一種減壓蒸餾法製備的細辛揮髮油及其用途的製作方法

2023-06-05 00:47:36 1

專利名稱：：一種減壓蒸餾法製備的細辛揮髮油及其用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及細辛揮髮油及其製備方法和用途，屬藥物領域。
背景技術：
：馬兜鈴科植物北細辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvat.mandshuricum(Maxim.)Kitag.的乾燥全草。細辛為常用中藥，具有解熱抗炎，鎮痛，鎮靜等藥理活性，主要藥效成分為揮髮油。如三種細辛屬植物揮髮油的鎮痛消炎作用研究，中華中醫藥雜誌(原中國醫藥學報)，2006年第21巻第5期；細辛醚的研究進展，中醫藥學刊，2006年7月，第24巻第7期，報導了細辛醚對神經系統、心血管系統、呼吸系統、消化系統等多種活性。針對細辛的提取工藝，報導針對揮髮油的提取較多，如正交試驗優化細辛揮髮油提取及包合工藝的研究，中藥材第29巻第5期，2006年5月，報導了細辛揮髮油的提取工藝取細辛80.0g，置揮髮油提取器中，加入規定倍量水，浸泡一定時間，按《中國藥典》2000年版一部，附錄XD揮髮油測定法(甲法)水蒸汽蒸餾規定時間，讀取揮髮油量。優選細辛提取揮髮油的最佳工藝，發現浸泡時間、加水量對揮髮油提取量無明顯影響，確定最佳揮髮油提取條件為浸泡時間lh，加水量8倍，提取時間3h。此外，細辛揮髮油的提取方法還有1、水蒸氣蒸餾法將遼細辛170g裝入揮髮油提取器中，加水蒸餾6h，收集揮髮油，稱重，萃取率為1.62%;2、微波萃取法將遼細辛樣品準確稱量30g，裝入燒瓶中，加入IOOmL石油醚，在輻射時間200s，微波功率720W，溶劑用量300mL的條件下進行微波萃取.用30mL石油醚洗滌燒瓶的殘渣，將濾液集中於一錐形瓶中.經減壓蒸餾回收石油醚，用無水Na乾燥樣品，24h後稱重，萃取率為5.46;3、超臨界C02萃取法準確稱取遼細辛170g,裝入1L的萃取罐內，超臨界C02萃取萃取壓力16MPa，萃取溫度32C，流量20kg/h;解析釜I壓力7MPa8MPa，溫度60C;解析釜II壓力4MPa6MPa，35°C，萃取時間為80min，每20min收集提取物稱量，萃取率為3.78，儲存於冰箱用GC—MS分析(不同方法提取的遼細辛揮髮油指紋圖譜分析，測試技術學報，2004年第18巻第3期；超臨界C02萃取苕葉細辛揮髮油，精細化工，2003年11月，第20巻第11期)。細辛有毒，現代毒理研究表明，細辛揮髮油中黃樟醚的毒性較大，具有麻痺動物呼吸中樞的作用，也是致癌物質。這一結果與臨床中細辛粉末的毒性大於煎劑的毒性相印證隨著煎煮時間的延長，強揮發性的黃樟醚將逐漸減少。有學者建議採用長時間煎煮的方法降低細辛的毒性(李述文，細辛治療坐骨神經痛，中醫雜誌，1993，34(7):391)，近年來還出現了採用精餾法去除黃樟醚的研究[蔡國琴，周俊，徐運；除去細辛揮髮油中有害物質黃樟醚方法的研究，中成藥，1997，19(7):37.]，該文獻報導了通過分段蒸餾,製備的細辛揮髮油中甲基丁香酚與黃樟醚的含量為42.34%和7.74%;該實驗表明有毒物質黃樟醚的揮發性大於甲基丁香酚，通過本實驗，可以設計出用蒸餾法棄出細辛蒸餾液的最先流份來提取細辛的揮發性成分的方法，可做到使含細辛揮髮油的製劑安全有效。但採用該方法製備的揮髮油中黃樟醚的含量仍然較高；有文獻報導採用高效液相色譜技術對北細辛的正己烷提取物中強毒性成分黃樟醚進行了目標去除，並採用霍恩氏法和二甲苯所致小鼠耳殼腫脹試驗對去除前後的提取物進行急性毒性及抗炎藥理活性研究(程孟春，等，一種利用製備液相色譜特異性去除北細辛毒性成分的新方法，世界科學技術-中醫藥現代現基礎研究，2006年第八巻第二期)，利用長時間蒸煮雖可有效去除黃樟醚，但同時甲基丁香酚等細辛的主要藥效成分也會被除掉了；用液相色譜技術去除黃樟醚的成本較高且不能大規模製備，在生產應用中不能廣泛運用。目前文獻中報導的均是將細辛揮髮油直接提取作為藥用部分，但是由於揮髮油中的成分複雜，除了有效成分外，還有毒性成分，如黃樟醚，且有效成分中，各種成分發揮的藥效各異，目前尚沒有有效將細辛揮髮油進一步分離後進行藥效監控的相關文獻的報導。
發明內容本發明的技術方案是提供了一種細辛揮髮油，本發明的另一技術方案是提供了該揮髮油的製備方法和用途。本發明提供了一種細辛揮髮油，它是由下述方法製備而成取細辛提取揮髮油粗品，再用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36'C開始，每升高8。C收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，並分別依次標上l-7號，8號為未餾出的揮髮油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將餘下餾出液與8號揮髮油混合，製備成本發明揮髮油。所述的低溫保存為-l(TC溫度保存。其中，所述的組別與溫度範圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60°C;4號:60-68。C;5號:68-76。C;6號:90國98。C;7號:98-106°C。8號由於溫度過高，未餾出。其中，含有甲基丁香酚的重量百分含量大於40%;黃樟醚的重量百分含量不高於2%。本發明還提供了一種製備權利要求1或2所述的細辛揮髮油的方法，包括如下步驟a、取細辛提取揮髮油粗品；b、分離a步驟所述的揮髮油粗品用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36"C開始，每升高8'C收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封,並分別依次標上l-7號，8號為未餾出的揮髮油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將l-8號餾出液與8號揮髮油混合，製備成本發明揮髮油。其中所述的低溫保存為-l(TC溫度保存。步驟b所述的組別與溫度範圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60。C;4號60-68。C;5號68-76。C;6號90-98。C;7號98-106°C。8號溫度過高，未餾出。本發明還提供了細辛揮髮油在製備鎮痛、抗炎的藥物中的用途。本發明還提供了細辛揮髮油在製備免疫調節的藥物中的用途。本發明還提供了細辛揮髮油在製備治療類風溼性關節炎的藥物中的用途。本發明通過減壓蒸餾的方法可以在去除絕大部分黃樟醚的同時保留有效成分，臨床使用更安全，通過將揮髮油中不同組分分離後配伍，藥效更明確、穩定，可控性強；且具有成本低，儀器簡單，操作容易，能在生產中推廣，為臨床提供了一種新的選擇。以下通過具體實施方式對本發明作進一步的詳細描述，但並不限制本發明，本領域技術人員可以根據本發明作出各種改變和變形，只要不脫離本發明的精神，均應屬於本發明所附權利要求的範圍。具體實施例方式實施例l本發明細辛揮髮油的提取1、水蒸餾提取揮髮油粗品試藥細辛購自杭州中藥飲片廠，經鑑定為馬兜鈴科植物北細辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvat.mandshuricum(Maxim.)Kitag.的乾燥全草。方法取細辛500g，置揮髮油提取器中，加入規定倍量水，浸泡一定時間，按《中國藥典》2000年版一部，附錄XD揮髮油測定法(甲法)水蒸汽蒸餾規定時間，讀取揮髮油量。餾出揮髮油用棕色瓶收集，低溫保存(5°C)。除了採用該方法提取揮髮油外，也可以採用目前文獻報導的其它方法提取揮髮油。2、揮髮油的組分分離取45ml揮髮油用減壓蒸餾的方法分離，每隔8'C收集一次，收集到的餾出液用棕色容量瓶密封,其中，77-89。C未能收集到餾出液，已收集的餾出液分tableseeoriginaldocumentpage63、檢測石英毛細管柱HP-5MS，50mX0.25mmX0.25tim;程序升溫60。C以8。C/min速度升至120。C，再以l(TC/min速度升至28(rC;載氣He;柱流量0.9ml/min;進樣量lul;進樣口溫度250。C;接口溫度230。C;柱壓80kPa;分流比50:1。採用黃樟醚及甲基丁香酚兩種標品做對照，確定兩種成分的峰位。結果顯示黃樟醚在7號組分中，甲基丁香酚在未餾出組分中。4揮髮油混合物的製備在98'C前，控制升溫速度，使液體l滴/秒的速度餾出；隨後將溫度控制在98-106。C，持續蒸餾直至沒有液體流出，棄去該部分，即7號組分；將未餾出的液體和98。C前餾出的混合。實施例2本發明揮髮油中甲基丁香酚、黃樟醚的含量測定採用氣相色譜歸一化法測定實施例l中甲基丁香酚、黃樟醚在揮髮油中的相對含量，參考文獻王棟，等，北細辛不同生長期甲基丁香酚和黃樟醚氣相色譜法定量分析，色譜，1997年1月第15巻第1期；所述的方法進行測定，結果實施例1製備的揮髮油中含有甲基丁香酚的重量百分含量為46.3%;黃樟醚的重量百分含量為1.7%。以下通過藥效學試驗證明本發明的有益效果。試驗例1遼細辛揮髮油混合物鎮痛作用研究實驗材料1、藥材來源按實施例1的方法製備的揮髮油。2、動物昆明小鼠，18-22g，由成都實驗動物飼養中心提供。3、藥品與試劑吐溫-80;硫酸嗎啡，北京萌蒂製藥有限公司，每片30mg,批號07042311;4、儀器電子分析天平；智能熱板儀方法1、熱板法取雌性小鼠，1822g，於實驗前l天放入熱板刺痛儀中，記錄從放入到出現舔後足的時間(即痛閾值)，取痛閾值為530s的合格小鼠60隻，按痛閾值隨機分為3組，每組20隻。實驗前禁食16h，不禁水。給藥前再測l次痛閾值，作為正常痛閾值。陽性對照組皮下注射嗎啡10mg/kg;陰性對照組灌胃同體積5%吐溫-80(0.2ml/20g體重)；實驗組分別灌胃O.15ml/kg。每隔30分鐘測定一次反應時間，以60s為限，如痛閾超過60s，按60s計。室溫15"C。2、醋酸扭體法取雌性小鼠60隻體重1822g，隨機分為3組(給藥劑量同上)。灌胃給藥30min後腹腔注射0.6。/。醋酸0.2ml，觀察注射後至開始出現扭體的時間，記錄注射後20min內每隻小鼠的扭體次數，所得數據進行t檢驗。表1熱板法實驗數據(減壓蒸餾)tableseeoriginaldocumentpage7表2細辛揮髮油對醋酸所致疼痛產生扭體的次數tableseeoriginaldocumentpage7結論:用減壓蒸餾方法製備的細辛揮髮油具有顯著的鎮痛效果，但起效時間較嗎啡晚。試驗例2細辛揮髮油消炎實驗實驗材料弗氏完全佐劑取羊毛脂加熱溶解後取30mL置於研缽中,稍冷卻後,邊研磨邊加液體石臘至50ml液體石臘加完，高壓消毒，然後按5mg/ml加入卡介苗。實驗儀器足趾容積測量儀動物模型-大鼠佐劑性關節炎原理大鼠佐劑關節炎有人的RA(類風溼性關節炎)有許多相似性，大鼠腳掌內注射弗氏完全佐劑致炎後，35天炎症達到高峰，約1112天在非注射部位(後足、前足、耳、鼻、尾巴)出現繼發炎症病變，並能下調IL-1、IL-6、TNFa;上調IL-2等。實驗方法1、預防性試驗取50隻健康雄性Wistar大鼠，體g^200250g。隨機分為5組，陰性對照組灌胃2ml5%吐溫-80;揮髮油低、中、高劑量組分別灌胃0.15，0.30,0.60ml/kg;陽性對照組灌胃阿司匹林157mg/kg。給藥前測量足蹠體積並劃線，在注射弗氏佐劑前3天開始給藥；第3天給藥同時按每隻0.1ml將弗氏佐劑注於各組大鼠左後足墊內，弗氏佐劑注射一次。在致炎後18小時測一次足蹠體積，後兩天每天測量一次，實驗數據用t檢驗處理。2、治療性試驗取50隻健康雄性Wistar大鼠，ffi^200250g。隨機分為5組，陰性對照組灌胃2ml5%吐溫-80;揮髮油小、中、大劑量組分別灌胃0.15,0.30,0.60ml/kg;陽性對照組灌胃阿司匹林157mg/kg。試驗第一日，測正常兩後足蹠體積，按每隻0.1ml將弗氏佐劑注於各組大鼠左後足墊內，弗氏佐劑注射一次，再持續給藥一周，每天測量足蹠體積，並計算實驗前後足體積差及足體積抑制百分率，實驗數據用t檢驗處理。3、繼發病變試驗取50隻健康雄性Wistar大鼠，^200~250g。隨機分為5組，陰性對照組灌胃2ml5Q/。吐溫-80;揮髮油小、中、大劑量組分別灌胃0.15，0.30,0.60ml/kg;陽性對照組灌胃阿司匹林157mg/kg。試驗第一日，測正常兩後足蹠體積，按每隻0.1ml將弗氏佐劑注於各組大鼠左後足墊內，弗氏佐劑注射一次，待出現顯著繼發性炎症(一般為第ll日)，再持續給藥2周，每天測量足蹠體積，觀察全身症狀，並計算實驗前後足體積差及足體積抑制百分率，實驗數據用t檢驗處理。實驗結束後處死動物取血清檢測IL-1、TNF-a。根據試劑盒說明書用放免法檢測IL-1、TNF-a。表l細辛揮髮油對佐劑性關節炎大鼠足腫脹的抑制作用組別劑量實驗前足體積/ml實驗後足體積/ml足體積差/ml陰性對照一0.62±0.111.34±0.140.72±0.07陽性對照157mgkg—10.58±0.131.01±0.100.44±0.04*細辛揮髮油除黃樟醚組分(預防)0.15mlkg一10.66±0.101.25±0.110.58±0.04*0.3mlkg—10.56±0.110.97±0.130.40±0.05*0.6mlkg—10.68±0.121.15±0.100.48±0.05*陰性對照一0.65±0.131.36±0.110.71±0.08陽性對照157mg*kg—10.60±0.121.02±0.110.42±0.05細辛揮髮油除黃樟醚組分(治療)0.15mlkg-10.67±0.111.20±0.130.53±0.040.3mlkg-10.69±0.131.15±0.120.47±0.030.6mlkg—10.60±0.131.10±0.100.51±0.05陰性對照一0.66±0.151.45±0.110.79±0.07陽性對照157mgkg-10.58±0.111.12±0.110.55±0.05細辛揮髮油除黃樟醚組分(繼發病變)0.15mlkg-10.68±0.141.30±0.150.62±0.040.3mlkg—10.57±0.121.12±0.140.53±0.070.6mlkg—10.63±0.111.17±0.110.53±0.04表2細辛揮髮油對細胞因子的影響組別劑量IL-1(ng/ml)TNFa(ng/ml)陰性對照—1.90±0.216.23±0.22陽性對照157ragkg—10.69±0.072.78±0.13細辛揮髮油除黃樟醚組分(預防)0.15mlkg—10.89±0.122.62±0.210.3mlkg—10.76±0.152.55土0.190.6mlkg-10.77±0.152.65±0.15陰性對照—2.27±0.196.37±0.23陽性對照157mgkg一10.76±0.132.56±0.12細辛揮髮油除黃樟醚組分(治療)0.15mlkg-10.79±0.102.41±0.130.3mlkg—10.69土0.132.53±0.100.6mlkg—10.73±0.182.45±0.18陰性對照一2.45±0.206.77±0.26陽性對照157mgkg-10.81±0.113.12±0.15細辛揮髮油除黃樟醚組分(繼發病變)0.15mlkg-10.88±0.262.93±0.160.3mlkg-10.78±0.222.77±0.120.6mlkg—10.80±0.192.69±0.18結論:從表1可知，在預防、治療及關節炎繼續發病變的實驗中，減壓蒸餾法提取的細辛揮髮油混合物效果與陽性對照組接近，中劑量組的效果最好，大劑量組的效果反而有所下降。對血清的檢測發現，揮髮油能明顯下調血清中IL-l和TNFa。從表2可知，9在治療和繼發病變實驗中，揮髮油的效果比陽性對照組好；而在預防實驗中效果接近陽性對照組。中、大劑量組血清中IL-l和TNF(i的量較小劑量組低。上述試驗證明，本發明細辛揮髮油具有明顯鎮痛、抗炎、免疫調節的作用，用於治療類風溼性關節炎，藥效明確，且以中劑量的藥效最佳，為臨床提供了一種新的選擇。權利要求1、細辛揮髮油，其特徵在於它是由下述方法製備而成取細辛提取揮髮油粗品，再用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36℃開始，每升高8℃收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，並分別依次標上1-7號，8號為未餾出的揮髮油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將餘下餾出液與8號揮髮油混合，製備成本發明揮髮油。2、根據權利要求l所述的細辛揮髮油，其特徵在於所述的組別與溫度範圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60°C;4號60-68°C;5號68-76。C;6號:90-98。C;7號:98-106。C。3、根據權利要求1或2所述的細辛揮髮油，其特徵在於含有甲基丁香酚的重量百分含量大於40%;黃樟醚的重量百分含量不高於2%。4、一種製備權利要求l-3任一一項所述的細辛揮髮油的方法，包括如下步驟a、取細辛提取揮髮油粗品；b、分離a步驟所述的揮髮油粗品用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36'C開始，每升高8'C收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，並分別依次標上l-7號，8號為未餾出的揮髮油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將餘下餾出液與8號揮髮油混合，製備成本發明揮髮油。5、根據權利要求4所述的細辛揮髮油的製備方法，其特徵在於步驟b所述的組別與溫度範圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60°C;4號60-68。C;5號:68-76。C;6號:90-98。C;7號:98-106°C。6、根據權利要求4所述的細辛揮髮油的製備方法，其特徵在於步驟b所述的低溫保存為-l(TC溫度保存。7、權利要求1-3任一一項所述的細辛揮髮油在製備鎮痛、抗炎的藥物中的用途。8、權利要求1-3任一一項所述的細辛揮髮油在製備免疫調節的藥物中的用途。9、權利要求l-3任一一項所述的細辛揮髮油在製備治療類風溼性關節炎的藥物中的用途。全文摘要本發明提供了一種細辛揮髮油，它是由下述方法製備而成取細辛提取揮髮油粗品，再用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06MPa下，從36℃開始，每升高8℃收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，並分別標上1-7號，8號為未餾出的揮髮油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將餘下餾出液與8號揮髮油混合，製備成本發明揮髮油。本發明還提供了該揮髮油的用途；本發明通過減壓蒸餾的方法可以在去除絕大部分黃樟醚的同時保留有效成分，臨床使用更安全，通過將揮髮油中不同組分分離後配伍，藥效更明確、穩定，可控性強；且具有成本低，儀器簡單，操作容易，能在生產中推廣，為臨床提供了一種新的選擇。文檔編號C11B3/00GK101530442SQ20091012761公開日2009年9月16日申請日期2009年3月12日優先權日2008年3月12日發明者偉嚴,許志暉,益郭,蕊黃申請人:四川師範大學