防治油菜菌核病的枯草芽胞桿菌及抗菌物質分離的製作方法

2023-12-12 22:17:27

專利名稱：防治油菜菌核病的枯草芽胞桿菌及抗菌物質分離的製作方法
技術領域：
本發明屬於農業微生物學技術領域，具體涉及一株防治油菜菌核病的枯草芽胞桿菌的 分離篩選，抗菌活性物質的分離及應用。
背景技術：
油菜菌核病是由核盤菌(&^0""^"/^加'0,鵬)引起的真菌病害，居油菜三大病害之首， 輕病年減產10% 20%，重病年減產達50%左右。在油菜菌核病的抗病油菜品種篩選上 仍未找到免疫材料，目前缺乏高效的抗病品種(雙桑等，油菜菌核病及抗病育種研究進展， CROP RESEARCH, 2006, 5: 552-556)。長期以來其防治大多用苯並咪唑類殺菌劑在花期噴 霧進行化學防治。由於長期單一用藥，病原菌對殺菌劑己廣泛產生抗藥性，防治效果並不 理想，並且長期使用上述藥劑，給生態環境、人類健康帶來嚴重危害。使得人們對該病的 生物防治寄予了厚望。在目前研究的菌核病生防菌中，國外有通過真菌盾殼黴(Com'o勿h, 朋'"tom)進行防治的報導，該菌通過寄生核盤菌菌核，使其喪失產生子囊盤的能力。1999年 德國的Prophyta公司用C. m/m'tora開發出第一個用於防治核盤菌的生防真菌產品，其商品 名為CONTANS(Hedke K等，Contans - first biocon加l agent against SWero加r謂sc/era/7o/", in oilseed rape [R〗.Canberra, Australia: Proceedings of the 10th International Rapeseed Congress, 1999)。目前國內還沒有專門用於防治油菜菌核病的生防產品。枯草芽胞桿菌是一種在自然界廣泛存在的微生物，革蘭氏陽性，產生耐熱、抗逆的芽 胞，在芽胞形成初期分泌各種抗菌物質，對病原真菌有特異性的防治作用，具有顯著的生 防潛力。目前已確定來自枯草芽胞桿菌的抗菌物質有低分子抗菌肽，有環狀肽或環狀脂肽， 也有些為線狀肽等，這些物質能使病原真菌菌絲發生斷裂、解體、細胞質消解等現象。脂 肽類類抗生素是由枯草芽胞桿菌(^^7/m w6ri/W產生的具有潛在的植物病害防治和醫學 應用價值的抗菌物質，包括surfactin、 iturin和fengycin。脂肽類生物表面活性劑一般是以內 酯或醯胺鍵結合而成的環狀脂肽。脂肽分子中多個胺基酸組成的肽鏈形成親水基，脂肪烴 鏈形成親油基，親水的胺基酸能和烴鏈上的羧基、羥基或氨基結合形成環狀。由於胺基酸 組成和脂肪酸側鏈長度的差異形成多種同分異構體，這些脂肽的結構相似，性質相近，從 細菌發酵液中分離純化得到純的單分子類抗生素非常困難，這給進一歩的結構鑑定帶來相當大的難度。酸沉澱是分離純化脂肽類物質最常用的方法，但酸沉澱後很多雜質也一起被 沉澱下來了，分離純化的效果並不理想(Mukherjee S等，Towards commercial production ofmicrobial surfactants. TRENDS in Biotechnology, 2006, 24(11): 509-515)。固相萃取(Solid-phase extraction, SPE)，又稱固液微處理小柱技術。它是利用對某些成分的選擇性吸 附與選擇性洗脫的液相色譜分離原理，使液體樣品通過吸附劑小柱，特異性地保留其中某 些組分，再選用適當的溶劑衝洗雜質，然後用少量溶劑迅速洗脫，從而達到快速分離淨化 與濃縮的目的。特別適合從各類複雜樣品中提取淨化微量待測組分，具有分離速度快、操 作簡單、萃取效率高、無乳化等特點，在環境分析、藥物分析等方面有廣泛應用。能起到 將被分離物質與雜質分開和濃縮樣品的作用，尤其適用於色譜分析樣品前處理。發明內容本發明的第一個目的是克服現有技術存在的缺陷，從自然環境中分離篩選出一株對油菜菌核病菌有抑制能力的枯草芽胞桿菌菌株；本發明的第二個目是從所述的枯草芽胞桿菌 株的發酵液中分離出對油菜菌核病菌有抑制能力的脂肽類抗菌物質；本發明的第三個目的 是利用所分離的脂肽類抗菌物質用於油菜菌核病的防治。本發明是這樣實現的申請人於2007年11月從中國湖北省武漢市華中農業大學油菜基地的土壤中分離得到一株對油菜菌核病菌(Sc/erarim'a "/m^'0nw2)有抑制能力的生防菌X-01菌株；經形態觀察， 生理生化和16S rDNA鑑定，該X-01菌株在分類學上屬於枯草芽胞桿菌(^zc///^ ra^7的， 申請人:於2008年4月28閂將該菌株送交湖北省武漢市武漢大學內的中國典型培養物保藏 中心(CCTCC)保藏，其保藏編號為CCTCCNO: M 208067。進一步的發酵試驗證明，該菌株能分泌一種脂肽類抗生素iturin A，測定其分子量為 1042.9 Da。一種製備脂肽類抗生素iturin A的方法，其特徵在於1) 將保藏編號為CCTCCNO: M 208067的枯草芽胞桿菌菌株X-01液體振蕩活化，接 種到裝有液體培養基(每1000 ml中含有胰蛋白腖10 g，葡萄糖5 g， K2HP04 2.5 g， MgS04.7H20 0.2 g， pH7.2)的三角瓶中，培養溫度30。C;搖床轉數150rpm;培養時間48 h，得到含脂肽類抗生素iturinA的發酵液；2) 將步驟l)得到的含脂肽類抗生素iturin A的發酵液在相對離心力為10000xg的離心 機上離心15min除去菌體，取上清，先用截留分子量為100KDa的超濾管超濾，濾過液再 用截留分子量為30 KDa的超濾管濃縮到原體積的1/20，棄去濾過液，取截留液上固相萃取柱分離，依次用0%, 20%, 40°/。， 60%, 80%, 100%的甲醇/水溶液(V/V)梯度洗脫，收 集60%, 80%, 100%洗脫組分，用旋轉蒸發儀於65。C水浴條件下濃縮得到含脂肽類抗生素 iturinA的粗提物；3)將步驟2)粗提物用1 ml甲醇溶解得到樣品處理液-1，將樣品處理液-1用高效液相色 譜儀分離，色譜柱的參數為填料為HypersilBDSC18， 4.6 mmx2 0mm， 5pm粒徑，高效 液相色譜條件流動相35%乙腈/水溶液(V/V);流速lml/min，檢測波長210 nm，進樣 量20 運行時間50 min，收集保留時間為10 min的色譜峰，於65'C水浴下旋轉蒸發濃 縮至lml後轉移到離心管中，用氮氣吹乾，得到脂肽類抗生素iturinA。基於以上的發明，申請人已經從該枯草芽胞桿菌的發酵液中成功地分離得到防治油菜 菌核病的脂肽類抗生素iturinA，並將這種類抗生素成功地應用在防治油菜菌核病上。當分 離得到的脂肽類抗生素iturin A的濃度為100 pg/ml時防治油菜菌核病的效果達100%，濃 度為10 pg/ml時的防治效果達到40.7%。本發明具有以下優點本發明分離的X-Ol菌株能產生脂肽類抗生素，具有很強的抑制油菜菌核病菌的能力， 為油菜菌核病的防治提供了新的生防產品。


圖1:本發明的技術流程圖。圖2: X-Ol菌株發酵濾液對核盤菌的抑制實驗結果。圖中CK:未接種的培養基(對照)；濾液X-Ol菌株的除去菌體後的發酵液。 圖3: X-Ol菌株的16SrDNA序列。圖4: X-Ol菌株的系統發育樹。圖中括號內為相應菌株在Genbank的編號。 圖5:本發明的菌株的抗菌活性組分經固相萃取後各洗脫組分的抗核盤菌效果圖。圖中 a:超濾截留液；b， c， d， e， f， g分別為0%， 20%， 40%， 60%,， 80%' 100%的甲醇水溶液洗脫液；由於樣品濃度過大以及上樣量過多，仍有部分活性組分未被固相萃取柱吸附，因此，最初的純水洗脫液(b)具有部分抗菌活性。甲醇無拮抗效果。 圖6:本發明的菌株的抗菌活性組分經固相萃取後的高效液相色譜圖。圖中色譜峰上的數 字表示各色譜峰編號。圖7:各液相色譜峰抗核盤菌的效果圖。圖中數字分別對應於圖6中的色譜峰。圖8:純化後的脂肽類抗生素iturinA的基質輔助雷射誘導解吸附電離飛行時間質譜圖。圖中質荷比(M/Z)為1043.9， 1065.9， 1081,9的離子峰分別為活性物質的[M+H]+， [M+Na]+， [M+K]+峰。圖9: X-01菌株產生的脂肽類抗生素iturin A的電噴霧碰撞活化解離質譜圖。圖中表示了 iturin A肽段斷裂後的部分b離子和y離子質譜峰；[M+H]+表示iturin A的質子化峰。
具體實施方式
下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為報導的微生物學常規操作方法。 實施例l:油菜菌核病拮抗菌株X-Ol的分離、篩選與鑑定第一步菌株的分離(稀釋平板法，參照趙斌等，微生物學實驗(第一版).北京科學 出版社，2002年介紹的方法)。從湖北省武漢市華中農業大學油菜基地採取土樣10 g，加入內裝100 ml無菌水和玻璃 珠的三角瓶中，於150rpm搖床上振蕩30min，得到土壤懸液。將土壤懸液在80。C加熱處 理30min，使芽胞桿菌得到富集，取lml富集培養液加入9ml無菌水中，依次按照l(T2， 10—3， 10—4， 10—5稀釋，取0.1ml不同梯度的稀釋液在牛肉膏蛋白腖培養基(牛肉膏5g，蛋 白腖10g， NaC15g，瓊脂15g,用蒸餾水定容至1 L, pH 7.2 )上塗布均勻，倒轉平板， 3(TC保溫培養2-3天，得到長有單菌落的平板。第二步拮抗菌株X-01的篩選在土豆培養基(新鮮去皮土豆20 g，葡萄糖20 g，瓊脂15 g，用自來水定容至1 L，pH 6.5) 平板上接種核盤菌，株號Let-27，參見姜道宏等，盾殼黴控制油菜菌核病菌再侵染及 其葉面存活的動態研究，植物病理學報，2000年2月第30巻第1期第60-65頁，20'C培 養2天後，用直徑為5 mm的打孔器在菌絲邊緣打孔獲得帶該核盤菌(Let-27)菌絲的瓊脂 塊。挑第二步分離培養得到的單菌落，接種在土豆培養基平板上，每個平板上接4株菌。 然後在平板中央接種一塊帶核盤菌菌絲的瓊脂塊。2(TC培養2天，觀察拮抗效果，測量抑 菌帶直徑。共獲得有拮抗效果的菌株13株。選抑菌帶直經最大的菌株，在牛肉膏蛋白腖 液體培養基(牛肉膏5g，蛋白腖10g， NaC15g，用蒸餾水定容至1L, pH7.2 )中搖瓶 發酵。培養溫度3(TC;搖床轉數150rpm;培養時間24h。發酵液離心後經細菌過濾器(0.2 Hm,Millipore,USA)過濾除菌。在土豆培養基平板中央放置帶核盤菌菌絲的瓊脂塊，用打孔 器在平板周圍距中心2.5 cm處均勻地打上直經為5 mm的小孔，滴入過濾液20 pl，每處理2 次重複,對照滴加牛肉膏蛋白腖液體培養基，置2(TC培養箱黑暗條件下培養2天，測量抑菌 帶直徑。按上述方法，最後得到一株對油菜菌核病菌有良好抑制能力的菌株X-Ol (見圖2)。第三步X-Ol菌株的常規鑑定和分子輔助鑑定將X-Ol菌株接種在如上所述的牛肉膏蛋白腖培養基上，3(TC培養24h，觀察記錄單菌 落形態，同時進行革蘭氏染色、過氧化氫酶試驗、澱粉水解試驗、硝酸鹽還原試驗等(參 照趙斌等，微生物學實驗(第一版).北京科學出版社，2002年介紹的方法)。16SrRNA 鑑定，採用上遊引物27F 5'AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3，和下遊引物1492R5'GGTTACCTGTTACGACTT3，擴增16S rDNA片段(Suzuki K等，v4grawyce;y mec/Zo/a"w sp.nov" nom. rev., comb, nov., a species for "Co ^we6ac/en'wm meifio/aww/w" Mamoli 1939 and for some aniline-assimilating bacteria which contain 2， 4陽diaminobutyric acid in the cell wall peptidoglycan. Int J Syst Bacterio, 1996, 46: 88-93)。採用20 jxl反應體系1 pi上遊引物27F， 1 pi下遊引物1492R, 0.2 pi dNTP， 0.2 TaqE , 1 pi Template, 2 pi 10xBuffer， 14.6 ^ ddH20。 PCR反應條件94。C, 1 min; 55°C， 1 min ; 72°C, 2 min， 30次循環，72。C延伸5min， PCR產 物經電泳純化後克隆到pMD 18-T載體(購自大連寶生物公司)上，送上海生物工程技術有 限公司測序。將得到的 16S rDNA 序列提交 GenBank (http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez db二nucleotide)禾口 RDP (Ribosomal Database Project) 資料庫(http:〃rdp.cme.msu.edu/)，採用Blastn程序進行序列的同源性分析，用Clustal X進 行多序列比對(Thompson JD等，The CLUSTAL—X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools. Nucleic Acids Res, 1997, 25: 4876-4882)，用MEGA3.0軟體按Neighbor-Joining法構建系統發育樹(Kumar S等，MEGA3: Integrated software for Molecular Evolutionary Genetics Analysis and sequence alignment. Briefings in Bioinformatics， 2004， 5: 150-163 )。第四步X-01菌株的菌學特徵及分類命名參照第三步中趙斌等，微生物學實驗(第一版).北京科學出版社，2002年介紹的方法，對分離的X-01菌株的菌學特徵進行了研究，特徵如下X-01菌株菌體大小為0.7-1.0x1.6-2.5，菌體杆狀，中生芽胞，革蘭氏反應陽性；在牛肉膏蛋白腖平板上形成的菌 落乳白色、邊緣整齊、表面在開始2天有光澤，隨培養時間延長變皺摺；具有運動性，不 產色素，在牛肉膏蛋白腖液體培養基中產菌膜；澱粉水解，檸檬酸鹽試驗，硝酸鹽還原， V.P.試驗，接觸酶試驗，酪素水解，石蕊牛奶還原試驗為陽性；明膠水解，過氧化氫酶， 甲基紅試驗，產吲哚試驗和卵磷脂酶試驗為陰性；X-01菌株能利用葡萄糖產酸，不能利用 葡萄糖產氣；X-01菌株的最適宜生長溫度為3(TC。根據《伯傑細菌鑑定手冊》(第八版， 中譯本，科學出版社，1984年)的檢索表檢索，X-01菌株的形態和生理生化特徵與枯草 芽胞桿菌的性狀相吻合。經過PCR擴增得到X-01菌株的16S rDNA片段(片段長度為15Ubp，見圖3)，測序後與GenBank資料庫中已知的13個枯草芽胞桿菌的16SrDNA同 源性為99% 。因此選取X-01菌株和RDP中相似性大的其它代表性菌株的16S rDNA序 列進行遺傳距離計算，並根據遺傳距離計算結果繪製系統發育樹(見圖4)，根據系統發育 分析可以確認本發明篩選得到的X-01菌株是枯草芽胞桿菌(^a"7/^^6ft7^)。X-01菌株的保藏培養基為常規牛肉膏蛋白腖培養基(如上所述)，培養溫度30'C。 實施例2: X-Ol菌株脂肽類抗菌活性物質的純化和結構鑑定挑X-Ol菌株單菌落在牛肉膏液體培養基(成分見上所述)中以3(TC， 150rpm振蕩培 養16h，得種子液，然後將1 ml的種子液接種到裝有100 ml發酵培養基(見後)的500ml 三角瓶中。所用發酵培養基組分為胰蛋白腖10 g、酵母抽提物2.5 g、葡萄糖5 g、 K2HP04 2.5 g、 MgS04'7H20 0.2 g，用蒸餾水定容至1000 ml, pH 7.2。培養溫度3(TC;搖床轉數 150 rpm;培養時間48 h。將X-01發酵液在相對離心力為lOOOOxg的離心機上離心15 min 除去菌體，取上清經截留分子量(MWCO)為100 KDa的超濾管(Amicon ultra-15 devices, Millipore， USA)超濾，濾過液再經截留分子量為30 KDa的超濾管濃縮至原體積的1/20， 棄去濾過液，取截留液上固相萃取柱(DIKMAProelUtC18，北京迪科瑪公司生產)在固相 萃取裝置(Supelco，USA)上分離(操作方法按照儀器廠家的操作說明進行)，依次用0%， 20%, 40%， 60%, 80%， 100。/。的甲醇/水溶液(V/V)梯度洗脫，收集活性組分(60%, 80%, 100% 甲醇/水洗脫組分，見圖5)，經旋轉蒸發儀(上海紅葉生化儀器廠)於65'C水浴條件下濃 縮(按照儀器廠家的操作說明進行)得到含脂肽類抗生素iturinA的粗提物，粗提物用1 ml 甲醇溶解得到樣品處理液-1，將樣品處理液-1經高效液相色譜(HPLC)分離(色譜柱為大 連依利特分析儀器有限公司產品Hypersil BDS C18， 4.6mmx20mm， 5pm粒徑；高效液 相色譜系統為美國Waters公司生產的515泵和2487雙波長檢測器)，流動相35%乙腈/ 水溶液(V/V);流速lml/min，檢測波長210nm，進樣量20pl;運行時間50 min。色譜 圖見附圖6，收集保留時間為IO分鐘的色譜峰(見圖6、圖7)，於65'C水浴下旋轉蒸發 濃縮至lml後轉移到離心管中，用氮氣吹乾，得到脂肽類抗生素iturinA。將得到的脂肽類抗生素iturin A進行基質輔助雷射誘導解吸附電離飛行時間質譜分析 (儀器為美國應用生物公司生產的Voyager-DESTR MALDI-TOF)，方法是&雷射源、 波長337nm、正離子方式檢測、反射方式(加速電壓20KV，反射電壓23KV)、基質為a-腈-4-羥肉桂酸(a-Cyno-4-hydroxycinnamicacid， CHCA)。質荷比(M/Z)為1043.9， 1065.9， 1081.9的離子峰分別為活性物質的[M+H]+， [M+Na]+， [M+K]+峰。結果表明本發明分離的 脂肽類抗生素iturinA的分子量分別為1042.9 Da(見圖8)。將分離得到的脂肽類抗生素iturinA用電噴霧碰撞活化解離質譜技術分析(儀器為美國應用生物公司生產的Qtmp 3200 ESI-MS)，電噴霧條件為噴霧電壓2.6kV、去簇電壓60V、正離子方式檢測、碰撞氣體為 氮氣。本發明分離得到的脂肽類抗生素iturinA產生的離子片斷見圖9，圖9中各峰是實驗 測定的質子化離子片斷([M+H]+)質荷比。根據b型碎片(b2=212.3， b3=299.2, b4=524.4， b5=638.5， b6=8014.1 ， b7=915.4)和y型離子碎片(yl=129.1 ， y2=243.4， y3=406.2， y4=520.4， y5=745.7 ， y6=832.4 )的質荷比得到該脂肽類抗生素iturin A的肽段結構為 Pro陽Asn-Tyr-(3AA-Asn-Tyr-Asn-Gln (Yu GY 等，Production of iturin A by 5ac/〃iw fl附y/o/z々wey^c/era suppressing i /7/z0c/0m'a so/cm/. Soil Biol Biochem， 2002, 34: 955-963);根據 卩AA (f3氨基脂肪酸)的質荷比M/Z44-b3二225.2，可以推斷脂肪酸鏈的長度應為14個碳 原子，其質子化結構為-H2N^CH-Q2H25-CO-，根據以上分析，本發明分離的枯草芽胞杆 菌X-01產生的分子量為1042.9 Da的抗生素屬於iturin A。
實施例3:純化的脂肽物質對油菜菌核病的離體防治實驗
用無菌水將從X-Ol菌株發酵液中純化得到的脂肽類抗生素iturinA分別配成lOO叱/ml， 10嗎/ml和l嗎/ml的溶液後噴霧於油菜葉片(油菜品種為Westar，五葉期)上。方法是將 油菜葉片置於墊有濾紙(用無菌水浸溼)的大玻璃平皿(直徑20 cm)中，每平皿3張葉片，每處 理3次重複，每張葉片中央接種一個核盤菌菌絲塊(Let-27)，置28'C、光/暗為14h/10h條 件下培養96h後測量各處理的發病斑直徑，分別以清水和多菌靈(市場上購買)為陰性和 陽性對照。按計算公式抑制率(％)=(清水對照病斑直徑_處理病斑直徑)/清水對照病 斑直徑xl00。/。計算抑制率。實驗重複3次，取平均值。X-01菌株產生的脂肽類抗生素iturinA 濃度為100 ng/ml時對油菜菌核病的防治效果達100。/。，濃度為10 pg/ml時的防治效果達到 40.7%,明顯優於多菌靈，說明本發明分離的X-01菌株產生的脂肽類抗生素iturinA對核盤
菌有很強的抑制作用，參見表l。
表l X-01菌株產生的脂肽類抗生素iturinA對油菜菌核病的離體防治效果
使用濃度病斑直徑抑制率
(昭/ml)(mm)(%)
1000100
1023.740.7
13512.5
多菌靈(100嗎/ml)25.536.3
清水對照40
權利要求
1. 一株防治油菜菌核病的枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)菌株X-01，保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，其保藏編號是CCTCC NOM 208067。
2、 根據權利要求1所述的菌株，其特徵在於，該菌株分泌一種脂肽類抗生素 iturinA，其分子量為1042.9 Da。
3、 一種製備脂肽類抗生素iturinA的方法，其特徵在於-1) 將保藏編號為CCTCCNO: M 208067的枯草芽胞桿菌菌株X-01進行液體 振蕩活化，並接種於液體培養基中，培養溫度3(TC;搖床轉數150rpm;培養時 間48 h，得到含脂肽類抗生素iturin A的發酵液；2) 將步驟l)得到的發酵液在相對離心力為10000xg的離心機上離心15min 除去菌體，取上清，用截留分子量為100 KDa的超濾管超濾，濾過液再用截留 分子量為30KDa的超濾管濃縮至原體積的1/20，棄去濾過液，取截留液上固相 萃取柱分離，依次用0%，20%,40%,60%，80%, 100%的甲醇/水溶液(V/V)梯度 洗脫，收集60%, 80%, 100%洗脫組分，用旋轉蒸發儀於65'C水浴條件下濃縮得 到含脂肽類抗生素iturin A的粗提物；3) 將步驟2)得到的粗提物用lml甲醇溶解得到樣品處理液-1，將樣品處理 液-1用高效液相色譜儀分離，色譜柱的參數為填料Hypersil BDS Cl8， 4.6 mmx2 Omm， 5pm粒徑，高效液相色譜條件流動相35%乙腈/水溶液(V/V);流速1 ml/min，檢測波長210nm，進樣量20 運行時間50min，收集保留時間為10 分鐘的色譜峰，於65。C水浴下旋轉蒸發濃縮至1 ml後轉移到離心管中，用氮氣 吹乾，得到脂肽類抗生素iturinA;其中步驟l)所述的液體培養基的組分為每1000 ml培養基中含有胰蛋白 腖10g，葡萄糖5g， K2HP042.5 g， MgSO4'7H2O0.2g， pH7.2。
4、 權利要求1所述的菌株在製備防治油菜菌核病的抗菌產物中的應用。
5、 權利要求2所述的脂肽類抗生素iturinA在防治油菜菌核病中的應用。
全文摘要
本發明屬於農業微生物學技術領域，具體涉及一株對油菜菌核病有抑制作用的拮抗菌X-01菌株的分離篩選，抗菌活性物質的分離與應用。本發明的X-01菌株已經保藏在中國典型培養物保藏中心(保減號為CCTCC NOM 208067)。通過形態學觀察、生理生化分析和16S rDNA同源性分析，鑑定X-01菌株為枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)。該菌株能夠分泌一種脂肽類抗生素iturin A，其分子量為1042.9Da。本發明還公開了利用X-01菌株製備脂肽類抗生素iturin A的方法。離體生防試驗表明，本發明製備的脂肽類抗生素iturin A對油菜菌核病菌具有明顯的抑制效果，脂肽類抗生素iturin A濃度為100μg/ml時防治油菜菌核病的效果達100％，濃度為10μg/ml時的防治效果達到40.7％。
文檔編號A01N37/18GK101270344SQ20081004765
公開日2008年9月24日 申請日期2008年5月12日 優先權日2008年5月12日
發明者進 何, 劉子鐸, 喻子牛, 明 孫, 張吉斌, 徐愛章, 李明順, 鄭世學 申請人:華中農業大學