一種外用大黃脂質體及其製備方法和用途的製作方法

2023-05-19 04:03:01 1

專利名稱：一種外用大黃脂質體及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種外用大黃脂質體，屬藥物領域。
背景技術：
脂質體是由脂質分散在水中形成的定向排列的雙分子層囊泡，脂質雙分子膜以同心圓的形式包封而形成微球狀體。由於脂質體具有兩性分子的性質，表面很容易就能被修飾，並且良好的生物相容性使得其有驚人的溶解力。脂質體具有雙重特性-親水性和疏水性，可以較好的包裹親水性物質和親脂性物質。1971年英國Gregoriadis和Rymen等人開始將脂質體用於藥物載體，此後人們開始廣泛運用脂質體包裹藥物。藥物被脂質體包封后，具有靶向性、緩釋性、組織親和性、降低藥物毒性和提高藥物穩定性等特點。因脂質體是類似生物膜結構的囊泡，對正常細胞和組織無損害和抑制作用，有細胞親和性與組織相容性，並可長時間吸附於靶細胞周圍，使藥物能充分向靶細胞靶組織透過，脂質體也可通過融合進入細胞內，經溶酶體消化釋放藥物，脂質體在藥物傳遞系統(drug delivery system, DDS) 中的重要性不言而喻。近年來為了改善脂質體的靶向性和體內外穩定性，人們還研究了許多新型的脂質體溫度敏感脂質體、酸度敏感脂質體、長循環脂質體、光敏感脂質體、免疫脂質體、多糖脂質體、磁性脂質體、前體脂質體。與凝膠製劑相比，脂質體組的滲透速率常數Pm 較凝膠組大，說明脂質體製劑較凝膠製劑的透皮速率高。其可能的機制是脂質體能增加角質層溼化和水合作用，使角質細胞間結構改變，脂質雙層中疏水性尾部排列紊亂，藥物通過擴散等作用進入細胞間質；同時脂質體的磷脂與表皮脂質屏障中的脂質層融合，使角質層脂質組成和結構改變，形成一種扁平的顆粒狀結構，使其屏障作用發生逆轉，包封有藥物的脂質體可順利通過這些脂質顆粒的間隙，而促進藥物透皮吸收；另外脂質體可經皮脂腺、汗腺、毛囊甚至直接穿透皮膚角質層進入皮膚深層、皮下組織，達到透皮作用。開發脂質體用作局部給藥的載體，可使藥物具有較大的皮膚透過量，有效地使藥物滲透入局部深層組織， 避免因透入藥量不足引起的療效欠佳；同時還可以減少藥物在全身其它部位，尤其是在血液、胃腸、肝組織的分布，使得藥效加強的同時減少藥物副反應。但是，並非任何藥物均適合製備成脂質體，脂質體中藥物的性質決定了製備的脂質體的質量，如脂質體中藥物的滲漏和穩定性。如鄧英傑等在試驗研究證明，一般具有較高油水分配係數P。。t值的藥物都能成功地包封在脂質體中，並具有較高的包封率，是適合於脂質體劑型的理想藥物。而對於那些不具備適當的油水分配係數的藥物，可以在保留藥物活性的前提下，改變藥物的化學結構，使藥物成為具有適當油水分配係數和藥物活性的衍生物，將這種衍生物包封在脂質體中比原藥物效果好。此外，脂質體的結構類型決定了脂質體的質量，脂質體粒徑越小越穩定，同時需要考慮包封率，通常在保護脂質體高包封率的前提下，製備較高穩定性的脂質體。因此，目前製備成脂質體的藥物通常是用量較少，藥效明確的化合物。而中藥提取物由於其中的成分複雜，製備成脂質體通常比較複雜，且很難滿足脂質體的質量要求，目前報導的中藥提取物的脂質體也較少。大黃為蓼科植物掌葉大黃Iiheum palmatum L.、唐古特大黃IiheumtanguticumMaxim, ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的乾燥根及根莖。性味歸經苦， 寒。歸脾、胃、大腸、肝、心包經。功能主治瀉熱通腸，涼血解毒，逐瘀通經。用於實熱便秘， 積滯腹痛，瀉痢不爽，溼熱黃疸，血熱吐衄，目赤，咽腫，腸癰腹痛，癰腫疔瘡，瘀血經閉，跌打損傷，外治水火燙傷；上消化道出血。酒大黃善清上焦血分熱毒。用於目赤咽腫，齒齦腫痛。熟大黃瀉下力緩，瀉火解毒。用於火毒瘡瘍。大黃炭涼血化瘀止血。用於血熱有瘀出血者。大黃性寒味苦，除內服具有瀉毒熱、破積滯、行瘀血功效外，還有很強的抗菌作用。試驗證實，大黃對多數革蘭氏陽性和某些革蘭氏陰性細菌均有抗菌作用；對金黃色葡萄球菌、 鏈球菌、白喉、枯草、炭疽桿菌以及傷寒、副傷寒、痢疾桿菌和致病真菌均有抑制作用，故常外用療疾。外用可治療口腔炎、口唇潰瘍及毛囊炎；治臁瘡(下肢潰瘍)；治水火燙傷；治癰腫疼痛生大黃適量研細末，以白酒調和敷癰腫處，乾燥後換藥；治凍瘡皮膚潰爛；治腸腹脹氣。從大黃乙醇提取物中分離到10個化合物，鑑定了其中的6個化合物，分別為大黃酚 (chrysophanol)，大黃素甲醚(physcion)，大黃素(emodin)，戸菩大黃素(aloe-emodin)， 大黃酸(rhein)，大黃酚。游離型蒽醌具有抗菌活性、抗炎抗病毒作用和抗腫瘤作用，大黃蒽醌類成分多數呈黃色，易溶於乙醇，是產生抗菌等藥效的主要成分。
目前將大黃製備的脂質體通常是選擇大黃中的單一化合物，如將其中的有效成分大黃素製備的脂質體。顧宜等報導了採用薄膜-超聲分散法製備脂質體(大黃素納米脂質體的製備和質量評價，第四軍醫大學學報，2003 ;24 ( )，具體方法是取處方量的大黃素、膽固醇、磷脂於250mL圓底燒瓶中，加氯仿20ml溶解，於旋轉蒸發儀上減壓蒸發除去氯仿，加入60g. Γ1葡萄糖液IOml得脂質體粗混懸液，冷水浴超聲2次，每次1. Omin, 0. Sum微孔濾膜過濾，得到脂質體膠體溶液。雷瑤，等，大黃素脂質體對Hep-2細胞毒的檢測，《武漢大學學報理學版》，2006年52卷2期，證明說明大黃素脂質體對!fep-2細胞的生長存在抑制作用.莫穗林，等，大黃素磁性納米脂質體的研製，《中藥材》，2005年觀卷9期，為了提高大黃素在體內的生物利用度，研製大黃素磁性納米脂質體。方法用薄膜-超聲法製備大黃素磁性納米脂質體。結果大黃素磁性納米脂質體粒徑100 300mm.包封率33. 75%。雖然大黃素是單一的化學成分，但是按常規製備方法製備得到的脂質體的包封率也不高，要製備成合格的脂質體難度較大。也有文獻報導採用大黃甲醇提取物製備的脂質體，如，申請號 01107203. 2，發明名稱一種治療蟎蟲感染性皮膚疾病的外用脂質體製劑，該發明為以草本植物大黃提取物和甲硝唑為主要活性成份，用於治療皮膚蟎蟲感染引發的蟎性皮膚疾病的外用脂質體製劑。本外用製劑對治療蟎性皮炎，蟎性痤瘡和「酒渣鼻」等常見皮膚疾病療效確切，且具有良好的皮膚賴受性和接受度，無刺激性和毒副作用。其中，所述的大黃提取物是大黃甲醇提取物，它的製備方法是取大黃的根或莖粉碎後，以甲醇做有機溶劑，於索式脂肪提取器中50°C _70°C循環提取2小時，有機提取液減壓下低溫蒸發，殘餘溶劑65°C溫度烘箱乾燥，得提取物。其脂質體的製備方法是將大黃提取物、克磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、 膽固醇及甲硝唑溶解於甲醇溶液、混合物溶液於0. OSmPa負壓，40°C下，減壓旋轉5小時蒸發有機溶液，容器中加入緩衝溶液，立即於往復式震蕩器上震蕩2小時，得到白色微有黏度的液態製劑。該方法是製備脂質體的常規方法，由於大黃甲醇提取物是由許多已知和未知成分組成的複合物，僅採用常規方式，能不能製備成合格的脂質體，是很難知曉的，且該專利說明書中並沒有進行對製備的產物指標的檢測，如包封率等，不能證明按該方法就能製備得到合格的大黃脂質體。目前，將大黃中的多種有效成分同時包入同一脂質體是尚未解決的技術難題。

發明內容
本發明的技術方案是提供了一種大黃脂質體，它是由大黃無水乙醇提取物製備而成的脂質體。本發明的另一技術方案是提供了該大黃脂質體的製備方法和用途。本發明提供了一種大黃脂質體，它是由大黃無水乙醇提取物、卵磷脂、膽固醇為原料製備而成，其重量配比為大黃無水乙醇提取物，以大黃藥材計6000-25000份、卵磷脂30_70份、膽固醇 30-70 份。進一步優選地，它是由下述重量配比的原料製備而成大黃無水乙醇提取物，以大黃藥材計15000份、卵磷脂50份、膽固醇50份。其中，所述的大黃無水乙醇提取物中含有大黃素0. 1-0. 3mg/ml。所述的脂質體中含有大黃素0. 22-0. 53mg/g,大黃酸0. 24-0. 67mg/g、大黃酚 0. 39-0. 89mg/g、大黃素甲醚 0. 15-0. 37mg/g。本發明還提供了一種製備所述的大黃脂質體的方法，它包括如下步驟a、製備大黃無水乙醇提取物稱取大黃粉末，加入無水乙醇，水浴回流提取，得大黃醇提液；b、取卵磷脂和膽固醇，加入氯仿，混勻，得膜材氯仿溶液；C、攪拌大黃醇提液，將膜材氯仿溶液注入大黃醇提液中，得含藥氯仿-乙醇膜材溶液；d、除盡氯仿，得含藥乙醇膜材；e、將含藥乙醇膜材以3 4滴/秒的速度滴入40-80mg/ml葡萄糖溶液中，得藥脂混合溶液；f、除去乙醇，得大黃脂質體溶液；微孔濾膜過濾，冷藏，即得脂質體。其中，d步驟所述的除盡氯仿的方法為水浴旋蒸法，操作步驟為先在水浴溫度 37°C，轉速20r/min，真空度0. 07MPa的條件下旋蒸至旋轉蒸發儀冷凝管上無液滴滴下，再升溫至42 °C，繼續旋蒸。其中，f步驟所述的除去乙醇的方法為水浴旋蒸法，操作步驟為先在水浴溫度 470C，轉速20r/min，真空度0. 07Mpa條件下旋蒸至旋轉蒸發儀的冷凝管上無液滴滴下，再升溫至 52 °C -65 °C。本發明還提供了所述的大黃脂質體在製備止痛、消炎的外用藥物中的用途。本發明還提供了一種用於止痛、消炎的外用藥物組合物，它是由所述的大黃脂質體，加入藥學上可接受的輔料或輔料性成分製備而成的外用製劑。其中，所述的外用製劑是散劑、膏劑、噴霧劑。以往對中藥脂質體的製備幾乎都是對某味藥其中的一種有效成分進行脂質體的製備，而這本身就有悖中藥的作用機制——中藥的藥效是複方中各種成分的功效和作用機制相互作用的結果——不能片面地從中草藥的單一品種或成分的單一藥理作用來判定複方的作用，中藥複方的重要性是必須加以強調的。本發明藥物中原料脂質體不是對單味藥中的單一成分進行脂質體製備，而是同時將單味藥中多種有效成分同時包入同一脂質體，這樣就能儘量避免由於成分不完整而導致的中藥藥效的降低或改變。本發明選擇含量較大且較穩定的大黃素作為大黃脂質體的評價標準，但並不是對大黃中的單一成分大黃素進行脂質體製備，而是對大黃醇提液中多種有效成分進行脂質體製備。本發明大黃脂質體的平均粒徑為86. 12nm，在60g. L—1的葡萄糖分散介質中能穩定存在，以大黃素為指標的包封率平均可達83. 52%。脂質體粒徑分布小且均勻，穩定，包封率高，提高了透皮吸收效率，並能通過對其進行不同的後期修飾達到不同的靶向性，同時也為製成直接塗敷的各種製劑打下基礎。顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。


圖1.大黃脂質體粒度分布2大黃素標準曲線圖
具體實施例方式實施例1本發明藥物脂質體的製備1. 1實驗材料膽固醇(Solarbio)；卵磷脂(Solarbio)；Sephadex G-50medium(Solarbio)； 大黃粉末(四川省中藥飲片有限責任公司，批號20081110)；大黃素對照品(編號 110756-200110)；磷酸二氫鉀(批號20071212)、磷酸氫二鉀(批號20080920)、十二烷基苯磺酸鈉(批號20081109)、葡萄糖粉末、碳酸氫鈉均為成都市科龍化工試劑廠所制；枸櫞酸 (廣東省臺山市新寧製藥廠，批號20011201)；無水乙醇、甲醇、氯仿、磷酸(批號20071203) 等均為成都市科龍化工試劑廠所制分析純試劑；甲醇(色譜純，Tedia Company USA, 1000ml 裝)，水為純淨水。1. 2實驗儀器島津高效液相色譜儀(LC-IOAtvp進樣泵；SPD_M10Avp 二級管整列紫外檢測器； SIL-IOAdvp自動進樣器；CTD-lOAsvp柱溫箱；SCL-lOAvp系統控制器；CLASSvp工作站)；CW 色譜柱O50X460mm 5mioron ；phenomenex)；粒度分布儀；TG16-WS臺式高速離心機(湘儀離心機廠)；85-2型恆溫磁力攪拌器(上海司樂儀器有限公司)；R-201型旋轉蒸發儀(上海申順生物科技有限公司)；水浴鍋(上海申順生物科技有限公司)；KQ-300DE型超聲儀 (崑山市超聲儀器有限公司)；SHB-III循環水式多用真空泵(鄭州長城科技工貿有限公司)；微孔濾膜(0. 45 μ m有機膜，直徑50mm，上海市新亞淨化器件廠)。1. 3 方法1.3. 1有效成分的提取稱取處方比例的大黃粉末15g，置燒瓶中。加入10倍量無水乙醇，80°C水浴，微沸， 回流提取池。藥液真空抽濾。
1. 3. 2大黃納米脂質體的製備按重量比1 1的比例精密稱取卵磷脂和膽固醇各50. Omg，加入15ml氯仿，緩慢攪拌，混勻，使膽固醇和卵磷脂充分溶解，得膜材氯仿溶液。取1. 3. 1中大黃醇提液的續濾液40ml於燒杯中；溫和磁力攪拌下，用注射器取膜材氯仿溶液，針頭置於醇提液液面下，緩慢注入，即得含藥的氯仿-乙醇膜材溶液。溶液轉移至250ml燒瓶中，置旋轉蒸發儀旋蒸 (水浴溫度37°C，轉速20r/min，真空度0. 07MPa)，旋蒸至旋轉蒸發儀冷凝管上無液滴滴下， 再升溫至42°C，繼續旋蒸除盡氯仿，得含藥乙醇膜材40ml。稱取6. Og的葡萄糖，用少量純化水攪拌使完全溶解，轉移至IOOml容量瓶，純化水定容，搖勻，得60mg/ml葡萄糖溶液；取 35ml葡萄糖溶液置燒杯中，磁力攪拌下，用注射器將含藥乙醇膜材溶液以3 4滴/秒的速度緩慢滴入葡萄糖溶液中，待分散均勻，即得藥脂混合溶液。轉移至250ml燒瓶，旋蒸(水浴溫度47°C，轉速20r/min，真空度0. 07MPa)至旋轉蒸發儀的冷凝管上無液滴滴下後，將水浴鍋溫度升至52攝氏度，直到乙醇除盡，得到大黃脂質體溶液。將大黃脂質體溶液用0. 45 μ m 微孔濾膜過濾，濾液置於小玻璃瓶中，4-8°C冷藏，待用。為避免葡萄糖水化燒瓶壁上膜不完全的現象，不能直接將藥物膜材乙醇溶液旋蒸成膜後再水化，由於乙醇與水互溶，故將其滴加至葡萄糖溶液中，再旋蒸除去乙醇，能達到了膜材水化形成脂質體的效果，並且避免了洗膜不徹底的問題。實施例2本發明脂質體的製備取大黃6g，卵磷脂和膽固醇各30. Omg,葡萄糖1. Sg,按實施例1的方法製備成大黃脂質體。實施例3本發明脂質體的製備取大黃25g，卵磷脂和膽固醇各70. Omg,葡萄糖2. 4g，按實施例1的方法製備成大黃脂質體。實施例4本發明脂質體製備中膽固醇、卵磷脂的配比篩選試驗按實施例1的方法，比較不同膽固醇卵磷脂比例下的大黃脂質體包封率取相同量的大黃醇提液，按本方法製備大黃脂質體及測定包封率，結果如下(n = 3)
權利要求
1.一種大黃脂質體，其特徵在於它是由下述重量配比的原料及輔料製備而成，其重量配比為大黃無水乙醇提取物，以大黃藥材計6000-25000份、卵磷脂30-70份、膽固醇30-70份。
2.根據權利要求1所述的大黃脂質體，其特徵在於它是由下述重量配比的原料製備而成大黃無水乙醇提取物，以大黃藥材計15000份、卵磷脂50份、膽固醇50份。
3.根據權利要求1或2所述的大黃脂質體，其特徵在於所述的大黃無水乙醇提取物中含有大黃素0. 1-0. 3mg/ml。
4.根據權利要求1-3任意一項所述的大黃脂質體，其特徵在於它含有大黃素0. 22-0. 53mg/g、大黃酸 0. 24-0. 67mg/g、大黃酚 0. 39-0. 89mg/g、大黃素甲醚 0. 15-0. 37mg/ g°
5.一種製備權利要求1-4任意一項所述的大黃脂質體的方法，它包括如下步驟a、製備大黃無水乙醇提取物稱取大黃粉末，加入無水乙醇，水浴回流提取，得大黃醇提液；b、取卵磷脂和膽固醇，加入氯仿，混勻，得膜材氯仿溶液；c、攪拌大黃醇提液，將膜材氯仿溶液注入大黃醇提液中，得含藥氯仿-乙醇膜材溶液；d、除盡氯仿，得含藥乙醇膜材；e、將含藥乙醇膜材以3 4滴/秒的速度滴入40-80mg/ml葡萄糖溶液中，得藥脂混合溶液；f、除去乙醇，得大黃脂質體溶液；微孔濾膜過濾，冷藏，即得脂質體。
6.根據權利要求5所述的大黃脂質體的製備方法，其特徵在於d步驟所述的除盡氯仿的方法為水浴旋蒸法，操作步驟為先在水浴溫度37°C，轉速20r/min，真空度0. 07MI^的條件下旋蒸至旋轉蒸發儀冷凝管上無液滴滴下，再升溫至42 °C，繼續旋蒸。
7.根據權利要求5所述的大黃脂質體的製備方法，其特徵在於f步驟所述的除去乙醇的方法為水浴旋蒸法，操作步驟為先在水浴溫度47°C，轉速20r/min，真空度0. 07Mpa條件下旋蒸至旋轉蒸發儀的冷凝管上無液滴滴下，再升溫至52°C _65°C。
8.權利要求1-4任意一項所述的大黃脂質體在製備止痛、消炎、消腫的外用藥物中的用途。
9.一種用於止痛、消炎、消腫的外用藥物組合物，它是由權利要求1-4任意一項所述的大黃脂質體，加入藥學上可接受的輔料或輔料性成分製備而成的外用製劑。
10.根據權利要求9所述的藥物組合物，其特徵在於；所述的外用製劑是散劑、膏劑、噴霧劑。
全文摘要
本發明提供了一種大黃脂質體，它是由大黃無水乙醇提取物、卵磷脂、膽固醇為原料製備而成，其重量配比為大黃無水乙醇提取物，以大黃藥材計6000-25000份、卵磷脂30-70份、膽固醇30-70份。本發明還提供了該大黃脂質體的製備方法和用途。本發明還提供了含有該大黃脂質體的藥物組合物。本發明脂質體粒徑分布小，均勻，質量穩定，包封率高，能夠提高透皮吸收效率，並能通過對其進行不同的後期修飾達到不同的靶向性，同時也能製成直接塗敷的各種製劑。
文檔編號A61K9/12GK102151302SQ20101908703
公開日2011年8月17日 申請日期2010年2月11日 優先權日2010年2月11日
發明者唐堯, 宋毅 申請人:四川大學華西醫院