一種富含黃酮苷元的射幹飲片及其提取物的製備工藝的製作方法

2023-06-05 14:20:27

本發明屬於中草藥技術領域，特別提供一種通過酶促反應而製備富含黃酮苷元的射幹高效飲片及其提取物的工藝。

背景技術：

射幹為鳶尾科植物射幹Belamcanda chinensis(L.)DC.乾燥根莖的加工品，具有清熱解毒，消痰，利咽的功效。多用於熱毒痰火鬱結，咽喉腫痛，痰涎壅盛，咳嗽氣喘。作為治療上呼吸道疾病之要藥，射幹中含有黃酮類及其衍生物、酮類、酚類、苯類、二環三萜類、甾類及揮發性成分。其中黃酮類成分作為主要的藥理活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗菌和抗病毒的作用。

射幹中已報導的黃酮類成分(包括苷及苷元)有30餘種，其中關於鳶尾苷(tectoridin)、鳶尾苷元(tectorigenin)、野鳶尾苷(iridin)和野鳶尾苷元(irigenin)等的活性研究報導較多。研究表明射幹中黃酮苷元類成分(鳶尾黃素、野鳶尾黃素)在抗炎、抗氧化、抑菌等活性較相應的苷類成分(鳶尾苷、野鳶尾苷)強。

以射幹中的鳶尾苷苷元和鳶尾苷分別治療炎症，發現二者均可以抑制12-O-十四醯佛波-13-乙酸酯或毒胡蘿蔔素對環氧合酶-2的誘導作用，抑制前列腺素E2(PGE2)的產生，並且鳶尾苷元抑制PGE2的產生能力強於鳶尾苷。

採用生物化學發光法測得射幹根莖中分離得到的異黃酮成分野鳶尾苷元、鳶尾苷元、鳶尾苷、5，6，7，4′-四羥基-8-甲氧基異黃酮均具有清除自由基的作用，其中鳶尾苷元對自由基清除作用的能力最強。

採用單細胞生物測定法對射幹的抗菌作用進行了研究。通過矽膠凝膠色譜柱和反相HPLC分離出活性組分為鳶尾苷元。採用17種真菌和6種細菌進行實驗，發現鳶尾苷元對髮癬菌屬的皮膚癬菌有顯著的抑菌作用。

然而，中藥射幹中的苷元含量有限，若是通過一定的方法人為的來促進苷類成分降解成苷元，對於提高飲片的臨床療效就具有積極的意義。

大孔吸附樹脂吸附技術最早用於廢水處理、醫藥工業、化學工業、分析化學、臨床檢定和治療等領域，近年來在我國已廣泛用於中草藥有效成分的提取、分離、純化工作中。與中藥製劑傳統工藝比較，應用大孔吸附樹脂技術所得提取物體積小、不吸潮、易製成外型美觀的各種劑型，特別適用於顆粒劑、膠囊劑和片劑，改變了傳統中藥製劑的粗、黑、大現象，有利於中藥製劑劑型的升級換代，促進了中藥現代化研究的發展。在射幹的總黃酮提取中，也有吸附樹脂分離的報導，但是到目前為止，所報導的方法中，皆是製備總黃酮提取物，沒有以分離黃酮苷元為目標的研究。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種富含黃酮苷元的射幹飲片及其提取物的製備工藝，該工藝可以顯著提高射幹飲片中的黃酮苷元的含量，從而提高飲片在抗菌消炎等方面的功效。以此為原料，通過大孔吸附樹脂技術進一步對總苷元進行富集、純化，為下一步開展的製劑開發提供保證。

本發明所述富含黃酮苷元的射幹飲片的製備方法，其特徵在於：在 25-55℃的條件下，在中藥射幹中加入β-葡萄糖苷酶，並浸泡在pH＝4-5的緩衝液中，β-葡萄糖苷酶的加入量為2000-6000萬U/kg，浸泡24-48小時，取出，瀝乾水分，乾燥，篩去碎屑，製成富含黃酮苷元的射幹飲片，該射幹飲片中黃酮苷元鳶尾黃素及野鳶尾黃素含量高於原射幹藥材1倍以上。所述射幹為射幹原藥材、原藥材切制的飲片或破碎後的藥材粉末。

其中，所述β-葡萄糖苷酶的活性為：10000U-100000U/mg，緩衝液為檸檬酸-檸檬酸鈉或檸檬酸-磷酸氫二鈉，所述緩衝液的加入體積優選為射幹藥材重量的3-6倍(L/Kg)。在緩衝液中浸泡後取出，乾燥溫度在40-60℃。

本發明還提供了一種利用以上方法製備得到的射幹飲片製備射幹提取物的方法，其特徵在於：所述射幹飲片經水提或醇提後調整含醇量為0～30％的上清液上於大孔吸附樹脂柱上，先用1～2倍量柱體積含醇量為25-40％的溶液洗脫，續用2-5倍柱體積、體積分數為80％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓乾燥至幹得富含黃酮苷元的射幹提取物。

本發明所述製備射幹提取物的方法，其特徵在於，所述水提或醇提過程以及工藝參數為：中藥射幹，加6～10倍pH為7.5～9的水或純度為20～70％的稀乙醇，在40～70℃條件下，浸泡1～2小時，回流提取2～3次，濾過，合併濾液，旋轉蒸發回收水或乙醇，調整為含醇量為0～30％的上清液，至每1ml含0.2～0.5g藥材的藥液，靜置12～24小時，除去沉澱。

本發明所述製備射幹提取物的方法，其特徵在於：所述大孔吸附樹脂柱為苯乙烯類大孔吸附樹脂柱。

本發明所述製備射幹提取物的方法，其特徵在於：上清液上於NKA-9、X-5、AB-8、S-8、HPD450、HPD500或HPD600的苯乙烯類大孔吸附樹脂 上，先用1～2倍量柱體積含醇量為0～30％的溶液洗脫，續用2～5倍柱體積、體積分數為30～80％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓乾燥至幹得射幹提取物。

本發明所述製備射幹提取物的方法，其特徵在於，具體製備工藝如下：

在45℃的條件下，在射幹飲片中加入β-葡萄糖苷酶，並浸泡在pH＝4-5的檸檬酸-檸檬酸鈉緩衝液中，β-葡萄糖苷酶的加入量為2000-6000萬U/kg，緩衝液的加入體積為射幹藥材重量的3-6倍，浸泡24-48小時，取出，瀝乾水分，於40-60℃條件下乾燥，篩去碎屑；飲片經水提或醇提後調整為含醇量為0～30％的上清液上於大孔吸附樹脂柱上，先用1～2倍量柱體積含醇量為30％的溶液洗脫，續用3倍柱體積、體積分數為80％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓乾燥至幹，即得射幹提取物。

本發明所述方法簡單，所得射幹提取物的雜質含量低。

附圖說明

圖1市售未經處理的射幹飲片。

圖2經處理的射幹飲片。

圖3射幹提取物(註：A，鳶尾苷；B，野鳶尾苷；C，鳶尾黃素；D，野鳶尾黃素)。

具體實施方式

實施例1

射幹中總苷元酶法轉化工藝的優化

儀器：Agilent 1100液相色譜系統(美國安捷倫公司)，Phenomenex色譜柱(Phenomenex Synergi 4u polar-RP 80A 250×4.6mm 4micron)，PHS-25C PH計(上海唐儀儀器有限公司)，KQ-250DB數控超聲波清洗器(崑山市超聲波儀器有限公司)，DZF-6050型真空乾燥箱(鞏義市予華儀器有限責任公司)。

試藥：射幹飲片(安徽滬譙中藥飲片廠，批號：20141120)；檸檬酸(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20140415)、檸檬酸鈉(瀋陽試劑一廠，批號：880703)；β-葡萄糖苷酶(湖北大華偉業醫藥化工有限公司，批號：20150103效價：10萬U/mg)。

以射幹中的總苷及總苷元的含量為考察指標，對射幹中總苷元酶法轉化工藝進行優化，確定其最優工藝為每100g飲片，在45℃的條件下，加入400萬單位的β-葡萄糖苷酶及4倍體積的pH 4.6的檸檬酸-檸檬酸鈉緩衝液，浸泡24小時。確定的最佳工藝條件下3批成品的驗證結果如表1.

表1試驗結果

實施例2

用商品化D101大孔吸附樹脂富集、純化總苷元的工藝方法，步驟如下：

(1)在45℃的條件下，在1Kg射幹飲片中加入4000萬U的β-葡萄糖苷酶，並浸泡在pH＝4.5的檸檬酸-檸檬酸鈉緩衝液中48小時，取出，瀝 幹水分，乾燥，粉碎，之後用8倍、6倍體積的70％乙醇回流提取2次，每次2h，合併濾液減壓蒸餾回收乙醇，調節醇濃度至30％，靜置12小時，離心除去少量不溶物，得到每1ml含0.5g生藥的吸附液2000ml。

(2)將2BV的上述吸附液通過裝有D101的大孔吸附樹脂的樹脂柱(柱內徑10cm，柱長150cm，裝有6000mL溼樹脂)，吸附速度為1.0BV/h；

(3)吸附完成後，用2BV的30％乙醇水溶液將樹脂上吸附能力較弱的雜質洗脫下來，速度為1.0BV/h；

(4)用5BV的80％乙醇水溶液作解吸劑，解吸速度為1.0BV/h，收集解吸液；

(5)將上述解吸液經減壓蒸餾並回收乙醇，然後經濃縮、真空乾燥，得到總苷元提取物30.19g。

(6)經HPLC分析測定，提取物中總苷元含量為15.1％(w％)。

實施例3

與實施例2的不同之處在於步驟(1)中，β-葡萄糖苷酶的加入量為5000萬U，浸泡在pH＝5的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液中24小時。最終得到總苷元提取物31.60g，經HPLC分析測定，提取物中總苷元含量為15.5％(w％)。

實施例4

與實施例2的不同之處在於步驟(1)中，β-葡萄糖苷酶的加入量為2000萬U，浸泡在pH＝4的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液中48小時。最終得到總苷元提取物29.69g，經HPLC分析測定，提取物中總苷元含量為14.5％(w％)。

實施例5

與實施例2的不同之處在於步驟(2)中，樹脂選用AB-8的大孔吸附樹脂，吸附速度為1.0BV/h。最終得到總苷元提取物30.43g，經HPLC分析測定，提取物中總苷元含量為13.5％(w％)。

實施例6

與實施例2的不同之處在於步驟(3-4)中，以3BV的30％乙醇水溶液將樹脂上吸附能力較弱的雜質洗脫下來，速度為1.0BV/h；用8BV的80％乙醇水溶液作解吸劑，解吸速度為1.0BV/h，收集解吸液。最終得到總苷元提取物31.67g，經HPLC分析測定，提取物中總苷元含量為14.2％(w％)。

上述實施例只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在於讓熟悉此項技術的人士能夠了解本發明的內容並據以實施，並不能以此限制本發明的保護範圍。凡根據本發明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。