一種特立帕肽的製備方法
2023-12-02 18:23:36 1
一種特立帕肽的製備方法
【專利摘要】本發明屬於藥物化學【技術領域】，涉及一種肽的製備方法，具體涉及一種特立帕肽的製備方法。所述方法包括以下步驟：1）採用固相合成法，在固相載體上依照特立帕肽的胺基酸序列從碳端開始順次偶聯胺基酸，偶聯17位絲氨酸時採用Boc-Ser-OH為原料，其中使所述17位絲氨酸的游離羥基與16位天冬醯胺的羧基進行酯縮合，然後再依次偶聯其他胺基酸；2）裂解得到粗肽後，將所述17位絲氨酸和16位天冬醯胺之間的酯鍵轉換為醯胺鍵，得到特立帕肽粗肽溶液。本發明的特立帕肽的製備方法新穎，提高了特立帕肽的純度，且操作簡便實用，總收率高，純度高，成本低，利於工業化生產。
【專利說明】一種特立帕肽的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於藥物化學【技術領域】，涉及一種肽的製備方法，具體涉及一種特立帕肽的製備方法。
【背景技術】
[0002]特立帕肽(Teriparatide)為一種長鏈的多肽藥物,其肽序為:
【權利要求】
1.一種特立帕肽的製備方法，其包括以下步驟: 1)採用固相合成法，在固相載體上依照特立帕肽的胺基酸序列從碳端開始順次偶聯胺基酸，偶聯17位絲氨酸時採用Boc-Ser-OH為原料，並使所述17位絲氨酸的游離羥基與16位天冬醯胺的羧基進行酯縮合，然後再依次偶聯其他保護胺基酸； 2)裂解得到粗肽後，將所述17位絲氨酸和16位天冬醯胺之間的酯鍵轉換為醯胺鍵，得到特立帕肽粗肽溶液。
2.權利要求1的方法，其中所述固相載體為樹脂，優選WangResin。
3.權利要求1的方法，其中所述酯縮合為DMAP催化的酯縮合。
4.權利要求1的方法，還包括純化所述特立帕肽粗肽溶液得到特立帕肽，優選地，使用反向高效液相色譜純化所述特立帕肽粗肽溶液。
5.權利要求1的方法，其中步驟2)包括將所述粗肽在包含NH41、二甲硫醚、TFA和水的反應體系I中進行第一步反應，萃取洗滌得到固體後再在磷酸緩衝液中進行第二步反應，其中所述水優選為純化水。
6.權利要求5的方法，其中所述反應體系I中NH41、二甲硫醚與所述粗肽的摩爾比分別為10-30:1和10-30:1，優選分別為15-25:1和15-25:1，更優選分別為20:1和20:1 ；TFA和水相對於每g粗肽的量分別為20-200ml和20-80ml，優選分別為50_150ml和30_60ml，更優選分別為IOOml和50ml ;在所述反應體系I中進行所述第一步反應的溫度為0°C _15°C，優選0°C -10°C，更優選0°C ;進行第一步反應的時間為30-150分鐘，優選60-120分鐘，更優選90分鐘。
7.權利要求5的方法，其中所述磷酸緩衝液的pH為6.5-8.5，優選7_8，更優選7.4 ;所述磷酸緩衝液的濃度為lOOm.mol/L ;進行所述第二步反應的時間為1_3小時，優選2小時。
8.權利要求1-7任一項的方法，其中所述步驟I)包括以下步驟: a)採用固相合成法，使Fmoc-Phe-OH與固相載體經反應得到Fmoc-Phe-固相載體； b)使所述Fmoc-Phe-固相載體按順序依次偶聯其他胺基酸，一直到偶聯完17位的絲氨酸，得到肽樹脂A，其中偶聯所述17位絲氨酸採用Boc-Ser-OH為原料； c)使所述肽樹脂A中所述17位絲氨酸的游離羥基與Fmoc-Asn(Trt)-OH進行酯縮合，並脫除Fmoc保護基團，得到肽樹脂B ; d)使所述肽樹脂B按順序依次偶聯完其他全部保護胺基酸，並脫除Fmoc保護基團，得到肽樹脂C。
9.權利要求8的方法，其中，在步驟c)中，進行所述酯縮合的反應體系包括所述肽樹脂 A、Fmoc-Asn (Trt) -OH、HOBt, DIC 和 DMAP，優選地，Fmoc-Asn (Trt) -OH、HOBt 和 DIC 與所述肽樹脂A的摩爾比均為1-10: I，均更優選3-6:1，均最優選4: I ；DMAP與所述肽樹脂A的摩爾比為0.1-1.0:1，優選0.3-0.6:1，更優選0.4:1 ;進行所述酯縮合的反應時間為1_3小時，優選2小時。
10.權利要求8的方法，其中，在步驟c)中，進行所述酯縮合的反應體系包括所述肽樹脂 A、Fmoc-Asn (Trt) -OH、HOAt, DIC 和 DMAP，優選地，Fmoc-Asn (Trt) -OH、HOAt 和 DIC 與所述肽樹脂A的摩爾比均為1-10: I，均更優選3-6:1，均最優選4: I ；DMAP與所述肽樹脂A的摩爾比為0.1-1.0:1，優選0.3-0.6:1，更優選0.4:1 ;進行所述酯縮合的反應時間為1_3小時，優選2小時。
【文檔編號】C07K1/04GK103467595SQ201310403743
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月6日 優先權日:2013年9月6日
【發明者】朱日成, 宓鵬程, 馬亞平, 袁建成 申請人:深圳翰宇藥業股份有限公司