一種鑑別點籃子魚精子活力的方法

2023-05-01 10:44:01 1

專利名稱：一種鑑別點籃子魚精子活力的方法
技術領域：
本發明屬於水產養殖技術領域，尤其涉及到一種鑑別點籃子魚精子活力的方法。
背景技術：
在生產實踐中，魚類精子活力的好壞是反應受精率高低的重要指標之一，因此，客 觀準確評價魚類精子的活力具有非常重要的理論意義與應用價值。在評價魚類精子活力 時，目前主要有以下幾種方法一、利用普通顯微鏡觀察記錄精子的活動狀況和運動時間， 這種方法受人為因素的影響較大，不能客觀反應精子的活動狀況；二、利用魚類精子直接開 展受精試驗，統計受精率、孵化率、出膜率等，這種方法受外界環境因子影響較多，且隨著不 同魚類的早期發育時間的長短試驗周期會有較大變化；三、最近又開發出一套計算機輔助 分析系統(CASA)，用於分析精子的運動速率和運動距離等，這種方法能客觀反應精子的活 動情況，但儀器設備較為昂貴。

發明內容
本發明需要解決的問題是提供一種避免受人為因素、外界環境因子的影響，能客 觀準確評價、鑑別點籃子魚精子活力的方法。本發明的技術方案是在點籃子魚的繁殖季節，分批採集一定量的精子，用試劑盒 分別測定不同批次精子中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、穀胱甘肽還原酶和穀胱甘肽過氧 化物酶的活性，如果精子中超氧化物歧化酶的活性高於421. 68士 12. 66U/ml，過氧化氫酶 的活性高於121. 17士 15. 04U/ml,穀胱甘肽過氧化物酶的活性高於55. 22士2. llU/min. ml，穀胱甘肽還原酶的活性高於239. 33士22. 24U/L，判斷為精子活力較好；如果精子中超 氧化物歧化酶的活性介於199. 56士50. 55U/ml和421. 68士 12. 66U/ml之間，過氧化氫酶 的活性介於74. 60 士 12. 70U/ml和121. 17 士 15. 04U/ml之間，穀胱甘肽過氧化物酶的活 性介於28. 15士 1. 78U/min. ml和55. 22士2. llU/min. ml之間，穀胱甘肽還原酶的活性介 於163. 54士 17. 14U/L和239. 33士22. 24U/L之間，則判斷為精子活力一般；如果精子中超 氧化物歧化酶的活性低於199. 56士50. 55U/ml,過氧化氫酶的活性低於74. 60士 12. 70U/ ml，穀胱甘肽過氧化物酶的活性低於28. 15士 1.78U/min. ml，穀胱甘肽還原酶的活性低於 163. 54士 17. 14U/L，則判斷為精子活力差。本發明針對不同活力的點籃子魚精子進行酶活性檢測，根據酶活性的高低建立了不同活力的點籃子魚精子相關能量代謝酶的活性數據，並提供了鑑別點籃子魚精子中超氧 化物歧化酶、過氧化氫酶、穀胱甘肽還原酶和穀胱甘肽過氧化物酶的活性的相應區分數據， 通過精子相關能量代謝酶活性檢測，用本方法的區分數據來鑑別點籃子魚精子的活力。本 方法與現有方法相比，減少了通過人為觀察判斷的主觀因素，可檢測樣本數量大，所需時間 短，而且鑑別準確率達到98%以上。利用本方法鑑別出的不同活力的精子開展受精試驗，活 力好的精子受精率可達到95%以上，活力一般的精子受精率只有50%左右，活力差的精子 基本無受精能力。本方法所用儀器設備簡單，只需一臺普通的分光光度計，成本低廉，不需要昂貴的儀器設備。
具體實施例方式
在點籃子魚的繁殖季節，分批採集點籃子魚的精子，每批次取5尾魚精子，用試劑盒(南京建成生物工程研究所出品的試劑盒)在分光光度計下分別測定不同批次精子中 超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、穀胱甘肽還原酶(GR)和穀胱甘肽過氧化物酶 (GSH-PX)的活性，每個樣重複三次，結果取平均值，運用統計軟體對結果進行分析處理，如 果精子中SOD的平均活性高於421. 68士 12. 66U/ml，CAT的活性平均高於121. 17士 15. 04U/ ml，GSH-PX 的平均活性高於 55. 22 士 2. 1IU/ (min. ml)，GR 的活性高於 239. 33 士 22. 24U/ L，判斷為精子活力較好；如果精子中SOD的平均活性介於199. 56 士 50. 55U/ml和 421. 68士 12. 66U/ml 之間，CAT 的平均活性介於 74. 60士 12. 70U/ml 和 121. 17士 15. 04U/ml 之間，GSH-PX 的平均活性介於 28. 15士 1. 78U/ (min. ml)和 55. 22士2. IlU/ (min. ml)之間， GR的平均活性介於163. 54士 17. 14U/L和239. 33士22. 24U/L之間，則判斷為精子活力一般； 如果精子中SOD的平均活性低於199. 56士50. 55U/ml，CAT的平均活性低於74. 60士 12. 70U/ ml, GSH-PX 的平均活性低於 28. 15 士 1. 78U/ (min. ml), GR 的平均活性低於 163. 54 士 17. 14U/ L，則判斷為精子活力差。
權利要求
一種鑑別點籃子魚精子活力的方法，配備試劑盒、分光光度計，其特徵是在點籃子魚的繁殖季節，分批採集一定量的精子，用試劑盒分別測定不同批次精子中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、穀胱甘肽還原酶和穀胱甘肽過氧化物酶的活性，如果精子中超氧化物歧化酶的活性高於421.68±12.66U/ml，過氧化氫酶的活性高於121.17±15.04U/ml，穀胱甘肽過氧化物酶的活性高於55.22±2.11U/min.ml，穀胱甘肽還原酶的活性高於239.33±22.24U/L，為精子活力較好；如果精子中超氧化物歧化酶的活性介於199.56±50.55U/ml和421.68±12.66U/ml之間，過氧化氫酶的活性介於74.60±12.70U/ml和121.17±15.04U/ml之間，穀胱甘肽過氧化物酶的活性介於28.15±1.78U/min.ml和55.22±2.11U/min.ml之間，穀胱甘肽還原酶的活性介於163.54±17.14U/L和239.33±22.24U/L之間，則為精子活力一般；如果精子中超氧化物歧化酶的活性低於199.56±50.55U/ml，過氧化氫酶的活性低於74.60±12.70U/ml，穀胱甘肽過氧化物酶的活性低於28.15±1.78U/min.ml，穀胱甘肽還原酶的活性低於163.54±17.14U/L，則為精子活力差。
2.根據權利要求1所述的一種鑑別點籃子魚精子活力的方法，其特徵是測定每批次取 5尾魚精子。
全文摘要
一種鑑別點籃子魚精子活力的方法，涉及水產養殖技術領域，需要提供一種鑑別點籃子魚精子活力的方法，本發明配備試劑盒、分光光度計，其特徵是在點籃子魚的繁殖季節，分批採集一定量的精子，用試劑盒分別測定不同批次精子中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、穀胱甘肽還原酶和穀胱甘肽過氧化物酶的活性來區分精子活力較好、一般或活力差。本發明用於鑑別點籃子魚精子活力。
文檔編號C12Q1/28GK101838678SQ20091004765
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月16日 優先權日2009年3月16日
發明者馮廣朋, 劉鑑毅, 姚志峰, 莊平, 張濤, 江琪, 章龍珍, 趙峰, 閆文罡, 黃曉榮 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所