灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法
2023-12-01 07:01:01 5
專利名稱：灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及灰樹花多糖提取物的測定方法，尤其涉及灰樹花深層液體發酵液多糖提取物中非活性成分澱粉含量的定量測定方法。
本發明的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，由以下步驟組成1)除去脂溶性成分取烘乾磨碎的待測多糖樣品，分別稱0.5～2克於6個離心杯中，分別加入30ml乙醚，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml乙醚，如此重複離心3次；2)除去可溶性糖類幹擾物質向上述棄去上清液後的離心杯中加入50～60℃的80％乙醇30ml，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，如此重複離心3次；然後再向離心後的杯中加入40～50℃蒸餾水30ml，在40～50℃恆溫水浴中振蕩60分鐘，以4000～5000轉/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重複離心3次；3)酶法分解澱粉向步驟2)棄去上清液後的離心杯中加入5ml蒸餾水，溼潤並攪拌分離出的樣品，再加入80～90℃蒸餾水40ml，攪勻後，置沸水浴中處理50～60分鐘使澱粉糊化；之後冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，並立即加入pH4～6的磷酸鹽緩衝液25ml，再加入甲苯5～7滴，混勻，封口，置於45～48℃條件下保溫20～24小時進行澱粉酶解；4)澱粉酶解檢測取上述澱粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，若顯藍色、紅色或紫色，即為澱粉酶解不完全，應再重複步驟3)的酶法分解澱粉，直至加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為澱粉酶解完全；
5)澱粉酶解液處理將上述完全酶解的澱粉酶解液冷後，用6molL-1NaOH中和至中性，然後邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(0Ac)2溶液，直至澱粉酶解液無白色絮狀沉澱為止；再向澱粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產生白色沉澱為止；以4000-5000轉/分鐘離心5-10分鐘，將上清液轉移入容量瓶，調節pH為9.1～9.6，以測定需求量定容；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理後的澱粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
其中，上述步驟1)或2)所述的振蕩時間是8～12分鐘。
其中，上述步驟2)所述80％乙醇的溫度是55～58℃。
其中，上述步驟2)所述加入的蒸餾水和恆溫水浴的溫度均為45～50℃。
其中，上述步驟3)所述磷酸鹽緩衝液的pH為4.8～5.6。
其中，上述步驟3)所述進行澱粉酶解的溫度是45℃，時間是20小時。
其中，上述步驟5)所述處理後的澱粉酶解液pH為9.3～9.5。
其中，上述步驟6)所述的食品中還原糖的測定方法包括如下步驟①標定鹼性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值，計算每10ml(甲、乙液各5ml)鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量(mg)；②樣品溶液預測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內加熱至沸，趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積。
採用本發明進行灰樹花多糖產品中澱粉含量的測定，具有可操作性強、測定結果穩定可靠、測定結果的變異係數小、誤差小、重現性高等優點。實驗顯示，根據樣品中澱粉含量不同，變異係數一般在5％～10％範圍內。可滿足常規實驗室對分析測試的要求以及相關企業對產品質量的控制要求。
下面結合具體實施方式
對本發明作進一步的說明。
2)除去可溶性糖類幹擾物質向上述棄去上清液後的離心杯中加入57℃的80％乙醇30ml，充分振蕩15分鐘，以5000轉/分鐘離心10分鐘，棄去上清液，如此重複離心3次；然後再向棄去上清液後的離心杯中加入50℃蒸餾水30ml，在50℃恆溫水浴中振蕩60分鐘，以5000轉/分鐘離心5分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重複離心3次；3)酶法分解澱粉向步驟2)棄去上清液後的離心杯中加入5ml蒸餾水，溼潤並攪拌分離出的樣品，再加入90℃蒸餾水40ml，攪勻後，置沸水浴中處理55分鐘使澱粉糊化；之後冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，並立即加入pH 5.2的磷酸鹽緩衝液25ml，再加入甲苯5滴，混勻，封口，置於45℃條件下保溫20小時進行澱粉酶解；4)澱粉酶解檢測取上述澱粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，至結果為加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為澱粉酶解完全；5)澱粉酶解液處理將上述完全酶解的澱粉酶解液冷後，用6molL-1NaOH中和至中性，然後邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液，直至澱粉酶解液無白色絮狀沉澱為止；再向澱粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產生白色沉澱為止；以4000轉/分鐘離心10分鐘，取上清液轉移入250ml容量瓶，調節pH為9.3，定容，設為V2；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理後的澱粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
①標定鹼性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值V0，計算每10ml(甲、乙液各5ml)鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量(mg)；②樣品溶液預測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內加熱至沸，趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積V1。
同時，以同方法做試劑空白試驗。
結果計算澱粉％＝V0*C/(1000mV1)*0.9*100％(式中澱粉含量以葡萄糖計)灰樹花活性多糖中澱粉含量的測定實施例分析結果見附表1。
其中m1——10ml鹼性酒石酸銅溶液(甲、乙液各5ml)相當於還原糖(以葡萄糖計)的質量，mg；m——樣品質量，g；V0——10ml鹼性酒石酸銅溶液(甲、乙液各5ml)消耗的標準葡萄糖溶液體積，ml；V2——定容體積，mlV1——測定樣品時平均消耗樣品溶液體積，ml。
實施例21)除去脂溶性成分取烘乾磨碎的待測多糖樣品(編號為2號)，稱0.943克、1.0392克、0.85克、0.9977克、0.9023克、0.9383克分別放於6個離心杯中，分別加入30ml乙醚，充分振蕩15分鐘，以4000轉/分鐘離心10分鐘，棄去上清液，再加入30ml乙醚，如此重複離心3次；2)除去可溶性糖類幹擾物質向上述棄去上清液後的離心杯中加入50℃的80％乙醇30ml，充分振蕩10分鐘，以5000轉/分鐘離心5分鐘，棄去上清液，如此重複離心3次；然後再向棄去上清液後的離心杯中加入40℃蒸餾水30ml，在45℃恆溫水浴中振蕩60分鐘，以4000轉/分鐘離心10分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重複離心3次；3)酶法分解澱粉；向步驟2)棄去上清液後的離心杯中加入5ml蒸餾水，溼潤並攪拌分離出的樣品，再加入80℃蒸餾水40ml，攪勻後，置沸水浴中處理60分鐘使澱粉糊化；之後冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，並立即加入pH 4.8的磷酸鹽緩衝液25ml，再加入甲苯7滴，混勻，封口，置於48℃條件下保溫24小時進行澱粉酶解；4)澱粉酶解檢測取上述澱粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，至結果為加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為澱粉酶解完全；5)澱粉酶解液處理將上述完全酶解的澱粉酶解液冷後，用6molL-1NaOH中和至中性，然後邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液，直至澱粉酶解液無白色絮狀沉澱為止；再向澱粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產生白色沉澱為止；以4800轉/分鐘離心7分鐘，取上清液轉移入250ml容量瓶，調節pH為9.5，定容，設為V2；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理後的澱粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
①標定鹼性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值V0，計算每10ml(甲、乙液各5ml)鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量(mg)②樣品溶液預測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內加熱至沸，趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積V1。
同時，以同方法做試劑空白試驗。
結果計算澱粉％＝V0*C/(1000mV1)*0.9*100％(式中澱粉含量以葡萄糖計)灰樹花活性多糖中澱粉含量的測定實施例分析結果見附表2。
權利要求
1.一種灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，由以下步驟組成1)除去脂溶性成分取烘乾磨碎的待測多糖樣品，分別稱0.5～2克於6個離心杯中，分別加入30ml乙醚，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml乙醚，如此重複離心3次；2)除去可溶性糖類幹擾物質向上述棄去上清液後的離心杯中加入50～60℃的80％乙醇30ml，充分振蕩5～15分鐘，以4000～5000轉/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，如此重複離心3次；然後再向棄去上清液後的離心杯中加入40～50℃蒸餾水30ml，在40～50℃恆溫水浴中振蕩60分鐘，以4000～5000轉/分鐘離心5～10分鐘，棄去上清液，再加入30ml蒸餾水，如此重複離心3次；3)酶法分解澱粉向步驟2)離心棄去上清液後的杯中加入5ml蒸餾水，溼潤並攪拌分離出的樣品，再加入80～90℃蒸餾水40ml，攪勻後，置沸水浴中處理50～60分鐘使澱粉糊化；之後冷卻至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，並立即加入pH4～6的磷酸鹽緩衝液25ml，再加入甲苯5～7滴，混勻，封口，置於45～48℃條件下保溫20～24小時進行澱粉酶解；4)澱粉酶解檢測取上述澱粉酶解液1滴加入碘溶液1滴進行酶解效果檢測，若顯藍色、紅色或紫色，即為澱粉酶解不完全，應再重複步驟3)的酶法分解澱粉，直至加碘溶液檢測不顯藍色、紅色或紫色為止，即為澱粉酶解完全；5)澱粉酶解液處理將上述完全酶解的澱粉酶解液冷後，用6molL-1NaOH中和至中性，然後邊攪動邊逐滴加入飽和Pb(OAc)2溶液，直至澱粉酶解液無白色絮狀沉澱為止；再向澱粉酶解液中逐滴加入飽和的硫酸鈉溶液，直至不產生白包沉澱為止；以4000-5000轉/分鐘離心5-10分鐘，將上清液轉移入容量瓶，調節pH為9.1～9.6，以測定需求量定容；6)斐林法測定還原糖含量取步驟5)中處理後的澱粉酶解液為樣品，按GB5009.7-85《食品中還原糖的測定方法》直接滴定法，測定樣品中可溶性糖的含量。
2.如權利要求1所述的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其特徵在於，步驟1)或2)所述的振蕩時間是8～12分鐘。
3.如權利要求1所述的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其特徵在於，步驟2)所述80％乙醇的溫度是55～58℃。
4.如權利要求1所述的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其特徵在於，步驟2)所述加入的蒸餾水和恆溫水浴的溫度均為45～50℃。
5.如權利要求1所述的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其特徵在於，步驟3)所述磷酸鹽緩衝液的pH為4.8～5.6。
6.如權利要求1所述的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其特徵在於，步驟3)所述進行澱粉酶解的溫度是45℃，時間是20小時。
7.如權利要求1所述的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其特徵在於，步驟5)所述處理後的澱粉酶解液pH為9.3～9.5。
8.如權利要求1所述的灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其特徵在於，步驟6)所述的食品中還原糖的測定方法包括如下步驟①標定鹼性酒石酸銅溶液吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，控制在2min內加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積，同時平行操作三份，取其平均值，計算每10ml(甲、乙液各5ml)鹼性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量(mg)；②樣品溶液預測吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min內加熱至沸，趁沸以先快後慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，並保持溶液沸騰狀態，待溶液顏色變淺時，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積；③樣品溶液測定吸取斐林試劑甲液及乙液各5.0ml，置於150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預測體積少1ml的樣品溶液，使在2min內加熱至沸，趁沸繼續以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍色剛好褪去為終點，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積。
全文摘要
本發明公開一種灰樹花多糖中澱粉含量的測定方法，其方法包括脂溶性成分除去，可溶性糖類幹擾物質除去，酶法分解澱粉，澱粉酶解檢測，澱粉酶解液處理，斐林法測定還原糖含量等步驟。本發明的方法具有可操作性強、測定結果穩定可靠、測定結果的變異係數小、誤差小、重現性高等優點。
文檔編號G01N31/16GK1474183SQ0313896
公開日2004年2月11日 申請日期2003年8月1日 優先權日2003年8月1日
發明者隋方功, 宋愛榮, 張玉娜, 呂銀燕 申請人:萊陽農學院