豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液及其保存方法
2023-07-12 02:12:46 1
豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液及其保存方法
【專利摘要】本發明公開一種豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液，由以下組分配製而成：海藻糖34.23克，胎牛血清0.9升，超純水定容至1升；所述冷凍保護液PH為7.45，滲透壓為324mOsmol/Kg。在2ml凍存管中將精液與所述冷凍保護液等體積混合，然後在液氮面上5cm處停留3分鐘後直接投入液氮中保存；解凍時，將冷凍在液氮中存有精子的凍存管取出，37℃水浴中1分鐘。本發明與現有技術相比，具有以下的優點：對精子的毒性很低，且能提供精子所需營養物質。
【專利說明】豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液及其保存方法
[0001]
【技術領域】
本發明涉及鰓棘鱸屬魚類精子的冷凍保存，特別是對豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液及其保存方法。
[0002]
【背景技術】
鰓棘鱸是馳名世界的名貴海產魚類，肉質鮮美，營養豐富，經濟價值很高。鰓棘鱸屬其中的一些種類(如豹紋鰓棘鱸)的人工養殖在我國廣東和海南等省迅速普及和推廣，成為南方沿海重要海水養殖種類。
[0003]超低溫冷凍保存精液是保護魚類優良種質的有效途徑，我國魚類精子冷凍保存的工作主要集中在「四大家魚」等淡水魚類以及鮃鰈類和大黃魚等冷水性海水魚類。不同種魚類的精子生理特性等差異很大，因此超低溫冷凍保存的最佳條件也千差萬別。迄今，尚未見鰓棘鱸屬魚類精子超低溫冷凍保存的研究報導。
[0004]冷凍保護液對精子保存效果至為關鍵，目前主要是採用滲透性抗凍劑(二甲亞碸、二甲基甲醯胺、甘油、甲醇、乙二醇等)與鹽溶液(NaC 1、KC1、Na2CO3、NaH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、MgCl2等)混合配製。然而，滲透性抗凍劑大多為無機化學藥品，本身對精子有一定的毒性；鹽溶液也不能給精子提供必要的營養物質。
[0005]
【發明內容】
本發明的目的在於提供一種豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液，解決目前採用的滲透性抗凍劑混合鹽溶液存在的毒性及缺乏營養等問題。
[0006]本發明另一個目的在於提供一種上述豹紋鰓棘鱸精子冷凍保存方法，彌補目前鰓棘鱸屬魚類尚無相關保存技術的不足。
[0007]本發明解決技術問題的技術方案:一種豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液，由以下組分配製而成:海藻糖34.23克，胎牛血清0.9升，超純水定容至I升；所述冷凍保護液PH為7.45，滲透壓為 324m0smol/Kg。
[0008]本發明豹紋鰓棘鱸精子冷凍保存方法，在2ml凍存管中將精液與所述冷凍保護液等體積混合，然後在液氮面上5cm處停留3分鐘後直接投入液氮中保存；解凍時，將冷凍在液氮中存有精子的凍存管取出，37°C水浴中I分鐘。
[0009]本發明與現有技術相比，具有以下的優點:對精子的毒性很低，且能提供精子所需營養物質。
[0010]現有技術中的精子抗凍保護液的各種成分都可能對精子有一定的毒性，本發明將配方簡單化，有利於減輕抗凍保護液本身對精子的不良影響。海藻糖是一種非滲透性的抗凍劑，能使精子脫水減少冷凍過程中產生冰晶損傷，從而起到保護精子的作用。海藻糖為大分子物質，不能穿過細胞膜進入到精子內部，相對於滲透性抗凍劑，海藻糖的毒性更低。胎牛血清是細胞培養的重要培養液之一，含有豐富的胺基酸和維生素，為精子提供豐富的營養物質。
【具體實施方式】
[0011]實施例1
1.冷凍保護液的配製:海藻糖34.23克，胎牛血清0.9升，超純水定容至I升(PH=7.45,滲透壓=324m0smol/Kg)。
[0012]2.採精:用丁香酚麻醉豹紋鰓棘鱸性成熟雄魚，擦乾魚體避免精子與海水接觸，輕壓腹部收集精液於2ml凍存管中。
[0013]3.冷凍:在凍存管中將精液與冷凍保護液等體積混合，然後在液氮面上5cm處停留3分鐘後直接投入液氣中保存。
[0014]4.解凍:將冷凍在液氮中存有精子的凍存管取出，37°C水浴中I分鐘。
[0015]5.精子活力檢測:利用計數機輔助精子分析系統檢測豹紋鰓棘鱸精子解凍後的活力為36.33%，接近鮮精活力41.69%。
[0016]相同條件和操作下，三種滲透性抗凍劑二甲亞碸、二甲基甲醯胺和甘油保存精子的活力在20% — 30%之間，保存效果均低於本發明採用的抗凍保護液。
【權利要求】
1.豹紋鰓棘鱸精子冷凍保護液，其特徵在於:海藻糖34.23克，胎牛血清0.9升，超純水定容至I升；所述冷凍保護液PH值為7.45，滲透壓為324mOsmol/Kg。
2.一種使用權利要求1所述冷凍保護液的豹紋鰓棘鱸精子冷凍保存方法，其特徵在於:在2ml凍存管中將精液與所述冷凍保護液等體積混合，然後在液氮面上5cm處停留3分鐘後直接投入液氮中保存；解凍時，將冷凍在液氮中存有精子的凍存管取出，37°C水浴中I分鐘。
【文檔編號】A01N1/02GK104304234SQ201410473950
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月17日 優先權日:2014年9月17日
【發明者】蒙子寧, 李波, 劉曉春, 張勇, 林浩然 申請人:中山大學