凍幹法穩定疫苗的製作方法

2023-05-09 04:40:31

專利名稱：：凍幹法穩定疫苗的製作方法
技術領域：
：本發明涉及藥物組合物，例如疫苗，以及製備和使用這樣的組合物的方法。
背景技術：
：接種疫苗是醫學最偉大的成就之一，使數以百萬計的人免受毀滅性疾病的影響。在疫苗廣泛使用前，傳染病每年僅在美國就殺死了數以千計的兒童和成年人，同樣在世界各地殺死了更多得多的人。接種疫苗廣泛用於預防和治療細菌、病毒和其他病原體所致的感染，接種疫苗也是用於預防和治療癌症的方法。疫苗接種中使用一些不同的方法，包括滅活病原體，活減毒病原體和滅活病原體亞單位給藥。就病毒感染而言，已發現活疫苗帶來最有效和持久的保護性免疫應答。已經開發出抗黃病毒的活減毒疫苗，黃病毒是通常通過感染的蚊子或壁蝨傳播的小的包膜正鏈RNA病毒。黃病毒科家族的黃病毒屬包括大約70種病毒，其中許多如黃熱病(YF)、登革熱(DEN)、日本腦炎(JE)和森林腦炎(TBE)病毒是主要的人類病原體(綜述BurkeandMonath,FieldsVirology,4thEd.，1043-1126，2001)。不同的方法已用於開發抗黃病毒的疫苗。就黃熱病病毒而言，例如兩種疫苗(黃熱病17D和法國嗜神經疫苗)已通過連續傳代進行開發(Monath，「YellowFever,」InPlotkinandOrenstein,Vaccines,3rded.,Saunders,Philadelphia,pp.815-879,1999)。用於接種疫苗的黃病毒減毒的另一方法包括構建包括兩種不同黃病毒組分的嵌合黃病毒。了解這種嵌合體如何構建需要解釋黃病毒基因組的結構。黃病毒蛋白是通過翻譯單個、長開放閱讀框生成多蛋白，之後是一系列複雜的宿主以及病毒蛋白酶對多蛋白的翻譯後蛋白水解，生成成熟的病毒蛋白(Ambergetal.,J.Virol.73=8083-8094,1999；Rice,"Flaviviridae,」InVirology,Fields(ed.)，Raven-Lippincott,NewYork,1995,VolumeI，p.937)。病毒結構蛋白以C-prM-E的順序在多蛋白中排列，其中「C」是衣殼，「prM」是病毒包膜結合M蛋白的前體，「E」是包膜蛋白。這些蛋白質出現在多蛋白的N端區域，而非結構蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)位於多蛋白的C端區域。已製備的嵌合黃病毒包括來自不同黃病毒的結構和非結構蛋白。例如所謂的ChimeriVax技術採用黃熱病17D病毒衣殼蛋白和非結構蛋白，以遞送其他黃病毒的包膜蛋白(prM和E)(參見例如Chambersetal.，J.Virol.73:3095_3101，1999)。這項技術已用來開發針對登革熱、乙型腦炎(JE)、西尼羅(WN)和聖路易斯腦炎(SLE)病毒的候選疫苗(參見例如Pugachevetal.，NewGenerationVaccines,3rded.，Levineetal.，eds.,MarcelDekker,NewYork,Basel,pp.559-571,2004；Chambersetal.,J.Virol.733095-3101,1999；Guirakhooetal.,Virology257:363-372,1999；Monathetal.,Vaccine171869-1882,1999；Guirakhooetal.,J.Virol.74:5477-5485,2000；Arroyoetal.，TrendsMo1.Med.7:350_354，2001；Guirakhooetal.，J.Virol.78:4761_4775，2004；Guirakhooetal.,J.Virol.789998-10008,2004；Monathetal.,J.Infect.Dis.1881213-1230,2003；Arroyoetal.，J.Virol.78:12497_12507，2004；和Pugachevetal.，Am.J.Trop.Med.Hyg.71:639_645，2004)。對疫苗成功使用和商業化而言最重要的是以何種方式處理和配製疫苗，以確保在使用前疫苗運輸和儲存條件下穩定和療效的保持。冷凍乾燥是一些疫苗產品處理中涉及的方法，本質上是低壓下通過升華去除水，留下內有少量水分的幹餅產物的凍幹過程。此過程可能對疫苗是有利的，包括如上所述的嵌合黃病毒疫苗，因為這樣的疫苗往往在低溼度環境中更穩定。冷凍乾燥還可以增加產物的存儲溫度，使其更易於運輸。影響凍幹過程有效性的關鍵因素是疫苗的製劑。例如可取的是通過除去水，所述製劑提高產品的穩定性。通常疫苗製劑將包含任何或全部下列成分填充劑(如糖)、穩定劑(如糖或蛋白質)以及緩衝劑。因此如上所討論的，開發有效和高效的加工方法和製劑對臨床上有用和商業上成功的疫苗，包括黃病毒疫苗的開發都是非常重要的。發明概述本發明提供包括一種或多種活減毒黃病毒疫苗、一種或多種穩定劑，一種或多重填充劑以及一種或多種緩衝劑成分的組合物。在一個實施例中，該穩定劑是人血清白蛋白(HSA)(例如非重組人血清白蛋白(HSA)或重組人血清白蛋白(rHA))(例如約0.05-2.0%或0.1%)。可以包括在本發明組合物中的填充劑的例子是乳糖(例如約2-10%或4%)和/或甘露醇(例如約2-10%或5%)，而可以包括在組合物中的緩衝劑成分的例子是組氨酸(例如約l_20mM或IOmM)和/或穀氨酸鉀(例如約20_80mM或50mM)。組合物可以是凍幹形式或凍幹前的液體形式。此外，組合物的PH值可以是例如6-10、7-9、7.5-8.5或7.9-8.1。包括在本發明組合物中的活的減毒疫苗可以是例如嵌合黃病毒，如包括第一黃病毒的結構蛋白和第二不同黃病毒的非結構蛋白的嵌合黃病毒。在一個實施例中，這樣的嵌合黃病毒包括第一黃病毒的前膜/膜和包膜蛋白，以及第二不同黃病毒的衣殼和非結構蛋白。第一和第二黃病毒可以獨立地選自黃熱病(例如YF17D)、日本腦炎、登革熱-1、登革-2、登革熱-3、登革熱-4、墨萊溪谷腦炎、聖路易腦炎、西尼羅、庫寧、羅西奧腦炎、Ilheus、中歐腦炎、西伯利亞腦炎、俄羅斯春夏腦炎、Kyasanur森林病、Alkhurma、鄂木斯克出血熱、跳躍病、Powassan、Negishi、Absettarov、Hansalova、Apoi禾口Hypr病毒。在具體實施例中，第一黃病毒為日本腦炎病毒或西尼羅病毒，第二黃病毒是黃熱病病毒(例如YF17D)。本發明還包括的是包括一種或多種基於蛋白和/或病毒的藥物、人血清白蛋白(例如非重組人血清白蛋白(HSA)或重組人血清白蛋白(rHA))(例如約0.05-2.0%或0.1%)、穀氨酸鹼金屬鹽(如穀氨酸鉀)(例如約20-80mM或50mM)、一種或多種額外胺基酸(例如組氨酸)(例如約l_20mM或IOmM)，以及一種或多種糖或糖醇(如乳糖和/或甘露醇)(例如約2-10%、4%或5%)。組合物可以是冷凍乾燥形式或凍幹前的液體形式。此外組合物的PH值可以是例如6-10、7-9、7.5-8.5或7.9-8.1。在一個實施例中，基於病毒的藥品包括天花疫苗(如牛痘病毒或減毒痘苗病毒，例如ACAM1000、ACAM2000或改良安卡拉痘苗(MVA))。在另一實施例中，基於蛋白的藥品包括B型肝炎病毒核心蛋白融合體(如B型肝炎病毒核心蛋白融合體進一步包括一種或多種流感M2e肽)。此外，在另一實施例中，基於蛋白的藥物包括艱難梭菌的毒素或類毒素。本發明還包括製備藥物組合物的方法，其包括將如上所述的那些組合物凍幹處理。此過程可包括冷凍、一次乾燥和二次乾燥。在實施例中，冷凍步驟包括約-50°C下冷凍約120分鐘。一次乾燥步驟可以包括溫度遞變(ramp)步驟，其包括溫度遞變約+0.1°C/分鐘至擱板溫度約-40°C，保持約500分鐘；溫度遞變約+0.1°C/分鐘至擱板溫度約-35°C，保持約500分鐘；溫度遞變約+0.I0C/分鐘至擱板溫度約-30°C，保持約500分鐘；溫度遞變約+0.rc/分鐘至擱板溫度約-25°c，保持約800分鐘。在此實施例中，二次乾燥步驟可包括溫度遞變步驟，其包括溫度遞變約+0.rc/分鐘至擱板溫度約+20°C，保持約800分鐘。在另一實施例中，冷凍步驟可以包括在約-40°c冷凍約60分鐘。一次乾燥步驟可包括溫度遞變步驟，其包括溫度遞變約+0.5°c/分鐘至擱板溫度約-5°c，保持約300分鐘；以及溫度遞變約-0.5°C/分鐘至擱板溫度約-0°C，保持約300分鐘。二次乾燥步驟可包括溫度遞變步驟，其包括溫度遞變約+0.2V/分鐘至擱板溫度約+30°C，保持約600分鐘；以及溫度遞變約-1.O0C/分鐘至擱板溫度約+5°C，保持約9999分鐘。本發明還包括預防或治療受試者一種或多種疾病的方法，其包括如上所述或本文其他地方所述，施用一種或多種本發明的組合物。在這些方法的某些實施例中，受試者有黃病毒(例如日本腦炎病毒、西尼羅病毒、登革熱病毒或黃熱病病毒感染)、天花、流感或艱難梭菌發展的風險，或有以上病毒。此外，本發明包括在如本文所述的疾病的預防和治療中本文所述的組合物和製劑的用途，以及用於這些目的的藥品的製備。一般而言，如果本發明的物質或組合物給藥前，受試者沒有所述疾病或感染，則執行所述方法以「預防」受試者的疾病或感染。如果受試者有這樣的疾病或感染，則執行該方法以「治療」疾病或感染。可以進行預防和/或治療以減少如不給藥則出現的所述影響，或消除這種影響。本發明提供若干好處。例如如上所述，對包括蛋白和/或病毒成分的藥物組合物，如疫苗的有效使用而言，關鍵是在不同的運輸和儲存條件下保持組合物穩定。如下文進一步討論的，本發明提供製劑和加工步驟，製備具有提高的穩定性的組合物。本發明的其他特徵和優點從以下詳細說明、附圖和權利要求是顯而易見的。圖1為實驗JEPD-018中，37°C儲存時效價損失圖。圖2為實驗WNPD-033中，有和沒有組氨酸的穩定性圖。圖3為實驗WNPD-045中，37°C下有和沒有穀氨酸鉀的穩定性圖。圖4為實驗JEPD-145中，37°C下不同濃度乳糖的穩定性圖。圖5為與37°C下甘露醇/乳糖組合比較單一糖製劑的穩定性圖。圖6為退火樣品中，37°C儲存的效價損失圖。圖7為4%乳糖溶液的熱分析圖，其玻璃化溫度為-32.6°C。圖8為當5%甘露醇加到製劑中時，玻璃轉化溫度降低約6°C至_38°C的熱分析圖。圖9為-80°C時，最終製劑的實時穩定性圖。圖10是使用調製式DSC分析以提高解析度的WNPD-045樣品的熱分析圖。圖11是無需使用調製式掃描即表現足夠解析度的JEPD-172樣品的熱分析圖。圖12是所示實驗中凍幹的ChimeriVax殘留水分的穩定性的相互關係。圖13是實驗JEPD-151的熱電偶溫度圖。詳細說明本發明提供可用於製備基於病毒和/或蛋白的藥品，包括活病毒疫苗的製備的組合物和方法，進一步介紹如下。本發明的組合物包括如下所述已發現在疫苗製備中有利的成分(例如尤其是穩定劑、填充劑和緩衝劑)，而所述方法包括涉及也是有利的凍幹的步驟。本發明還提供了採用本文所述組合物的預防和治療方法。本發明的組合物和方法進一步說明如下。本發明的組合物包括一種或多種基於蛋白和/或病毒的治療藥物，以及一種或多種穩定劑、填充劑，和/或緩衝成分。本發明的組合物的具體實施例以下進一步詳述，包括嵌合黃病毒疫苗、作為穩定劑的人血清白蛋白(0.1%)、作為填充劑的甘露醇(5%)和乳糖(4%),以及作為緩衝組分的組氨酸(IOmM)和穀氨酸鉀(50mM)。如下所述，除了此具體實施例，本發明還包括其中這些類型成分的特性和/或數量改變的組合物。本發明的組合物中可出現的穩定劑包括血清白蛋白蛋白。優選血清白蛋白蛋白人血清白蛋白(HSA)，無論重組或非重組形式。可包括在本發明所述組合物中的血清白蛋白蛋白的另外的例子是牛血清白蛋白。除了血清白蛋白，可包括在本發明組合物中的其他穩定劑是明膠，如人明膠(如可以是野生型或基因工程的重組人明膠)和豬明膠、酪蛋白、PVP，及本文提及的任何穩定劑(或本領域已知的其他)的組合。就人血清白蛋白而言，此成分的量可以是例如約0.05-2.0%,0.075-1.0%或0.可存在於本發明組合物中的填充劑包括糖，如乳糖、蔗糖和果糖，和/或糖醇，如甘露醇和山梨醇。正如下文進一步討論的，在包括甘露醇的本發明組合物中，對此組分而言優選無定形，而非結晶形式。此外，在某些實施例中，本發明的組合物可優選包括糖和/或糖醇的組合。在一個實施例中，下文進一步闡述的，本發明的組合物可以包括乳糖和甘露醇的組合，後者優選無定形形式。在一個實施例中，乳糖為約1-10%、2-8%或4-6%(例如4%)，而甘露醇為約1-10%、2-8%或4-6%(如5%)。正如以上所指出的，除了穩定劑和填充劑，本發明的組合物可包括緩衝組分，如胺基酸，這可能有助於保持例如某一特定PH水平或範圍，和/或產物穩定性。可包括在本發明組合物中的緩衝組分的一個例子是組氨酸，可能出現在組合物中的濃度為約例如1-20、5-15或10mM。緩衝組分的另一個例子是穀氨酸鹼金屬鹽，如穀氨酸鈉或鉀，組合物中存在的濃度為約10-100、25-75或50mM。此外，所述組合物一般pH值為例如6_10、7_9、7.5-8.5或7.9-8.1。本發明的組合物還包括一種或多種活性治療成分，其可為基於肽或蛋白的治療藥物，以及病毒，如活的減毒病毒疫苗。後一組治療藥物(活減毒病毒疫苗)類型的例子是黃病毒疫苗，如黃熱病病毒疫苗。這樣的黃熱病病毒疫苗的例子是YF17D疫苗株(Smithburnetal·,"YellowFeverVaccination,"WorldHealthOrg.,p.238,1956；Freestone,inPlotkinetal.(eds.),Vaccines,2ndedition,W.B.Saunders,Philadelphia,1995)。其他黃熱病病毒株，如YF17DD(GenBank檢索號U17066)和YF17D-213(GenBank檢索號U17067)(dosSantosetal.，VirusRes.35:35_41，1995)，YF17D-204France(X15067,X15062),YF17D-204,234US(Riceetal.，Science229726-733,1985；Riceetal.,NewBiologist1:285_296，1989;C03700，K02749)，和Galleretal.，Vaccine16(9/10):1024_1028，1998所描述的黃熱病病毒株，也可以存在於本發明的組合物中。可在本發明的組合物中存在的其他黃病毒包括其他蚊子傳播的黃病毒，如日本腦炎(例如SA14-14-2)，登革熱(血清型1-4)、墨萊溪谷腦炎、聖路易腦炎、西尼羅、庫寧、Rocio腦炎，Ilheus病毒；蜱傳黃病毒，如中歐腦炎、西伯利亞腦炎、俄羅斯春夏腦炎，Kyasanur*#_、Powassan>Negishi、Absettarov>Hansalova.Apoi和Hypr病毒，以及C型肝炎病毒屬病毒(如C型肝炎病毒)。除了上面列出的病毒以及其他黃病毒，嵌合黃病毒也可以包括在本發明的組合物中。這些嵌合體可以由黃病毒(即骨架黃病毒)組成，其中結構蛋白(或多種結構蛋白)已經被第二病毒(即待測或預定的病毒，例如黃病毒；參見例如美國專利號6，696，281；美國專利號6，184，024；美國專利號6，676，936和美國專利號6，497，884)的相應結構蛋白(或多種結構蛋白)取代。例如，所述嵌合體可由骨架黃病毒(如黃熱病病毒)組成，其中所述黃病毒的膜和包膜蛋白已被第二待測病毒(例如西尼羅病毒、登革熱病毒(血清型1、2、3或4)、日本腦炎病毒，或其他病毒，如任何本文提及的那些)的膜和包膜取代。嵌合病毒可以從任意組合的病毒製備，但通常需要針對哪種病毒的免疫力，則所述病毒就是插入的結構蛋白的來源。可包括在本發明組合物的嵌合病毒類型的具體例子是黃熱病人疫苗株YF17D，其中膜蛋白和包膜蛋白已被另一黃病毒，如西尼羅病毒、登革熱病毒(血清型1、2、3或4)、日本腦炎病毒、聖路易斯腦炎病毒，墨萊溪谷腦炎病毒，或任何其他黃病毒，如以上所列那些之一的膜蛋白和包膜蛋白取代。使用此方法製備的嵌合黃病毒已被指定為所謂的「ChimeriVax」病毒。使用ChimeriVax技術製備，保藏在布達佩斯條約確認的美國維吉尼亞馬納薩斯的美國菌種保藏中心(ATCC)，保藏日期1998年1月6日的以下嵌合黃病毒可用於製備本發明的病毒嵌合黃熱病17D/登革熱2型病毒(YF/DEN-2；ATCC檢索號ATCCVR-2593)和嵌合黃熱病17D/日本腦炎SA14-14-2病毒(YF/JEA1.3；ATCC檢索號ATCCVR-2594)。可用於本發明的嵌合病毒的詳細信息在例如下列出版物中提供W098/37911；W001/39802；Chambersetal.,J.Virol.733095-3101,1999；W003/103571；W02004/045529；U.S.專利號6，696，281；U.S.專利號6，184，024；U.S.專利號6，676，936；和U.S.專利號6，497，884。能在本發明的組合物中出現，並可以包括特定減毒突變的嵌合黃病毒的另外具體例子例如在W002/072835、W002/102828、W003/10357UW02004/045529、W02005/082020、W02006/044857、W02006/116182和U.S.專利號6，589，531中描述。可出現在本發明組合物中的另外的病毒疫苗包括天花疫苗(例如基於牛痘病毒的疫苗，包括ACAM1000、ACAM2000、改良安卡拉痘苗(MVA)，和Lister，以及基於猴痘的疫苗)以及皰疹病毒和疫苗(如HSV-1及其重組體，以及HSV-2及其重組體)(參見例如美國專利號7，115，270)。除了病毒，本發明的組合物還可以包括治療或疫苗肽或蛋白，例如B型肝炎核心蛋白融合體構建物(如與一種或多種流感肽例如M2e融合的B型肝炎核心蛋白；參見例如W02005/055957)和艱難梭菌類毒素疫苗(包括例如類毒素A和/或B)。上述及本文其他地方所述的組合物可以是凍幹形式，或液體形式，如凍幹過程之前或之後的形式。正如本文其他地方進一步詳細討論的，由於活性組分的穩定性，本發明的組合物尤其有利，活性組分的穩定性主要是由於製劑以及包括凍幹的產物製備過程。一般來說，這個過程包括以下步驟冷凍、一次乾燥、二次乾燥和加塞。這個過程在以下實驗性實施例中進一步詳細說明，但所述過程的例子如下。冷凍步驟中凍幹機擱板預冷至_50°C。一旦所有託盤放上樣品，擱板保持在_50°C120分鐘。在一次乾燥步驟中，真空設置為25mT，並進行以下溫度遞變步驟溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-40°C，保持500分鐘；溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-35°C，保持500分鐘；溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-30°C，保持500分鐘；溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-25X，保持800分鐘。在二次乾燥步驟中，真空保持為25mT，並進行溫度遞變步驟溫度遞變+0.I0C/分鐘至擱板溫度+20°C，保持800分鐘。如有必要，產品可在20°C、25mT最多再保持24小時，然後加塞。在加塞步驟中，用0.22μm過濾的乾燥氮氣對室內脫氣，真空設為SOOmbar(略有真空)，並將塞子擠到小瓶中。可用於本發明的另一凍幹循環總結在下表中。表1-另一凍幹循環tableseeoriginaldocumentpage10因此，本發明的所述方法可以包括在或至約例如-70°C至-30°C(例如-60°C至-40°C，或-50°C)冷凍。冷凍可以進行約30至240分鐘(例如60至120分鐘)或更長的時間。如本文所述，所述材料可隨後進行一個或多個乾燥步驟。在這些步驟中，可使用真空(例如25mT)，溫度可以經一段時間(如100-1000分鐘，例如200-600或300-500分鐘)，逐步改變(例如0.1至1.O0C/分鐘，或0.5°C/分鐘)。在一次乾燥中，溫度可提高到或約例如-30°C至+10°C，例如-20°C至+5°C或-15°C至0°C，而在二次乾燥中，溫度可改變至例如+5°C至+35°C，例如10°C至30°C，或15°C至20°C。正如本領域技術人員所知的，這些參數(如溫度、保持時間，溫度遞變速率和真空水平)可以基於例如得到的結果改變。配製前，可包括在本發明組合物中的病毒(包括嵌合體)可以使用本領域的標準方法製備。例如，病毒基因組相應的RNA分子可引入原代細胞、雞胚或二倍體細胞系，則子代病毒就可從中(或其上清)純化。可用於製備所述病毒的另一方法採用異倍體細胞，如Vero細胞(Yasumuraetal.，NihonRinsho211201-1215，1963)。在此方法中，病毒基因組相應的核酸分子(例如RNA分子)引入異倍體細胞，從其中培養細胞的培養基收集病毒，收集的病毒用核酸酶(例如降解DNA和RNA的核酸內切酶，如Benzonase；美國專利號5，173,418)處理，核酸酶處理的病毒濃縮(例如通過使用截留分子量例如500kDa的濾器超濾)，為接種疫苗之目的配製濃縮的病毒。這種方法的詳細資料在WO03/060088A2中提供，其全部在此引作參考。本發明的疫苗組合物可以作為一線預防性藥物施用於那些有感染風險的人，或可用作為二線藥物治療患者。由於這些組合物的一些中病毒是減毒的，它們尤其適合施用於「有風險的個體」，如老年人、兒童，或愛滋病毒感染者。這樣的疫苗還可以用於獸醫的情況，例如給馬接種疫苗抗西尼羅病毒感染，或給鳥(例如有價值的、瀕危的或馴養的鳥類，分別例如火烈鳥、禿頭鷹和鵝)接種疫苗。此外，本發明的所述疫苗可以包括病毒，如與缺乏這樣突變的病毒混合的混合物中的包括特定突變的嵌合病毒。本發明的疫苗可採用本領域熟知的方法給藥，施用的疫苗的適當量可由本領域計數人員容易地確定。確定施用的病毒的適當量可通過考慮以下因素確定，例如待施用所述病毒的受試者的體型和一般健康狀況。例如，本發明的病毒可以配製成0.1至1.Oml劑量體積中含有IO2和IO8之間，例如IO3至IO7感染單位(例如噬斑形成單位或組織培養感染劑量)的無菌水溶液，以例如肌肉內、皮下或皮內途徑給藥。另外，由於黃病毒可能通過黏膜途徑，例如口腔途徑感染人宿主(Gresikovaetal.，「Tick-borneEncephalitis,"InTheArboviruses,EcologyandEpidemiology,Monath(ed·),CRCPress,BocaRaton,Florida,1988,VolumeIV，177-203)，所以本發明的基於黃病毒的疫苗還可通過黏膜途徑給藥。此外，正如本領域技術人員確定合適的，本發明的疫苗可以單劑量給藥，或可選地給藥可包括使用首劑量，然後例如2-6個月後給予加強劑量。實施例在配製和凍幹兩種疫苗ChimeriVaXTM-WN(包括黃熱病病毒衣殼和非結構蛋白以及西尼羅病毒前膜/膜和包膜蛋白的嵌合黃病毒)和ChimeriVaXTM-JE(包括黃熱病病毒衣殼和非結構蛋白以及日本腦炎病毒前膜/膜和包膜蛋白的嵌合病毒)的開發計劃中，進行下文所述的實驗，但就其他蛋白/肽和/或含有病毒的治療產物的配製和加工而言，這些方法也包括在本發明中，如上所討論。因此，在一個實施例中，本發明的製劑包括IOmM組氨酸(胺基酸)、50mM穀氨酸鉀(胺基酸)、0.HSA(人血清白蛋白，USP)、5%甘露醇以及4%乳糖，pH7.9-8.1。在本發明方法的實施例中，凍幹如下進行。凍幹機擱板預冷至-50°C，一旦所有託盤都放置樣品，擱板-50°C保持120分鐘。一次乾燥步驟過程中，真空設為25mT，步驟包括溫度遞變+0.I0C/分鐘至擱板溫度約-40°C，保持約500分鐘；溫度遞變+0.I0C/分鐘至擱板溫度約_35°C，保持約500分鐘；溫度遞變約+0.I0C/分鐘至擱板溫度約-30°C，保持約500分鐘；溫度遞變+0.I0C/分鐘至擱板溫度約_25°C，保持約800分鐘。在二次乾燥步驟中，真空設為25mT，溫度遞變+0.I0C/分鐘至擱板溫度+20°C，保持約800分鐘。如有必要，產物可在20°C、25mT，再保持最多24小時，然後加塞。在加塞步驟中，用0.22μm過濾的乾燥氮氣室內脫氣，真空設為SOOmbar(略有真空)，將塞子擠到小瓶中。以下提供部分此實施例的基礎，以及包括在本發明中的其他製劑和方法。實施例ι-m^rmm/%mmm(WNPD-045)講行西原羅凍幹研究在此實施例中描述的實驗中，研究了以5%甘露醇、4%乳糖和IOmM組氨酸為基礎的西尼羅製劑。完整的製劑以及相關玻璃體轉化溫度見表2。表2:ffNPD-045製劑和玻璃轉化溫度tableseeoriginaldocumentpage12病毒是將WNPD-001澄清原液(ClarifiedBulk)以1100稀釋在配製緩衝液中製備的。配製在BSC中進行。凍幹在下列條件下進行0.5°C/分鐘溫度遞變至擱板溫度為_55°C，保持120分鐘；當產物溫度達到-50°C時，保持15分鐘；室內設為150mT，前級管道(foreline)設為IOOmT時乾燥；50mT下0.2°C/分鐘溫度遞變至擱板溫度為_20°C，保持1034分鐘；50mT下，0.53°C/分鐘溫度遞變至擱板溫度為20°C，保持大約862分鐘。此凍幹周期在約38小時內完成。對凍乾材料進行加速穩定性研究。一些凍幹瓶37°C培養。第7日和14日時，取出小瓶，標記，置於-80°C儲存。37°C下7天後，所有有穀氨酸鉀的製劑已有明顯的餅收縮。無穀氨酸鉀的製劑沒有此收縮。實驗WNPD-049和WNPD-051為確定這些製劑中病毒穩定性的PFU分析。所有樣品用WFI復溶。結果凍幹後所有製劑看起來非常相似。餅是完整的，沒有出現明顯體積損失。一些餅已從小瓶壁分離，但在製劑中似乎是隨機的。表3顯示了冷凍得率，以及與製劑中使用的澄清原液(ClarifiedBulk)物質比較的經凍幹的得率。表4顯示37°C加速穩定性研究的結表3:ffNPD-045凍幹和冷凍得率tableseeoriginaldocumentpage13表437°C下WNPD-045穩定件tableseeoriginaldocumentpage13tableseeoriginaldocumentpage14結論有HSA的製劑表現非常好，有迄今為止一些最好的結果。-80°C保存沒有明顯損失。這些製劑也顯示非常好的凍幹得率，平均得率為73%。應當指出的是，這些樣品的餅的外觀比起迄今為止任何其他製劑更一致得多。HSA製劑的穩定性非常令人鼓舞。這兩種製劑37°C下14天後顯示llog)。實施例II-ChimeriVaxlg-WN和ChimeriVaxa-TE產物凍幹疫苗的開發此實施例描述了適合ChimeriVaXTM-WN和ChimeriVaXTM-JE疫苗的製劑的開發和表徵，以及這些疫苗凍幹周期的開發和最優化。實驗步驟和結果步驟配製為配製大量樣品(bulk)用於凍幹實驗，將濃的ChimeriVaXTM-WN或ChimeriVax-JEl100稀釋於配製緩衝液中。配製緩衝液組合物根據實驗計劃進行變動。凍幹前得到配製的大量樣品(bulk)，-80°C儲存作為「凍幹前樣品」。凍幹對於直至WNPD-070和直至JEPD-144的實驗，使用FTSDuraStopMP系統凍幹。以JEPD-145開始，使用動力學LyoStarII系統。凍幹參數根據實驗計劃進行變動。所有實驗都使用3mL小瓶。通常使用0.5mL填充體積，但是實驗使用0.3mL填充體積，適當時會指出οChimeriVax-WN噬斑分析噬斑分析用於評估凍幹過程的小瓶回收率和穩定性研究。凍幹的ChimeriVaXTM-WN樣品用注射用水(WFI)或0.9%注射用氯化鈉復溶。復溶的樣品用WNPFU培養基稀釋。稀釋液置於O-Vero板，每孔100μ1，接種每孔2χ105細胞。板37°C和5%CO2下孵育1小時，然後覆蓋甲基纖維素膜。板於37°C、5%C02孵育96士12小時，然後用結晶紫的70%甲醇溶液染色。衝洗染色的板，然後計數。可接受的稀釋每孔有10-120噬斑，每次稀釋計數的所有孔的相對標準偏差<40%。ChimeriVax-JE噬斑分析噬斑分析用於評估凍幹過程的病毒回收率和穩定性研究。凍幹的ChimeriVaXTM-JE樣品用注射用水(WFI)或0.9%氯化鈉注射液復溶。復溶的樣品用JEPFU培養基稀釋。稀釋液置於O-Vero板上，每孔100μ1，接種3χ105個細胞每孔。板37°C、5%CO2孵育1小時，然後用甲基纖維素膜覆蓋。板37°C、5%C02孵育96士12小時，然後用結晶紫的70%甲醇溶液染色。衝洗染色的板，然後計數。可接受的稀釋為10-120個斑塊每孔，每次稀釋計數的所有孔的相對標準偏差<40%。穩定性研究進行了一些溫度的穩定性研究。加速穩定性研究在37°C培養箱中進行。樣品還保持在室溫(15-30°C)、25°C、2-8°C^n-2(rC。零時間樣品_80°C儲存。在一些例子中，於特定天數在提高的溫度下取樣，儲存在-80°C，日後分析。殘留水分分析樣品直接注射到卡爾費休庫侖法水分測定儀中進行殘留水分分析。該測試由Canton,MA的Acambis質量控制小組(QualityControlgroup)按照US02-FRM-158-02完成。差示掃描量熱差示掃描量熱用TAInstrumentsQlOOO進行。液體樣品冷卻到_70°C，然後溫度遞變至20°C。當需要更高的解析度時，使用調製方法。這些方法為製劑緩衝劑候選物產生玻璃化轉變溫度。固體樣品從0°C溫度遞變至120°C。此方法用於評價凍乾物質的玻璃轉化溫度，並確定儲存條件。結果製劑開發概述基於下列標準評價製劑·Tg'-冷凍材料的玻璃轉化溫度·凍幹的餅的外觀·凍幹回收率·凍幹的物質37°C穩定性·凍幹的物質的殘留水分·Tg-凍乾物質的玻璃轉化溫度在早期製劑實驗中評估了大量賦形劑。初篩的成分包括山梨醇、甘露醇、蔗糖、葡聚糖、乳糖、甘氨酸、羥乙基澱粉、噴他澱粉、PEG3350,PVP40K、氯化鈉、氯化鉀、Tween-80、組氨酸、丙氨酸、HEPES、TRIS、穀氨酸鉀、三聚磷酸鹽和磷酸鉀。一些無法得到可接受的餅的製劑凍幹後，病毒回收率非常低(低於30%)。隨著HSA加入製劑中作為穩定劑，病毒回收率開始改善。HSA試驗在實驗WNPD-021中，HSA首次用作穩定劑。不同濃度的HSA加到兩種基礎製劑中。兩種製劑為·羥乙基澱粉、蔗糖、0.山梨醇和50mM穀氨酸鉀·4%乳糖、2%山梨醇、IOmM組氨酸、IOmM丙氨酸和50mM穀氨酸鉀，加入濃度為0%、0.2%、1%和2%的HSA。噬斑分析顯示通過用WFI復溶的下列得率。表5:ffNPD-021凍幹得率tableseeoriginaldocumentpage16實驗JEPD-018進一步探討了HSA作為凍幹製劑的穩定劑的作用。本實驗使用了4%乳糖、2%山梨醇、IOmM組氨酸、IOmM丙氨酸、50mM穀氨酸鉀製劑，並檢查0%、0.05%、0.1%、1%和2%的HSA濃度。凍幹後，在加速穩定性研究中樣品存放在37°C下。表6表明HSA的存在大大提高了凍幹後的病毒得率。37°C儲存5、12和19天後測定效價的樣品顯示明顯良好的回收率(圖1)。HSA濃度超過0.1%，似乎沒有任何明顯改善，因此決定著重於使用0.1%HSA的製劑。表6=TEPD-018凍幹收率和37°C加諫穩定件數據tableseeoriginaldocumentpage17也評估重組穩定劑，以探討是否有可能去除HSA。實驗JEPD-080檢測DeltaBiologies的重組HSA和Fibrogen的重組人明膠(2株-野生型和基因工程的)的用途。重組人明膠重(rHG)產品的使用濃度為0.5%和1%。所有穩定劑用於5%甘露醇、4%乳糖、IOmM組氨酸和50mM穀氨酸鉀的基礎製劑。重組HSA的表現比得上非重組的，但是明膠產品一般凍幹回收率不好，37°C研究中穩定性不好。表7:TEDP-080凍幹收率和37°C加諫穩定件數據tableseeoriginaldocumentpage18篩選緩衝組分組氨酸被選為緩衝組分，因為其pK值接近ChimeriVax產品的最適pH值範圍。我們的目標PH值範圍是7.9-8.1，組氨酸pK3』為8.97。實驗WNPD-033測試5%蔗糖、0.1%HSA和50mM穀氨酸鉀，有或沒有IOmM組氨酸的製劑。將這些製劑凍幹，進行37°C加速穩定性研究。所述兩種凍幹的製劑經復溶得率非常相似(有組氨酸為74%，沒有組氨酸為87%)，並顯示37°C下類似穩定性分布(圖2)。儘管有沒有組氨酸分布都相似，但因其在目標PH值範圍內的緩衝容量，所以選作製劑組分。實驗WNPD-045檢測有或沒有50mM穀氨酸鉀的5%甘露醇、4%乳糖、0.1%HSA和IOmM組氨酸的製劑。將這兩種製劑凍幹，然後37°C孵育28天。37°C孵育過程中間隔7天取樣，得到如圖3所示的穩定性分布。凍幹後這兩種製劑有相當的得率(80%以上)。有50mM穀氨酸鉀的製劑37°C下比沒有穀氨酸鉀的穩定性好。28天後，有穀氨酸鉀的製劑效價損失的對數為0.26。沒有穀氨酸鉀的損失的對數為0.56。根據這些數據，確定製劑中包括50mM穀氨酸鉀。選擇填充劑在WNPD-021中，乳糖首次作為製劑組分進行研究。此實驗得到令人鼓舞的凍幹得率，如表5所示。在JEPD-018中進一步研究乳糖，在加速穩定性試驗中顯示非常有希望的結果(表6和圖1)。實驗WNPD-029闡述了這些令人鼓舞的結果。此實驗採用4%乳糖、2%山梨醇、IOmM組氨酸、IOmM丙氨酸和50mM穀氨酸鉀的基礎製劑。以下數據鞏固了使用HSA作為穩定組分的益處。表8:ffNPD-029凍幹得率和37°C加諫穩定件數據tableseeoriginaldocumentpage19在實驗JEPD-145中，乳糖濃度有變動。濃度2%的乳糖、3%乳糖和4%乳糖都與5%甘露醇、0.HSAUOmM組氨酸和50mM穀氨酸鉀一起凍幹。此實驗表明，3%和4%乳糖表現相似，但在加速穩定性研究中2%乳糖表現不夠好(圖4)。由於使用3%的乳糖沒有可覺察的優勢，因此使用4%的乳糖濃度繼續研究。實驗WNPD-036比較下列三種製劑·4%乳糖、2%山梨醇、IOmM組氨酸、OmM丙氨酸、50mM穀氨酸鉀、0.1%HSA·4%乳糖、3%山梨醇、IOmM組氨酸、50mM穀氨酸鉀、0.1%HSA·4%乳糖、3%甘露醇、IOmM組氨酸、0.1%HAS表9:ffNPD-036凍幹收率和37°C加諫穩定件數據tableseeoriginaldocumentpage20該乳糖/甘露醇製劑表現良好。凍幹後回收率很好，37°C兩星期後效價損失的對數僅有0.15。此製劑被選作進一步研究的候選。人們希望，甘露醇的結晶性能可用於加快凍幹周期。單一的糖製劑其他實驗研究分別利用這些填充劑。WNPD-030檢查僅含甘露醇或蔗糖的製劑。在WNPD-047中檢測乳糖。將這些製劑與WNPD-045的含有5%甘露醇和4%乳糖的兩種糖組合的製劑比較。WNPD-045製劑(5%甘露醇、4%乳糖、0.人血清白蛋白、IOmM組氨酸，50mM穀氨酸鉀)的穩定性遠遠超過了任何單一的糖製劑。所有單一的糖製劑顯示37°C14天後病毒效價損失的對數超過0.9。同一時期甘露醇/乳糖製劑損失的對數只有0.46。這在圖5中有說明。退火在兩次凍幹實驗JEPD-166和JEPD-172中嘗試退火。在這些實驗中，瓶子_50°C冷凍，然後溫度遞變0.8°C/分鐘至-15°c，保持180分鐘退火。下一步降溫0.8°C//分鐘至-50°C，再保持120分鐘，然後開始一次乾燥。這兩個實驗得到很好的餅。退火使甘露醇結晶，餅的外觀是典型晶型甘露醇餅。但是與所有無退火生成餅的實驗相比，退火的物質表現出的穩定性差。退火的樣品37°C儲存兩周後損失的對數近1.0，而非退火樣品通常同一時期損失的對數範圍為0.3-0.5(圖6)。這些數據加上來自單一糖體系的數據，得出這樣的結論結晶甘露醇不利於ChimeriVax產品的穩定。差示掃描量熱法確認結晶退火基本上使所有甘露醇結晶。圖7顯示了4%乳糖溶液的熱分析圖，其玻璃轉化溫度為-32.6°C。圖8顯示當往製劑中加入5%甘露醇時，玻璃轉化溫度降低約6°C至_38°C。然而，退火使甘露醇結晶，並使玻璃轉化溫度恢復到僅乳糖的熱分析圖中所見的範圍。玻璃轉化溫度降低的消失證實甘露醇已完全結晶。可從這些數據得出另一結論。凍幹時乳糖始終保持無定形狀態。製劑本身中的甘露醇將作為結晶物質凍幹，但是當與其它糖類合併時，甘露醇可以是結晶或無定形的。之前的實驗已表明下列情況中穩定性不好·僅乳糖(4%)_其中乳糖為無定形·僅甘露醇(5%)_其中甘露醇為晶型·乳糖(4%)和甘露醇(5%)退火-其中甘露醇為晶型，乳糖為無定形良好的穩定性僅體現在包括這兩種組分的製劑之一。當乳糖(4%)和甘露醇(5%)無退火步驟凍幹時，乳糖和甘露醇都保持無定形狀態。因此無論是無定形的甘露醇或無定形的甘露醇/乳糖組合都賦予凍幹的ChimeriVax優越的穩定性。僅無定形乳糖已證明無效，正如任何類型的晶態甘露醇一樣。最終製劑的支持數據正如上文所述，5%甘露醇、4%乳糖、0.1%HSAUOmM組氨酸和50mM穀氨酸鉀(pH7.9-8.1)被選做ChimeriVax疫苗的製劑緩衝劑。進行了一系列試驗鑑定製劑，並建立和優化凍幹周期。液體穩定性可檢測WNPD-052、JEPD-072和JEPD-087的數據，以表明此製劑在實時_80°C儲存實驗中有極好的穩定性。由於儲存所致的無統計學意義的顯著效價損失可以在這些實驗中觀察到(圖9)。凍幹前-80°C存儲時，此製劑使ChimeriVax產物足夠穩定。差示掃描量熱法差示掃描量熱法(DSC)用於確定此製劑的玻璃轉變溫度(Tg')。圖10顯示了WNPD-045樣品的熱分析圖。這使用調製DSC分析，以改善解析度。圖11是未使用調製掃描即顯示足夠解析度的JEPD-172樣品。這兩個樣本顯示低玻璃化轉變溫度(由中點)，範圍是-38—40"C。水分分析37°C2周後，當將殘留水分的量與疫苗穩定性相比時，可以看到趨勢。圖12顯示從實驗JEPD-072、JEPD-087、JEPD-145,JEPD-147和JEPD-151收集的數據，並顯示與殘留水分的百分比相比效價的損失。凍幹參數表10中顯示的實驗詳述了最終製劑凍幹中使用的參數。還提供凍幹後病毒得率、凍幹餅的水分百分比、凍幹餅的外觀，37°C1周和2周加速穩定性試驗，以及37°C孵育最高時間點。表10最終製劑實駘的凍幹參數tableseeoriginaldocumentpage22tableseeoriginaldocumentpage23tableseeoriginaldocumentpage23*表示從穩定性曲線外推出的數量根據這些數據，有必要確立可移交給合同製造商的凍幹周期。JEPD-151凍幹後有最高得率、37°C下2周後最好的穩定性、最低的水分殘留，並產生一些美學角度最好的餅(圖13)。此實驗的凍幹周期作為提供給合同製造商的技術規範的模型。技術規範這些技術規範是根據JEPD-151，但延長保持時間以彌補不同凍幹機的可能的規模問題。這些規範被移交給WalterReedArmyInstituteofResearch，以滿足ChimeriVax-WN和ChimeriVax-JEPhaseI/II材料的合同。冷凍周期·凍幹機擱板預冷至-500C一旦所有託盤都放置樣品，擱板保持_50°C120分鐘。一次乾燥真空設為25mT·溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-40V，保持500分鐘·溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-35°C，保持500分鐘·溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-30V，保持500分鐘·溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度-25°C，保持800分鐘二次乾燥真空保持在25mT·溫度遞變+0.1°C/分鐘至擱板溫度+20V，保持800分鐘·如果需要，產品可於+20°C、25mT另外保持最高24小時，然後加塞加塞用0.22μm過濾的乾燥氮氣對室內脫氣·真空設為800mbar(稍有真空)將塞子塞入小瓶材料和設備材料·WNPFU培養基-含10%FBS(Hyclone,Catalog#SH30070.03)和Ix青黴素/鏈黴素(Sigma，P4333)的M199培養基(Gibco,Catalog#12340-030).JEPFU培養基-含10%FBS(Hyclone,Catalog#SH30070.03)禾ΠIx青黴素/鏈黴素(Sigma，P4333)，IxL-穀氨醯胺(2福)(Gibco,Catalog#25030-018)和2OmMHEPES的EMEM培養基·甲基纖維素覆蓋膜-含5%或10%FBS(Hyclone,Catalog#SH30070.03)、IxL-穀氨醯胺(Gibco，Catalog#25030-018)，lx抗生素/殺真菌藥(Gibco，Catalog#15240-062)的甲基纖維素(按照S0P#502-066製備)設備·FTSDurastopMP凍幹機·KineticsLyostarII^zFlZl·Orion卡爾費休庫侖法水分測定儀modelAF7LC·TAInstrumentsDSCQ1000(ID#8769)·HeraeusHeracell240培養箱(ID#9055)·VWR低溫培養箱Model2005(ID#s8618和8617)·VWR冰箱(ID#8663)·FischerScientificIsotemp(ID#9059)『RevcoUltimaII(ID#9061)結論/討論此實施例中出現的數據描述旨在ChimeriVax產品的凍幹的製劑的選擇和開發。該製劑已徹底鑑定，並表現出足夠的液體形式的穩定性，以及凍幹後出色的回收率和穩定性。凍幹前，所配製的疫苗可以液體形式_80°C保存，對效價無任何重大影響。此實施例也進行了3mL小瓶，0.5mL填充量的凍幹周期的研發和最優化。此周期應生成有可接受外觀、高病毒回收率(>70%)、低水分殘留(<2%)的餅。提高的溫度下凍乾產品表現出出色穩定性，並且在<-10°C的儲存條件下儲存時沒有明顯效價損失。以上提及的所有出版物的內容在此引作參考。其他實施方案在以下權利要求的範圍內。權利要求組合物，其包含活的減毒黃病毒疫苗、一種或多種穩定劑、一種或多種填充劑，以及一種或多種緩衝組分。2.權利要求1所述的組合物，其中所述穩定劑是人血清白蛋白(HSA)。3.權利要求2所述的組合物，其中所述人血清白蛋白是非重組人血清白蛋白(HSA)。4.權利要求2所述的組合物，其中所述人血清白蛋白是重組人血清白蛋白(rHA)。5.權利要求1所述的組合物，其包含乳糖作為填充劑。6.權利要求1所述的組合物，其包含甘露醇作為填充劑。7.權利要求1所述的組合物，其包含乳糖和甘露醇作為填充劑。8.權利要求1所述的組合物，其包含組氨酸作為緩衝組分。9.權利要求1所述的組合物，其包含穀氨酸鉀作為緩衝組分。10.權利要求1所述的組合物，其包含組氨酸和穀氨酸鉀作為緩衝組分。11.權利要求2所述的組合物，其中所述組合物中所述人血清白蛋白的濃度為約0.05-2.0%。12.權利要求11所述的組合物，其中所述組合物中所述人血清白蛋白的濃度為約0.1%。13.權利要求5或7所述的組合物，其中所述組合物中所述乳糖的濃度為約2-10%。14.權利要求13所述的組合物，其中所述組合物中所述乳糖的濃度為約4%。15.權利要求6或7所述的組合物，其中所述組合物中所述甘露醇的濃度為約2-10%。16.權利要求15所述的組合物，其中所述組合物中所述甘露醇的濃度為約5%。17.權利要求8或10所述的組合物，其中所述組合物中所述組氨酸的濃度為約l-20mMo18.權利要求17所述的組合物，其中所述組合物中所述組氨酸的濃度為約10mM。19.權利要求9或10所述的組合物，其中所述組合物中所述穀氨酸鉀的濃度為約20-80mM。20.權利要求19所述的組合物，其中所述組合物中所述穀氨酸鉀的濃度為約50mM。21.權利要求1所述的組合物，其中所述活的減毒黃病毒是嵌合黃病毒。22.權利要求21所述的組合物，其中所述嵌合黃病毒包含第一黃病毒的結構蛋白和第二不同黃病毒的非結構蛋白。23.權利要求22所述的組合物，其中所述嵌合黃病毒包含所述第一黃病毒的膜和包膜蛋白，以及所述第二不同黃病毒的衣殼和非結構蛋白。24.權利要求23所述的組合物，其中所述第一和第二黃病毒獨立地選自黃熱病、日本腦炎、登革熱-1、登革_2、登革熱_3、登革熱_4、墨萊溪谷腦炎、聖路易腦炎、西尼羅、庫寧、羅西奧腦炎、Ilheus、中歐腦炎、西伯利亞腦炎、俄羅斯春夏腦炎、Kyasanur森林病、Alkhurma、咢β木其Jf克出血熱、跳躍病、Powassan、Negishi、Absettarov、Hansalova、Apoi禾口Hypr病毒。25.權利要求23所述的組合物，其中所述第二黃病毒為黃熱病病毒。26.權利要求25所述的組合物，其中所述黃熱病病毒是YF17D。27.權利要求23所述的組合物，其中所述第一黃病毒為日本腦炎病毒或西尼羅病毒。28.權利要求1所述的組合物，其中所述組合物為凍幹形式。29.權利要求1所述的組合物，其中所述組合物的pH為7.9-8.1。30.組合物，其包含基於蛋白或病毒的藥物、人血清白蛋白、穀氨酸鹼金屬鹽、一種或多種另外的胺基酸以及一種或多種糖或糖醇。31.權利要求30所述的組合物，其中所述人血清白蛋白是非重組人血清白蛋白。32.權利要求30所述的組合物，其中所述人血清白蛋白是重組人血清白蛋白。33.權利要求30所述的組合物，其中所述穀氨酸鹼金屬鹽為穀氨酸鉀。34.權利要求30所述的組合物，其中所述一種或多種其他的胺基酸為組氨酸。35.權利要求30所述的組合物，其中所述一種或多種糖或糖醇是乳糖和/或甘露醇。36.權利要求30所述的組合物，其中所述組合物中所述人血清白蛋白的濃度為約0.05-2.0%。37.權利要求36所述的組合物，其中所述組合物中所述人血清白蛋白的濃度為約0.1%。38.權利要求35所述的組合物，其中所述組合物中所述乳糖的濃度為約2-10%。39.權利要求38所述的組合物，其中所述組合物中所述乳糖的濃度為約4%。40.權利要求35所述的組合物，其中所述組合物中所述甘露醇的濃度為約2-10%。41.權利要求40所述的組合物，其中所述組合物中所述甘露醇的濃度為約5%。42.權利要求34所述的組合物，其中所述組合物中所述組氨酸的濃度為約l-20mM。43.權利要求42所述的組合物，其中所述組合物中所述組氨酸的濃度為約10mM。44.權利要求33所述的組合物，其中所述組合物中所述穀氨酸鉀的濃度為約20-80mM。45.權利要求44所述的組合物，其中所述組合物中所述穀氨酸鉀的濃度為約50mM。46.權利要求30所述的組合物，其中所述組合物為凍幹形式。47.權利要求30所述的組合物，其中所述組合物的pH為7.9-8.1。48.權利要求30所述的組合物，其中所述基於病毒的藥物包含天花疫苗。49.權利要求48所述的組合物，其中所述天花疫苗包含牛痘病毒或減毒牛痘病毒。50.權利要求49所述的組合物，其中所述牛痘病毒或減毒牛痘病毒為ACAM1000、ACAM2000或改良安卡拉痘苗(MVA)。51.權利要求30所述的組合物，其中所述基於蛋白的藥物包含B型肝炎病毒核心蛋白融合體。52.權利要求51所述的組合物，其中所述B型肝炎病毒核心蛋白融合體進一步包含一種或多種流感M2e肽。53.權利要求30所述的組合物，其中所述基於蛋白的藥物包含艱難梭菌的毒素或類毒素。54.製備治療組合物的方法，所述方法包含使權利要求1或權利要求30所述的組合物經凍幹處理。55.權利要求54所述的方法，其中所述方法包含冷凍、一次乾燥和二次乾燥的步驟。56.權利要求55所述的方法，其中所述凍幹步驟包含約_50°C冷凍約120分鐘。57.權利要求55所述的方法，其中所述一次乾燥步驟包含溫度遞變步驟，其包括溫度遞變約+0.rc/分鐘至擱板溫度約-40°c，保持約500分鐘；溫度遞變約+0.rc/分鐘至擱板溫度約-35°C，保持約500分鐘；溫度遞變約+0.rc/分鐘至擱板溫度約-30°c，保持約500分鐘；以及溫度遞變約+0.I0C/分鐘至擱板溫度約_25°C，保持約800分鐘。58.權利要求55所述的方法，其中所述二次乾燥步驟包括溫度遞變步驟，其包括溫度遞變約+0.I0C/分鐘至擱板溫度約+20°C，保持約800分鐘。59.權利要求55所述的方法，其中所述冷凍步驟包含約_40°C冷凍約60分鐘。60.權利要求55所述的方法，其中所述一次乾燥步驟包含溫度遞變步驟，其包括溫度遞變約+0.5°C/分鐘至擱板溫度約_5°C，保持約300分鐘；以及溫度遞變約-0.5°C/分鐘至擱板溫度約-0°C，保持約300分鐘。61.權利要求55所述的方法，其中所述二次乾燥步驟包含溫度遞變步驟，其包括溫度遞變約+0.20C/分鐘至擱板溫度約+30°C，保持約600分鐘；以及溫度遞變約-1.0°C/分鐘至擱板溫度約+5°C，保持約9999分鐘。62.預防或治療受試者疾病的方法，所述方法包含將權利要求1或權利要求30的組合物施用於受試者。63.權利要求62所述的方法，其中所述受試者有黃病毒感染的風險或有黃病毒感染。64.權利要求63所述的方法，其中所述黃病毒感染是日本腦炎病毒、西尼羅病毒、登革熱病毒或黃熱病病毒感染。65.權利要求62所述的方法，其中所述受試者有天花感染的風險或有天花感染。66.權利要求62所述的方法，其中所述受試者有流感感染的風險或有流感感染。67.權利要求62所述的方法，其中所述受試者有艱難梭菌感染的風險或有艱難梭菌感染。全文摘要本發明提供藥物組合物，例如疫苗，以及製備和使用這樣的組合物的方法。文檔編號C12N7/00GK101808657SQ200780049359公開日2010年8月18日申請日期2007年11月7日優先權日2006年11月7日發明者D·C·韋洛姆,J·E·沃伊什維洛,P·德喬治,P·恰拉梅塔羅申請人:賽諾菲巴斯德生物製劑公司