一種石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導子的製作方法

2023-12-08 17:47:41 3

一種石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導子的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種用於石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導子，其通過保藏編號CGMCC?NO.8019的絲核菌製備而成。採用本發明的真菌誘導子處理石斛蘭組培苗，無須添加任何人工激素，其鮮重增長量即可達到對照的4倍左右，如果將其按適當的濃度添加到該組培苗的生產中，將大大縮短其生產周期，節約大量的成本，應用前景十分廣闊。
【專利說明】一種石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導子
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物和微生物領域，具體的涉及一種能夠用於石斛蘭組培苗快速繁育的方法及真菌誘導子。
【背景技術】
[0002]真菌誘導子(Fungal elicitor)是來源於真菌細胞提取物或分泌物的一種特定的化學信號，在植物與真菌的相互作用中，能快速、高度專一和選擇性的誘導植物特定基因的表達，進而活化特定次生代謝途徑，積累特定目的的次生代謝產物。因其含有大量的幾丁質、多糖、寡糖、多肽、脂肪酸、蛋白質、糖蛋白和糖脂等物質，可提高植物的生物量、次生代謝產物、多糖含量、酶活性等有效成分。目前，真菌誘導子成功應用在多藥用植物次生代謝產物的誘導和生產中的實例已有很多，如利用尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum誘導紅豆杉中紫杉醇；在蘭科植物的應用上，鐵皮石斛原球莖受到真菌誘導子MF24誘導後不僅化學背景沒有改變，還促進了生物鹼類成分的產生和特異性的積累。
[0003]石斛蘭在當今花卉市場中扮演著重要的角色，每年石斛蘭種苗的生產和銷售十分樂觀。然而，目前生產上常利用添加激素來提高石斛蘭組培苗的生長速率，但同時容易出現變異和玻璃化等現象，因此，如何獲得一種能夠有效促進石斛蘭組培苗生長的真菌誘導子是本領域的技術人員亟待解決的技術問題。

【發明內容】

[0004]本發明的目的是提供一種絲核菌，其特徵在於所述的絲核菌菌株保藏編號CGMCCN0.8019，保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
[0005]本發明另一方面還涉及一種用於石斛蘭組培苗促生的真菌誘導子，其特徵在於所述的真菌誘導子由上述絲核菌製備而成，優選的，所述的真菌誘導子製備方法包括如下步驟:所述絲核菌在PDA平板培養基上培養7天後用打孔器打孔，並將菌餅接種到預先分裝、滅菌好的PDA液體培養基中，100-150rpm搖床震蕩培養7天，待菌絲體充分生長後收穫，用果汁機將菌絲體打碎後與菌液混合，滅菌後得。
[0006]本發明另一方面還涉及一種石斛蘭組培苗培養基，其特徵在於所述的培養基中含有30-50ml/L上述真菌誘導子以及1/2MS培養基+2-4%蔗糖+0.4-0.8%瓊脂。
[0007]採用本發明的真菌誘導子處理石斛蘭組培苗，無須添加任何人工激素，其鮮重增長量即可達到對照的4倍左右，如果將其按適當的濃度添加到該組培苗的生產中，將大大縮短其生產周期，節約大量的成本，應用前景十分廣闊。
[0008]微生物信息
[0009]本發明所篩選的Y05絲核菌(Rhizoctonia sp.)真菌已經保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC N0.8019，保藏地址為:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏日期為2013年08月12日。【具體實施方式】
[0010]實施例1
[0011]I材料與方法
[0012]1.1 材料
[0013]選取具有I~2條根、4~5片葉、生長狀況一致的石斛蘭Dendrobium組培苗。
[0014]1.2 方法
[0015]1.2.1真菌誘導子的配製
[0016]將從野生蘭分離得到6個菌根真菌Yl~Y6在PDA平板培養基上培養7天後用直徑為0.5cm的打孔器打孔，並將菌餅接種到預先分裝、滅菌好的PDA液體培養基中，250ml每瓶，每瓶接種I個菌餅，120r/pm搖床震蕩培養7天，待菌絲體充分生長後收穫。用果汁機將菌絲體打碎後與菌液混合，121°C滅菌20min後備用。
[0017]1.2.2誘導子培養基的配製
[0018]以1/2MS培養基+3%蔗糖+0.6%瓊脂為基礎培養基，分別將Y1-6號真菌誘導子按40ml/L、60ml/L、80ml/L三個梯度分別添加到基礎培養基中，不加真菌誘導子的基礎培養基作為對照。
[0019]1.2.3測定項目和方法
[0020]接種前，在超淨工作檯上稱取組培苗的質量(精確至0.0OOlg)，然後接種到含有誘導子的培養基中，置於3000LUX、12h/d的條件下培養，25°C、相對溼度70%~75%，每個處理接種30株，每瓶5株，共6瓶。90天後收穫組培物，清水洗淨根部的培養基後自然風乾，然後用電子天平稱取組培苗的鮮重(精確至0.0001)。
[0021]2結果:真菌誘導子對石斛蘭組培苗鮮重的影響
[0022]重量是植物體生長的最直接指標之一。培養90天後，處理13表現出了旺盛的生長勢，假鱗莖粗壯，葉寬而翠綠，鮮重增長與對照和其餘處理之間均達極顯著差異，增長
1.0824g ;其餘處理的鮮重增長量與CK之間的差異不顯著(表1)，其中處理11、處理15等8個處理的鮮重增長量反而低於CK。可見當在培養基中添加真菌誘導子Y05，添加量為40ml/L時，石斛蘭組培苗的長勢最好，此濃度的Y05真菌誘導子培養基最適合石斛蘭組培苗的生長，鮮重增長量最大。
[0023]表1真菌誘導子對石斛蘭組培苗鮮重增量影響的顯著性分析
【權利要求】
1.一種絲核菌，其特徵在於所述的絲核菌菌株保藏編號CGMCC N0.8019，保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
2.一種用於石斛蘭組培苗促生的真菌誘導子，其特徵在於所述的真菌誘導子由權利要求I所述絲核菌製備而成，優選的，所述的真菌誘導子製備方法包括如下步驟:所述絲核菌在PDA平板培養基上培養7天後用打孔器打孔，並將菌餅接種到預先分裝、滅菌好的PDA液體培養基中，100-150rpm搖床震蕩培養7天，待菌絲體充分生長後收穫，用果汁機將菌絲體打碎後與菌液混合，滅菌後獲得。
3.一種石斛蘭組培苗培養基，其特徵在於所述的培養基中含有30-50ml/L權利要求2所述的真菌誘導子以 及1/2MS培養基+2-4%蔗糖+0.4-0.8%瓊脂。
【文檔編號】C12R1/645GK103589648SQ201310531772
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月30日 優先權日:2013年10月30日
【發明者】陳金花, 楊光穗, 尹俊梅, 黃少華 申請人:中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所