紫珠總苷提取物及其製備方法和用途
2023-05-09 10:36:11 5
紫珠總苷提取物及其製備方法和用途
【專利摘要】本發明提供紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18％～45％毛蕊花糖苷和15％～40％Arenarioside，所述提取物由華紫珠或杜虹花的葉製備。本發明還提供該紫珠總苷提取物的製備方法及用途。本發明紫珠總苷提取物對神經細胞具有顯著的保護作用，對帕金森模型小鼠的行為障礙和老年痴呆模型小鼠的記憶獲得性障礙具有明顯的改善作用，可用於治療神經退行性疾病。本發明紫珠總苷提取物還對諸如皮炎或溼疹等皮膚病症狀具有良好的治療和改善作用。可用於治療皮膚病。
【專利說明】紫珠總苷提取物及其製備方法和用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及中醫藥領域，具體涉及紫珠總苷提取物及其製備方法和用途。
【背景技術】
[0002]紫珠是馬鞭草科紫珠屬植物的通稱，種類繁多，在我國大約有35種，分布較為廣泛。紫珠所含的成分主要為黃酮類、萜類、苯乙醇苷類以及揮髮油類等。其中苯乙醇苷類是其含量較多的化學成分，因結構中大多含有苯丙醯基苷元，因此也被稱為苯丙素苷類化合物。已有文獻報導，苯乙醇苷類成分具有止痛抗菌消炎、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、保肝護肝和鹼基修復作用，對於糖尿病及相關疾病，學習、記憶能力低下等都具有明顯的改善作用。近年來，隨著國內外對其研究的深入，越來越多的文獻資料表明苯乙醇苷類化合物具有防治神經退行性疾病的作用，尤其是在改善老年痴呆症、帕金森病上效果明顯。中國專利申請CN200710040195.2報導從肉蓯蓉中製備肉蓯蓉總苷(苯乙醇苷類成分)提取物，並報導了該提取物用於治療帕金森病的用途。中國專利CN201010146367.6公開了從枇杷葉紫珠(Callicarpa kochiana)的地上部分中製備以連翅酯苷B和毛蕊花糖苷為主要特徵成分的提取物，並公開了該提取物用於治療老年痴呆藥物中的應用。
[0003]然而，肉蓯蓉屬於瀕危名貴中藥材，產量有限，枇杷葉紫珠以野生為主，產量小，並且該兩種藥材中苯乙醇苷類成分含量低，因此以肉蓯蓉和枇杷葉紫珠為原料製備苯乙醇苷類成分,生產成本高,不適合持續性發展。因此,用資源豐富、價格便宜、並且苯乙醇苷類物質含量高的藥材來製備治療神經退行性等疾病的藥物有優越性及需求。另外，由於苯乙醇苷類物質藥理活性廣泛，苯乙醇苷類物質的新藥效及治療作用也值得深入的開發。
【發明內容】
`[0004]本發明的目的在`於提供來源於華紫珠(Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的紫珠總苷提取物,該提取物以苯乙醇苷類成分毛蕊花糖苷和Arenarioside為特徵性活性成分，對於神經退行性疾病具有治療功效。另外，該提取物還對溼疹或皮炎具有治療功效。
[0005]本發明提供以下技術方案:
[0006]1、紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18%~45%毛蕊花糖苷和15%~40%Arenarioside,所述提取物由華紫珠(Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的葉(優選為乾燥葉)製備。
[0007]2、根據技術方案I的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有28%~45%毛蕊花糖苷。
[0008]3、根據技術方案I或2的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有28%~38%毛蕊花糖苷。
[0009]4、根據技術方案1-3中任一項的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有24%~40%Arenarioside0
[0010]5、根據技術方案1-4中任一項的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有25%~35%Arenarioside。
[0011]6、技術方案1-5中任一項所述的紫珠總苷提取物的製備方法，其包括以下步驟:
[0012](I)將華紫珠 Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpaformosana Rolfe)的葉(優選為乾燥葉)粉碎，用溶劑提取I~3次,所述溶劑為水、醇或者水與醇的混合物；
[0013](2)將各次提取液合併，減壓濃縮除去步驟⑴所述的有機溶劑；加入0.5倍~2倍體積量的水，靜置過夜，離心或過濾得到上清液；
[0014](3a)使上清液通過裝填有樹脂填料的色譜層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質，然後以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，乾燥，得到紫珠總苷提取物；或者
[0015](3b)用有機溶劑萃取上清液，將有機相減壓濃縮，乾燥，得到紫珠總苷提取物。
[0016]7、根據技術方案6所述的製備方法，其中步驟(1)中，提取方法選自閃式提取法、回流提取法、微波提取法、超聲提取法和滲漉提取法。
[0017]8、根據技術方案6或7所述的製備方法，其中步驟(3a)中，所述樹脂填料選自大孔吸附樹脂、聚醯胺樹脂和離子交換樹脂。
[0018]9、根據技術方案6-8中任一項所述的製備方法，其中步驟(3a)中，所述大孔吸附樹脂填料為HPD100、HPD200、D101、AB-8、SP825、ADS_7型等大孔吸附樹脂。
[0019]10、根據技術方案6-9中任一項所述的製備方法，其中步驟(3a)中，所述稀醇水溶液為O~15體積％的稀醇水溶液。
[0020]11、根據技術方案6-10中任一項所述的製備方法，其中步驟(3a)中，所述較高濃度的醇水溶液為30%~90體積％的醇水溶液。
[0021]12、據技術方案6-11中任一項所述的製備方法，其中步驟(3b)中，所述有機溶劑為正丁醇或乙酸乙酯。
[0022]13、根據技術方案6-12中任一項所述的製備方法，其中步驟(3a)中，減壓濃縮洗脫液後，一次或更多次進行以下操作:用水溶解濃縮液，使之通過裝填有樹脂填料的色譜層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質，然後以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮。
[0023]14、技術方案1-5中任一項所述的紫珠總苷提取物在製備用於治療或輔助治療神經退行性疾病的食品、保健品或藥品中的用途。
[0024]15、技術方案1-5中任一項所述的紫珠總苷提取物在製備用於治療或輔助治療皮膚病的化妝品、保健品或藥品中的用途。
[0025]16、技術方案15所述的用途，其中所述皮膚病為溼疹或皮炎。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0026]圖1為來自華紫珠葉的本發明紫珠總苷提取物的典型的高效液相色譜(使用DAD檢測器)圖。
[0027]圖2為來自杜虹花葉提取物的本發明紫珠總苷提取物的典型的高效液相色譜(使用DAD檢測器)圖。
[0028]圖1 和 2 中，線性關係:Y = 16374 * Χ+18.793，R = 0.9997 ;其中，Y 為峰面積，X為毛蕊花糖苷的濃度(mg/mL), Arenarioside的含量以毛蕊花糖苷為標準計。
[0029]圖3示出動態軸向壓縮高壓製備液相色譜圖。
[0030]圖4示出毛蕊花糖苷單體的HPLC色譜圖。
[0031]圖5不出Arenarioside單體的HPLC色譜圖。
[0032]圖6示出了不同種類的紫珠葉中苯乙醇苷類含量測定結果。
[0033]圖7示出了不同濃度的毛蕊花糖苷對MPP+誘導的SH-SY5Y神經細胞損傷的保護作用，其中「&&」表示與空白對照組相比P < 0.01，「 * 」表示與模型組相比P < 0.05，「 」表示與模型組相比P < 0.01。
[0034]圖8示出了不同濃度的Arenarioside對MPP+誘導的SH-SY5Y神經細胞損傷的保護作用，其中「腿」表示與空白對照組相比P < 0.01，「*」表示與模型組相比P < 0.05，「*
表示與模型組相比P < 0.01。
[0035]圖9示出了不同濃度的本發明實施例5製備的紫珠總苷提取物對MPP+誘導的SH-SY5Y神經細胞損傷的保護作用，其中「&&」表示與空白對照組相比P < 0.01，「 * 」表示與模型組相比P < 0.05，「* *」表示與模型組相比P < 0.01。
[0036]圖10示出了不同濃度的本發明實施例4、6和7製備的紫珠總苷提取物對MPP+誘導的SH-SY5Y神經細胞損傷的保護作用，其中「&&」表示與空白對照組相比P < 0.01，「 ~k 」表示與模型組相比P < 0.05，「* *」表示與模型組相比P < 0.01。
[0037]圖11示出 了苯乙醇苷類提取物對MPTP致帕金森小鼠的自主活動的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:肉蓯蓉總苷組(400mg/kg) ；4:本發明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) 表示與空白對照組相比P < 0.01，「 * 」表示與模型組相比P < 0.05，「* *」表示與模型組相比P < 0.01，「#」表示與肉蓯蓉總苷組相比P < 0.05。
[0038]圖12示出了苯乙醇苷類提取物對MPTP致帕金森小鼠的滾筒行為的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:肉蓯蓉總苷組(400mg/kg) ；4:本發明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) 表示與空白對照組相比P < 0.01，「 * 」表示與模型組相比P < 0.05，「* *」表示與模型組相比P < 0.01，「#」表示與肉蓯蓉總苷組相比P < 0.05。
[0039]圖13示出了紫珠總苷提取物對東莨菪鹼致小鼠跳臺潛伏期的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:枇杷葉紫珠總苷組(300mg/kg) ；4:本發明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) 表示與空白對照組相比P < 0.01，「 * 」表示與模型組相比P < 0.05，「* *」表示與模型組相比P < 0.01，「#」表示與枇杷葉紫珠總苷組相比P < 0.05。
[0040]圖14示出了紫珠總苷提取物對東莨菪鹼致小鼠跳臺錯誤次數的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:枇杷葉紫珠總苷組(300mg/kg) ；4:本發明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ;「&&」表示與空白對照組相比？< 0.01，「 * 」表示與模型組相比p < 0.05，「* *」表示與模型組相比P < 0.01，「#」表示與枇杷葉紫珠總苷組相比P < 0.05。
[0041]圖15示出了本發明紫珠總苷提取物及陽性對照藥在不同給藥時間對DNCB致小鼠背部皮膚皮炎-溼疹模型的治療作用。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg,相當於醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg) ；E:本發明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)。
[0042]圖16示出了各組小鼠皮膚病理組織照片。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg，相當於醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg) ；E:本發明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)。
[0043]圖17示出了本發明紫珠總苷提取物對皮炎-溼疹模型小鼠真皮內炎性細胞的影響。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg，相當於醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg) ；E:本發明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)。「&&」表示與空白對照組相比P < 0.01，「女* 」表示與模型組相比P < 0.01。
[0044]圖18示出了本發明紫珠總苷提取物對皮炎-溼疹模型小鼠血清中IL_2(a)及TNF-a (b)的影響。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg,相當於醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg)；E:本發明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)。「&」表示與空白對照組相比P < 0.05，「&&」表示與空白對照組相比P < 0.01，「 * 」表示與模型組相比P < 0.05，「 * * 」表示與模型組相比P < 0.01。
【具體實施方式】`
[0045]一方面，本發明提供紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18%~45%毛蕊花糖苷和 15%~40% Arenarioside。本發明提取物由華紫珠(Callicarpacathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的葉(優選乾燥葉)製備。
[0046]毛蕊花糖苷和Arenarioside的結構式如下:
【權利要求】
1.紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18%~45%毛蕊花糖苷和15%~40%Arenarioside,所述提取物由華紫珠(Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的葉製備。
2.根據權利要求1的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有28%~45%毛蕊花糖苷。
3.根據權利要求1或2的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有24%~40%Arenarioside0
4.權利要求1-3中任一項所述的紫珠總苷提取物的製備方法，其包括以下步驟: (1)將華紫珠Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(CallicarpaformosanaRolfe)的葉粉碎，用溶劑提取I~3次，所述溶劑為水、醇或者水與醇的混合物； (2)將各次提取液合併，減壓濃縮除去步驟(1)所述的有機溶劑；加入0.5倍~2倍體積量的水，靜置過夜，離心或過濾得到上清液； (3a)使上清液通過裝填有樹脂填料的色譜層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質，然後以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，乾燥，得到紫珠總苷提取物；或者 (3b)用有機溶劑萃取上清液，將有機相減壓濃縮，乾燥，得到紫珠總苷提取物。
5.根據權利要求4所述的製備方法，其中步驟(1)中，提取方法選自閃式提取法、回流提取法、微波提取法、超聲提取法和滲漉提取法。
6.根據權利要求4或5所述的製備方法，其中步驟(3a)中，所述樹脂填料選自大孔吸附樹脂、聚醯胺樹脂和離子交換樹脂。
7.根據權利要求4-6中任一項所述的製備方法，其中步驟(3a)中，所述稀醇水溶液為O~15體積％的稀醇水溶液，所述較高濃度的醇水溶液為30%~90體積％的醇水溶液。
8.據權利要求4-7中任一項所述的製備方法，其中步驟(3b)中，所述有機溶劑為正丁醇或乙酸乙酯。
9.根據權利要求4-8中任一項所述的製備方法，其中步驟(3a)中，減壓濃縮洗脫液後，一次或更多次進行以下操作:用水溶解濃縮液，使之通過層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質，然後以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮。
10.權利要求1-3中任一項所述的紫珠總苷提取物在製備用於治療或輔助治療神經退行性疾病的食品、保健品或藥品或用於治療皮膚病的化妝品、保健品或藥品中的用途。
【文檔編號】A61K127/00GK103816296SQ201210468493
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年11月19日 優先權日:2012年11月19日
【發明者】劉敬閣, 程屹俊, 曹進國, 朱永亮, 錢向平 申請人:蘇州潤新生物科技有限公司