適合轉基因小麥定量檢測的內標準基因引物設計及應用的製作方法

2023-12-10 04:19:06 2

適合轉基因小麥定量檢測的內標準基因引物設計及應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種適合轉基因小麥定量檢測的內標準基因引物設計及應用，其步驟：A、通過NCBI資料庫BlastN篩選物種特異性好的基因，查找非同源區段設計引物，擴增區段，將上下遊序列進行Primer-Blast檢測；B、選取16個不同物種種子和35個不同小麥品種滅菌消毒、萌發取葉片提取DNA；C、SouthernBlot鑑定候選特異性好的PSG719、UCB基因位點數為6個，拷貝數為2個；D、普通PCR鑑定內標準基因引物物種特異性：E、普通PCR鑑定內標準基因引物不同小麥品種間穩定性。確定兩對引物做轉基因小麥檢測時的定性或定量檢測內標準基因引物。方法易行，操作簡便，定性檢測極限為0.95個小麥基因組，定量檢測為5個小麥基因組,通過Real-timePCR檢測,線性關係良好。
【專利說明】適合轉基因小麥定量檢測的內標準基因引物設計及應用
[0001]本申請是針對申請日為2011-12-21，申請號:201110432297.5，發明名稱:適合轉基因小麥定量檢測的內標準基因引物設計及應用的分案申請。
【技術領域】
[0002]本發明屬於植物檢驗檢疫小麥屬作物、食品、深加工產品轉基因檢測領域，更具體涉及一種利用 Real-time PCR 基於 PSG719 (Ta PSG719gene, FJ497025.1)、UCB (Tu CypBgene, EU868840.1)基因小麥種屬特異性區段設計的用於小麥轉基因定量檢測中內標準基因引物，同時涉及一種轉基因小麥定量的內標準基因引物的設計方法，還涉及一種轉基因小麥定量的內標準基因引物的用途。
【背景技術】
[0003]小麥作為世界第一大作物，由於受到轉基因技術的限制，小麥轉基因研究滯後於其它作物。近年來，我國在小麥轉基因方面也取得了初步的進展，並獲得了一批具有抗病蟲、抗逆境及改善品質的轉基因小麥新材料，部分品系已經進入環境釋放階段(尹鈞，李永春我國小麥轉基因研究的現狀及發展趨勢中國農業信息2009.13-17)。而人們也開始關注食品安全與健康，而與之相對的則是現有的轉基因檢測技術的發展仍然在緩步前行。
[0004]出於對轉基因食品可能存在的未知安全隱患的憂慮，同時也是對消費者知情權的保護，各國政府紛紛立法設立相關的檢測閾值以利於管理(c.A.Carter InternationalApproaches to the Labeling of Genetically Modified Foods Agricultural IssueCenter University of California2003)o
[0005]
【權利要求】
1.一種轉基因小麥定量的內標準基因引物，其序列為:For:ATACCTCCCGCCTGGTGATTGTT ；Rev: TAGTGCTCCCAACAGTTTTCAGACC。
【文檔編號】C12N15/11GK103805711SQ201410088887
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2011年12月21日 優先權日:2011年12月21日
【發明者】廖玉才, 李和平, 趙正喜, 瞿波, 黃濤, 張靜柏, 左東雲, 程偉, 楊鵬 申請人:華中農業大學