一種簡便的瓜類疫黴快速分離培養基的製作方法
2023-06-02 00:35:36
專利名稱：一種簡便的瓜類疫黴快速分離培養基的製作方法
技術領域：
本發明涉及ー種簡便、快速分離瓜類疫黴菌的培養基。屬於微生物技術領域。
背景技術：
疫黴菌導致的植物病害對寄主植物的破壞性強、危害性大，傳播與蔓延迅速，弓丨起的病害大多難以控制，在植物的一個生長季節內病菌可迅速發展造成病害流行，導致農業生產的嚴重損失。因此由疫黴菌所致的植物病害通常稱為「疫病」。例如馬鈴薯晚疫病從1835年第一次在北美洲流行，隨後1845年在歐洲不斷發生，1847年在愛爾蘭曾因該病的大發生使馬鈴薯幾近絕產，導致歷史上著名的大饑饉，近百萬人餓死，200多萬人移民他鄉。由大豆疫黴菌(Phytophthora sojae)導致的大豆疫病是危害極為嚴重的大豆病害之一，在環境條件適宜的情況下可導致感病類型的大豆絕產。惡疫黴(P.cactorum)為一同宗配合疫黴種，是導致我國梨、蘋果、人參、草莓等多種植物疫病的主要病原菌。辣椒疫黴(P. capsici)可侵染辣椒、番茄、黃瓜、西瓜、南瓜和西葫蘆等8科19種主要蔬菜和作物。由瓜類疫黴(P.melonis)引起的黃瓜疫病，可造成黃瓜大面積死亡，是影響黃瓜生產的重要因素之一。該病原菌除為害黃瓜外，還可侵染絲瓜、冬瓜、西瓜、南瓜、葫蘆、菜瓜、瓠瓜、甜瓜、白蘭瓜、哈密瓜、苦瓜、越瓜等葫蘆科作物，是近10多年來為害瓜類的重要病害。為了對疫黴進行相關研究，以及調查病原菌的田間發病情況，篩選高效的藥劑，最終達到有效防治該病害的目的，分離獲得純化的疫黴是必要的前提條件。常規的病原菌分離方法是《植病研究方法》介紹的用75%こ醇和0. I %升汞液表面消毒處理。實際工作中，從田間採集到的樣本除被疫黴侵染外，不可避免的常常帶有錸刀菌，立枯絲核菌和腐黴等其他非目標真菌和細菌，按常規方法進行分離組織病原菌時，由於這些非目標真菌或細菌的汙染，造成目標菌分離率低或難於分離到目標菌。因此，利用普通培養基從病組織上或土壌中分離疫黴吋，達不到分離純化的目的。
發明內容
本發明的ー個目的是提供ー種殺菌劑組合。本發明所提供的殺菌劑組合，其活性成分如下述I)、2)所示I)、由咯菌臆、惡黴靈、五氯硝基苯、利福平組成；2)、由咪鮮胺、惡黴靈、五氯硝基苯、利福平組成；上述殺菌劑中，所述I)中，所述咯菌臆、惡黴靈、五氯硝基苯和利福平的質量份數比為(10-20)(50-100) (10-50) (50-100)，具體為 10 50 10 : 50 或 15 : 70 : 20 : 70 或20 100 50 100 ；所述2)中，所述咪鮮胺、惡黴靈、五氯硝基苯和利福平的質量份數比為(10-20)(50-100) (10-50) (50-100)，具體為 10 50 10 : 50 或 15 : 70 : 20 : 70 或20 100 50 100 ；、
本發明的另ー個目的是提供ー種用於分離疫黴屬病原菌(Phytophthora spp.)的
培養基。
本發明所提供的用於分離疫黴(Phytophthora spp.)的培養基,為如下I或II所示I、是向PDA培養基中添加權利要求I或2中所述I)所示殺菌劑得到的；II、是向PDA培養基中添加權利要求I或2中所述2)所示殺菌劑得到的；上述培養基中，所述I所示培養基中，所述咯菌腈在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-20 μ g/mL,具體為10 μ g/mL、15 μ g/mL或20 μ g/mL ;所述惡黴靈在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL、70 μ g/mL或100 μ g/mL ;所述五氯硝基苯在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-50 μ g/mL,具體為10 μ g/mL,20 μ g/mL或50 μ g/mL ;所述利福平在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL>70 μ g/mL 或 100 μ g/mL ；上述培養基中，所述II所示培養基中，所述咪鮮胺在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-20 μ g/mL,具體為10 μ g/mL、15 μ g/mL或20 μ g/mL ;所述利福平在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL、70 μ g/mL或100 μ g/mL ;所述五氯硝基苯在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-50 μ g/mL,具體為10 μ g/mL,20 μ g/mL或50 μ g/mL ;所述利福平在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL>70 μ g/mL 或 100 μ g/mL ；上述培養基在分離疫黴(Phytophthora spp.)中的應用也屬於本發明的保護範圍。本發明所提供的分離疫黴(Phytophthora spp.)的方法,包括如下步驟用上述任一所述培養基進行分離，用於分離的樣本為感染疫黴(Phytophthora spp.)的植物的根
莖或土壌。實驗證明，本發明的PDA選擇性培養基具有可行性、準確性、實用快捷和成本低廉、製備簡便的特點。用本發明的PDA選擇性培養基分離疫黴，可解決疫黴分離過程中各種非目標真菌和細菌汙染嚴重的問題，且速度快，效率高，省時、省力。本發明為進行田間一次性分離以及室內純化疫黴提供技術支持。本發明選擇培養基可用於簡便、快捷地從病株組織上或病田土壤中一次性分離辣椒疫黴、瓜類疫黴等疫黴病原菌以及室內純化疫黴菌株。
圖I為三種抗生素對植株根莖表面細菌的抑制作用。圖2為三種抗生素對土壤中細菌的抑制作用。圖3為黃瓜疫黴的發病情況和疫黴分離情況。A為為田間瓜類疫黴引起植株發病；B為瓜類疫黴侵染引起黃瓜果實發病；C為田間瓜類疫黴侵染導致黃瓜根莖部發病山為病樣中分離到的瓜類疫黴。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
咯菌腈原藥 購自武漢福德化工有限公司，其主要活性成分物質的化學名稱是4_(2，2_ ニ氣-I, 3_苯並ニ氧戍環_4_基)卩比略-3_臆,分子式C12H6F2N202。該藥中略菌腈的質量百分含量為96%。咪鮮胺(又叫「咪醯胺」)原藥購自海南カ智生物工程有限公司，其主要活性成分物質的化學名稱是N-丙基-N-[2-(2，4，6-三氯苯氧基)こ基]-咪唑-I-甲醯胺，分子式C15H16C13N302。該藥中咪鮮胺的質量百分含量為97%。惡黴靈原藥購自山東濰坊天達植保有限公司，其主要活性成分物質的化學名稱是3-羥基-5-甲基異惡唑，通用名稱為惡黴靈，分子式C4H5N02。該藥中主要活性成分物質的質量百分含量為98%。五氯硝基苯原藥購自山西三立化工有限公司(原山西省臨汾有機化工廠)，其主要活性成分物質的化學名稱是五氯硝基苯，通用名稱為五氯硝基苯，分子式C6C15N02。該藥中五氯硝基苯的質量百分含量為95%。青黴素、利福平、氯黴素均購自北京拓英坊科技有限公司。實施例I、四種真菌抑制劑和三種抗生素對瓜類疫黴的抑制作用一、四種真囷抑制劑對瓜果疫黴的抑制作用以丙酮或甲醇為咪鮮胺、咯菌臆、惡黴靈和五氯硝基苯的溶劑，分別配製5000 μ g/mL的四種藥劑母液IOml ;其中，將咪鮮胺、咯菌腈和五氯硝基苯這三種真菌抑制劑的母液分別配製系列濃度為50 μ g/mL、20 μ g/mL和10 μ g/mL的含藥PDA平板；將惡黴靈這種腐黴抑制劑的母液分別配製系列濃度為100 μ g/mL、70 μ g/mL和50 μ g/mL的含藥PDA平板，以加有溶劑的平板為對照；然後採用菌絲生長速率法測定瓜類疫黴對咪鮮胺、咯菌臆、惡黴靈和五氯硝基苯的敏感性。將供試的瓜類疫黴菌株在PDA平板上於25°C預培養3d，用直徑為5_的打孔器於菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅，將菌餅接種到分別含有四種藥劑系列濃度的PDA含藥平板中央(各濃度含等量有機溶剤)，於25°C下黑暗培養，4-5d後用十字交叉法測量各處理的菌落增長直徑(菌落直徑減去菌餅直徑5mm)，每處理重複3次；最後按照下面公式求出各藥劑濃度對菌絲生長的抑制百分率)，抑制率)=[(對照菌落增長直徑-處理菌落增長直徑)/ (對照菌落增長直徑)]X 100。測定了供試的四種真菌抑制劑對瓜類疫黴的抑制作用，結果如表I所示，不同濃度的五氯硝基苯對瓜類疫黴的抑制率均低於10%，因此可以採用10-50 μ g/mL的五氯硝基苯作為選擇性藥劑；50μ g/mL咯菌腈和咪鮮胺對瓜類疫黴的抑制率均大於10%，10-20 μ g/mL濃度的咯菌腈和咪鮮胺對瓜類疫黴抑制率較低，所以可以採用10-20 μ g/mL的咪鮮胺為分離疫黴中使用的選擇性藥劑。不同濃度的惡黴靈對瓜類疫黴的抑制率均低於10%，因此可以採用50-100 μ g/mL的惡黴靈作為選擇性藥劑；；表I四種真菌抑制劑對瓜類疫黴的抑制作用
ニ、三種抗生素對瓜類疫黴的抑制作用用滅菌水將上述三種抗生素均配製成5Χ104μ g/mL的母液，使用三種母液分別配製成濃度為100 μ g/mL>50 μ g/mL的利福平、青黴素和氯黴素，以加有無菌水的平板為對照。然後採用菌絲生長速率法測定瓜類疫黴對這三種抗生素的敏感性。將供試的瓜果瓜類疫黴在PDA平板上於25°C預培養3d，用直徑為5mm的打孔器於菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅，將菌餅接種到分別含藥劑系列濃度的PDA含藥平板中央，於25°C下黑暗培養，4-5d後用十字交叉法測量各處理的菌落增長直徑(菌落直徑減去菌餅直徑5mm)，每處理重複3次；最後按照下面公式求出各藥劑濃度對菌絲生長的抑制百分率(％)，抑制率(％)=[(對照菌落增長直徑-處理菌落增長直徑)/ (對照菌落增長直徑)]X 100。同時測定了不同濃度的三種抗生素對瓜類疫黴的抑制作用，結果見表2，濃度為100和50 μ g/mL的青黴素、利福平和氯黴素對瓜類疫黴均沒有明顯的抑制作用。因此，可以在分離瓜果腐黴時使用100 μ g/mL或是50 μ g/mL濃度的青黴素、利福平和氯黴素作為分離純化瓜類疫黴選擇性培養基中的抗生素成份。並進ー步測定三種抗生素對環境中帶菌土壌和黃瓜根莖組織上攜帯的細菌的抑制作用。表2三種抗生素對瓜類疫黴的抑制作用
抑制率(％)
菌株青黴素 「利福平「氯黴素------
IOOppm 50ppm IOOppm 5 Oppm IOOppm 5 Oppm
—瓜類疫黴 L 2.2 J_1.6 I 3.5 I 1.2__1.8 J_-1.1 _實施例2、三種抗生素對環境中細菌的抑制作用供試植株將感病黃瓜品種長春密刺栽培於Φ 15cm,高12cm的育苗缽內，置於中國農業大學科學園辣椒試驗田培養，植株長到4-5葉期後隨即採集根莖部，用於菌懸液的製備。供試土壤於2009年從天津市西青區瓜類疫病發生嚴重地區採集土樣，備用。試驗方法此試驗是在實施例I結果的基礎上檢測所選擇的三種濃度抗生素是否可有效抑制環境中的細菌。對於環境中細菌的檢測，主要針對來自植株莖基部以及發病土壤中的細菌，這是根據瓜類疫黴的分離部位主要是發病的莖基部以及帶病土壤決定的，本實驗採用的是黃瓜莖基部以及疫病發生比較嚴重的天津市西青區田間的土樣。首先，採30棵黃瓜幼苗的根莖部，剪碎後採用四分法將樣本隨機分成4份，取出其中I份放入25ml離心管中，加入15ml滅菌水，200r/min振蕩2分鐘，過濾取濾液，使用無菌水稀釋100X，分別取100 μ I塗布在分別含有100 μ g/mL、50 μ g/mL的利福平、青黴素和氯黴素，以不含藥平板為對照，每處理3個重複，2d後觀察其對細菌的抑制作用；然後從瓜類疫病發病嚴重的天津市河西區和西青區田間取土樣，稱取5g,放入燒杯中加入20ml滅菌水,200r/min振蕩20min，取上清100 μ I分別塗布在含有100 μ g/mL,50 μ g/mL的利福平、青黴素和氯黴素，以不含藥平板為對照，每處理3個重複，2天後觀察其對細菌的作用。選擇對細菌具有明顯抑制作用的抗生素濃度。本研究在表2結果的基礎之上，分別測定了初步選擇可用的三種抗生素對幼苗莖基部和土壌中細菌的抑制作用，兩個研究的結果一致。從圖I和圖2看出，氯黴素抑菌活性差，在其濃度達到100μ g/mL時，與對照相比，抑菌效果不明顯。青黴素、利福平的抑菌活性較強，可以達到抑菌的作用。由於環境中細菌種類的多祥性，青黴素主要對革蘭氏陽性菌有較強的抑制作用，所以平板中有少許零星革蘭氏陰性菌菌落。而對於利福平，平板中只有少許真菌菌落。因此，利福平對幼苗根莖部和土壤中的細菌具有廣譜的抑菌作用。綜上所述，本發明篩選藥劑的原則是對瓜類疫黴抑制率小於10%的前提下，儘可能選擇高濃度的藥劑，以提高對非目標菌的抑菌活性。根據以上所有的試驗結果可以看出，應用於從田間一次性分離瓜類疫黴的選擇性培養基，可以選擇的真菌抑制劑為咯菌腈、咪鮮胺、惡黴靈和五氯硝基苯，濃度分別為10-20 μ g/mL、10-20 μ g/mL、50-100 μ g/mL和10-50 μ g/mL ;可以選擇的抗生素類為利福平,濃度採用50-100 μ g/mL。實施例3、用於分離瓜類疫黴的PDA選擇性培養基一、分離方法2009,2011年從天津市西青區，河西區瓜類疫病發病嚴重地區採集病樣，用於分離瓜類疫黴。瓜類疫黴的分離按下述方法進行在同一地區選擇不同的田塊，採集疫病的病樣(根莖和土壌)進行分離。分離步驟將發病組織使用清水清理乾淨後充分晾乾，切取根莖部病健交界處的小塊組織接種在本發明的選擇性培養基上，25°C下黑暗培養，至有菌絲長出；在菌落邊緣打取菌餅，置於加入IOmL滅菌水的培養皿中，在28°C光照條件下培養24-48h，可誘導其產生孢子囊，將培養皿置於4°C冰箱中處理40-60min後放回到室溫，30-60min後遊動孢子釋放；挑單遊動孢子置於普通PDA培養基上培養，至長出菌落，得到瓜類疫黴。對得到的瓜類疫黴進行鑑定。將真正的瓜類疫黴菌落保存在白雲豆培養基試管斜面上，加適量的滅菌石蠟油置於室溫下保存備用。根據現有的瓜果腐黴菌鑑定方法進行鑑定。ニ、分離中使用的培養基(一)I、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)的配製方法馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉14g,加蒸懼水定容至IOOOmL,高壓蒸汽滅菌，121で，20min。2、白雲豆培養基的配製方法白雲豆粉60g，雙層紗布過濾，瓊脂粉14g，加蒸餾水定容至IOOOmL,高壓蒸汽滅菌，121 °C, 20min。(ニ)從發病田土壌或病樣根莖部分離瓜類疫黴使用不同的PDA選擇培養基，具體如下I、病樣分離部位為根莖PDA選擇培養基I :向未冷卻的PDA培養基中添加咪鮮胺、惡黴靈、五氯硝基苯、、和利福平，並用未冷卻的PDA培養基定容至I升；咪鮮胺在PDA選擇培養基I中的濃度為15 μ g/mL，惡黴靈在PDA選擇培養基I中的濃度為70 μ g/mL，五氯硝基苯在PDA選擇培養基I中的濃度為20 μ g/mL,利福平在PDA選擇培養基I中的濃度為70 μ g/mL。PDA選擇培養基II :與PDA選擇培養基I基本相同，不同之處在於咪鮮胺在PDA選擇培養基I中的濃度為10 μ g/mL,惡黴靈在PDA選擇培養基I中的濃度為50 μ g/mL,五氯硝基苯在PDA選擇培養基I中的濃度為10 μ g/mL，利福平在PDA選擇培養基I中的濃度為 50 μ g/mL。PDA選擇培養基III :與PDA選擇培養基I基本相同，不同之處在於咪鮮胺在PDA選擇培養基I中的濃度為20 μ g/mL,惡黴靈在PDA選擇培養基I中的濃度為100 μ g/mL,五 氯硝基苯在PDA選擇培養基I中的濃度為50 μ g/mL，利福平在PDA選擇培養基I中的濃度為 100 μ g/mL。2、病樣分離部位為土壤PDA選擇培養基I :向未冷卻的PDA培養基中添加咯菌腈、惡黴靈、五氯硝基苯、和利福平，並用未冷卻的PDA培養基定容至I升；咯菌腈在PDA選擇培養基I中的濃度為15 μ g/mL,惡黴靈在PDA選擇培養基I中的濃度為70 μ g/mL,五氯硝基苯在PDA選擇培養基I中的濃度為20 μ g/mL，利福平在PDA選擇培養基I中的濃度為70 μ g/mL。PDA選擇培養基II :與PDA選擇培養基I基本相同，不同之處在於咯菌腈在PDA選擇培養基I中的濃度為10 μ g/mL,惡黴靈在PDA選擇培養基I中的濃度為50 μ g/mL,五氯硝基苯在PDA選擇培養基I中的濃度為10 μ g/mL，利福平在PDA選擇培養基I中的濃度為 50 μ g/mL。PDA選擇培養基III :與PDA選擇培養基I基本相同，不同之處在於咯菌腈在PDA選擇培養基I中的濃度為20 μ g/mL,惡黴靈在PDA選擇培養基I中的濃度為100 μ g/mL,五氯硝基苯在PDA選擇培養基I中的濃度為50 μ g/mL,利福平在PDA選擇培養基I中的濃度為 100 μ g/mL。真菌抑制劑溶液的配製以丙酮或甲醇為溶剤，以咯菌腈原藥、咪鮮胺原藥、惡黴靈原藥和五氯硝基苯原藥為溶質，分別配製濃度為5000 μ g/mL的母液IOml,四種原藥的稱量量依次為 50. 2mg、51. 0mg、50. 6mg 和 50. 5mg ；細菌抑制劑溶液的配製用滅菌水將各種抗生素均配製成濃度為5 X IO4 μ g/mL的溶液。四、分離及鑑定結果在使用不同的本發明選擇培養基進行分離的過程中，PDA選擇培養基中均沒有雜菌長出，只有瓜類疫黴能夠生長，說明本發明的PDA選擇培養基抑制了雜菌和腐黴生長，使瓜類疫黴的分離更容易。本發明方法從開始將病變組織接種至選擇性培養基上至有瓜類疫黴菌絲長出，一般只需要3-4天，本發明的選擇培養基有效的抑制了其它真菌和細菌的生長，使瓜類疫黴在培養基中成為優勢菌群，生長速度提高，從而加快了分離進程。2009,2011年從上述天津市西青區和河西區瓜類疫病發病嚴重地區採集黃瓜、冬瓜和南瓜病樣，共分離得到167株瓜類疫黴菌株，167株瓜類疫黴均鑑定正確。在用于田間一次性分離疫黴時，根據疫黴分離部位和採樣地區施藥歷史的不同，用於疫黴分離培養的殺菌劑組合物中以腐黴抑制劑惡黴靈和細菌抑制劑利福平為主，加入的其它真菌抑制劑可以有不同的組合。針對不同的分離部位，選擇不同的真菌抑制劑。其中，咪鮮胺對錸刀屬真菌有特效，對鏈格孢菌和立枯絲核菌也有較好的抑制作用，並且與生產中廣泛使用的多菌靈無交互抗藥 性。因此，對於植物根莖部組織中瓜類疫黴的分離，真菌抑制劑組合可選10-20 μ g/mL咪鮮胺，有利於抑制對多菌靈產生抗藥性的錸刀菌和絲核菌。咯菌腈是ー種非內吸的殺菌劑，對立枯絲核菌有特效，對錸刀菌也有較好的抑制作用，在從病土中分離瓜類疫黴時，可以用於腐生錸刀菌及絲核菌的真菌抑制劑。因此，對於土壤中瓜類疫黴的分離，真菌抑制劑組合可選擇10-20 μ g/mL咯菌腈；五氯硝基苯對子囊菌門的根黴特效，主要用於環境溫度較高時空氣中黑根黴的抑制，因此如在溫度較高的季節分離瓜疫黴，需在上述殺菌劑組合物中添加濃度為10-50 μ g/mL五氯硝基苯後使用效果最佳。惡黴靈可選擇性的抑制真菌和腐黴，但對疫黴沒有抑制作用，在從根莖部組織中或從土壤中分離瓜類疫黴時，可以用於腐黴的抑制劑。因此，對於土壌中瓜類疫黴的分離，腐黴抑制劑組合可選擇50-100 μ g/mL惡黴靈。將上述該含有不同殺菌譜的真菌抑制劑和抗生素類殺細菌劑的殺菌劑組合物添加至PDA培養基中，製備成瓜類疫黴的選擇性培養基。
權利要求
1.ー種殺菌劑，其活性成分如下述I)或2)所示 1)、由多菌靈、五氯硝基苯、氟嗎啉和利福平組成； 2)、由咪鮮胺、五氯硝基苯、氟嗎啉和利福平組成。
2.根據權利要求I所述的殺菌劑，其特徵在於 所述I)中，所述咯菌臆、惡黴靈、五氯硝基苯和利福平的質量份數比為(10-20)(50-100) (10-50) (50-100)，具體為 10 : 50 : 10 : 50 或 15 : 70 : 20 : 70 或20 100 50 100 ； 所述2)中，所述咪鮮胺、惡黴靈、五氯硝基苯和利福平的質量份數比為(10-20)(50-100) (10-50) (50-100)，具體為 10 50 10 : 50 或 15 : 70 : 20 : 70 或20 100 50 100。
3.一種用於分離疫黴(Phytophthora spp)的培養基,為如下I或II所示 I、是向PDA培養基中添加權利要求I或2中所述I)所示殺菌劑得到的； II、是向PDA培養基中添加權利要求I或2中所述2)所示殺菌劑得到的。
4.根據權利要求3所述的培養基，其特徵在於 上述培養基中，所述I所示培養基中，所述咯菌腈在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-20 μ g/mL,具體為10 μ g/mL、15 μ g/mL或20 μ g/mL ;所述惡黴靈在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL、70 μ g/mL或100 μ g/mL ;所述五氯硝基苯在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-50 μ g/mL,具體為10 μ g/mL>20 μ g/mL或50 μ g/mL ；所述利福平在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL,70 μ g/mL 或 100 μ g/mL ； 上述培養基中，所述II所示培養基中，所述咪鮮胺在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-20 μ g/mL,具體為10 μ g/mL、15 μ g/mL或20 μ g/mL ;所述利福平在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL、70 μ g/mL或100 μ g/mL ;所述五氯硝基苯在所述PDA培養基中的濃度為10 μ g/mL-50 μ g/mL,具體為10 μ g/mL,20 μ g/mL或50 μ g/mL ;所述利福平在所述PDA培養基中的濃度為50 μ g/mL-100 μ g/mL,具體為50 μ g/mL>70 μ g/mL Wi 100 μ g/mL。
5.權利要求3或4所述培養基在分離疫黴(Phytophthoraspp.)中的應用。
6.ー種分離疫黴(Phytophthora spp.)的方法,包括如下步驟用權利要求3或4中所述培養基進行分離，用於分離的樣本為感染疫黴(Phytophthora spp.)的植物的根莖部組織或土壌。
全文摘要
本發明公開了一種簡便、快速分離瓜類疫黴菌的培養基。該培養基是向PDA培養基中添加如下1)或2)所述殺菌劑得到的1)、由咯菌腈、惡黴靈、五氯硝基苯和利福平組成；2)、由咪鮮胺、惡黴靈、五氯硝基苯和利福平組成；實驗證明，本發明的PDA選擇性培養基具有可行性、準確性、實用快捷和成本低廉、製備簡便的特點。用本發明的PDA選擇性培養基分離瓜類疫黴等疫黴屬卵菌，可解決疫黴分離過程中各種非目標真菌和細菌汙染嚴重的問題，且速度快，效率高，省時、省力。
文檔編號A01N43/90GK102742585SQ20121025062
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月19日 優先權日2012年7月19日
發明者劉鵬飛, 賈睿哲 申請人:中國農業大學