恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法

2023-12-03 13:04:36 1

恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法
【專利摘要】本發明公開了一種恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法，屬於化學發光酶聯免疫檢測【技術領域】。該檢測試劑盒採用直接競爭法，試劑盒包括包被有恩諾沙星抗原的化學發光酶標板，恩諾沙星標準品，恩諾沙星酶標抗體，化學發光液和洗滌液。該試劑盒的使用方法包括如下步驟：（1）待測樣品的前處理；（2）順序加入恩諾沙星標準品溶液或樣品、恩諾沙星酶標抗體，競爭反應後洗板，最後加入化學發光液通過化學發光免疫分析儀進行恩諾沙星的定量檢測；（3）結果處理與分析。本發明提供的檢測試劑盒靈敏度高、穩定性好，適合大量樣品的篩查，具有重要的實際應用推廣意義。
【專利說明】恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及化學發光酶聯免疫檢測【技術領域】，特別涉及一種恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒及使用方法。

【背景技術】
[0002]諾沙星(Enrofloxacin,簡稱EF)是第一個畜禽專用的氟喹諾酮類藥物，1987年由德國拜耳公司首先研製成功。恩諾沙星化學名為1-環丙基-6-氟-4-氧代-1，4-2氫-7-(4-乙基-哌嗪基)-3-喹啉羧基，易溶於鹼性溶液，在水、甲醇中微溶，乙醇中不溶。其結構式見式1.2。

【權利要求】
1.一種恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵在於:所述檢測試劑盒包括包被有恩諾沙星抗原的化學發光酶標板、恩諾沙星標準品、恩諾沙星酶標抗體、化學發光液和洗滌液；所述恩諾沙星抗原為培氟沙星與卵清蛋白的偶聯物，所述的恩諾沙星抗原的包被濃度為0.5 mg/L O
2.根據權利要求1所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵在於，所述的化學發光酶標板為96孔可拆不透明白色發光板。
3.根據權利要求1所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵在於，所述的恩諾沙星標準品的濃度為lmg/mL，使用時用0.01 mol/L PBST將標準品稀釋成濃度為0,0.01,0.03,0.09,0.27,0.81,2.43,7.29 μ g/L 的一系列恩諾沙星標準品溶液。
4.根據權利要求1所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵在於，所述的酶標抗體為辣根過氧化酶標記的恩諾沙星單克隆抗體。
5.根據權利要求4所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵在於，所述的恩諾沙星酶標抗體的原濃度為lmg/mL，使用時用0.01 mol/L PBST稀釋4000倍。
6.根據權利要求1所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵在於，所述化學發光液由A液和B液組成，A液為將20mg對碘苯酚、8mg魯米諾、1.21gTris溶於10mL去離子水，用鹽酸調pH至8.4得到；B液為將體積分數0.40% H202、1.21gTris溶於10mL去離子水，用鹽酸調pH至7.0得到；使用時將底物液和底物緩衝液按體積比1:1的比例混合。
7.根據權利要求1所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵在於，所述的洗滌液為20倍濃縮洗滌液，為含有體積濃度0.5% Tween20的pH7.4 0.4mol/L的磷酸鹽緩衝液，使用時用去離子水稀釋成I倍洗滌液。
8.權利要求1?7任一項所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒的使用方法，其特徵在於包含如下步驟: (1)將試劑盒置於15?35°C平衡30min以上； (2)取出化學發光酶標板，往標準孔中加入不同濃度的恩諾沙星標準品溶液，樣品孔中加入待測樣品，然後每孔加入恩諾沙星酶標抗體，蓋上蓋板膜振搖混勻，孵育； (3)吸除板孔中的反應液，加入洗滌液洗滌，將酶標板拍幹； (4)每孔加入化學發光反應液，輕拍混勻，蓋上蓋板膜，I?2min後用化學發光免疫分析儀測定各孔的發光值RLU ； (5)檢測結果計算與分析，從而確定樣品中恩諾沙星的含量。
9.根據權利要求8所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒的使用方法，其特徵在於，步驟(2)中所述的待測樣品為肌肉或蜂蜜。
10.根據權利要求9所述的恩諾沙星的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒的使用方法，其特徵在於，當檢測樣品為肌肉時，肌肉要先經過以下預處理:稱取均質後肌肉組織3份，每份各Ig置於3個15mL尚心管中，分別加入4mL去尚子水,充分振蕩均勻,然後用尚心機以10000r/min的轉速離心lOmin，分別吸取上層清液2mL於3個1mL離心管中，加入2mL正己燒,振蕩1min,以10000 r/min的轉速離心1min,除去上層正己燒層,取下層清液50 μ L待測； 當檢測樣品為蜂蜜時，蜂蜜要先經過以下預處理:稱取3份樣品每份Ig置於3個15mL離心管中，分別加入4mL蒸餾水，充分振蕩均勻，再加入4mL乙酸乙酯，振蕩20min，用離心機以10000 r/min的轉速離心1min,吸取上層乙酸乙酯層2mL置於雞心瓶中用旋轉蒸發儀旋蒸至幹，加入ImL正己烷溶解乾燥物，再加入ImL去離子水復溶，去除上層正己烷層，取下層清液50 μ L待測。
【文檔編號】G01N33/577GK104165991SQ201410356799
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年7月24日 優先權日:2014年7月24日
【發明者】路俊山, 曾道平, 陳蓮英, 盧秋鴻 申請人:廣州萬聯生物科技有限公司