紅厚殼的快速繁殖技術的製作方法

2023-08-13 03:12:41

專利名稱：紅厚殼的快速繁殖技術的製作方法
技術領域：
本發明涉及組織培養技術領域，具體涉及紅厚殼的組織培養，尤其涉及紅 厚殼的快速繁殖技術。
背景技術：
紅厚殼屬(Ca/o/ /o^MmL)為藤黃科(GMmyferae)植物，為國家二級保 護植物。在我國的海南島和東南亞、印度、非洲等熱帶地區都有分布。紅厚殼 又名胡桐、海棠果，經濟價值高，應用範圍廣。具有油用、藥用、材用、觀賞、 生態保護等多種用途。1992年美國國家癌症研究所(NCI)從馬來西亞生長的 紅厚殼屬植物C.La/i!'geram中分離出的香豆素具有抗fflV-l活性成分，發現是 目前抗HIV-1活性最強的天然活性成分(Kashman et al. J Med Chem， 1992， 35: 2735-2743)。
我國有4種紅厚殼植物，其中海南分布2種，分別為紅厚殼(OzZo/7/iyZZMm jM0p/13^"m Li肌)和薄葉紅厚殼(C. memforawacewm Gard打.ef C7iflm/ .)， 目前
大都處在野生狀態。由於砍伐和土地利用等，使紅厚殼僅在某些地區小範圍存 在。國內對紅厚殼資源利用、保護和開發還沒有進行過系統的科學研究，經濟 利用價值還沒有完全開發出來，特別是還缺乏栽培技術，產量低、株間差異大、 經濟效益差。根據陶忠良(陶忠良，資源開發與市場，2003， 19: 85 — 87)報 道，紅厚殼植株生長較緩慢，幼苗生長6個月株高達40 50cm，但生長10年 後才能結果。
植物組織培養技術日趨完善，並在科學研究與現代化農業生產中充分顯示出其優越性，在農林作物的脫毒快繁、突變誘發、改革作物栽培、細胞工程和 基因工程育種以及種質保存等方面都發揮巨大的作用，是一項具有廣闊發展潛 力的高新技術。目前海南紅厚殼組織培養植株再生植株的相關研究尚未見有t艮 道。

發明內容
本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種穩定性好、繁殖率高、人 工可控且操作簡便的紅厚殼的快速繁殖技術，該技術通過種子無菌萌發和腋芽 誘導萌發獲得大量、整齊的組培苗。
本發明的上述目的是通過如下方法予以實現的
一種紅厚殼的快速繁殖技術，該技術包括紅厚殼種子無菌萌發和紅厚殼腋 芽誘導萌發兩步，其具體步驟如下-
(1) 紅厚殼種子無菌萌發
成熟紅厚殼果實去果殼後，將種子經消毒處理後對半橫切開，取有胚的一 半接種到無菌瓊脂培養基中，光照培養，得到萌發的幼苗；
(2) 紅厚殼腋芽誘導萌發
a. 將上述紅厚殼種子光照培養的幼苗在無菌條件下切取帶節莖段，接入腋 芽誘導萌發培養基中培養；所述腋芽誘導萌發培養基的配方為MS+1.0mg/LD-萘乙酸+0.5mg/LTDZ+8.0g/L瓊脂+40 g/L蔗糖；TDZ為苯基脲衍生物，全稱 為N一苯基一Nll ,2,3一噻二唑一5J尿，是本領域技術人員常用的植物組織高效生 物調節劑；
b. 將腋芽誘導萌發培養基中培養後的腋芽轉入含活性炭的繼代培養基中 培養，從而獲得所需紅厚殼幼苗；所述含活性炭的繼代培養基配方為l/2MS+0.5g/L活性炭+8.0g/L瓊脂+30 g/L蔗糖。
上述紅厚殼種子無菌萌發中，成熟紅厚殼去果殼後，將種子進行消毒處理， 可採用本領域技術人員的常規操作，也可以按照如下步驟進行消毒處理用 75體積％乙醇溶液消毒種子30秒，無菌水衝洗後，再用0.1% (質量百分比) 的氯化汞溶液消毒種子15分鐘，無菌水衝洗3次；紅厚殼種子的表面光滑， 在0.1%的氯化汞溶液中滴1滴吐溫，可增加消毒的效果。
上述紅厚殼種子無菌萌發中，紅厚殼種子含胚的一端呈圓錐形，另一端為 半圓形，切種子時不要傷到胚。
上述紅厚殼種子無菌萌發中，將有胚的一半接種到無菌瓊脂培養基中，該 無菌瓊脂培養基的配方為只含有0.8%瓊脂(質量百分比)，不含有其他任何 營養成分。
上述紅厚殼種子無菌萌發中，光照培養的培養條件為溫度為28士rc， 相對溼度為70±5%，光照條件為12小時/每天，光照強度為10±l|nmol/m2 " (表示"微摩爾/平方米X秒")，培養萌發幼苗。
上述紅厚殼腋芽誘導萌發中，待紅厚殼種子光照培養的腋芽展開6-8片葉 時，在無菌條件下切取帶節莖段，每一棵腋芽可切取3個帶節莖段，將帶節莖 段接入腋芽誘導萌發培養基中培養;培養溫度為28± 1°C ，相對溼度為70±5%， 每天光照12小時，光照強度為10土liimol/m、s 。
上述紅厚殼腋芽誘導萌發中，腋芽切取的帶節莖段在腋芽誘導萌發培養基 中培養21 28天後，轉入含活性炭的繼代培養基中培養，培養溫度為28土1 。C，相對溼度為70±5%，每天光照12小時，光照強度為10士Uimol/m2's ， 一般培養14 21天。上述紅厚殼腋芽誘導萌發中，步驟(1)的腋芽誘導萌發培養基配方和步
驟(2)的繼代培養基配方中的MS為本領域技術人員進行組織培養時最常用 的基礎培養基，市場上均有成品銷售。
經上述紅厚殼快速繁殖技術得到的紅厚殼幼苗，可用於後續的生根培養、 煉苗和移栽，採用本領域技術人員常用的生根培養、煉苗和移栽技術，均能獲 得很好的效果。
與現有技術相比，本發明具有如下有益效果
1. 本發明的快速繁殖技術其培養條件操作簡單，人工可控，由於組培苗在 無菌條件下生長，營養充足，溫度適宜，光照充分，不受季節、氣候的限制，
可周年生產組培試管苗；
2. 本發明通過紅厚殼種子無菌萌發和紅厚殼腋芽誘導萌發兩步，即可獲得 完整再生植株速度快，繁殖率高；
3. 本發明培養所得幼苗健壯、整齊，為大量獲得幼嫩枝葉提供有效途徑；
4. 採用本發明的快速繁殖技術， 一顆紅厚殼種子一年可生產出2187棵組 培苗。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明做進一步地描述，但具體實施例並不對本發
明做任何限定。 實施例l
本實施例的紅厚殼快速繁殖，包括紅厚殼種子無菌萌發和紅厚殼腋芽誘導 萌發兩步，其具體步驟如下 l.紅厚殼種子無菌萌發把50個成熟紅厚殼果實去除果殼，用75體積％乙醇溶液消毒種子30秒， 再用0.1% (質量百分比)的氯化汞溶液消毒種子15分鐘，無菌水洗3次後， 將消毒的種子對半橫切開，將有胚的一半接種到裝有無菌瓊脂培養基的培養瓶 中，將培養瓶置於光照培養箱中培養，溫度為28土rC，相對溼度為70±5%， 光照條件為12小時/每天，光照強度為10士lMmol/m2 s;所述無菌瓊脂培養 基的配方為只含有0.8% (質量百分比)的瓊脂，不含有其它任何營養成分。
2.誘導紅厚殼腋芽萌發 (l)待上述培養瓶中萌發的幼苗展開6一8片葉時(此時腋芽高度為6-7cm)， 將幼苗移出瓶，在無菌條件下切取帶節莖段，每棵腋芽可切取3個帶節莖段， 接入腋芽誘導萌發培養基中，腋芽誘導萌發培養基的配方為MS+1.0mg/Ll]-萘乙酸+0.5mg/LTDZ+8.0g/L瓊脂+40g/L蔗糖；培養溫度為28士rC，相對溼 度為70±5%，每天光照12小時，光照強度為10±lpmol/m2 s ;
(2) 上述帶節莖段在腋芽誘導萌發培養基中培養28天後，將萌發的腋芽 轉入繼代培養基中培養14天，繼代培養基的配方為l/2MS+0.5g/L活性炭 +8.0g/L瓊脂+30 g/L蔗糖；培養溫度為28士rC，相對溼度為70±5%，每天 光照12小時，光照強度為10士l(Limol/m、s ;
(3) 當每個帶節莖段萌發的腋芽為2-4個，腋芽生長至6—7釐米高時，無 菌條件下切取腋芽，重複上述步驟(1)和(2) 5次。
本實施例紅厚殼種子經上述方法快速繁殖後， 一年大約可生產出2187棵幼
苗，50顆種子可生產出109350棵幼苗。 實施例2
本實施例的紅厚殼快速繁殖技術其它操作同實施例1 ，不同的是 2.誘導紅厚殼腋芽萌發(1)腋芽誘導萌發培養基的配方為MS+1.0mg/L NAA
+2.0加^6-8八+0.2111^丁02+8.0^瓊脂+40 g/L蔗糖；所述NAA為D湊乙酸，
所述6-BA為細胞分裂素；
(2)帶節莖段在腋芽誘導萌發培養基中培養21天，腋芽萌發後轉入含活性
炭的繼代培養基中培養，含活性炭的繼代培養基配方為1/2MS+1.0g/L活性
炭+8.0g/L瓊脂+30 g/L蔗糖；
採用本實施例的快速繁殖技術，紅厚殼種子一年大約可生產出192棵幼
苗，50顆種子可生產出9600棵幼苗。 實施例3
本實施例的紅厚殼快速繁殖技術其它操作同實施例1 ，不同的是 2.誘導紅厚殼腋芽萌發
(1)腋芽誘導萌發培養基的配方為MS+l.Omg/L NAA +2.0mg/L6-BA +8.0g/L瓊脂+40 g/L蔗糖；所述NAA為D湊乙酸，所述6-BA為細胞分裂素； (2)帶節莖段在腋芽誘導萌發培養基中培養21天，腋芽萌發後轉入含活性 炭的繼代培養基中培養，含活性炭的繼代培養基配方為1/2MS+2.0g/L活性 炭+8.0g/L瓊脂+30 g/L蔗糖；
採用本實施例的快速繁殖技術，紅厚殼種子一年大約可生產出81棵幼苗， 50顆種子可生產出4050棵幼苗。
由實施例l、 2和3的結果可以看出，本發明的紅厚殼快速繁殖技術中， 腋芽誘導萌發培養基的優選配方為MS+1.0mg/Ltl-萘乙酸+0.5mg/L TDZ+8.0g/L瓊脂+40 g/L蔗糖；液壓誘導培養基的培養時間優選28天；含活 性炭的繼代培養基的優選配方為V2MS+1.0g/L活性炭+8.0g/L瓊脂+30 g/L
權利要求
1、一種紅厚殼的快速繁殖技術，其特徵在於該技術包括紅厚殼種子無菌萌發和紅厚殼腋芽誘導萌發兩步，具體步驟如下(1)紅厚殼種子無菌萌發成熟紅厚殼果實去果殼後，將種子經消毒處理後對半橫切開，取有胚的一半接種到無菌瓊脂培養基中，光照培養，得到萌發的幼苗；(2)紅厚殼腋芽誘導萌發a.將上述紅厚殼種子光照培養的幼苗在無菌條件下切取帶節莖接入腋芽誘導萌發培養基中培養；所述腋芽誘導萌發培養基的配方為MS+1.0mg/L top= "103" left = "184"/>-萘乙酸+0.5mg/L TDZ+8.0g/L瓊脂+40g/L蔗糖；b.將腋芽誘導萌發培養基中培養後的腋芽轉入含活性炭的繼代培養基中培養，從而獲得所需紅厚殼幼苗；所述含活性炭的繼代培養基配方為1/2MS+0.5g/L活性炭+8.0g/L瓊脂+30g/L蔗糖。
2、 根據權利要求1所述快速繁殖技術，其特徵在於所述紅厚殼為
3、 根據權利要求1所述快速繁殖技術，其特徵在於所述成熟紅厚殼果實去果殼後，將種子經如下方法進行消毒處理用75體積％乙醇溶液消毒種子30秒，無菌水衝洗後，再用0.1質量％的氯化汞溶液消毒種子15分鐘，無菌水衝洗3次。
4、 根據權利要求3所述快速繁殖技術，其特徵在於所述0.1質量％的氯化汞溶液中滴加有吐溫。
5、 根據權利要求1所述快速繁殖技術，其特徵在於所述步驟(1)中，無菌瓊脂培養基的配方為含有0.8質量％瓊脂。
6、 根據權利要求1所述快速繁殖技術，其特徵在於所述步驟(1)中，光照培養的培養溫度為28土rC，相對溼度為70±5%，每天光照12小時，光照強度為10±lpmol/m2 s 。
7、 根據權利要求1所述快速繁殖技術，其特徵在於所述步驟(2)中，腋芽誘導萌發培養基的培養溫度為28士rC，相對溼度為70±5%，每天光照12小時，光照強度為10±l|Limol/m2 s。
8、 根據權利要求1所述快速繁殖技術，其特徵在於所述步驟(2)中，帶節莖段在腋芽誘導萌發培養基中培養21 28天後，轉入含活性炭的繼代培養基中培養。
9、 根據權利要求1所述快速繁殖技術，其特徵在於所述步驟(2)中，含活性炭的繼代培養基中的培養溫度為28士rC，相對溼度為70±5%，每天光照12小時，光照強度為10士Uimol/m、s 。
全文摘要
本發明公開一種紅厚殼的快速繁殖技術，該技術包括紅厚殼種子無菌萌發和紅厚殼腋芽誘導萌發兩步，具體步驟如下(1)紅厚殼種子無菌萌發成熟紅厚殼果實去果殼後，將種子經消毒處理後對半橫切開，取有胚的一半接種到無菌瓊脂培養基中，光照培養，得到萌發的腋芽。(2)紅厚殼腋芽誘導萌發a.將上述紅厚殼種子光照培養的腋芽在無菌條件下切取帶節莖段，接入腋芽誘導萌發培養基中培養；b.將腋芽誘導萌發培養基中培養後的腋芽轉入含活性炭的繼代培養基中培養，從而獲得所需紅厚殼幼苗。本發明的培養操作簡單，人工可控，可周年生產組培試管苗，可獲得完整再生植株速度快，繁殖率高。
文檔編號A01H4/00GK101647394SQ200910192489
公開日2010年2月17日 申請日期2009年9月18日 優先權日2009年9月18日
發明者王小菁, 許德成 申請人:華南師範大學