甘氨酸診斷/測定試劑盒及甘氨酸的濃度測定方法
2023-08-07 12:41:21 2
專利名稱：甘氨酸診斷/測定試劑盒及甘氨酸的濃度測定方法
技術領域：
本發明涉及一種甘氨酸診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定甘氨酸 濃度的方法，屬於醫學/食品檢驗測定技術領域。
背景技術：
甘氨酸是一種重要的精細化工中間體，廣泛應用於農藥、醫藥、食品、 化肥、飼料等行業。根據甘氨酸的製備工藝和產品的純度可分為食品級、醫 藥級、飼料級和工業級四種規格產品。
在20多種胺基酸中，甘氨酸是最簡單的一種，它是組成蛋白質的一種成 分，為非人體必需胺基酸。《食品添加劑使用衛生標準》規定，甘氨酸允許 使用的範圍為調味料和豆奶，最大使用量是lg/kg。國家質檢總局日前進行 的一項專項監督檢査結果表明，國內部分乳飲料企業為提高產品中蛋白質含 量，在生產加工中違規使用價格低得多的甘氨酸代替奶粉，個別企業問題嚴 重。據業內人士介紹，使用甘氨酸替代奶粉，可以使產品成本至少減少一半。 人體若攝入甘氨酸的量過多，不僅不能被人體吸收利用，而且會打破人體對 胺基酸的吸收平衡而影響其它胺基酸的吸收，導致營養失衡而影響健康。
目前各地方的檢測標準均採用氨基氮測定法測定甘氨酸含量。較新的方 法，採用HPLC法(高效液相色譜柱後衍生法)測定其中的甘氨酸。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提出一種利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)技術，計量/連續監測還原型煙醯胺輔酶(還原型輔酶) 在340nm波長處吸光度的變化，得以測定甘氨酸濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的甘氨酸診斷/測定試劑盒，採用該試劑不僅可以在 紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行甘氨酸濃度測定，而且測 定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。 本發明甘氨酸濃度測定方法原理如下
甘氨酸+水+輔酶甘氨酸脫氫酶 乙醛酸+氨+
還原型輔酶+H"
這種方法應用甘氨酸脫氫酶(glycine dehydrogenase; EC 1.4丄10)酶促
反應速率比色法/終點法。甘氨酸脫氫酶酶解甘氨酸反應，同時將輔酶(在 340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而 得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，通過測量340nm 處吸光度上升的程度/速度，可以測算甘氨酸的濃度大小。
實驗表明，從測定結果的準確性和配製成本的經濟性兩方面綜合考慮， 無論是單劑、雙劑，如下成分關係的本發明甘氨酸診斷/測定試劑盒較為理想 緩衝液 100mmol/L 穩定劑 500 mmol/L
輔酶 3 mmol/L
甘氨酸脫氫酶 10000 U/L
本發明的甘氨酸診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括
緩衝液、穩定劑、輔酶、甘氨酸脫氫酶。 試劑盒可以是乾粉狀態，在使用前加水溶解後使用；也可以配製成液體 試劑，直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑 試劑l
緩衝液、穩定劑、輔酶。
5緩衝液、穩定劑、甘氨酸脫氫酶。
輔酶、甘氨酸脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以 是乾粉狀態，在使用前加水溶解後使用；也可以配製成液體試劑，直接使用。
無論是單劑、雙劑，本發明測定甘氨酸濃度的方法，其輔酶可以是NADP+、 NAD+或thio- NAD+中的 一種。
具體實施例方式
下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。 實施例一
本實施例的甘氨酸診斷/測定試劑為單試劑，包括
三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩衝液 100mmol/L 穩定劑 500 mmol/L
輔酶 3 mmol/L
甘氨酸脫氫酶 10000 U/L
試劑全部溶解配好後，分裝入瓶，進行冷凍乾燥，製成乾粉試劑；使用 前，加入純淨水，復溶後使用。
在全自動生化分析儀上設定溫度37"，反應時間IO分鐘，起始吸光度 《0.1，測試主波長340nm，測試副波長405nm，被測甘氨酸樣品與試劑的 體積比例為1/25，反應方向為正反應(上升反應)，延遲時間大約O分鐘左 右，檢測時間5分鐘左右。
加入樣品和試劑後，使之混合併發生反應，最終將反應物置於生化分析 儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，從而測算出甘氨酸的濃 度大小。 實施例二本實施例的甘氨酸診斷/測定試劑為雙試劑，包括 試劑1
三(羧甲基)氨基甲垸一鹽酸緩衝液 100mmol/L 穩定劑 50 mmol/L
輔酶 3 mmol/L
試劑2
三(羧甲基)氨基甲垸一鹽酸緩衝液 100 mmol/L 穩定劑 50 mmol/L
甘氨酸脫氫酶 10000 U/L
試劑全部溶解配好後，分裝入瓶，製成液體雙試劑，可以直接使用。 在全自動生化分析儀上設定溫度37'C，反應時間10分鐘，起始吸光度 《0.1，測試主波長340nm,測試副波長405nm，被測甘氨酸樣品與試劑1、 試劑2的體積比例為2/20/5，反應方向為正反應(上升反應)，延遲時間大 約0分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
加入樣品和試劑後，使之混合併發生反應，最終將反應物置於生化分析 儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，從而測算出甘氨酸的濃 度大小。
屮請人經過實驗驗證，採用以上發明內容屮記載的其他測定方法均能達 到木發明的目的，鑑亍測定步驟等情況與以上實施例類同，不另一一例舉。
總之，實驗證明採用本發明的測定方法完全可以通過一般牛化分析儀 器得出所需的測定結果——空白試劑吸光度變化(AA/mkO《0.0010;吸 光度時間反應曲線應呈上升曲線直至終點；試劑可測有效(R》0.99)線形 範圍—口丁達12 mmol/L;試劑測試的不準確度，其相對偏差不超過士5 %;試 劑測試的精密度(重複性)的變異係數(CV)《1 %;試劑的靈敏度Pl達
70.1258±0.05AA/mmol/L——本發明靈敏度高、精確度好，線形範圍寬廣， 足以便於推廣應用。
權利要求
1. 一種酶比色法的甘氨酸的濃度測定方法，其方法原理如下甘氨酸+水+輔酶 甘氨酸脫氫酶 乙醛酸+氨+ 還原型輔酶+H+將最終反應物置於紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，測算出甘氨酸的濃度大小測定結果。
2. —種甘氨酸診斷/測定試劑盒，主要成分包括緩衝液 20——500 mmol/L穩定齊IJ 1——4000 mmol/L1- 6 mmol/L1000——80000 U/L試劑成分的濃度不一定只限於上述範圍；在此範圍內效果較好，在此範圍外，試劑仍會反應作用。其特徵在於試劑盒可以是乾粉狀態，在使用前加水溶解後使用；也可以配製成液體試劑，直接使用。
3. 根據權利要求2所述甘氨酸診斷/測定試劑盒，其特徵在於由緩衝液、穩定劑、輔酶、甘氨酸脫氫酶組成單劑試劑。
4. 根據權利要求2所述甘氨酸診斷/測定試劑盒，其特徵在於由緩衝液、穩定劑、輔酶、甘氨酸脫氫酶組成雙劑試劑；試劑l，由緩衝液、穩定劑、輔酶、組成；試劑2，由緩衝液、穩定劑、甘氨酸脫氫酶組成。輔酶、甘氨酸脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。
5. 根據權利要求2所述甘氨酸診斷/測定試劑盒，其特徵在於還包括穩定劑1—4000 mmol/L或0.1%-100%體積比。所述穩定劑為硫酸銨(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐劑中的至少一種。
全文摘要
本發明涉及一種利用酶比色法技術的甘氨酸診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定甘氨酸濃度的方法原理、試劑的組成及成分，屬於醫學/食品檢驗測定技術領域。本發明的試劑盒主要成分包括緩衝液、輔酶、甘氨酸脫氫酶及穩定劑；通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發生一系列的酶促反應，再將反應物置於紫外/可見光分析儀下，檢測主波長340nm處吸光度上升的程度/速度，從而測算出甘氨酸的濃度大小。
文檔編號G01N21/31GK101464271SQ20071019142
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月19日 優先權日2007年12月19日
發明者王爾中 申請人:蘇州艾傑生物科技有限公司