一種抗輻射中藥發酵液的製備的製作方法

2023-05-27 11:15:26 1

專利名稱：：一種抗輻射中藥發酵液的製備的製作方法
技術領域：
：本發明涉及中藥加工及生物發酵領域，特別涉及中藥黃芪、三七、緑茶的發酵エ藝，及通過這種方法得到的發酵產物的抗輻射作用。
背景技術：
：黃芪總黃酮是黃芪的主要有效成分之一，多達30餘種，其抗輻射作用效果明顯。楊映雪等研究了黃芪總黃酮對輻射損傷小鼠的防護研究，結果表明黃芪總黃酮抗輻射效果明顯，受照小鼠存活率明顯提高，外周血WBC、PLT及脾臟的損傷作用顯著降低[1]。胥正敏等以人正常骨髄間充質幹細胞為研究對象，用6tlCoY射線進行照射，結果表明黃芪總黃酮能夠對人正常骨髄間充質幹細胞起到輻射防護作用[2]。皂苷廣泛存在於許多中藥，而三七中總皂苷含量較大，並且近年來有學者研究發現三七總皂苷具有較強的抗輻射作用。為了探討三七總皂苷的抗輻射療效，陳錫文等進行了實驗研究，結果顯示三七總皂苷能明顯提高受照小鼠的紅細胞、白細胞和骨髄有核細胞數，且小鼠胸腺、脾臟指數顯著升高，碳粒廓清指數増加M。鄒丹等發現三七總皂苷能明顯提高受照小鼠的外周血WBC、Hb、BMC總數及CFU-S和CFU-GM集落產率，得出了結論三七皂苷可以起到增強骨髄造血機能，達到對輻射後小鼠骨髄抑制的對抗作用[4]。茶多酚是茶葉中最具價值的功效成分，有分布廣含量高的特點，主要包括兒茶素、花色素、黃酮及黃酮醇、酚酸及縮酚酸類化合物氣近年來，眾多學者對茶多酚的醫療利保健功效進行了研究，發現茶多酚具有清除自由基、抗衰老等多種活性，並且證實了其具有明顯的抗輻射作用[6』7]。曹明富通過實驗研究了茶多酚對受6tlCoY照射小鼠的損傷防護，結果顯示，茶多酚能夠提高受照小鼠的免疫器官指數、血像、CFU-S及粒細胞MI，並且使骨髄PEC的細胞微核率受到抑制，說明了茶多酚對輻射損傷具有一定的防護治療作用[8]。我國是中藥的發源地，資源極其豐富，經過千年傳承已擁有十分系統的理論，但是再近些年來對中藥的現代化研究進展比較緩慢，導致了中藥的發展受到限制，使中藥至今還不能被世界完全接受。利用微生物對中藥進行發酵處理是中藥現代化研究史上的ー個重要創新，為中藥的開發開闢了一條新途徑。現代中藥發酵製藥技術是在繼承傳統中藥發酵炮製法的基礎上，結合現代生物工程技術方法包括發酵技術等，定向改變中藥的性能，或根據中藥之間的特性有目的有針對性進行組合，利用単一菌種，或用混合菌種定向發酵。通過微生物在發酵過程中產生的酶系對中藥底物進行氧化、還原化、酷化、羥基化、甲基化等多種化學反應[9]。經過發酵後能夠給中藥帶來很多有益處，首先是對中藥中有效成分產生影響。微生物在代謝過程中分泌出纖維素酶、蛋白酶、木質素酶等多種酶類，降低了中藥中有效成分浸出的傳質阻力，使其更充分的被提取M。另外，因微生物發酵是在常溫常壓下進行，條件溫和，避免了中藥活性成分遭到破壞，並且通過ー些特殊酶的作用還可以對中藥中的某些成分進行修飾、轉化，降解生物大分子從而實現提高中藥藥效或產生新藥效的目的參考文獻[I]楊映雪，陳建業，費中海，等.黃芪總黃酮對輻射損傷小鼠的防護作用研究[J].重慶醫科大學學報，2010，35(4):504507.[2]胥正敏，陳建業，李賢富，等.黃芪總黃酮對人正常骨髓間充質細胞的抗輻射損傷作用[J]·中藥藥理與臨床，2011，27(3)3941.[3]陳錫文，管敏強.三七總皂甙對小鼠抗輻射損傷的實驗研究[J].中華放射醫學與防護雜誌，2005，25(6):559560.[4]鄒丹，喬海靈，全宏勳，等.三七皂甙對輻射所致小鼠骨髄抑制的對抗作用[J].中華放射醫學與防護雜誌，2000，20(6):413415.[5]楊賢強，王嶽飛，陳留記，等.茶多酚化學[M].上海上海科學技術出版社，2003，I7，12，109125.[6]KatiyarSK,ElmetsCA.Greenteapolyphenolicantioxidantsandskinphotoprotection[J].IntJOncol,2001,18(6):13071313.[7]吳亮宇，林金科.茶多酚抗輻射研究進展[J]·茶葉，2011，37(4):213217.[8]曹明富.茶多酚對小鼠輻射損傷的防護效應[J].茶葉科學，1998，18⑵139144.[9]欽傳光，李世傑，丁焰，等.發酵工程在醫藥研究和生產中的應用[J].湖北エ學院學報，2000，15(I):6770.[10]葛喜珍.發酵在中藥研究中的應用[J]·時珍國醫國藥，2008，19(2):386387.[11]阮曉東，張惠文，蔡穎慧，等.微生物在中藥生物轉化中的應用[J].中草藥，2009,40(1):149-152.
發明內容本發明依據現代科技研究成果，選用黃芪、三七、緑茶作為實驗原料，其主要功效成分依次為黃酮、皂苷和茶多酚。以上述三種有效成分能夠在發酵液中充分浸出為目的，篩選食藥真菌對中藥生物轉化的最佳組合併對其發酵培養基和發酵條件進行優化。運用正交試驗的方法對發酵產物組方，測定較優組方抗輻射作用的生理生化指標。具體技術內容如下I以中藥黃芪為發酵底物，利用食藥真菌靈芝對其進行發酵，並考察不同時間發酵液中總黃酮含量的變化情況，確定食藥真菌靈芝發酵黃芪到第8天時，發酵液中總黃酮含量最高，為2.305mg/go並且通過單因素和正交試驗，以發酵液中總黃酮含量為指標，對食藥真菌靈芝發酵黃芪的培養基及發酵條件進行優化，得出最佳培養基為可溶性澱粉2g/100mL，硝酸鉀0.4g/100mL，磷酸ニ氫鉀0.lg/100mL，硫酸鎂0.lg/100mL，最佳發酵條件為接種量10%，黃芪添加量8g/100mL，溫度33°C，初始pH值5.5。最後採用優化後エ藝進行驗證得出發酵液中總黃酮含量為2.411mg/g。2以中藥三七為發酵底物，利用食藥真菌豬苓對其進行發酵，並考察不同時間發酵液中總皂苷含量的變化情況，確定了食藥真菌豬苓發酵三七到第8天時，發酵液中總皂苷含量最高，為69.063mg/go並且通過單因素和正交試驗，以發酵液中總皂苷含量為指標，對食藥真菌豬苓發酵三七的培養基及發酵條件進行優化，得出最佳培養基為可溶性澱粉3g/100mL，蛋白腖O.2g/100mL，磷酸ニ氫鉀O.3g/100mL，硫酸鎂O.lg/100mL，最佳發酵條件為接種量10%，三七添加量5g/100mL，溫度25°C，初始pH值7。最後採用優化後エ藝進行驗證得出發酵液中總皂苷含量為72.329mg/g。3以中藥綠茶為發酵底物，利用食藥真菌香菇對其進行發酵，並考察不同時間發酵液中茶多酚含量的變化情況，確定了食藥真菌香菇發酵三七到第6天吋，發酵液中茶多酚含量最高，為166.889mg/g。並且通過單因素和正交試驗，以發酵液中茶多酚含量為指標，對食藥真菌香菇發酵緑茶的培養基及發酵條件進行優化，得出最佳培養基為葡萄糖4g/100mL，酵母膏O.2g/100mL，磷酸ニ氫鉀O.3g/100mL，硫酸鎂O.lg/100mL，最佳發酵條件為接種量8%，中藥添加量8g/100mL，溫度25°C，初始pH值7。最後採用優化後エ藝進行驗證得出發酵液中茶多酚含量為170.749mg/g。4以照射後第3、10天的外周血中白細胞數作為評價指標，採用正交設計法對黃芪、三七、緑茶的發酵物進行劑量配比組方，優選出最佳組方為組方7，即三七發酵液O.4g/kg·(!,黃苗發酵液3.8g/kg·(!,綠茶發酵液2.25g/kg*d;組方2,即三七發酵液O.8g/kg*d,黃芪發酵液2.5g/kg·d，綠茶發酵液2.25g/kg·d。5對受輻射小鼠外周血白細胞(WBC)數，免疫器官指數，內源性脾集落形成単位(CFU-S)，骨髓有核細胞(BMC)數，骨髓嗜多染紅細胞微核率(PCE)五項指標測定，結果顯示，組方2和組方7均具有一定抗輻射作用。目前中藥抗輻射作用研究日漸增多，但是效果顯著得到開發的較少。本發明採用微生物發酵的方法，目的在於提高藥效，獲得ー劑具有良好抗輻射作用效果的組方，為以中藥為原材料的抗輻射產品研究開闢了一條新思路，同時在黃芪、三七及緑茶的進ー步應用研究上提供了理論基礎。具體實施例方式實施例一黃芪發酵液的製備以中藥黃芪為發酵底物，利用食藥真菌靈芝對其進行發酵，採用發酵培養基為可溶性澱粉2g/100mL，硝酸鉀O.4g/100mL,磷酸ニ氫鉀O.Ig/1OOmL,硫酸鎂O.Ig/1OOmL,最佳發酵條件為接種量10%，黃芪添加量8g/100mL，溫度33°C，初始pH值5.5，培養時間為8-10d，得黃芪發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。實施例ニ三七發酵液的製備以中藥黃芪為發酵底物，利用食藥真菌豬苓對其進行發酵，採用發酵培養基為可溶性澱粉3g/100mL，蛋白腖O.2g/100mL，磷酸ニ氫鉀O.3g/100mL，硫酸鎂O.lg/100mL，最佳發酵條件為接種量10%，三七添加量5g/100mL，溫度25°C，初始pH值7，培養時間為8_10d，得三七發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。實施例三緑茶發酵液的製備以中藥綠茶為發酵底物，利用食藥真菌香菇對其進行發酵，採用發酵培養基為葡萄糖4g/100mL，酵母膏0.2g/100mL,磷酸ニ氫鉀0.3g/100mL,硫酸鎂0.Ig/1OOmL,最佳發酵條件為接種量8%，中藥添加量8g/100mL，溫度25°C，初始pH值7，培養時間為6_8d，得綠茶發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。實施例四正交設計法優選中藥發酵物的抗輻射組方實驗動物健康的雌性昆明小鼠，18_22g，清潔級。輻照條件採用synergy醫用直線加速器對小鼠進行一次性全身照射，照射劑量3Gy,劑量率O.5Gy/min,照射時間6min,革巴心距離100cm。正交設計分組用L9(33)三因素三水平正交表進行試驗分組，因素水平表見表1，其中因素A為黃芪發酵液，因素B為三七發酵液，因素C為綠茶發酵液，以每千克小鼠每天灌服發酵液中所含原始生藥材量表示各因素的水平劑量。另設ー組輻照模型對照組，各試驗組分別於照射前連續灌服20天，每天一次，模型對照組以等量蒸餾水代替，對各組均以同一輻照條件進行一次性全身照射，照射後仍繼續灌服。表I試驗分組因素水平表i'able丄l'hetableofthegroupingfactorofexperiment權利要求1.一種黃芪發酵液，其特徵是以中藥黃芪為發酵底物，利用食約真菌靈芝對其進行發酵，採用發酵培養基為可溶性澱粉2g/100mL，硝酸鉀O.4g/100mL，磷酸二氫鉀O.lg/100mL,硫酸鎂O.lg/100mL,最佳發酵條件為接種量10%，黃芪添加量8g/100mL，溫度33°C，初始pH值5.5，培養時間為.8-10d，得黃芪發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。2.一種三七發酵液，其特徵是以中藥黃芪為發酵底物，利用食藥真菌豬苓對其進行發酵，採用發酵培養基為可溶性澱粉3g/100mL，蛋白腖O.2g/100mL，磷酸二氫鉀O.3g/100mL,硫酸鎂O.Ig/1OOmL,最佳發酵條件為接種量10%，三七添加量5g/100mL，溫度25°C，初始pH值7，培養時間為8-.10d，得三七發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及約品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。3.—種綠茶發酵液，其特徵是以中藥綠茶為發酵底物，利用食藥真菌香菇對其進行發酵，採用發酵培養基為葡萄糖4g/100mL，酵母膏O.2g/100mL，磷酸二氫鉀O.3g/100mL，硫酸鎂O.lg/100mL,最佳發酵條件為接種量8%，中藥添加量8g/100mL，溫度25°C，初始pH值7，培養時間為6-8d，得綠茶發酵液，經3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用於製備食品、保健品及藥品的原料。4.一種中藥發酵液，其特徵是將權利要求I至3所述方法製備的三種中藥發酵液進行劑量配比組方，該組方具有一定抗輻射作用，可以在製備抗輻射藥品、食品及保健品中應用。5.根據權利要求4所述的中藥發酵液，其特徵在於該發酵液可以單獨或與其它藥物配伍或加入藥學上可以接受的輔料，製備成軟膠囊、硬膠囊、滴丸、片劑、分散片、顆粒劑、注射液、口服液、栓劑，經口服、皮膚、黏膜、直腸方式應用。6.本發明是採用搖瓶的方法進行的，如進行放大生產，可根據本發明的基本原理採用各種生物反應器、發酵罐等方式進行發酵處理，另外除本發明中所用食藥真菌靈芝、豬苓、香菇外，也可是其它大型食藥真菌如平菇、黑木耳、金針菇等，這是本領域的研究人員所能理解的。全文摘要本發明提供一種抗輻射中藥發酵液的製備方法，涉及中藥加工及生物發酵領域，尤其是中藥黃芪、三七、綠茶的發酵方法。本發明以食藥真菌作為發酵的出發菌種，分別對三種中藥進行發酵，並將此法所得三種發酵液進行劑量配比組合。動物實驗顯示本發明中中藥發酵液具有明顯抗輻射作用。本發明的特點是中藥發酵液即可直接作為食(飲)品、保健品及藥品使用，或者用於製備食(飲)品、保健品及藥品的原料，在預防和治療輻射損傷方面具有良好的開發應用前景。文檔編號A23L1/29GK102688280SQ20121019294公開日2012年9月26日申請日期2012年6月13日優先權日2012年6月13日發明者姜雲,孫暘,王莘,董浩,陳述申請人:吉林農業大學