3

雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉑(ii)及其水合物的製作方法
【專利摘要】本發明涉及雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉑(II)及其水合物。本發明描述了雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉑(II)的二水合物、製備雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉑(II)及其水合物的方法以及雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉑(II)及其水合物的用途。
【專利說明】雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉑(M)及其水合物
【技術領域】
[0001]本發明涉及雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物、製備雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物的方法以及雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物的用途。
【背景技術】
[0002]自從發現順鉬(二氯二胺合鉬)的細胞抑制作用以來，鉬絡合物在抗腫瘤劑的研究和開發中起到重要作用。所述鉬絡合物的作用基於通過一個DNA鏈的兩個相鄰鳥嘌呤鹼基之間的交聯抑制DNA複製。這幹擾DNA的結構並使其無功能。因此，抑制細胞代謝且細胞開始凋亡。
[0003]具有細胞抑制作用的所述鉬絡合物通常包含兩個穩定配體和在反應過程中裂解的兩個不穩定配體。在體內，鉬絡合物與水反應，使不穩定配體裂解。由此獲得的含水絡合物隨後與細胞內的DNA反應並因此導致細胞死亡。
[0004]繼續發展鉬絡合物的目標首先是使所述絡合物對水穩定以致僅在人體內而非更早(在生產或儲存過程中)形成含水絡合物。此外，該試劑應儘可能選擇性作用於腫瘤組織而不應攻擊不受腫瘤困擾的健康細胞。
[0005]奧沙利鉬是具有細胞抑制作用的新近的鉬絡合物(草酸根_[(b?，27?)-環己烷二胺]合鉬(II))，其中鉬離子被1，2-二氨基環己基配體(DACH配體)和草酸根離子絡合。與順鉬相比，奧沙利鉬表現出改進的性質，特別是在其穩定性方面。但是，即使在這種情況下，在儲存期間也會發生反應，在此過程中奧沙利鉬降解以致該試劑的濃度降低且雜質積聚。根據歐洲藥典，已知奧沙利鉬與雜質A、B、C、D和E相關聯。這些通常被稱作「雜質」。
[0006]「雜質A」是草酸，其在奧沙利鉬水解過程中生成。水解過程中生成的另一雜質是CS°-4-2)-二水[(L.?，2/?)-環己烷-1，2-二胺-K N，κ N『]合鉬(二水二氨基環己烷合鉬)，其被稱作「雜質B」。
[0007]奧沙利鉬氧化產物(006-33)-[(11?，210-環己烷-1，2-二胺-1^隊κ N 『] 二氫[乙二酸根(2-) κΟΙ, K 02]合鉬被稱作「雜質C」。「雜質D」是(SP-4-2)-[(lS，2S)_環己燒-1, 2- 二胺-κ N, K N 『][乙二酸根(2_) - K 01, K 02]合鉬，且「雜質E」是(3卩-4-2)-二1-氧代雙[(11?，210-環己烷-1，2-二胺-1^隊κΝ 『]合二鉬。此外，另一些雜質是已知的，但僅以極少量存在。
[0008]為了使生成的雜質量保持低或完全消除它們，US 2010/0267824 Al提出3至4.5的PH範圍用於腸道外攝入奧沙利鉬化合物。這可降低雜質分數，但沒有完全消除它們。
[0009]歐洲藥典規定了 用於確定雜質分數的參考標準。目前，使用二硝酸根-(1,2-二氨基環己烷)合鉬(II)作為雜質B的參考標準。這種物質在水中形成反應性二水二氨基環己烷合鉬(II)絡合物。令人驚訝地，已經發現，二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)是爆炸性物質，這使其難以運輸、儲存和操作。圖1顯示二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II) (Pt(DACH) (NO3)2)的差熱分析(DTA測量)以證實爆炸傾向。對Pt (DACH) (NO3)2的兩個樣品Mzl Mz2進行測量。各樣品在充滿氮氣的封閉玻璃安瓿內以3K/min的加熱速率從室溫加熱至450 0C。記錄鉬化合物Pt (DACH) (NO3) 2與參考樣品(Al2O3)之間的溫差。這兩個樣品都顯示在1.175 J/g的加熱趨勢(heat tone)下在170 1:開始放熱行為。根據VDI 2263指南進行測量。
[0010]因此，需要形成反應性而非爆炸性的二水二氨基環己烷合鉬(II)絡合物的(1,2-二氨基環己烷)合鉬(II)化合物。
[0011]Schwartz 等人(Preparation and Antitumor Evaluation of Water-SolubleDerivatives of Dichloro (1，2_diaminocyclohexane)platinum(II)，Cancer TreatmentReports Vol.61，N0.8，1977 年 11 月，1519-1525)描述了雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的一水合物。所述物質在水中形成所需反應性二水合絡合物。雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的一水合物在水中的溶解度為3mg/ml。該溶解度與二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)(其到目前為止用作標準並具有大約0.5 mg/ml的水溶解度)相比也改進。但溶解度的進一步改進仍是被期望的。
[0012]Schwartz等人的公開(dito)描述了製備雙_(4_甲基苯磺酸根)_1，2_環己烷二胺合鉬(II)的一水合物的方法。在這種方法中蒸發溶劑水。因此，幾乎無法控制產物結晶。通過機械手段實現產物分離。這在產物的大規模生產中成問題，因為將不得不刮除大量硬殼。這也可能危害主管人員，因為機械分離與可能被吸入的升起的粉塵和細粒相關聯。
[0013]所得形式應具有良好的水溶解性並完全易操作。這是為了規避二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)的不利性質。
[0014]除穩定性外，抗腫瘤劑的另一關鍵因素在於，它們應專門作用於患病組織。為此目的，聚合物或靶分子可鍵合到鉬絡合物上。例如在US 2011/0286958 Al中描述了相關的聚合物和靶分子。該聚合物取代鉬絡合物的不穩定配體。用於將該聚合物鍵合到鉬絡合物上的原材料是二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)。但這種物質的水溶性不良。此外，如上所述，其是爆炸性物質以致其生產、運輸、儲存和操作困難。

【發明內容】

[0015]因此，根據第一方面，本發明的目的是提供替代二硝酸根-(1，2- 二氨基環己烷)合鉬(II)並具有比較好的溶解度的化合物。此外，該化合物應該穩定並容易操作。此外，其還應適合用作奧沙利鉬的雜質B的參考標準。
[0016]因此，本發明的另一方面是提供製備可用於替代二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)並克服上述缺點的化合物的方法。由該方法獲得的化合物也適合用作奧沙利鉬的雜質B的參考標準。此外，該化合物應適合在聚合物鍵合的環己烷二胺合鉬(II)絡合物的合成中用作替代二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)的替代原材料。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1示出二硝酸根-(1,2-二氨基環己烷)合鉬(II) (Pt(DACH) (NO3)2)的差熱分析(DTA測量)；
圖2示出雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)的二水合物的X-射線粉末衍射法數據；
圖3示出雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)的二水合物的動態差示掃描量熱法數據；
圖4示出由雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)製備二水合物類的反應式；
圖5示出由二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)製備二水合物類的反應式。【具體實施方式】
[0018]令人驚訝地，已經表明，通過雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物實現根據本發明的第一方面的目的。該二水合物在25°C的溫度和常壓下的水溶解度為大約90 mg/ml ο因此，與根據現有技術獲知並在相同條件下具有大約3 mg/ml的水溶解度的一水合物相比顯著改進水溶解度。
[0019]雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物優選以晶體形式存在。藉助X-射線粉末衍射法(XRPD)(圖2)和動態差示掃描量熱法(DSC)(圖3)分析它們。
[0020]圖2中的X-射線粉末衍射圖顯示位於6.35±0.2、10.47±0.2、10.62±0.2、
12.77±0.2,19.05±0.2,20.27±0.2,20.40±0.2,23.04±0.2,23.38±0.2,27.61±0.2、
30.51±0.2和34.95±0.2的2theta (2 Θ )值的結晶材料的典型信號位置。誤差範圍歸因於XRH)測量中的已知不確定性，如樣品中存在的溶劑的殘留量。圖2顯示雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)的二水合物的離散信號峰和波譜。優選在Stoe (Darmstadt, Germany)製造的Stadi P粉末衍射系統中使用Cu K ,照射(1.54056 Angstrom = 0.154056 nm)記錄 XRI3D 波譜。優選使用彎曲 Ge 單色儀(111)和IP-PSD探測器(成像板位置敏感探測器)在40 kV和30 mA的X-射線管發生器電壓下在透射中完成測量。優選以40°的固定角ω引入樣品，由此ω是在測量過程中樣品或試樣支架相對於原X-射線束的取向。優選在3.0°至79.05°的2Θ掃描範圍內測量。
[0021]DSC譜圖(圖3)顯示與水釋放或相變相關的許多吸熱和放熱信號。測量的樣品由11.550毫克雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物構成。但是，沒有像Pt(DACH) (NO3)2的情況中那樣的可識別的表明爆炸性分解的峰。優選使用TAInstruments (New Castle, Delaware, USA)製造的 DSC Q2000 進行 DSC 記錄。該樣品優選在25°C下平衡，並使用2 °C的升溫速率最高達400 °C的溫度完成測量。
[0022]這兩種技術(XRPD和DSC)都是現有技術中的完善的測量方法。
[0023]此外，雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物令人驚訝地比雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的一水合物更熱力學穩定。
[0024]在水中，雙-(4-甲基苯磺酸根)_ 1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物形成反應性二氨基環己烷二水合鉬(II)絡合物。因此，雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-二氨基環己烷二水合鉬(II)絡合物以溶解狀態存在。本發明的化合物可以以固態呈各種形式。在這種情況下，不僅二氨基環己烷(DACH)基團而且兩個甲苯磺酸根(4-甲基苯磺酸根)可以都通過配位鍵合到中心鉬(II)原子上。此外，兩個水分子也可以以固態形式通過配位鍵合到鉬(II)原子上，或可能存在混合形式，其中甲苯磺酸鹽分子和水分子通過配位鍵合到鉬(II)原子上。
[0025]本發明的雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II) 二水合物與從現有技術中獲知的一水合物相比具有大於80 mg/ml的明顯改進的水溶解度。現有技術中已詳細描述的二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)與本發明的化合物相比也具有僅大約
0.5 mg/ml的明顯較差的溶解度。溶解度，如本發明的範圍中所用，應該是在室溫和常壓下的溶解度。這也是指在本申請中的標準條件下的溶解度。此外，本發明的雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II) 二水合物是非爆炸性化合物，這從作為圖3附錄的DSC譜圖中顯而易見。此外，這種化合物可以以指定晶型存在，該指定晶型可以藉助作為圖2附錄的X-射線粉末衍射圖證實。
[0026]根據本申請的另一方面，本發明提供製備替代二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)的化合物的方法，其以給定次序包括下列步驟:
a)使二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)和4-甲基苯磺酸銀在含水溶劑中反應以形成雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)和滷化銀；
b)從來自步驟a)的反應混合物中分離滷化銀；
c)加入與水形成共沸混合物的化合物；
d)從所述共沸混合物中除去至少一部分水；
e)調節水的分數以形成所需的雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)水合物；和· f)分離雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉬(II)的水合物。
[0027]本發明的方法能夠製備Schwartz等人(dito)已經描述的雙_(4_甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉬(II)的一水合物。與所述參考文獻中描述的製備方法相比，不以不受控方式蒸發溶劑。這能使所需產物受控結晶。本發明的方法也能以更大規模生產所需產物。沒有對生產參與人員的相關危害。
[0028]此外，還可以不僅製備雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)的一水合物，還可以製備其二水合物或其它水合物。該方法還能製備非水合的鉬絡合物，雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)。因此，本發明提供克服從現有技術中獲知的缺點的製備雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物的方法。
[0029]步驟a)中存在的鹼性物質二滷-1,2-環己二胺合鉬(II)中的滷素原子可以是任何滷素原子。氯(Cl)、溴(Br)和/或碘⑴是優選的。這種情況中使用的鉬(II)絡合物可含有兩個相同或兩個不同的滷素配體。優選在鉬(II)絡合物上存在兩個相同的滷素配體，因為這能夠確定與銀鹽的反應中的明確化學計量。因此優選使用雙-(4-甲基苯磺酸根)-二溴-1，2-環己烷二胺合鉬(II)、雙-(4-甲基苯磺酸根)-二氯-1，2-環己烷二胺合鉬(II)或雙-(4-甲基苯磺酸根)_ 二碘-1，2-環己烷二胺合鉬(II)作為本發明的方法的步驟a)中的離析物(educt)。
[0030]步驟a)中的二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)與4_甲基苯磺酸銀的反應在含水溶劑中進行。所述溶劑優選是水或含有水和至少一種與水形成共沸混合物的其它化合物的混合物。在這種情況下，可以將水與多種不同的化合物混合。該化合物必須以指定比率與水混溶並且必須與水形成共沸混合物。根據本發明，也可以將僅一種化合物與水混合併由此形成共沸混合物。
[0031]步驟a)中的二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)絡合物與4_甲基苯磺酸銀的反應優選在4-甲基苯磺酸銀的亞化學計量下進行。因此，鉬絡合物在該合成中與少於2摩爾當量的銀鹽反應。4-甲基苯磺酸銀的優選量為1.88至1.99摩爾當量，特別優選為1.92至1.96摩爾當量的量。這兩種組分的反應產生雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)和滷化銀。該反應在含水溶劑中進行。所得滷化銀僅極難溶於所述溶劑並因此沉澱。相應的沉澱物因此容易與其餘反應混合物分離，優選藉助過濾。在反應中使用亞化學計量的量的4-甲基苯磺酸銀防止銀存在於最終產物中。這會使分離困難。但4-甲基苯磺酸銀的分數絕不能太低，因此否則只有小分數的二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)與甲苯磺酸根反應且所需產物(雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物)的收率低。
[0032]為了吸收副產物或未轉化的離析物，可以在本發明的方法的步驟b)中分離滷化銀後和在加入與水形成共沸混合物的化合物之前，在步驟c)中將活性炭添加到反應混合物中。如果該反應根據優選實施方案進行，即以亞化學計量水平進行，活性炭特別從反應混合物中除去未反應的二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)。此外，活性炭也除去銀鹽和副產物。
[0033]要添加的活性炭分數優選為相對於所用鉬(II)化合物的I重量％至20重量％，特別優選2重量％至10重量％，甚至更特別優選3重量％至7重量％，再更優選5重量％。所述量足以從反應混合物中除去存在的未反應離析物和副產物。
[0034]在分離滷化銀後，在本發明的方法的步驟c)中加入至少一種與水形成共沸混合物的化合物。在這種情況下，可以將一種化合物添加到反應混合物中。根據本發明也可以在該方法的步驟c)中加 入多種與水形成共沸混合物的化合物。所述至少一種化合物優選選自醇和滷代烴。它們與水形成共沸混合物。此外，雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物在所述化合物中的溶解度特別高。優選地，在標準條件(室溫，常壓)下該鉬(II)化合物的溶解度為5 g/Ι或更大，特別優選7 g/Ι或更大。該化合物特別優選選自正丁醇、甲苯、氯仿和乙醇。也可以使用含有水和本發明的化合物的混合物作為本發明的方法的步驟a)中的含水溶劑。
[0035]優選將僅一種化合物添加到反應混合物中，優選為選自醇或滷代烴，特別優選選自正丁醇、甲苯、氯仿和乙醇的化合物。在一個特別優選的實施方案中，在本發明的方法的步驟c)中將正丁醇添加到反應混合物中。優選使用正丁醇，因為由正丁醇和水構成的共沸混合物的沸點為92°C，因此有利於本發明的方法的後繼步驟。此外，在所述步驟中獲得的產物雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)很好地可溶於正丁醇，這簡化產物的進一步提純並能獲得聞收率。
[0036]隨後，從由此形成共沸混合物中除去至少一部分水。這可以使用根據現有技術獲知的方法完成。優選通過共沸蒸餾除去水。在本發明的方法的步驟d)中特別優選從共沸混合物中不僅部分，而是完全除去水。結果獲得與水形成共沸混合物的化合物。雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物可溶於所述化合物。
[0037]在從共沸混合物中至少部分除去水後，調節形成所需雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)水合物所需的水分數。可以通過化學計量學計算所需水分數。如果本發明的方法要提供雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的非水合形式，在此不加入水。為了獲得該化合物的水合物，可以計算所需水量並混入反應混合物中。優選在本發明的方法的步驟e)中適當調節水的分數以獲得雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物並隨後在本發明的方法的步驟f)中移出所述物質。
[0038]在步驟f)中可以根據從現有技術中獲知的方法分離產物。優選將反溶劑添加到反應混合物中以分離雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的水合物。所需產物在標準條件(室溫，常壓)下具有優選小於2 g/Ι，特別是小於I g/Ι的在該反溶劑中的低溶解度。同時，該反溶劑在與水形成共沸混合物的化合物中具有高溶解度。本發明的範圍內的高溶解度應被理解為優選是指該反溶劑在與水形成共沸混合物的化合物中以任何比率的無限混溶，同時形成均相。根據本發明，反溶劑可以獨自使用，或多種化合物可以互相混合併用作反溶劑。
[0039]優選使用乙酸乙酯和/或丙酮作為本發明的方法中的反溶劑。乙酸乙酯特別優選作為反溶劑，特別是如果正丁醇是與水形成共沸混合物的化合物時。乙酸乙酯和正丁醇互相很好地混溶。同時，所需產物雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)或其水合物可溶於正丁醇但不溶於乙酸乙酯。
[0040]可以將由此獲得的化合物重結晶以將其進一步純化。為此目的，將該化合物溶解在與水形成共沸混合物的化合物中。反溶劑的加入優選能夠獲得所需化合物的晶體。
[0041 ] 在一個具體實施方案中，本發明因此包括製備雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物的方法，其包括下列步驟:
a)在含水溶劑中使二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)(其中兩個滷素相同並選自氯、溴或碘)與4-甲基苯磺酸銀(其中4-甲基苯磺酸銀相對於鉬(II)化合物以亞化學計量的量存在)反應，同時形成雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)和滷化銀；· b)從來自步驟a)的反應混合物中分離滷化銀，隨後將活性炭添加到反應混合物中；
c)加入正丁醇；
d)藉助共沸蒸餾從共沸混合物中除去所有水；
e)調節水的分數以形成雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物；和
f)通過添加乙酸乙酯作為反溶劑，分離雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物。
[0042]反溶劑的加入優選確保產物的結晶以優選、緩慢和受控方式進行。這能防止溶劑蒸發時常見的不受控結晶。因此，本發明的方法可用於獲得指定組成的結晶化合物。
[0043]根據本發明的方法的受控制備特別能夠用作參考標準，因為必須為此目的能夠提供明確指定的物質。
[0044]歐洲藥典EP 7.3目前指定化合物二硝酸根-1，2-環己烷二胺合鉬(II) (= 二硝酸根-(1，2- 二氨基環己烷)合鉬(II))作為奧沙利鉬的雜質B的參考標準。如下描述其使用:
為了用作參考標準，將5毫克奧沙利鉬雜質B CRSCCRS =現行參考標準)溶解在25毫升甲醇中並用水將該容器填充至最高達100毫升。聲處理該溶液1.5小時直至溶液清澈。為了分析，將100毫克奧沙利鉬試劑溶解在水中並將容器填充至最高達50毫升。
[0045]然後將這兩種溶液依次注入HPLC系統(柱I = 0.25 m ;直徑=4.6 mm ;固定相:鹼鈍化的十八烷基甲矽烷基矽膠5 Mm)中。測量溫度為40°C。流動相由20%乙腈和80%在I, 000毫升水中含有1.36克磷酸氫鉀和I克庚磺酸鈉的水溶液構成,用磷酸將pH調節至
3.0 ± 0.05。測量條件:流速2.0 mL/min.，檢測:在215納米下的分光光度計，注入體積:20微升。
[0046]由各自HPLC色譜圖中的面積百分比比率計算奧沙利鉬試劑中的雜質B的分數。
[0047]二硝酸根-1，2-環己烷二胺合鉬(II)作為雜質B( (5P-4-2)-二水合[(L.?，27?)-環己烷-1，2- 二胺-K N，K N 『]鉬)的標準的缺點包括其爆炸性和在水中的差溶解性。
[0048]令人訝地，已經表明，可以替代該參考標準，這克服上文指出的缺點。雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物根據本發明作為奧沙利鉬的雜質B的參考標準的用途因此包括 1.提供奧沙利鉬溶液；
i1.提供雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物的溶液作為參考標準；
ii1.記錄來自步驟i)的奧沙利鉬溶液的色譜圖；
iv.記錄來自步驟ii)的參考標準溶液的色譜圖；和
V.比較來自步驟iii)和iv)的色譜圖以確定(5P-4-2)-二水[(17?，2/?)_環己烷-1，2-二胺-κΝ，κΝ 『]合鉬的分數。
[0049]在奧沙利鉬合成的常用方法中，作為副產物產生物質二硝酸根-(1，2- 二氨基環己烷)合鉬(II)。所述物質因此根據現有技術用作雜質B，(5Ρ-4-2)-二水[(b?，2/?)-環己烷-1，2- 二胺- K N，K N『]合鉬的參考標準。但是，已經表明，如從作為圖1附錄的DTA測量中看出，所述物質遇熱時會爆炸。根據本發明使用的雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)沒有表現出所述爆炸傾向。如從所附DSC譜圖(圖3)中對二水合物的情況看出，可根據本發明使用的水合物也熱穩定。此外，使用本發明的方法能夠獲得以受控方式結晶並具有明確指定的組成的產物。因此，可以以可再現方式調節步驟ii)中的溶液濃度。
[0050]優選使用奧沙利鉬的水溶液以及雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物的水溶液。在這種情況下，本發明的化合物與從現有技術中獲知的二硝酸根合化合物相比具有額外優點，即其具有更好的水溶解性。因此，也可以提供更濃的溶液作為參考標準。
[0051]為了確定奧沙利鉬中的雜質B的分數，可以例如在水中以2 mg/ml的濃度製備奧沙利鉬水溶液。使用雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物的水溶液作為參考標準。所述溶液可具有0.05 mg/ml的濃度。
[0052]在一個優選實施方案中，使用雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物作為參考標準。該二水合物在水中的溶解度為80 mg/ml或更大。因此，可以容易地提供不同的參考標準。
[0053]在進一步進程中，記錄奧沙利鉬溶液，然後參考標準溶液的色譜圖。色譜圖的比較能夠確定奧沙利鉬中的雜質B的分數。[0054]優選地，奧沙利鉬溶液和參考標準溶液的色譜圖是來自高壓液相色譜法(HPLC)的色譜圖。HPLC是足夠公知的色譜法。色譜圖中存在的信號峰面積的比較能夠得出關於奧沙利鉬中存在的雜質分數的結論。
[0055]在一個優選實施方案中，本發明因此涉及雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物作為用於確定奧沙利鉬的雜質B的參考標準的用途。所述用途包括:
1.提供奧沙利鉬水溶液；
i1.提供雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物的水溶液作為參考標準；
ii1.記錄來自步驟i)的奧沙利鉬溶液的HPLC色譜圖；
iv.記錄來自步驟ii)的參考標準溶液的HPLC色譜圖；和
V.比較來自步驟c)和d)的色譜圖以確定CS°-4-2) - 二水[(L/P, 2R)-環己燒-1, 2- 二胺-K N，κΝ 『]合鉬的分數。
[0056]由於雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物，特別是二水合物在水中的良好溶解性，該參考標準溶液容易製備。關於奧沙利鉬中的雜質B分數的確定，如果使用歐洲藥典EP 7.3中規定的試劑和參考標準的量和/或濃度並用雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物替代之前的標準，則在HPLC色譜圖中的面積比較中需要考慮校正係數。所述校正係數來自雜質B的現行標準(二硝酸根-1，2-環己二氨基合鉬(II))和根據本發明使用的參考標準(雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物)的摩爾質量比。使用雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)的二水合物作為參考標準，所得校正係數為(687.69 g/mol) / (433.29 g/mol)=1.587。必須將面積比(該試劑在色譜圖中的面積/參考標準在色譜圖中的面積)乘以這一值。
[0057]或者，也可以藉助校正係數調節該新參考標準，即添加的雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II) 二水合物的量。如果根據歐洲藥典EP 7.3中的現行規範使用的標準的量乘以校正係數，可以直接比較色譜圖中的面積，只要奧沙利鉬的稱重量保持不變。
[0058]如果使用雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的一水合物、任何其它水合物或非水合化合物代替雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物，需要相應地計算校正係數。
[0059]除穩定性和易製備性外，以靶向方式施加對抗腫瘤劑而言至關重要。在現有技術中描述了相關的聚合物改性的鉬絡合物。例如在US 2011/0286958 Al中使用二硝酸根-(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)作為原材料。
[0060]令人訝地，已經表明，本發明的物質雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物可用於製備聚合物鍵合的環己烷二胺合鉬(II)絡合物。本發明的用途包括:
a.提供雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物； b.提供包含至少一個或多個能與鉬成鍵的基團的聚合物；
c.使雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物和聚合物在溶劑中反應。
[0061]雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物的使用能夠由於該產物在水中的高溶解度而實現靈活反應。該二水合物與從現有技術中獲知的化合物相比尤其具有大於80 mg/ml的在水中的高溶解度。因此，在步驟a中優選使用雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物。本發明的雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)的二水合物和任何其它水合物或所述化合物本身都不是固有的爆炸性物質。因此，由此克服來自現有技術的缺點。在這種情況下，可以使雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)或其任何水合物與已知聚合物反應。在這種情況下，鉬鍵合的甲苯磺酸根或水基(water groups)充當離去基團。它們被聚合物內的能與鉬成鍵(優選配位鍵)的基團取代。
[0062]鍵合到環己烷二胺合鉬(II)絡合物上的聚合物優選包含能與鉬形成4-至7-元螯合環的基團。相關的螯合環提供特別穩定的鉬(II)絡合物。在本發明的範圍中，4-至7-元螯合環包括4元、5元、6元和7元螯合環。
[0063]該聚合物優選包含羧酸酯基團、醯胺基團或氨基。例如在US 2011/0286958 Al中描述和要求保護相關的聚合化合物。
[0064]環己烷二胺合鉬絡合物或其水合物與該聚合物的反應在溶劑中進行。該溶劑優選包含水。該溶劑優選是水。
[0065]該聚合物優選是聚(N-(2-輕丙基)甲基丙烯醯胺基-gly-gly-gly-二乙基氨基丙二酸酯(聚(HPMA)-GGG-Ame)，由此gly代表甘氨醯基。
[0066]在一個特別優選的實施方案中，本發明因此涉及雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物用於製備聚合物鍵合的環己烷二胺合鉬(II)絡合物的用途，其包括:·
a.提供雙-(4-甲基苯磺酸根)-l，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物；
b.提供聚(HPMA)-GGG-Ame ；
c.使雙-(4-甲基-苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物和聚(HPMA) -GGG-Ame在水中反應。
[0067]在這種情況下，甘氨醯基充當連接基以便能夠更靈活連接。通過氨基丙二酸酯(Ame)基團實現聚合物與鉬(II)的實際連接。
[0068]示例性實施方案:
1.雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環B烷二胺合鉑(II)的二水合物的化學合成為了化學合成雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)(雙甲苯磺酸根環己烷二胺合鉬)的二水合物，將二氯-R，R_(1，2-二氨基環己烷)合鉬(II)的懸浮液懸浮在水中並添加在水中含有0.97摩爾當量的(對-甲苯磺酸)銀的溶液。該混合物在暗處在55 °C下攪拌48小時。隨後，將該懸浮液冷卻至4°C並繼續攪拌另外4小時。通過過濾除去所得氯化銀，然後將濾液在活性炭(相對於原材料的5重量％)存在下在室溫下攪拌另外20小時，然後再過濾。然後在真空中在50°C下將所得濾液縮減至其起始體積的30%，然後將略過量的1-丁醇作為夾帶劑添加到該水性反應混合物中以完全除去水。這通過在真空中在50°C下進一步縮減體積實現。向這種無水1- 丁醇溶液中，加入15當量(相對於鉬)水並將該溶液攪拌另外16小時。然後通過將反溶劑乙酸乙酯添加到該1-丁醇溶液中，使目標化合物沉澱。通過過濾移出由此獲得的固體並在真空中在40 1:下乾燥。
[0069]該化合物的分析表明其是二水合物(測得水含量為5.12%，理論水含量為5.24 %)。
[0070]收率為60至85%。
[0071]2.雙-(4-甲基-苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉑(II)的二水合物的純化
可以通過隨後重結晶以可再現的方式純化雙-(4-甲基-苯磺酸根)-1, 2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物。
[0072]為此目的，重複上文1.下描述的程序:溶解在無水1-丁醇中，加入指定量的水以形成二水合物，通過將乙酸乙酯添加到該1- 丁醇溶液中以沉澱。
[0073]這產生雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物的晶體。
[0074]3.二水合物類的製備
雙甲苯磺酸根-環己烷二胺合鉬(4.28克；6.568毫摩爾)在50°C下在45毫升純化水中攪拌I小時。該溶液隨後經Sartorius製造的0.2 Mm RC過濾器(無紡布增強型)過濾並用40毫升純化水洗漆。使該溶液冷卻至室溫。
[0075]相應反應顯示在圖4中。
[0076]4.聚合物與甲苯磺酸根-環B烷二胺合鉑的綴合物的製備 將11克聚(HPMA)-GGG-Ame (相當於5.5毫摩爾Ame)置於62毫升純化水中並在RT下攪拌30分鐘。然後，加入5毫升2N NaOH水溶液(pH=13)並將該批料在RT下攪拌另外30分鐘。然後用5% HNO3水溶液將反應溶液調節至pH 7.4，然後經？5 frit過濾，然後經Steritop (Merck ;孔徑0.1 Mm)過濾並用10毫升純化水衝洗。將濾液轉移到燒瓶中並在加入新鮮製備的Pt-DACH- 二水合物類溶液(來自實施例3)的同時劇烈攪拌，由此pH降至5。然後使用2 N NaOH水溶液將該溶液的pH調節至5.2。該溶液在恆定pH下在RT下攪拌2小時(根據需要使用NaOH溶液再調節pH)。然後，使用2 N NaOH水溶液將反應溶液的pH調節至7.4並將該批料加熱至38°C，然後在7.4的恆定pH下在38°C下攪拌17小時(使用滴定器(Metrohm製造的716 DMS Titrino)使pH值保持恆定)。隨後，該溶液經Steritop(Merck ；0.1 Mm)過濾並用10毫升純化水衝洗。藉助TFF將該溶液濃縮至大約60毫升並用大約50毫升純化水洗滌5次。然後將滲餘物轉移到雙壁燒瓶中，然後加入1.29克NaCl、243毫克NaH2P04*H20和1.89克Na2HP04*7H20。該溶液用純化水補充至總體積為150毫升，一旦加入的鹽完全溶解，用2 N NaOH水溶液將pH調節至7.4。將該批料加熱至38°C並在無攪拌的情況下在此溫度下保持4小時。該溶液隨後經Steritop (Merck ;0.1 Mm)過濾並藉助TFF將濾液濃縮至大約60毫升，並用純化水衝洗(收集7份滲透溶液)。然後將滲餘物凍幹。
[0077]收率為6.35 g (49.3%)。
[0078]聚(HPMA)-GGG-Ame =聚(N_(2_羥丙基)甲基丙烯醯胺基-gly-gly-gly-二乙基氨基-丙二酸酯
聚(HPMA) =聚(N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺
DACH = 1R，2R-二氨基環己烷
TFF =切向流過濾
Rff=純化水
RT =室溫(20°C )。[0079]5.與現有摶術比較
5.a由硝酸根-環己烷二胺合鉑製備二水合物類(圖5)
將PtDACH(NO3)2 (10克；23.079毫摩爾)置於149毫升純化水中。加入總共657微升5% HNO3，然後在70°C下攪拌I小時。該溶液隨後經Sartorius製造的0.2 Mm RC過濾器(無紡布增強型)過濾並用40毫升純化水洗滌。使該溶液冷卻至室溫。
[0080]相應反應顯示在圖5中。
[0081]5.b.聚合物與硝酸根-環B烷二胺合鉑的綴合物的製備
該製備與實施例4類似地進行，除了使用如實施例5.a中製備的由硝酸根-環己烷二胺合鉬製成的二水合物類代替由甲苯磺酸根-環己烷二胺合鉬製成的二水合物類。
[0082]收率為7.13 g (66.8 %)。
【權利要求】
1.雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物。
2.製備雙-(4-甲基-苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物的方法，包括下列步驟: a)使二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)和4-甲基苯磺酸銀在含水溶劑中反應以形成雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)和滷化銀； b)從來自步驟a)的反應混合物中分離滷化銀； c)加入與水形成共沸混合物的化合物； d)從所述共沸混合物中除去至少一部分水； e)調節水的分數以形成所需的雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)-的水合物； f)分離雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉬(II)的水合物。
3.根據權利要求2的方法，其特徵在於使用氯、溴和/或碘作為二滷-1，2-環己烷二胺合鉬(II)中的滷素。
4.根據權利要求2或權利要求3的方法，其特徵在於所述反應在4-甲基苯磺酸銀為亞化學計量水平下進行。
5.根據權利要求2`至4的任一項的方法，其特徵在於在步驟b)中分離滷化銀後和在加入與水形成共沸混合物的化合物之前，在步驟c)中將活性炭添加到反應混合物中。
6.根據權利要求2至5的任一項的方法，其特徵在於步驟a)中的含水溶劑是水或含有水和至少一種與水形成共沸混合物的其它化合物的混合物。
7.根據權利要求2至6的任一項的方法，其特徵在於所述與水形成共沸混合物的化合物是正丁醇。
8.根據權利要求2至7的任一項的方法，其特徵在於在步驟d)中完全除去所述共沸混合物，同時形成雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)在所述與水形成共沸混合物的化合物中的溶液。
9.根據權利要求2至8的任一項的方法，其特徵在於在步驟e)中適當調節水的分數以獲得雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物並隨後在步驟f)中移出所述物質。
10.根據權利要求2至9的任一項的方法，其特徵在於在步驟f)中將反溶劑，優選乙酸乙酯添加到所述混合物中以分離雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2_環己烷二胺合鉬(II)或雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的水合物。
11.雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)-及其水合物作為(SP-4-2)-二水[(IR，2R)-環己烷-1，2-二胺-K N，κΝ 『]合鉬的參考標準的用途，其包括 `1.提供奧沙利鉬溶液； ?.提供雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物的溶液作為參考標準； ii1.記錄來自步驟i)的奧沙利鉬溶液的色譜圖； iv.記錄來自步驟ii)的參考標準溶液的色譜圖；和 V.比較來自步驟iii)和iv)的色譜圖以確定(5P-4-2)-二水[(b?，2/?)-環己烷-1，2-二胺-κΝ，κΝ 『]合鉬的分數。
12.根據權利要求11的用途，其特徵在於在步驟i)和/或步驟ii)中使用水溶液。
13.根據權利要求11或權利要求12的用途，其特徵在於在步驟ii)中使用雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物作為參考標準。
14.根據權利要求11至13的任一項的用途，其特徵在於步驟iii)和iv)中的色譜圖是來自高壓液相色譜法(HPLC)的色譜圖。
15.雙-(4-甲基苯磺酸根)-1，2-環己烷二胺合鉬(II)及其水合物用於製備聚合物鍵合的環己烷二胺合鉬(II)絡合物的用途，其包括: a.提供雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物； b.提供包含至少一個或多個能與鉬成鍵的基團的聚合物； c.使雙-(4-甲基苯磺酸根)_1，2-環己烷二胺合鉬(II)或其水合物和所述聚合物在溶劑中反應。
16.根據權利要求15的用途，其特徵在於在步驟a)中使用雙-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-環己烷二胺合鉬(II)的二水合物。
17.根據權利要求15或16的用途，其特徵在於所述聚合物包含能與鉬形成4-至7-元螯合環的基團。
18.根據權利要求15至17的任一項的用途，其特徵在於所述聚合物包含羧酸酯基團、醯胺基團或氨基。`
19.根據權利要求15至17的任一項的用途，其特徵在於所述溶劑包含水，尤其在於，所述溶劑是水。
【文檔編號】C08F120/58GK103864853SQ201310643907
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2013年12月5日 優先權日:2012年12月5日
【發明者】S.約斯特, C.布蘭德斯, H.勞特, S.維爾納, S.施門格勒 申請人:賀利氏貴金屬有限責任兩合公司