安非他酮代謝物用於治療炎性病症的用途的製作方法
2023-06-08 23:55:56 5
專利名稱：安非他酮代謝物用於治療炎性病症的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及安非他酮代謝物用於治療炎性病症的用途。
背景技術：
免疫驅動的炎性事件是許多慢性炎性疾病的重要原因，在這些慢性 炎性疾病中，長期的炎症引起組織破壞並導致廣泛的損傷，最終導致被 影響器官的衰竭。這些疾病的原因還不清楚，因為其似乎來源於個體免 疫系統的自身啟動，故通常將其稱為自身免疫病。病症包括涉及多個器
官的那些病症，比如系統性紅斑狼瘡(SLE)和硬皮病。其它類型的自 身免疫疾病可涉及特定組織或器官比如肌肉骨骼組織(類風溼性關節 炎、強直性脊推炎)、胃腸道(克羅恩病和潰瘍性結腸炎)、中樞神經系 統(阿爾茨海默病、多發性硬化、運動神經元病、帕金森病和慢性疲勞 症候群)、胰腺p-細胞(胰島素依賴型糖尿病)、腎上腺(艾迪生病)、 腎臟(古德帕斯丘症候群、IgA腎病、間質性腎炎)、外分泌腺(乾燥 症候群(Sjogren's syndrome)和自身免疫性胰腺炎)以及皮膚(銀屑 病和特應性皮炎)。
此外，有些慢性炎性疾病其病因或多或少是已知的，但其炎症仍是 慢性且持續的。這些疾病也表現出大塊組織/器官的破壞，包括以下病 症如骨關節炎、牙周病、糖尿病腎病、慢性阻塞性肺病、動脈粥樣硬 化(artherosclerosis )、移植物抗宿主病、慢性盆腔炎、子宮內膜異位症、 慢性肝炎和結核病。在這些疾病中，組織破壞常損傷器官功能，導致生 命質量的進行性降低和器官衰竭。這些病症是發展中世界的主要發病原 因，並且當前治療對其療效很差。
皮膚結構的炎症(皮炎)是一組常見的病症，其包括光化性角化病、 酒渣鼻、尋常痤瘡、變應性接觸性皮炎、血管性水腫、特應性皮炎、大 皰性類天皰疾(bullous pemiphigoid)、皮膚藥物反應、多形紅斑、紅斑 狼疾(lupus erythrametosus )、日光性皮炎、4艮屑病、銀屑病關節炎、 硬皮病和蕁麻滲。這些疾病通過各種療法來治療，其中許多療法具有非常嚴重的副作用。
當前免疫驅動病症的疾病緩解性治療(如果有的話)包括中和抗體、 細胞毒素、皮質類固醇、免疫抑制劑、抗組胺劑和抗毒萆鹼劑。這些治 療常與不方便的施用途徑和嚴重的副作用相關，導致順應性問題。此外， 某些藥物種類僅對某些類型的炎性疾病有效，例如抗組胺劑僅對鼻炎有 效。
安非他酮是市售的抗抑鬱劑，因其中樞作用機制而抑制5-羥色胺和去 甲腎上腺素的重吸收。安非他酮代謝物在文獻中被描述為在多種中樞神經 系統疾病中具有治療作用。
發明內容
出乎意料地，發現所選的安非他酮代謝物是細胞因子的調節劑並且具 有抗炎性能。祁^據本發明，利用通式(I)化合物或其鹽治療例如上述的炎 ，性病症
具體實施例方式
雖然安非他酮本身在LPS誘導的細胞因子釋放模型中具有非常弱的 細胞因子調節活性，但式(I)化合物卻是令人驚訝地有效的細胞因子調節 劑。安非他酮被非立體選擇性地代謝成式(I)的全部4種對映體，但是這 些化合物僅佔所述母體藥物的4^P代謝的相對較小的比例。
用於本發明的化合物是手性的，應當理解，本發明包括式(I)的任何 非對映異構體和對映異構體。式(I)的優選的非對映異構體或對映異構體 具有4艮小或不具有單胺重吸收活性，但是顯示出有效的細胞因子調節活 性。可利用合適的體外和體內方法測定這些活性。特別優選的化合物包括 非對映異構體的赤式對(erythro-pair)和單個的赤式對映異構體。這些特別優選的化合物是(lS，2R)-赤式-2-(l，l-二甲基乙基)^-l-(3-氯苯基)丙烷 -1-醇和(1議，28)-^4'-2-(1，1-二甲基乙基)絲-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇。應當 理解，用於本發明的化合物包括藥學活性鹽，例如鹽酸鹽。
根據本發明的式(I)化合物用於治療炎性疾病，包括但不限於涉及 多個器官的自身免疫病，比如系統性紅斑狼瘡(SLE)和硬皮病，涉及 特定組織或器官比如肌肉骨骼組織(類風溼性關節炎、強直性脊推炎)、 胃腸道(克羅恩病和潰瘍性結腸炎)、中樞神經系統(阿爾茨海默病、 多發性硬化、運動神經元病、帕金森病和慢性疲勞症候群)、胰腺P-細 胞(胰島素依賴型糖尿病)、腎上腺(艾迪生病)、腎臟(古德帕斯丘綜 合徵、IgA腎病、間質性腎炎)、外分泌腺(乾燥症候群和自身免疫性 胰腺炎)以及皮膚(銀屑病和特應性皮炎)的自身免疫疾病，慢性炎性 疾病比如骨關節炎、牙周病、糖尿病腎病、慢性阻塞性肺疾病、動脈粥 樣硬化(artherosclerosis )、移植物抗宿主病、慢性盆腔炎、子宮內膜異 位症、慢性肝炎和肺結核，IgE介導的(I型)超敏性比如鼻炎、哮喘、 過敏症和皮炎。皮炎病症包括光化性角化病、酒渣鼻、尋常痤瘡、變應 性接觸性皮炎、血管性水腫、特應性皮炎、大皰性類天皰瘡(bullous pemiphigoid )、皮膚藥物反應、多形紅斑、紅斑狼裔(lupus erythrametosus )、日光性皮炎、4艮屑病、4艮屑病關節炎、硬皮病和^麻 滲。還可治療眼睛的病症，比如糖尿病視網膜病變、黃斑變性、脈絡膜 新生血管膜、黃斑嚢樣水肺、視網膜前膜(epi-retinal membrane)和 黃斑裂孔(macular hole )、乾眼、葡萄膜炎和結膜炎。
根據本發明，這些化合物可在患者還施用或聯合施用選自以下的另 一種治療劑時使用，所述治療劑為皮質類固醇(實例包括皮質醇、可的 松、氫化可的松、雙氫可的松、氟氫可的松、強的松、強的松龍、去氟 可特、氟尼縮松、氯地米松、甲基強的松龍、去炎松、倍他米松和地塞 米松)，緩解病情的抗風溼藥(DMARD)(實例包括柳氮磺胺吡啶、金 硫蘋果酸鹽(aurothiomalate )、布西拉明、苯丁酸氮芥、環磷醯胺、來 氟米特、甲氨喋呤、咪唑立賓、青黴胺和水楊酸偶氮磺胺吡啶)、免疫 抑制劑(實例包括硫唑嘌呤、環孢菌素、黴酚酸酯(mycophenolate))， COX抑制劑(實例包括醋氯芬酸、阿西美辛、阿氯酚酸(alcofenac )、 阿明洛芬、阿洛普令(aloxipirin)、氨芬酸、氨基比林、安特非寧 (antraphenine)、阿司匹林、阿扎丙宗、貝諾酯、苯哺洛芬、千達明、布替布芬、塞來昔布、氯乙喚(chlorthenoxacine)、水楊酸膽鹼、氯美 辛(chlometacin )、右旋酮洛芬、雙氯芬酸、二氟尼柳、依莫法宗、依 匹唑、依託度酸、氯苯泰松、聯苯乙酸、芬布芬、芬氯酸、氟比洛芬、 格拉非寧、水楊酸羥乙酯、布洛芬、吲咮美辛、吲哚洛芬、酮基布洛芬、 酮咯酸、乳醯基氨基苯乙醚(lactyl phenetidin)、氯索洛芬、甲滅酸、 安乃近、莫非保松、莫非唑酸、萘丁美酮、萘普生、尼芬那宗、奧沙美 辛、非那西丁、旅布宗(pipebuzone)、普拉洛芬、異丙安替比林、丙喹 酮、洛芬昔布、水楊醯胺、雙水楊酯、舒林酸、舒洛芬、瘞拉米特、替 諾立定、託芬那酸、佐美酸)、中和抗體(實例包括依那西普(etanercept) 和英夫單抗)、抗生素(實例包括多西環素和米諾環素)。
可採用任何合適的施用途徑。例如，口服、局部、胃腸外、眼睛、 直腸、陰道、吸入、口腔、舌下和鼻內遞送途徑中任何途徑都可以是合 適的。活性劑的劑量將取決於所述病症的性質和程度、患者的年齡和狀 況、以及本領域技術人員公知的其它因素。典型的劑量是0.1mg (例如 10mg)至100mg，每日l至3次給予。
下述方案和合成舉例說明了式I化合物的製備。
2-溴-l-(3-氯苯基)丙烷-l-酮(2)
向帶有滴液漏鬥的三頸2L圓底燒瓶中加入3-氯苯丙酮(1) (110 g0.65 mol)和770 mlCH3CN。在氮氣下將所得反應混合物冷卻至0*C。 起初在0"C向溶液中滴加溴(33.4 ml, 0.65 mol)，但是在加入過程中(加 入約1/4溴時)除去冰浴[注通過30 %偏亞硫酸氫鈉水溶液淨化反應。 將反應混合物溫熱至30匸直到開始啟動反應(放出氣體以及脫色)。整 個添加過程進行1.5小時。添加完成後，然後將反應混合物冷卻至O"C， 小心地加入碳酸氫鈉飽和溶液(~550ml)。分層，用二氯甲烷萃取水層 (3 x 440ml)。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥、過濾並在真空下濃 縮得到淺黃色固體(152g，定量收率)，其不需要任何進一步純化而直 接用於下一步驟中。
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) 5H 7.99 (s, 1H)， 7.88 (d， 1H), 7.55 (d， 1H), 7.41 (m， 1H)， 5.20 (m， 1H), 1.89(d, 3H).
2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-酮(3)
在帶有冷凝器和滴液漏鬥的三頸2L圓底燒瓶中，將粗製的2-溴 國l-(3-氯苯基)丙烷-l-酮(2 X 152 g, 0.65 mol )溶解在600 ml乙腈(HPLC 級)中。在室溫和氮氣下，向所得混合物中滴加叔丁胺(172.5 ml， 1.63 mol)。然後將反應混合物加熱至回流約5小時。在此期間通過TLC分 析(二氧化矽，己烷乙酸乙酯，卯:10)監測反應進程。當原料耗盡時， 將反應混合物冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，用約250 ml乙酸乙酯清 洗所述珪藻土。濾液用2M KOH溶液(350 ml)清洗。分層，將有機 相用無水硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮至幹，得到淺橙色油(147g,定量收 率)，其不需要任何進一步的純化。
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) 5H 7.98 (s， 1H), 7.87 (d, 1H)， 7.56 (d， 1H), 7.43 (m， 1H), 4.29 (m， 1H)， 2.04 (寬單峰,1H)' 1.35 (d， 3H), 1.05 (s， 9H).
2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇(4)
在2L圓底燒瓶中，將"7 g ( 0.65 mol)粗製的2-溴-1-(3-氯苯基) 丙烷-l-酮(3)溶解在1500 ml乙醇中。在氮氣下將所得溶液冷卻至0 t!，攪拌下分批加入NaBH4 (27.1 g， 0.72 mol)。添加過程中使溫度保 持在低於5X:。完成最後的添加後，使反應混合物達到室溫並通過TLC 分析(二氧化矽，己烷乙酸乙酯，50:50)進行監測。在原料耗盡(約1小時)時，加入147 ml HCl ( 37% )直到觀察到pH為1。然後加入 在最少量水中的固體KOH (~25g)直到將pH調節到7-8。減壓下濃縮 混合物。將所得殘留物進一步用在最少量水中的固體KOH (~25g)鹼 化，調節pH至10-11。將混合物萃取到TBME ( 2 x 500mL )中。合併 有機層，用鹽水清洗，用無水MgS04乾燥、濃縮得到粗的褐色油。
純化通過在矽膠上的梯度洗脫色語(己烷乙酸乙酯，90/10—己 烷乙酸乙酯，5:95)上純化所述粗物質(127g)。合併單個點的級分並 在減壓下濃縮至恆重。這樣得到作為非對映異構體混合物的低熔點固體 (90.6g，收率58%)。
1H-NMR (500 MHz, CDCI3) S 7.16-7.37 (m， 10H，兩個非對映異構體 )，4.55 (d， 1H， 主要的異構體)，3.84 (d， 1H，次要的異構體)，3.08 (m, 1H,主要的異構體)，2.61 (m， 1H， 次要的異構體)，1.15 (s， 9H,主要的異構體)，1.14 (s， 9H，次要的異構體)，1.01 (d， 3H,次要的 異構體)，077 (d， 3HA要的異構體)
13C-NMR (125 MHz' CDCI3) 5H 145.16, 144.19, 134.12, 134.00， 129.63, 129.42， 129.22， 127.65， 127.25， 126.97， 126.30, 125.57， 125.14， 124.35， 74.24， 71.95， 54.54, 51,84， 51.32, 51.29， 30.34, 30.18， 30.04, 20.39， 18.83， 17.81.
質譜242，在+veESI中
HPLC分析赤式異構體72.85%,蘇式異構體25.51%
通過製備型手性HPLC得到2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇的 單個的赤式異構體及蘇式非對映異構體對，其中利用了 330 x 50 CHIRALPAK AD20 pm柱，流動相90/10 CCV乙醇+l。/。二乙胺，流速 60 ml/分鐘，UV檢測波長230 nm，溫度25"C。利用該方法分離99 g 粗的2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇，得到
(-H赤式)-2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇(5 )
30.3 g淺褐色油
保留時間10.1分鐘
HPLC分析(230 nm下的面積％ ) >98異構體純度>99
(+)-(赤式)-2-叔丁基氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇(6 )
29.6g黑褐色油
保留時間11.7分鐘
HPLC分析(230 nm下的面積％ ) >97 異構體純度>99
(+/-)-(^"式)-2-叔丁基氨基-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇(7 )
18.5 g淺褐色油
保留時間12.4和14.6分鐘
HPLC分析(230 nm下的面積％ ) >98.5
非對映異構體純度>99
(+/-)-(赤式)-2-叔丁基氨基-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇(8 )
以下試驗提供本發明的證據。 LPS小鼠試驗
通過腹膜內(i.p.) ( 5 ml/kg)或口服(10 ml/kg )施用方式給7周 齡的Balb C ByJ小鼠(24-28g)施用載體或測試物。30分鐘後通過腹 膜內注射lmg/kgLPS而刺激這些動物。LPS刺激2小時後，在異氟烷 淺麻醉下通過眼眶後穿刺將血液樣品採集到普通管內(normal tube )。 使樣品在室溫下凝結，然後在6000g和4t:下旋轉3分鐘。血清儲存在 -20匸直到使用。利用ELISA技術一式兩份地分析血清中TNFa和IL-10 水平。
以最高劑量施用的安非他酮(3)對LPS誘導的TNFa分泌具有小的 影響，但其對IL-10分泌沒有影響。還原形式的安非他酮(7)(蘇式外 消旋體)和(8)(赤式外消旋體)二者均具有細胞因子調節作用。(7)是最有效的藥劑，在所有施用劑量下均抑制TNFa，並在較高劑量下促進 IL-10的分泌。(7 )是效力相當小的細胞因子調節劑(最高劑量下對TNFa 具有小的抑制作用)，並且在任何劑量下對IL-10都不具有真正的作用。
赤式對映體(5 )和(6 ) 二者均具有良好的細胞因子調節性能。(5 ) 抑制LPS刺激之後TNFa的產生，但是對IL-10水平沒有影響。然而， (6)既抑制TNFa又促進IL-lO的分泌。這兩種分子都具有細胞因子調 節性能，更表明了它們作為抗炎和免疫調節治療劑的潛能。
角叉菜膠足爪試驗
對禁食(18小時)的雄性Wistar大鼠(105-130g)稱重，通過將 右後足浸入汞中直至脛跗關節而讀取汞器官充滿度測量儀 (plethysmometer )的基礎讀數。隨後，通過口服灌胃(10 ml/kg )施 用載體、參比物和測試物。處理後半小時，將0.1ml在0.9%鹽水中的 2%角叉菜膠注射到所述右後足的足底下(subplanatar )區域。在施用 角叉菜膠後第l、 2、 3、 4和5小時時利用器官充滿度測量儀再次測量 右足。足爪體積的影響以足爪體積隨時間的曲線下面積表示。活性(足 爪體積的抑制)以相比於載體對照的抗炎活性％表示。
化合物(5)和(6)分別顯示出對足爪內角叉菜膠誘導的足肺脹具 有劑量依賴性抗炎作用。
大鼠佐劑試驗
在第0天，通過向右足內足下注射弗氏佐劑(乳酪分支桿菌 (3fj;c(7^ic^"/w附Ai/0^cm附)在礦物油中的懸液)對雄性Wistar大鼠 (180-200 g)進行接種。以相同方式將含有0.9%鹽水的假接種物注射 到相匹配的雄性Wistar大鼠中。在第2天，對動物進行稱重。在第3、 4、 7、 9和11天，對動物進行稱重，並且利用器官充滿度測量儀將足爪 浸沒至脛跗關節來測量右後足爪和左後足爪。在第11天，選擇左後足 體積增加20 %的大鼠用於繼續研究。在同一天，給繼續研究的大鼠口 服施用測試物(10 ml/kg在蒸鎦水中)，從此開始每天施用一次，直到 完成研究。在第11、 14、 15、 16、 18和21天測量左後足爪和右後足爪 的體積。化合物(5)和(6) 二者均具有抗佐劑性關節炎的保護作用。(5) 在最高的兩個劑量下降低足爪腫脹，而(6)則在所有劑量(3、 10和 30mg/kg)下均抑制足爪炎症。
DSS誘導的結腸炎
在正常條件下飼養8-10周齡的BDF1雄性小鼠(~30g)。研究開始 時，將正常水換成3。/。硫酸葡聚糖溶液以誘導結腸炎症。同時，直腸內 施用埃他利特和陽性對照布地縮松，每日兩次，施用7天。在第8天， 處死動物並取出大腸。評價下部三分之二的組織學嚴重程度(評分系統， l輕度至4重度)。評價小鼠的累積直腸出血分數、腹瀉分數和累積潛血 測量值。
最高劑量的化合物(5)和(6) 二者均對口服硫酸葡聚糖誘導的組 織學分數具有顯著的影響。(6)稍稍更有效，在較低劑量下可見大的改 善作用。這表明(5)和(6) 二者均可具有治療炎性腸疾病的用途。
實驗性自身免疫性腦炎
通過皮下注射弗氏完全佐劑(CFA)中的蛋白脂質蛋白質 (proteolipid protein, PLP)(用作致腦炎的接種物)對適應的SJL小鼠 致敏。以200 pl體積中的125嗎PLP/300嗎CFA的濃度皮下施用接種 物。48小時後，以20 jig/kg的劑量腹膜內注射百曰咳毒素(PTX)以 增加血腦屏障的滲透性。
從實驗第一天起以10 mg/kg的劑量口服施用化合物(6 )，每日 一次， 直到結束。以25mg/kg的劑量腹膜內施用考帕松。在整個實驗過程中， 進行小心的臨床檢查並稱量體重以觀察動物的健康狀況。
發現化合物(6)徹底改善S幾小鼠EAE模型的二度JJL。
權利要求
1. 化合物用於治療或預防炎性病症的用途，其中所述化合物是式(I)化合物或其鹽
2. 權利要求l的用途，其中所述病症是慢性退行性疾病，比如類 風溼性關節炎、骨關節炎或骨質疏鬆。
3. 權利要求l的用途，其中所述病症是慢性脫髓鞘疾病，比如多 發性硬化。
4. 權利要求l的用途，其中所述病症是呼吸疾病，比如哮喘或慢 性阻塞性肺病。
5. 權利要求l的用途，其中所述病症是炎性腸病，比如潰瘍性結 腸炎或克羅恩病。
6. 權利要求l的用途，其中所述病症是皮膚病症，比如4艮屑病、 硬皮病或特應性皮炎。
7. 權利要求l的用途，其中所述病症是牙科疾病，比如牙周病或 齒齦炎。
8. 權利要求1的用途，其中所述病症是糖尿病腎病、狼瘡腎炎、IgA 腎病或腎小球腎炎。
9. 權利要求l的用途，其中所述病症是系統性紅斑狼瘡。
10. 權利要求l的用途，其中所述病症是移植物抗宿主病。
11. 權利要求l的用途，其中所述病症是眼科病症。
12. 權利要求11的用途，其中所述眼科病症是與年齡相關的黃斑變性。
13. 權利要求ll的用途，其中所述眼科病症是糖尿病視網膜病變。
14. 權利要求ll的用途，其中所述眼科病症是脈絡膜新生血管膜、黃斑囊樣水腫、視網膜前膜和黃斑裂孔。
15. 權利要求ll的用途，其中所述眼科病症是乾眼。
16. 權利要求ll的用途，其中所述眼科病症是葡萄膜炎。
17. 前述權利要求中任一項的用途，其中所述化合物是非對映異構 體對的外消旋或非外消旋混合物。
18. 權利要求17的用途，其中所述化合物是非對映異構體的赤式對 的外消旋或非外消旋混合物。
19. 前述權利要求中任一項的用途，其中所述化合物是(lS，2R)-^" 式'-2-(l,l-二甲基乙基)氨基-l-(3-氯苯基)丙烷-l-醇或(lR,2S)-赤^; -2-(1,1-二甲基乙基)氨基-1-(3-氯苯基)丙烷-1-醇。
20. 前述權利要求中任一項的用途，其中對治療對象還施用選自以 下的另一種治療劑皮質類固醇、細胞毒素、抗生素、免疫抑制劑或非 甾體抗炎藥。
21. 權利要求20的用途，其中以組合形式提供化合物(I)和所述 的另一種藥劑。
全文摘要
式(I)化合物或其鹽是可用於治療或預防與T-細胞增殖相關的病症或由促炎細胞因子介導的病症的化合物。
文檔編號A61P29/00GK101415410SQ200780008506
公開日2009年4月22日 申請日期2007年3月9日 優先權日2006年3月9日
發明者安德魯·道格拉斯·巴克斯特, 約翰·布魯, 羅賓·馬克·班尼斯特 申請人:索塞R&D有限公司