一種胭脂花組培繁殖的種質保存方法

2023-05-29 21:00:06 2

專利名稱：一種胭脂花組培繁殖的種質保存方法
技術領域：
本發明涉及植物種質的保存方法，具體涉及一種胭脂花(Primul a maximowiczii)組培繁殖的種質保存方法。
背景技術：
胭脂花是原產於我國北方的報春花屬多年生草本植物，花色鮮豔，觀賞價值高，是一種具有很高園林應用潛力的野生花卉。野生胭脂花群體中存在豐富的觀賞價值高的天然變異，主要表現在花色、花眼變異，這些變異為胭脂花的園林應用提供了豐富的種質材料。但由於胭脂花屬典型的異花授粉植物，用種子繁殖易喪失優良性狀，分株方法增殖係數太低，同時栽培條件較為苛刻，無法有效保存優良種質或品種。本發明則利用組織培養技術來解決胭脂花優良種質的保存問題，迄今國內外尚未有相關方面的研究報導。

發明內容
本發明的目的在於提供一種胭脂花組培繁殖的種質保存方法。為了實現本發明目的，本發明提供了一種胭脂花組培繁殖的種質保存方法，該方法包括低溫處理後的外植體經表面滅菌後，進行不定芽的誘導，所述的不定芽的誘導培養基為以MS為基本培養基，添加0. 2 1.0mg/L 6-BA，0 0. ang/L IBA，20_40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9-6. 0。其中，該種質保存方法還包括增殖和繼代培養，所述的增殖和繼代培養基為以MS 為基本培養基，添加0. 5 1. Omg/L 6-BA, 0. 05 0. 5mg/L NAA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9 6. 0 ；所述的繼代培養每隔1 2月繼代一次。其中，該種質保存方法還包括生根培養，所述的生根培養的培養基為以MS為基本培養基，添加0.02 0.05mg/L IBA，20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9。其中，該種質保存方法還包括組培苗的移栽，所述的組培苗的移栽選擇在生根培養3 4周後，平均每株生根4 5條，打開瓶蓋，煉苗4 5天，待葉色加深，再移栽到溫室，栽培基質為草炭 珍珠巖為2 1(體積比)；開始一周使溼度保持在80%以上，每天噴水2 3次，移栽溫度為 18 25°C。其中，所述的不定芽的誘導培養基優選為以MS為基本培養基，添加1. Omg/L 6-BA,0. 2mg/L IBA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9。其中，所述的增殖和繼代培養基優選為以MS為基本培養基，添加1. Omg/L 6-BA, 0. 2mg/L NAA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9。其中，所述的生根培養的培養基優選為以MS為基本培養基，添加0.02mg/L IBA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9。其中，所述低溫處理溫度為-2 -5°C，時間為2 4個月。其中，所述的外植體為頂芽中帶腋芽的幼葉。
其中，所述的頂芽中帶腋芽的幼葉在接種時切成1. 5cmXl. 5cm帶腋芽的方塊。其中，所述的外植體表面消毒過程如下剝去外層葉片的頂芽經洗潔精和自來水洗淨，流水下衝洗30 40min後，置於75%酒精中處理30s左右，然後再經0. 升汞消毒 7 8min，無菌水衝洗5 6次後將帶腋芽幼葉剝下。其中，所述的芽的誘導、增殖、繼代、生根培養時光照條件為自然散射光2500 3000Lux加人工輔助光1500 2000Lux，光照時間為14h/d，培養溫度為20 25°C。所述的芽的誘導時間為15 20d。本發明的一種胭脂花組培繁殖的種質保存方法，2個月內繁殖係數達到4 6，生根率96%以上，移栽成活率近100% ；同時，以頂芽中帶腋芽的幼葉為外植體繁殖保存的胭脂花種質可保持遺傳穩定性，為新品種和優異種質的保存提供了保障。與常規方法相比，本發明的優點在於1.胭脂花是典型的自交不親和植物，很難採用實生繁殖方法獲得穩定遺傳的保持原種質遺傳性狀的後代。利用本方法保存繁育的胭脂花可穩定遺傳。2.與分株方法進行種質保存和繁殖的方法相比，本發明不受自然條件或地區差異的限制，繁殖係數高，可以隨時大規模提供種苗。3.減少常規種質保存用地常規的種質保存方法需要佔用一定的土地，且易感染病毒、病害，造成種質資源退化。利用本發明提供的方法，可以減少用地，並可以對生長過弱、嚴重感病的種質進行脫毒培養，復壯、純化，達到種質長期保存的目的。


圖1為本發明所述經過表面消毒後的胭脂花的頂芽；圖2為本發明所述利用幼葉為外植體誘導芽的情況；圖3為本發明所述芽在增殖培養基中增殖培養的情況；圖4為本發明所述不定芽在生根培養基上的生根情況；圖5為本發明所述試管苗移栽到溫室中培養。
具體實施例方式下面結合實施例，對本發明的具體實施方式
作進一步詳細描述。以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。實施例1外植體的選擇10月初將已形成休眠頂芽的植株置於-2 V的冷庫中冷凍處理2 4個月後，取出植株，剝出頂芽，取頂芽幼葉作為外植體。實施例2外植體的表面消毒選取生長健壯的胭脂花的頂芽，用洗潔精和自來水洗淨後，再在流水下衝洗 30min，在超淨工作檯內先用75%乙醇消毒30s，無菌水衝洗3次，然後再經0. 升汞消毒 8min，無菌水衝洗6次。實施例3外植體誘導芽的生成頂芽經表面消毒後，在無菌操作臺內將其幼葉剝下，選取健壯的帶腋芽的幼葉， 將其從基部切成1. 5cmXl. 5cm的方塊，葉片基部插入以MS為基本培養基，添加不同濃度的6-BA和NAA的固體培養基中，具體參見下表。每瓶接種2個。光照條件為自然散射光 3000Lux加上人工輔助光源1800士200Lux，光照14h，溫度20 25°C。接種後，葉色逐漸加深變綠，5天後，從每個葉片基部抽出1 2個新芽，15天後，芽長至1 1.5cm高，生長健壯。實驗結果表明，在以MS為基本培養基，添加1. 0mg/L6-BA,0. 2mg/LNAA, 20 40g/ L蔗糖的固體培養基條件下，誘導芽長勢最好，其中萌芽率100%，平均苗高1.68cm。表一在不同濃度培養基條件下誘導芽萌芽情況
權利要求
1.一種胭脂花組培繁殖的種質保存方法，其特徵在於，包括低溫處理後的外植體經表面滅菌後，進行不定芽的誘導，所述的不定芽的誘導培養基為以MS為基本培養基，添加 0. 2 1. Omg/L 6-BA，0 0. 2mg/L IBA，20 40g/L 蔗糖的固體培養基，pH 為 5. 9 6. 0。
2.根據權利要求1所述的種質保存方法，其特徵在於，還包括增殖和繼代培養，所述的增殖和繼代培養基為以MS為基本培養基，添加0. 5 1. Omg/L 6-BA, 0. 05 0. 5mg/L NAA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9 6. 0 ；所述的繼代培養每隔1 2月繼代一次。
3.根據權利要求2所述的種質保存方法，其特徵在於，還包括生根培養，所述的生根培養的培養基為以MS為基本培養基，添加0. 02 0. 05mg/L IBA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，PH為5. 9。
4.根據權利要求3所述的種質保存方法，其特徵在於，還包括組培苗的移栽，所述的組培苗的移栽選擇在生根培養3 4周後，平均每株生根4 5條，打開瓶蓋，煉苗4 5天，待葉色加深，再移栽到溫室，栽培基質為草炭珍珠巖為2 1 ；開始一周使溼度保持在80% 以上，每天噴水2 3次，移栽溫度為18 25°C。
5.根據權利要求1 4任一項所述的種質保存方法，其特徵在於，所述的不定芽的誘導培養基為以MS為基本培養基，添加1. Omg/L 6-BA,0. 2mg/L IBA，20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5. 9。
6.根據權利要求1 4任一項所述的種質保存方法，其特徵在於，所述的增殖和繼代培養基優選為以MS為基本培養基，添加1. 0mg/L6 BA，0. 2mg/L NAA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5.9。
7.根據權利要求1 4任一項所述的種質保存方法，其特徵在於，所述的生根培養的培養基優選為以MS為基本培養基，添加0. 02mg/LIBA, 20 40g/L蔗糖的固體培養基，pH為 5 · 9 ο
8.根據權利要求1 4任一項所述的種質保存方法，其特徵在於，所述低溫處理溫度為-2 -5°C，時間為2 4個月。
9.根據權利要求1 4任一項所述的種質保存方法，其特徵在於，所述的外植體為頂芽中帶腋芽的幼葉。
10.根據權利要求9所述的種質保存方法，其特徵在於，所述的頂芽中帶腋芽的幼葉在接種時切成1. 5cmX 1. 5cm帶腋芽的方塊。
全文摘要
本發明提供了一種胭脂花組培繁殖的種質保存方法，包括低溫處理後的外植體經表面滅菌後，進行不定芽的誘導，所述的不定芽的誘導培養基為以MS為基本培養基，添加0.2～1.0mg/L 6-BA，0～0.2mg/L IBA，20～40g/L蔗糖的固體培養基，pH為5.9～6.0。本發明提供的組培繁殖胭脂花種質保存方法穩定可靠，可重複性強，為胭脂花優良單株的保存提供了技術保障。
文檔編號A01H4/00GK102228004SQ20111012124
公開日2011年11月2日 申請日期2011年5月11日 優先權日2011年5月11日
發明者孫明, 張啟翔, 遊曉會, 潘會堂, 王佳, 程堂仁 申請人:北京林業大學