一種抗生素殘留檢測系統及其容器的製作方法
2023-06-02 01:53:36
專利名稱：一種抗生素殘留檢測系統及其容器的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種快速、靈敏、便捷的檢測食品中抗生素殘留的系統及其容器，屬於微生物化學檢測領域。
背景技術：
1949年美國首次發現抗生素對畜禽有促生長作用，此後，許多國家將抗生素廣泛應用於畜牧業，我國在20世紀50年代開始將抗生素作為飼料添加劑，其在防治動物疾病方面起到十分顯著的作用，取得了明顯的經濟效益。但抗生素的不規範使用導致動物體內藥物的滯留、蓄積，並以殘留的方式進入人體內和生態系統，給人類健康和環境帶來危害。隨著世界各國對食品安全性的重視加強，美國、歐盟等國家已相繼頒布一系列法律，禁止或限制抗生素的使用。牛奶是人們尤其是嬰幼兒的主要營養食品，牛奶中殘留抗生素會危害飲用者身體健康。
牛奶"無抗"在國際上是一個雷打不動的硬性市場準入指標。在歐美國家，"有抗奶"及其製品嚴禁在市場上銷售。2008年，農業部頒發了《無公害牛奶標準》，把"無抗"列入其中，表明有關部門對"無抗奶"開始重視起來。
最近在國家新頒布的GB/T 4789.27-2008食品衛生微生物學檢驗鮮乳中抗生素殘留檢驗中更是嚴格的規定了生鮮牛乳中的抗生素殘留限量，並且取消了 "無抗奶"的名稱，進一步指向了牛奶行業中的"有抗奶"的檢測。
目前市場上出現的一些牛奶抗生素檢測儀，其造價成本高，不適合家庭、個人的廣泛使用。也有文獻報導將微生物方法與儀器分析方法相結合，用嗜熱脂肪芽孢桿菌作為指示菌，通過"阻抗分析儀"的自動檢測、分析，根據DT時間的產生，判斷牛奶中抗生素的殘留情況，但該方法尚在研究中，還未產生實質性產品。現在市場上的抗生素快速檢測試劑盒大多是國外進口的設備與試劑，可以檢測內醯胺類和四環素類抗生素，但其成本很高，其他國產試劑盒也只能檢測內醯胺類抗生素，可檢測的抗生素品種較少，因此，必須尋找快速、準確、低成本的檢測技術，且可以檢測常用的抗生素品種，用來檢測牛奶中的抗生素是否超標。
發明內容
本發明公開了一種檢測牛奶中抗生素的系統及其容器，可方便、快速地對市場上銷售的各種牛奶中是否含有抗生素進行檢測，在2.5-3小時內檢査出牛奶中所含的抗生素濃度是否超
過歐盟牛奶中抗生素要求最大殘留量(MRL)。可檢測e-內醯胺類、四環素類、大環內酯類、
氨基配糖類、磺胺類及其它種類的抗生素共37種。本發明採用的技術方案
本發明提供一種用於盛放檢測培養基的容器，其開口端覆蓋著一層金屬薄膜，可以保持微生物的穩定性、活性，還可防止交叉汙染。
其中檢測培養基中接種有檢測微生物和指示劑，微生物的生長使培養基發生顏色變化， 若樣品中存在的抗生素濃度高於檢測限，.微生物的生長受到抑制，培養基不發生顏色變化。
本發明對牛奶中抗生素濃度的檢測，是通過以下過程實現的
首先確定所需微孔數量，用刀沿微孔外側劃開金屬薄膜，取下所需數量，剩餘的微孔板 需立即放回塑膠袋中密封以防止微孔乾結，並於4 8'C下儲存。
然後將要使用的微孔條安放到另一個空板架上，剝開微孔上的金屬薄膜，在每個微孔中 加入100)al待測牛奶樣品。
用粘膠薄膜或酶標板條帽小心地密封微孔條，將其垂直放入已經預熱至65'C的水浴或培 養器中培養2.5h。
從微孔底面觀察判定結果
陰性結果微孔顯示綠到黃色；陽性結果微孔顯示藍到紫色；若微孔顯示為綠到藍色 則為未知結果，表明抗生素濃度在檢測限附近，仍需繼續培養0.5h後再判定結果。
本發明的適用範圍快速檢測各種牛奶中抗生素濃度是否超過歐盟牛奶中抗生素要求最
大殘留量(MRL),操作簡單、快捷，檢測靈敏度高，無需專業人員操作，可以廣泛用於現
場樣品和大量樣品的快速檢測，'便於百姓在家庭中自行使用，也可用於工商執法、食品安全、 市場的快速檢測。
圖表說明
圖l盛放檢測培養基的容器示意圖。 表l本發明可檢測的抗生素種類
表2本發明對各抗生素的檢測限與歐盟標準的最大殘留量比較.
具體實施例方式
檢測培養基製備的實施方式
實施例1
葡萄糖 5g/L .
蛋白腖 10g/L 瓊脂 4g/L .純水 1L 溴甲酚紫 0.01g/L
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然後接入濃度為105cfu/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬薄 膜封口後，置於4 8'C冷藏備用。 實施例2
4葡萄糖 蛋白腖 瓊脂 純水
溴甲酚紫
5g/L
10g/L
4g/L
0.05g/L
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然後接入濃度為107cfii/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬薄 膜封口後，置於4 8'C冷藏備用。
將上述溶液分裝在容器中滅菌，然後接入濃度為107cfu/ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌，金屬 薄膜封口後，置於4 8'C冷藏備用。 檢測實施方式 實施例l
如
圖1所示的一種盛放檢測培養基的容器，主要由以下組件組成
容器開口端101，容器封閉端102，檢測培養基103，金屬薄膜104。 將配製好的培養基裝入容器中，培養基體積約佔容器體積的1/3，滅菌後，接入一定濃度 的嗜熱脂肪芽孢桿菌，用金屬薄膜封口後，置於4 8'C冷藏備用。 實施例2
本發明不能直接檢測酸奶等酸性物質，如果檢測酸性物質，應先將pH值調整至7.0 7.2 範圍內再進行檢測。其他的檢測步驟如下-
1. 確定所需微孔數量，用刀沿微孔外側劃開金屬薄膜，取下所需數量，剩餘的微孔板需 立即放回塑膠袋中密封以防止微孔乾結，並於4 8'C下儲存。
2. 將要使用的微孔條安放到另一個空板架上，剝開微孔上的金屬薄膜，在每個微孔中加 入100^1待測牛奶樣品。
3. 用粘膠薄膜或酶標板條帽小心地密封微孔條，將其垂直放入已經預熱至65'C的水浴 或培養器中培養2.5h。
4. 從微孔底面觀察判定結果-陰性結果綠-黃色； 陽性結果藍-紫色；
實施例3
葡萄糖 蛋白腖 瓊脂 純水
溴甲酚紫
O.lg/L
5g/L
10g/L
4g/L未知結果綠-藍色，抗生素濃度在試劑盒的檢測限附近，需繼續培養0.5h判定結果。 本發明可檢測的抗生素種類見表1:
抗生素種類
青黴素G氨苄西林阿莫西林苯甲異噁唑青黴素
鄰氯青黴素頭孢氨苄頭孢哌酮頭孢拉丁
頭孢匹林頭孢噻呋頭孢唑林乙氧萘(胺)青黴素
雙氯青黴素磺胺噻唑磺胺地索辛磺胺二甲瞎咬
磺胺嘧啶土黴素四環素氯四環素
泰樂菌素新黴素鏈黴素慶大黴素
雙氫鏈黴素卡那黴素林肯黴素甲氧苄氨嘧啶
氨苯碸
表1
實施例3
使用本發明的檢測系統，可以對食品中的e-內醯胺類、四環素類、大環內酯類、氨基配
糖類、磺胺類及其它種類的抗生素的殘留進行檢測，檢測限如表2所示；
抗生素種類 e-內醯胺類MRL (ppb)檢測限 (卯b) 本發明產品同類其他產品擾生素種類MRL Cppb )檢測限 (ppb) 本發明產 同類其他產 品 品
青黴素G4氨苄西林43 3
阿莫西林433苯甲異噁唑青黴 素3015 10
鄰氯青黴素303040頭孢氨苄10040 40
頭孢哌酮502020100
頭孢匹林101010io ioo
頭孢唑林502020頭孢噻啶-75
乙氧萘(胺)青黴素302020雙氯青黴素3010 5
磺胺類
摘胺噻唑1005030磺咹—甲叫A-'柳100 〗50
鍾柳磺妝地'々十l(X>50 10(1磺胺嘧啶 四環素類
氯四環素 大環內酡類
鶴錄, 氨基配糖類 新黴素
卡麟素
其他抗生素 林i'.黴素
甲碸黴素
100
100
100
100
150
150
.幼
50
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鄰暨 柳 t鎖
1W) 50
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130
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750
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氨苯碸 新生萆紊
100
咖
50
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10 0
■
700
實船範鬧內 尖檢出
實驗範IUl'J
人w出
700
實驗範口I'J 夫檢出
表2
根據上表的檢測限與歐盟給出的最大殘留量比較，本發明產品的檢測精度可以滿足歐盟 標準，並且對大環內酯類抗生素和氨基配糖類抗生素的檢測精度有顯著的提高，均高於現有 的檢測產品。且，使用本發明生產的產品其成本低於市場上的同類產品。
最後，應當指出，以上實施例僅是本發明較有代表性的例子。顯然，本發明的方案並不 限於上述的實施例，還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直接 導出或聯想到的所有變形，均應認為是本發明的保護範圍。
權利要求
1.一種快速檢測食品中抗生素殘留的檢測系統，由接種在檢測培養基中的檢測微生物及檢測指示劑組成，其特徵在於，所述檢測微生物為嗜熱脂肪芽孢桿菌，所述指示劑為溴甲酚紫。
2. 根據權利要求l所述的一種快速檢測食品中抗生素殘留的檢測系統，其特徵在於，所述的 檢測微生物的濃度為105-107cfU/ml。
3. 根據權利要求l所述的一種快速檢測食品中抗生素殘留的檢測系統，其特徵在於，所述的 溴甲酚紫的濃度為0.01-0.1g/L。
4. 一種用於盛放檢測培養基的容器，該容器由開口端和封閉端組成，所述封閉端盛有檢測培 養基，其特徵在於，所述培養基佔到容器總體積的1/3~1/2。
5. 根據權利要求4所述的一種用於盛放檢測培養基的容器，其特徵在於所述容器開口端採用 金屬薄膜封閉。
全文摘要
本發明涉及一種快速、靈敏、便捷的檢測食品中抗生素殘留的系統及其容器，屬於微生物化學檢測領域。該檢測系統由接種在檢測培養基中的檢測微生物和檢測指示劑組成。本發明還提供一種用於盛放檢測培養基的容器，該容器由開口端和封閉端組成，所述封閉端盛有檢測培養基，開口端用金屬薄膜封閉。使用本發明可以快速、準確、低成本的檢測食品中的抗生素殘留。
文檔編號C12Q1/18GK101659984SQ20091009155
公開日2010年3月3日 申請日期2009年8月27日 優先權日2009年8月27日
發明者桑華春, 衛 田 申請人:北京智雲達科技有限公司