厚樸酚與和厚樸酚的製造方法
2023-08-13 06:30:51 1
專利名稱：厚樸酚與和厚樸酚的製造方法
技術領域：
本發明涉及一種厚樸酚與和厚樸酚的製造方法，它以木蘭科植物厚樸為原料來製得的，屬中草藥化學藥物製造領域。
但是，作為中草藥的厚樸是否可用作抗腫瘤藥物，其機理和實踐從未有人作過深入研究。另外對於厚樸的提取製造也需採用一種新的工藝方法。
研究發現，心腦血管疾病及癌症無一不和氧自由基密切相關。其他神經系統、循環系統的發病過程中，氧自由基也起著重要作用；致癌、促癌和癌形成的每一步都有氧自由基的產生和參與。在正常情況下，DNA氧化損傷是高頻率的，機體每個細胞的DAN每天遭受約一萬次氧自由基侵襲，造成20多種類型氧化損傷的DNA，這些損傷多具誘變性。氧化損傷的DNA及誘變部位慢慢積累，從而癌症。而抗氧化劑能有效的清除自由基，延緩機體衰老，對癌症有預防和治療作用。
本發明對厚樸化學成分及藥理活性進行了深入研究。從厚樸中分離得到兩種酚類化合物厚樸酚與和厚樸酚，並對這兩種化合物進行了抗癌活性研究，探討其治療胃癌的可行性，發現它們有很好的抑制胃癌細胞的作用。為開發一種新的抗腫瘤藥物提供了可能性。
本發明的目的是通過以下手段和工藝措施來達到的。
本發明的一種厚樸酚與和厚樸酚的製造方法如下本發明以木蘭科植物厚樸為原料，首先將厚樸經粉碎後所得之粉末用乙醇在室溫下浸提三次，將所得浸提液進行真空減壓，回收溶劑，得乙醇提取物浸膏。將該乙醇提取物加矽膠並攪拌均勻；然後在低溫下烘乾、研細，分批上色譜柱分離提取。以不同比例的石油醚一乙酸乙酯混合溶液梯度洗脫，將洗脫液在旋轉蒸發器上真空蒸餾到十分之一；靜置一段時間，結晶而得兩種化合物厚樸酚與和厚樸酚。
厚樸酚的分子式為C18H18O2，白色塊狀晶體，mp.100～101℃；分子量為
266。
和厚樸酚的分子式為C18H18O2，為同分異構體，其結構式為
它為白色晶體，熔點84.8～85.0℃；分子量為266。
厚樸酚與和厚樸酚具有較好的抗氧化性以及對人的胃癌細胞具有較好的抑制作用。
本發明通過以下實驗方法對上述效果獲得了證實。一、測定厚樸酚與和厚樸酚的抗氧化活性的方法(OSI法)。
在溫度為100℃，空氣流量為20升/小時，將抽提物及結晶物按不同濃度分別加入含5克豬油的試管中，在氧化穩定儀上測定其OSI值，並作平行試樣。(OSI值是指油脂突變酸敗的時間)。其結果見表1。
表中BHT是2，6二叔丁基對甲酚。pf值為樣品與空白試樣的OSI值之比，即pf＝樣品OSI值/空白OSI值，而空白試樣的OSI值為16.05小時。
由表1可知，厚樸酚與和厚樸酚的抗氧化活性很強，和BHT基本相當。二、對人胃癌細胞BGC-823的細胞毒作用的實驗將以對數生長的胃癌細胞BGC-823接種在含15％小牛血清的RPMI 1640培養液中，置37℃，5％二氧化碳、飽合溼度下的培養箱內培養，以EDTA(乙二胺四乙酸)-胰酶混合溶液消化傳代，以100μL(1.0×105/mL)劑量濃度接種在96孔平板上，孵育24小時後，傾去培養液，將不同濃度厚樸酚(25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78μg/mL)、和不同濃度的和厚樸酚(100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56μg/mL)分別加入孔內，每一濃度加3孔，每孔100μL，對照組加同量培養液，孵育24小時後，棄去培養液。隨後每孔加入100μL 0.2％MTT的D-Hank’s液，37℃繼續孵育4h，吸去上清液，37℃溫育30min並不時輕輕振蕩。在酶聯免疫儀490nm波長處檢測各孔吸光度(A值)，按公式計算其抑瘤率。抑瘤率(％)＝[(對照組A值-實驗組A值)/對照組A值]×100。
從下面的細胞毒作用實驗結果的表格(表2.1，表2.2)中，數據表明厚樸酚與和厚樸酚對人胃癌細胞BGC-823有顯著的生長抑制作用，MTT試驗結果顯示，隨著藥物濃度加大，抑制率也隨之增高，與對照組相比均有顯著性差異。說明厚樸酚與和厚樸酚對胃癌細胞BGC-823的抑制作用與藥物濃度呈正相關，其IC50(半數抑制濃度)分別為3.60μg/mL和31.3μg/mL。
表2.1厚樸酚對人胃癌細胞BGC-823的細胞毒作用
表2.2和厚樸酚對人胃癌細胞BGC-823的細胞毒作用
具體實施方式
實施例稱取烘乾磨碎的厚樸粉末500g，室溫下加入乙醇1.5升，提取三次，合併提取液，在60℃及0.1MPa壓力下回收溶劑，得乙醇提取物85.5g，將該20g乙醇提取物加40g矽膠拌勻，上色譜柱分離提取(矽膠400g，200-300目)，以不同比例石油醚-乙酸乙酯進行梯度洗脫，在石油醚-乙酸乙酯(9∶1)處得到厚樸酚650mg，在石油醚-乙酸乙酯(8∶2)處得和厚樸酚75.3mg。
權利要求
1.一種厚樸酚與和厚樸酚的製造方法，其特徵是以木蘭科植物厚樸為原料，首先將厚樸經粉碎後所得之粉末用乙醇在室溫下依次浸提三次，將所得浸提液進行真空減壓，回收溶劑，得乙醇提取物浸膏；將該乙醇提取物加矽膠並攪拌均勻；然後在低溫下烘乾、研細，分批上色譜柱分離提取；以不同比例的石油醚—乙酸乙酯混合溶液梯度洗脫，將洗脫液在旋轉蒸發器上真空蒸餾到十分之一；靜置一段時間，結晶而得兩種化合物厚樸酚與和厚樸酚。
2.根據權利要求1所述的一種厚樸酚與和厚樸酚的製造方法，其特徵在於所述的乙醇浸提液是在60℃溫度和0.1MPa壓力下進行真空減壓，回收溶劑的。
3.根據權利要求1所述的一種厚樸酚與和厚樸酚的製造方法，其特徵在於所述的色譜柱為矽膠400克、200-300目。
4.根據權利要求1所述的一種厚樸酚與和厚樸酚的製造方法，其特徵在於在洗脫液的石油醚與乙酸乙酯的比例為9∶1處，得到厚樸酚，在石油醚∶乙酸乙酯＝8∶2處得和厚樸酚。
5.根據權利要求1的製造方法所製得的產品厚樸酚與和厚樸酚的用途是作為一種抑制胃癌細胞增生的藥物。
全文摘要
本發明提供了一種厚樸酚與和厚樸酚的製造方法，其特徵是以木蘭科植物厚樸為原料，首先將厚樸經粉碎後所得之粉末用乙醇在室溫下浸提三次，將所得浸提液進行真空減壓，回收溶劑，得乙醇提取物；將該乙醇提取物加矽膠並攪拌均勻；然後在低溫下烘乾、研細，分批上色譜柱分離提取；以不同比例的石油醚—乙酸乙酯混合溶液梯度洗脫，將洗脫液在旋轉蒸發器上真空蒸餾到十分之一；靜置一段時間，結晶而得兩種化合物厚樸酚與和厚樸酚。該物質經研究並通過實驗證實具有抑制胃癌細胞的作用，可用於製造防治胃癌的藥物。
文檔編號C07C39/00GK1446785SQ03115690
公開日2003年10月8日 申請日期2003年3月7日 優先權日2003年3月7日
發明者翁新楚, 吳侯 申請人:上海大學