一種測定果蔬醬中棒麴黴素的方法

2023-05-05 22:27:46 1

專利名稱：：一種測定果蔬醬中棒麴黴素的方法
技術領域：
：本發明屬於食品安全檢測領域，具體涉及食品中有害毒素化合物的檢測方法，特別是涉及一種快速檢測果蔬醬中棒麴黴素的方法領域。
背景技術：
：棒麴黴素(Patulin，PAT)，又稱展青黴素。化學名稱4-羥基-4H-呋喃(3，2_c)並吡喃_2(6H)酮(4-hydroxy-4H-Furo[3，2-c]Pyran-2(6H)-One)，是屬於真菌毒素的一類有毒化合物，主要是青黴屬(Penicillium)、麴黴屬(Aspergillus)和絲衣黴(Byssochlamys)等多種真菌的次生代謝產物，有強烈的抗菌活性，對動物的細胞和組織有很強的毒性，具有潛在的致癌、致畸和致突變性，主要存在於蘋果、梨和葡萄。歐盟規定果汁、特別是蘋果汁及含蘋果汁的酒精飲料中，棒麴黴素最大限量為50iig/L，固體蘋果產品中，棒麴黴素最大限量為25iig/L，兒童用蘋果汁和嬰兒食品中，棒麴黴素最大限量為10iig/L。目前，測定棒麴黴素的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜法(GC-MS)、高效液相色譜_質譜法(HPLC-MS)。尚未出臺國家標準方法，僅有行業標準，SN/T2008-2007《進出口果汁中棒麴黴毒素的檢測方法_高效液相色譜法》規定了棒麴黴毒素測定的HPLC法，SN/T1859-2007《飲料中棒麴黴素和5-羥甲基糠醛的測定方法_液相色譜_質譜法和氣相色譜_質譜法》規定了棒麴黴素測定的GC-MS法、HPLC-MS法。上述方法均為測定果汁飲料中尤其是蘋果汁中的棒麴黴素，未見有關果蔬醬中棒麴黴素的測定方法。其中GC-MS法均採用N，O-雙三甲基矽基三氟乙醯胺(BSTFA)為衍生劑，為了降低檢測限，分別採用增加稱樣量，大體積溶劑提取，液_液分配淨化，多個離子面積和來定量，方法存在過程冗長，操作步驟繁瑣，費時，試劑用量大等不足。用目前公開的果汁飲料中檢測棒麴黴素的方法不適宜應用在果蔬醬中棒麴黴素的檢測，國內外也未見有關快速、簡便、靈敏度高、準確、專一、耐用的測定果蔬醬中棒麴黴素的方法的報導。因此，探索和研究快速，靈敏、準確、專一、耐用的果蔬醬中棒麴黴素的方法，對於維護食品安全，保護人民的身體健康和消費者的合法權益，促進食品行業的快速發展均具有重要意義。
發明內容針對現有測定棒麴黴素方法存在過程冗長，操作步驟繁瑣，費時，試劑用量大等不足，也未見有關快速、簡便、靈敏度高、準確、專一、耐用的測定果蔬醬中棒麴黴素的方法的報導。本發明的目的在於提供了一種測定果蔬醬中棒麴黴素的快速，簡便、靈敏、準確、專一、耐用的確證和定量方法。本發明具體提供了一種測定果蔬醬中棒麴黴素的確證和定量方法。本發明的技術方案通過採用N-甲基N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)為衍生劑，DB-35MS為色譜柱，建立了GC-MS法測定果蔬醬中棒麴黴素的高靈敏4度方法，用乙酸乙酯-正己烷提取果蔬醬中棒麴黴素，碳黑小柱淨化。通過選擇性離子監測(SIM)模式選擇離子的優化，消除果蔬醬基質影響，增強抗幹擾能力，降低檢測限和定量重現性。本發明具體提供了一種快速測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，果蔬醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜_質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克果蔬醬於離心管中，加水0.5-3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入0.5-2克海沙，4-8克無水硫酸鈉和0.5_2克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min。移取4mL上清液至乙酸乙酯活化碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，3-7mL乙酸乙酯洗脫。在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加入50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應l-7min，冷卻，供氣相色譜-質譜測定。該方法是一種快速，簡便、靈敏、準確、專一、耐用的確證和定量方法，廣泛應用於果蔬醬中棒麴黴素檢測領域。本發明優先選用衍生化試劑為N-甲基N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)+特丁基二甲基矽基氯矽烷(TBDMCS)(99+1，V/V)。本發明中隔墊密封優先採用PTFE/矽橡膠/PTFE隔墊密封。同時，本發明通過系列實驗驗證了上述測定棒麴黴素的方法適用山楂醬、草莓醬、蘋果醬、藍莓醬等各種果醬和蔬菜醬。進一步，本發明提供測定番茄醬中棒麴黴素的確證和定量方法，優選技術方案步驟如下稱取2.00克番茄醬於15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加水3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1克海沙，5克無水硫酸鈉和1克碳酸氫鈉，劇烈振搖混合2min，4500r/min離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)小柱，移取4mL上清液至小柱，用加有30iiL冰乙酸的10mL刻度試管接受洗脫液，用4mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150yL溶解液至1.5mL螺紋口高回收率樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應3min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。進一步，本發明提供測定杏醬中棒麴黴素的確證和定量方法，優選技術方案步驟如下稱取2.00克杏醬於15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，加水3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1克海沙，5克無水硫酸鈉和1克碳酸氫鈉，劇烈振搖混合2min，4500r/min離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)小柱，移取4mL上清液至固相萃取小柱，用加有30iiL冰乙酸的lOmL刻度試管接受洗脫液，用4mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150yL溶解液至1.5mL螺紋口高回收率樣品瓶中，加入50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應3min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。本領域所熟知，棒麴黴素易溶於水、乙酸乙酯、丙酮、乙醇及氯仿，微溶於乙醚和苯，不溶於石油醚，其水溶液易分解，在有機溶劑中相對穩定。現有技術報導的提取溶劑有乙酸乙酯、乙酸乙酯_正己烷溶液(60+40，V/V)、乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)。本發明綜合考慮果蔬醬的特性和對後續的淨化有利，選擇乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)為提取溶劑，同時加入海沙、無水硫酸鈉和碳酸氫鈉，加入碳酸氫鈉的目的是為了除去酚類物質，加入海沙是為了提高提取效率，加入無水硫酸鈉使液_液分配更加完全，提高棒麴黴素的萃取率。同時，本發明在確定色譜條件的技術環節中，比較了棒麴黴素特丁基二甲基矽烷(TBDMS)衍生物在DB-1、DB-5、DB-1701P、DB-35MS四種色譜柱的分離效果，發現棒麴黴素TBDMS衍生物在DB-1、DB-5、DB-1701P色譜柱上出現拖尾，靈敏度低，在DB-35MS色譜柱峰形尖銳、對稱，靈敏度最高，本發明最終選定DB-35MS色譜柱。使用本發明的上述樣品提取和淨化方法及DB-35MS色譜柱，在棒麴黴素TBDMS衍生物出峰的時間窗口無幹擾，半峰寬為0.025min，確保了本發明測定杏醬中棒麴黴素的確證和定量方法的高質量。眾所周知，現有技術報導的淨化方法主要有三類，一類為液_液萃取，加入碳酸鈉溶液淨化；一類為液體樣品直接加到C18、OASISHLB、聚苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)共聚物等固相萃取小柱上提取淨化；等固相萃取小柱上提取淨化；一類為固相萃取法，使用矽膠固相萃取小柱，氰基固相萃取小柱，矽膠+弗羅裡矽土固相萃取小柱等。果蔬醬中含有大量的色素，其色素的存在將影響衍生化反應，對測定有幹擾，必須除去。活性炭對色素的吸附作用很強，選擇碳黑(Carb)固相萃取柱為淨化柱，結果表明Carb柱去除幹擾的效果最好，洗脫物比較乾淨，基質背景和基線噪音低，可獲得穩定、滿意的回收率和較好的重現性。選擇乙酸乙酯為洗脫溶劑，4mL乙酸乙酯可將棒麴黴素完全洗脫，回收率95X以上。本發明最終選擇3-7mL乙酸乙酯為洗脫液。本發明充分考慮到，棒麴黴素為極性化合物，揮發性低，為增加揮發性，提高分離的柱效，降低檢出限，需要衍生後進行GC-MS分析。現有技術報導均採用N，0-雙三甲基矽基三氟乙醯胺(BSTFA)為衍生化試劑，試驗發現，採用N-甲基-N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)為衍生劑，特丁基二甲基矽烷衍生物(TBmiS)較為穩定，不易變化分解，比棒麴黴素三甲基矽烷衍生物(TMS)有更高的靈敏度，專一性好。本發明最終選擇N-甲基-N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)為衍生劑。本領域熟知，衍生化反應一般為8(TC下加熱60min，本發明經過反覆試驗確定採用在微波高檔800W條件下，衍生化3min，大大縮短了反應時間。本發明通過對選擇離子監測模式(SIM)離子選擇的優化，有效提高方法的選擇性和抗幹擾能力、降低檢測限和測定低限；本發明對果蔬醬空白樣品的分析，樣品基質中含有155、167、255離子碎片，對定性定量測定幹擾大，並結合棒麴黴素TBDMS衍生物的裂解途徑，最終選定定性離子為183、184、211、212，183為定量離子，採用上述離子組合來定性和確證，抗幹擾能力強，專一性強，靈敏度高，能準確地對棒麴黴素進行定性和定量分析。通過實施本發明具體的
發明內容，可以達到以下有益效果。1.高靈敏度採用乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)為提取溶劑，加入海沙、無水硫酸鈉和碳酸氫鈉來提高提取效率，選擇碳黑(Carb)固相萃取柱為淨化柱，採用N-甲基-N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)為衍生劑，對色譜柱和選擇離子監測模式(SIM)離子選擇進行了優化，消除基質影響，增強抗幹擾能力，降低檢出限和測定低限，棒麴黴素的檢出限(LOD)為2.5iig/kg，測定低限(LOQ)為10yg/kg，實現了對果蔬醬中棒麴黴素的高靈敏度檢測。62.樣品前處理時間短2人在180min內可處理40份樣品，可實現對果蔬醬樣品中棒麴黴素進行高通量檢測。3.淨化效果好加入碳酸氫鈉有效除去了酚類物質，選擇碳黑(Carb)固相萃取柱為淨化柱，有效除去了色素，優選DB-35MS色譜柱為分離柱，峰形尖銳、對稱，在棒麴黴素TBDMS衍生物出峰的時間窗口無幹擾，利於準確確證和定量。4.樣品稱樣量少，溶劑使用量少，汙染小，環保樣品稱樣量僅為2克，通過對提取溶劑的篩選和優化，選擇出提取效率最佳的溶劑組合，每份果蔬醬樣品有機溶劑使用量僅為14mL，廢棄物少。5.流程簡單操作性強，易於掌握，無需良好訓練和較高技能便能很好完成。6.使用較少的玻璃器皿只需使用15mL具螺旋塞聚丙烯刻度離心管，10mL刻度試管、1.5mL高回收率樣品瓶。7.樣品製備過程中所使用裝置簡單只需小型離心機、12孔固相萃取裝置、氮吹儀、渦旋混合器等，便於推廣應用。8.所需空間小，在小型實驗室便可完成果蔬醬樣品的前處理可在IO平方的房間內完成，易於實現現場檢驗。9.成本低使用的試劑為實驗室常用試劑，價格便宜，易於採購，用量少。10.本發明通過對選擇離子監測(SIM)模式離子選擇的優化，有效消除複雜基體幹擾選定棒麴黴素的特徵離子為183、184、211、212，採用上述離子組合來定量和確證。獲得抗幹擾能力強，專一性強，靈敏度高，能準確地對棒麴黴素進行定性和定量分析。11.首次採用微波加熱衍生化反應，縮短反應時間衍生化反應一般為8(TC下加熱60min，本發明經過試驗確定採用在微波高檔條件(800W)下，衍生化3min，大大縮短了反應時間，為該發明為首創。圖l所示為為添加50iig/kg棒麴黴素TBDMS衍生物番茄醬樣品選擇離子(SIM)質譜圖；圖2所示為棒麴黴素TBDMS衍生物質譜圖；圖3所示為棒麴黴素TBDMS衍生物質譜裂解途徑圖。具體實施例方式下面，舉實施例說明本發明，但是，本發明並不限於下述的實施例。另外，在下述的說明中，如無特別說明，％皆指V/V體積百分比。本發明中設備和材料有Agilent7890A/5975C氣相色譜-質譜儀(美國Agilent公司)，配備7683自動進樣器、增強型化學工作站；氮吹儀(美國Organomation公司)；微波爐(格蘭仕公司，800W);小型離心機；1.5mL螺紋口高回收率樣品瓶(美國Agilent公司，P/N5183-2030);PTFE/矽橡膠/PTFE隔墊(美國Agilent公司，P/N5182-0729)。棒麴黴素標準品純度為99.5%，Chemservice公司提供；BESEP⑧Carb固相萃取柱，500mg，6mL，北京振翔公司；衍生化試劑N-甲基N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺7(MTBSTFA)+特丁基二甲基矽基氯矽烷(TBDMCS)(99+1，V/V)，lmLX10，(美國塞分科技公司)；乙腈、乙酸乙酉旨、正己烷(色譜純)；水為超純水。標準工作液的配製將棒麴黴素用乙腈配製成質量濃度為200mg/L的標準儲備液，並根據需要稀釋成適當質量濃度的標準工作液，於棕色儲存瓶4t:下保存備用。本發明中選用的所有試劑和儀器都為本領域熟知選用的，但不限制本發明的實施，其他本領域熟知的一些試劑和設備都可適用於本發明以下實施方式的實施。實施例一稱取2.00克果蔬醬於離心管中，加水0.5-3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入0.5-2克海沙，4-8克無水硫酸鈉和0.5_2克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用3-7mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應l-7min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。實施例二稱取2.00克番茄醬於離心管中，加水3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1克海沙，5克無水硫酸鈉和1克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用4mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應3min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。實施例三稱取2.00克杏醬於離心管中，加水3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1克海沙，5克無水硫酸鈉和1克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用4mL乙酸乙酯洗脫；在40°C下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應3min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。實施例四稱取2.00克草莓醬於離心管中，加水0.5mL，振搖，加5mL乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入2克海沙，4克無水硫酸鈉和1.5克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30iiL冰乙酸的試管接受洗脫液，用7mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應lmin，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。實施例五稱取2.00克蘋果醬於離心管中，加水1.5mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入0.5克海沙，6克無水硫酸鈉和2克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30iiL冰乙酸的試管接受洗脫液，用3mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240L乙腈溶解，準確移取150L溶解液至樣品瓶中，加50L衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應7min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。實施例六稱取2.00克藍莓醬於離心管中，加水2mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1.5克海沙，7克無水硫酸鈉和0.5克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30iiL冰乙酸的試管接受洗脫液，用7mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應2min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。實施例七稱取2.00克山楂醬於離心管中，加水2.5mL，振搖，加5mL乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入0.5克海沙，8克無水硫酸鈉和0.5克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑(Carb)固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用5mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應6min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。實施例八色譜條件的優化本發明比較了棒麴黴素特丁基二甲基矽烷(TB匿S)衍生物在DB-l、DB-5、DB-1701P、DB-35MS四種色譜柱的分離效果，發現棒麴黴素TBDMS衍生物在DB-1、DB-5、DB-1701P色譜柱上出現拖尾，靈敏度低，在DB-35MS色譜柱峰形尖銳、對稱，靈敏度最高，最終選定DB-35MS色譜柱。參見附圖1為添加50yg/kg棒麴黴素TBDMS衍生物番茄醬樣品選擇離子(SIM)質譜圖，棒麴黴素TBDMS衍生物的保留時間為8.655min。從質譜圖可以看出使用本發明的樣品提取和淨化方法及DB-35MS色譜柱，在棒麴黴素TB匿S衍生物出峰的時間窗口無幹擾，半峰寬為0.025min，這對確證和定量測定有利。實施例九提取溶劑的選擇棒麴黴素易溶於水、乙酸乙酯、丙酮、乙醇及氯仿，微溶於乙醚和苯，不溶於石油醚。棒麴黴素的水溶液易分解，在有機溶劑中相對穩定。現有技術報導的提取溶劑有乙酸乙酉旨、乙酸乙酯-正己烷溶液(60+40，V/V)、乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)。綜合考慮果蔬醬的特性和對後續的淨化有利，本發明經過比較和選擇，最終選擇乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)為提取溶劑。實施例十淨化方法的選擇和淨化條件的優化現有技術報導的淨化方法主要有三類，一類為液-液萃取，加入碳酸鈉溶液淨化；一類為液體樣品直接加到C18、0ASISHLB、聚苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)共聚物等固相萃取小柱上提取淨化；一類為固相萃取法，使用矽膠固相萃取小柱，氰基固相萃取小柱，矽膠+弗羅裡矽土固相萃取小柱等。果蔬醬中含有大量的色素，色素的存在將影響衍生化反應，對測定有幹擾，必須除去。活性炭對色素的吸附作用很強，選擇碳黑(Carb)固相萃取柱為淨化柱，結果表明Carb柱去除幹擾的效果最好，洗脫物比較乾淨，基質背景和基線噪音低，可獲得穩定、滿意的回收率和較好的重現性。選擇乙酸乙酯為洗脫溶劑，實驗比較了1、2、3、4、5、6、7mL乙酸乙酯洗脫效果。實驗結果表明，4mL乙酸乙酯可將棒麴黴素完全洗脫，9回收率95%以上。故最終選擇3-7mL乙酸乙酯為洗脫液。實施例i^一衍生化條件的選擇和優化棒麴黴素為極性化合物，揮發性低，為增加揮發性，提高分離的柱效，降低檢出限，需要衍生後進行GC-MS分析。現有技術報導均採用N，O-雙三甲基矽基三氟乙醯胺(BSTFA)為衍生化試劑，試驗發現，採用N-甲基N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)為衍生劑，特丁基二甲基矽烷衍生物(TB匿S)較為穩定，不易變化分解，比棒麴黴素三甲基矽烷衍生物(TMS)有更高的靈敏度，專一性好。最終選擇N-甲基N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)為衍生劑。採用N-甲基N-特丁基二甲基矽基三氟乙醯胺(MTBSTFA)為衍生劑時，衍生化反應一般為8(TC下加熱60min。本發明試驗了微波加熱衍生化反應，固定其它條件不變，改變微波加熱時間，分別衍生1、2、3、4、5、6、7min，結果表明，微波加熱時間對衍生化反應影響不大，最終選定衍生時間3min。實施例十二選擇離子監測模式特徵離子的優選通過上述實施例，參見附圖2為棒麴黴素TBDMS衍生物的質譜圖，棒麴黴素TBDMS衍生物的特徵離子為155、167、183、184、211、212、255，未出現分子離子峰m/z268，說明該分子結構並不穩定。m/z212是由分子離子峰失去丁烯分子後的碎片，m/z211是由分子離子峰失去特丁基自由基後的正離子碎片，繼而失去CO分子關環得到m/z183的正離子碎片，m/z184的碎片可能為m/zl83的正離子接受一個氫自由基而生成的自由基正離子，棒麴黴素TBDMS衍生物的裂解途徑參見附圖3。選擇離子監測(SIM)經常被用於降低檢測限和提高定量重現性。SIM的離子選擇應能有效消除複雜基體幹擾，經對果蔬醬空白樣品的分析，樣品基質中含有155、167、255離子碎片，對定性定量測定幹擾大，並結合棒麴黴素TBDMS衍生物的裂解途徑，最終選定定性離子為183、184、211、212，183為定量離子，採用上述離子組合來定性和確證，抗幹擾能力強，專一性強，靈敏度高，能準確地對棒麴黴素進行定性和定量分析。實施例十三棒麴黴素的定量離子、定性離子及標準相對離子豐度見表1。定性依據進行果蔬醬樣品測定時，如果試樣中的質量色譜峰保留時間與標準工作溶液一致(變化範圍在±0.5%之內)；並且在扣除背景後的樣品質譜圖中，所選擇的離子均出現，而且所選擇的離子相對豐度與濃度相當標準溶液的相對豐度相差符合表1的有關規定，則可判斷樣品中存在棒麴黴素。本發明採用外標法定量。表1:定性確證時棒麴黴素的定量離子、定性離子和標準相對離子豐度及最大容許相對偏差定量/定性離子(m/z)標準相對離子豐度(%基峰)允許的相對偏差183*100—21158±10%21220±20%18416±20%10*定量離子(Quantitativeions)定量方法外標法定量，採用本領域常規技術可知。實施例十四配製棒麴黴素系列工作溶液，按上述實施例進行處理，衍生後上機測試。以棒麴黴素的質量濃度X(iig/mL)為橫坐標，定量離子(m/z345)的質譜峰面積Y為縱坐標進行線性回歸。棒麴黴素在0.0125-1g/mL範圍內線性良好，線性方程為Y=1.216X106X+7.176X10，r=0.9911。檢出限(LOD)是指信噪比(S/N)大於3時的最低檢測濃度，測定低限(L0Q)指信噪比(S/N)大於10時的最低檢測濃度。本方法的檢出限(LOD)和測定低限(LOQ)分別為2.5lig/kg禾口10lig/kg。實施例十五以可溶性固形物含量為28_30%的番茄醬為樣品，做四個水平的添加回收試驗，分別為10yg/kg、25iig/kg、50iig/kg、100iig/kg，每個添加水平重複6次；以杏醬、草莓醬、蘋果醬、藍莓醬、山楂醬為樣品，做25g/kg—個水平的添加回收試驗，重複6次，按上述實施例進行回收試驗，方法回收率和相對標準偏差符合國內外有關標準和法規的要求，見表2。表2:果蔬醬樣品棒麴黴素添加回收率測定結果(n=6)tableseeoriginaldocumentpage11實施例十六本發明採用色譜條件為常規技術報導，在本發明中，DB-35MS毛細管色譜柱，30mXO.25mmXO.25ym，分流/不分流進樣口，進樣口溫度250°C，脈衝不分流進樣，；脈衝壓力2.758Xl5pa;載氣高純氦氣(純度99.999%)，流速lmL/min;程序升溫100。C保留2min，以25°C/min升至200°C，再以20°C/min升至270°C，全部程序時間15min，後運行溫度280°C，時間5min，流速0.5mL/min;自動進樣，進樣量1PL。實施例十七本發明採用質譜條件為常規技術報導，在本發明中，離子源EI，電子倍增器電壓為自動調諧值+200V;電離能量70eV;離子源溫度230°C;四極杆溫度150°C;接口溫度280°C;採集模式SIM模式，掃描質量(m/z)範圍40-450;溶劑延遲時間為5min。定量離子m/zl83，定性離子m/zl83、m/zl84、m/z211，m/z212，住留時間75ms。權利要求一種快速測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，果蔬醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜-質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克果蔬醬於離心管中，加水0.5-3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入0.5-2克海沙，4-8克無水硫酸鈉和0.5-2克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min；移取4mL上清液至乙酸乙酯活化碳黑小柱，用加有30μL冰乙酸的試管接受洗脫液，3-7mL乙酸乙酯洗脫；在40℃下通氮氣緩緩吹乾，240μL乙腈溶解，準確移取150μL溶解液至樣品瓶中，加入50μL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應1-7min，冷卻，供氣相色譜-質譜測定。2.按照權利要求1測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，其特徵在於，所述果蔬醬中的番茄醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜_質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克番茄醬於離心管中，加水3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1克海沙，5克無水硫酸鈉和1克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用4mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240yL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應3min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。3.按照權利要求1測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，其特徵在於，所述果蔬醬中的杏醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜_質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克杏醬於離心管中，加水3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1克海沙，5克無水硫酸鈉和1克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用4mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240yL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應3min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。4.按照權利要求l測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，其特徵在於，所述果蔬醬中的草莓醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜_質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克草莓醬於離心管中，加水0.5mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入2克海沙，4克無水硫酸鈉和1.5克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30iiL冰乙酸的試管接受洗脫液，用7mL乙酸乙酯洗脫；在40°C下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應lmin，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。5.按照權利要求1測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，其特徵在於，所述果蔬醬中的蘋果醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜_質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克蘋果醬於離心管中，加水1.5mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入0.5克海沙，6克無水硫酸鈉和2克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30iiL冰乙酸的試管接受洗脫液，用3mL乙酸乙酯洗脫；在40°C下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應7min，冷卻，供氣相色譜-質譜測定。6.按照權利要求1測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，其特徵在於，所述果蔬醬中的藍莓醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜_質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克藍莓醬於離心管中，加水2mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入1.5克海沙，7克無水硫酸鈉和0.5克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用7mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240yL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應2min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。7.按照權利要求1測定果蔬醬中棒麴黴素的方法，其特徵在於，所述果蔬醬中的山楂醬經提取、淨化，衍生，氣相色譜_質譜測定，選擇離子監測模式，外標法定量，具體測定方法步驟如下稱取2.00克山楂醬於離心管中，加水2.5mL，振搖，加5mL乙酸乙酯_正己烷溶液(95+5，V/V)，振搖，同時加入0.5克海沙，8克無水硫酸鈉和0.5克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min;用5mL乙酸乙酯活化碳黑固相萃取柱，移取4mL上清液至碳黑小柱，用加有30yL冰乙酸的試管接受洗脫液，用5mL乙酸乙酯洗脫；在4(TC下通氮氣緩緩吹乾，加240iiL乙腈溶解，準確移取150iiL溶解液至樣品瓶中，加50iiL衍生化試劑，用隔墊密封，微波800W高檔條件下反應6min，冷卻，供氣相色譜_質譜測定。全文摘要本發明公開了一種快速測定果蔬醬中棒麴黴素的方法。通過稱取2.00克果蔬醬於離心管中，加水0.5-3mL，振搖，加5mL乙酸乙酯-正己烷溶液(95+5，v/v)，振搖，同時加入0.5-2克海沙，4-8克無水硫酸鈉和0.5-2克碳酸氫鈉，劇烈振搖2min，離心3min。移取4mL上清液至乙酸乙酯活化炭黑小柱，用加有冰乙酸的試管接受洗脫液，3-7mL乙酸乙酯洗脫，吹乾。240μL乙腈溶解，移取150μL溶解液至樣品瓶中，加50μL衍生化試劑，微波加熱1-7min，冷卻，供氣相色譜-質譜測定。該方法是一種快速，簡便、靈敏、準確、專一、耐用的確證和定量方法，廣泛應用於果蔬醬中棒麴黴素檢測領域。文檔編號G01N30/02GK101776656SQ20101004551公開日2010年7月14日申請日期2010年1月15日優先權日2010年1月15日發明者姚偉琴,朱慧萍,李欣,李炎,李鋒格,沈夢園,田延河,胡建民,蘇敏申請人:新疆出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心