一種四環素的免疫學檢測試紙卡的製作方法
2023-05-09 01:15:01 1
一種四環素的免疫學檢測試紙卡的製作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種四環素的免疫學檢測試紙卡。本實用新型的技術方案要點為：一種四環素的免疫學檢測試紙卡，包括塑料盒體和封裝於塑料盒體內的試紙條，所述的試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對應，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對應。本實用新型操作簡單、快速準確、靈敏度高、成本低、穩定性好，可進行批量檢測。
【專利說明】—種四環素的免疫學檢測試紙卡【技術領域】
[0001]本實用新型屬於食品安全一獸藥殘留免疫化學檢測【技術領域】，具體涉及一種四環素的免疫學檢測試紙卡。
【背景技術】
[0002]四環素類藥物(Tetracycline, TCs)是由鏈黴菌產生的一類鹼性廣譜抗生素，在化學結構上屬於多環並四苯羧基醯胺母核的衍生物，包括金黴素、土黴素、四環素和去甲金黴素，以及半合成的多西環素和米諾環素等。該類藥物能特異性地與細菌核糖體30S亞基的A位置結合，阻止氨基醯-tRNA在該位置上的聯結，從而抑制肽鏈的增長、影響細菌蛋白質的合成。四環素類藥物主要用於立克氏次體、衣原體、支原體及回歸熱螺旋體等非細菌性感染，以及治療敏感菌引起的呼吸道、膽道、尿路及皮膚軟組織等部位的多種感染性疾病。在畜禽生產中，四環素類藥物被廣泛作為治療藥物和藥物添加劑使用，用於防治消化道感染、促進生長和提高奶牛產奶量。
[0003]隨著四環素類抗生素被大量、廣泛的應用於禽畜養殖業，其造成的食品殘留給人類身心健康帶來極大的安全隱患。人長期攝入四環素類抗生素會引起各種慢性和蓄積性疾病，主要表現為對胃、腸、肝臟的損害，以及牙齒的染色，還會造成過敏反應、二重感染、致畸胎等，同時還會導致人體腸道中菌群平衡的失調以及耐藥菌株的產生。因此，世界各國對TCs殘留檢測十分關注。日本要求進口畜禽肉中四環素族殘留量不得超過0.05 mg/kg，澳大利亞規定四環素類總量不得大於0.3 mg/kg，歐盟一律標準為0.01 mg/kg，美國藥品監督管理局規定TCs在動物肌肉組織中殘留總量不超過0.02 mg/kg，牛奶中為0.3 mg/kg。我國農業部於2002年修訂了《動物性食品中獸藥最高殘留限量》，其中規定牛/羊奶以及所有動物肌肉中四環素類抗生素的最高殘留量為0.1 mg/kg，對動物肝臟、腎臟、蛋中四環素殘留也有相應限量規定。
[0004]食品中四環素類抗生素殘留檢測方法有高效液相色譜法、毛細管電泳法、電化學分析、化學發光及液相色譜一質譜聯用法等，這些方法對待測樣品的前處理要求高，且操作煩瑣，需要精密的儀器設備；與之相比，免疫學分析技術具有靈敏、快速、特異、簡便等優點，是近年來逐漸發展起來的一種重要的痕量檢測技術，在獸藥殘留分析領域應用越來越多，具有廣闊的推廣應用前景。
[0005]膠體金標記免疫分析法是近年來迅速發展的一種新型分析技術，其特點是簡便快速、成本低、無汙染、無需培訓，非常適合於現場檢測。與ELISA相比，具有樣品前處理簡單，顯色時間短(3-5 min)，且所有試劑包含在一根試紙條上，無需使用儀器等優點，具有廣闊的市場前景和應用價值。因此，研製快速、靈敏、高效的四環素免疫學檢測試紙卡對於保障動物性食品安全具有十分重要的意義。
【發明內容】
[0006]本實用新型解決的技術問題是提供了一種操作簡單、快速準確、靈敏度高、成本低、穩定性好，可進行批量檢測的四環素的免疫學檢測試紙卡。
[0007]本實用新型的技術方案是:一種四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的四環素的免疫學檢測試紙卡包括塑料盒體和封裝於塑料盒體內的試紙條，所述的試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對應，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對應，所述的硝酸纖維素膜上有四環素一載體蛋白偶聯物溶液印製的檢測線(T線)和羊抗鼠IgG溶液印製的質控線(C線)，兩者間距5 _，其中四環素一載體蛋白偶聯物溶液印製的檢測線(T線)位於靠近樣品墊的一側，所述的結合墊上灌注有膠體金標記的抗四環素單克隆抗體。
[0008]本實用新型所述的支撐層是由聚氯乙烯樹脂與穩定劑及輔料配合製成的PVC板。本實用新型所述的吸收墊是由吸水能力極強的植物長纖維為原材料製成的純白濾紙。本實用新型所述的樣品墊和金標抗體結合墊是由玻璃纖維棉製作而成的。本實用新型所述的樣品墊和金標抗體結合墊的疊壓寬度為2 mm,吸收墊與硝酸纖維素膜的疊壓寬度為2 _。本實用新型所述的樣品墊、金標抗體結合墊和吸收墊上方覆蓋有膠膜保護層。本實用新型所述的硝酸纖維素膜兩端分界處有標記線。
[0009]本實用新型具有以下優點:(1)靈敏度高、特異性強。四環素的免疫學檢測試紙卡以膠體金標記高親和力的單克隆抗體製備而成，金標抗體中金顆粒與抗體分子通過異性電荷間範德華力相結合，膠體金對單克隆抗體的特異性和親和力影響很小。因此，快速檢測試紙卡具有較高的靈敏度和特異性，其檢測靈敏度可達6 ng/ml ；
[0010](2)操作簡單、方便快捷。使用快速檢測試紙卡時無需其它任何試劑，只要將處理後的樣品溶液用滴管滴入試紙卡加樣孔內3~4滴，3飛min即可觀察結果；
[0011](3)檢測結果形象、直觀。試紙卡以紅色印跡線「 I 」或「 Il 」作為檢測線的陽性和陰性標記，即在硝酸纖維素膜上質控線(C線)顯示一條紅色「 I 」印跡時，表示被檢測樣品溶液中四環素殘留含量≤6 ng/ml ;若硝酸纖維素膜上質控線(C線)和檢測線(T線)同時出現兩條紅色「 Il 」印跡時，表示樣品溶液中四環素殘留含量<6 ng/ml。結果形象直觀，簡單準確，不容易出現誤判；
[0012](4)膠膜的使用可以延長檢測結果觀察時間，試紙卡穩定性好。本試紙卡樣品吸收墊將檢測溶液完全吸收，使之與偶聯墊上金標抗體充分反應，可以有效減少誤差率；還可以防止外界雜質幹擾，影響金標抗體與檢測抗原的結合；
[0013](5)成本低、投資少。使用本實用新型試紙卡，不需要另配複雜的儀器設備和昂貴的試劑，現場檢測一步到位，成本低廉，見效快；
[0014](6)易於大範圍推廣應用。本試紙卡操作簡單，適合不同類別的人員使用，如實驗室檢測、海關檢疫、衛生監督、規模養殖及個體生產等，具有廣闊的市場前景和較大的經濟效益和社會效益。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015]圖1是本實用新型的結構示意圖；圖2是本實用新型中試紙條的側視圖；圖3是本實用新型中試紙條的俯視圖。【具體實施方式】
[0016]結合附圖詳細描述實施例。一種四環素的免疫學檢測試紙卡，包括塑料盒體I和封裝於塑料盒體I內的試紙條2，所述的試紙條2的底層為支撐層3，該支撐層3上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊4、金標抗體結合墊5、硝酸纖維素膜6和吸收墊7，所述的塑料盒體I上開有加樣孔8和觀察窗9，該加樣孔8的位置與試紙條2上的樣品墊4位置相對應，觀察窗9與試紙條2上的硝酸纖維素膜6位置相對應，所述的硝酸纖維素膜6上有四環素一載體蛋白偶聯物溶液印製的檢測線(T線)11和羊抗鼠I gG溶液印製的質控線(C線)10，兩者間距5 _，其中四環素一載體蛋白偶聯物溶液印製的檢測線(T線)11位於靠近樣品墊4的一側，所述的結合墊5上灌注有膠體金標記的抗四環素單克隆抗體。
[0017]本實用新型所述的支撐層3是由聚氯乙烯樹脂與穩定劑及輔料配合製成的PVC板。本實用新型所述的吸收墊7是由吸水能力極強的植物長纖維為原材料製成的純白濾紙。本實用新型所述的樣品墊4和金標抗體結合墊5是由玻璃纖維棉製作而成的。本實用新型所述的樣品墊4和金標抗體結合墊5的疊壓寬度為2 mm,吸收墊7與硝酸纖維素膜6的疊壓寬度為2 _。本實用新型所述的樣品墊4、金標抗體結合墊5和吸收墊7上方覆蓋有膠膜保護層12。本實用新型所述的硝酸纖維素膜6兩端分界處有標記線13。
[0018]本實用新型所述的試紙卡的檢測原理:
[0019]試紙卡根據抗原抗體競爭性免疫層析原理設計。滴加樣品液後，在吸收墊和硝酸纖維素膜的毛細作用下，樣品溶液向上遷移，到達結合墊時，金標抗體將被溶解。當樣品中含有四環素時，它們將和金標抗體結合，並一起向上遷移，到達固定有TC-OVA的檢測線位置時，檢測抗原將和四環素競爭結合金標抗體上有限的抗原結合位點。樣品中TC含量越高，檢測抗原和金標抗體結合數量就越少，T線顯色就越弱；當樣品中TC高於一定數值(6ng/ml)時，檢測抗原就無法和金標抗體結合，T線不顯色。無論樣品中是否有TC存在，過量的金標抗體或檢測抗原與金標抗體的結合物都將和二抗GaMIgG結合，在C線形成紅色。
[0020]本實用新型所述的試紙卡的使用方法:
[0021]I)樣品前處理:
[0022]稱取切碎、勻質後的動物組織樣品1.0±0.05 g至5 ml離心管中，加入2 ml pH
4.0的Mcllvaine-EDTA樣品提取液,鏇潤混合3?5 min,室溫下4000 r/min離心5 min ；移取I ml上清液於5 ml離心管中，加入50 μ I 4 mol/L NaOH,振蕩混勻；再加入I ml正己烷，漩渦混合30 s;靜置5 min分層後，吸取至少100 μ I下層溶液與等體積PBS緩衝液混合後待檢。
[0023]2)樣品滴加:
[0024]將試紙卡平放後，用滴管將樣品溶液滴入試紙卡加樣孔內3?4滴，3飛min後即可觀察結果。
[0025]3)檢測結果分析:
[0026]陰性:若硝酸纖維素膜上質控線(C線)和檢測線(T線)同時出現兩條紅色「 Il 」印跡時，表示樣品溶液中四環素殘留含量< 6 ng/ml，判為陰性。
[0027]陽性:若硝酸纖維素膜上質控線(C線)顯示一條紅色「 I 」印跡，而檢測線(T線)不顯色，表示被檢測樣品溶液中四環素殘留含量> 6 ng/ml，判為陽性。
[0028]無效:若硝酸纖維素膜上質控線(C線)不顯示紅色條帶，則無論檢測線(T線)是否出現紅色印跡，該試紙卡均判為無效。
【權利要求】
1.一種四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的四環素的免疫學檢測試紙卡包括塑料盒體和封裝於塑料盒體內的試紙條，所述的試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對應，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對應，所述的硝酸纖維素膜上有四環素一載體蛋白偶聯物溶液印製的檢測線和羊抗鼠IgG溶液印製的質控線，兩者間距5 mm，其中四環素一載體蛋白偶聯物溶液印製的檢測線位於靠近樣品墊的一側，所述的結合墊上灌注有膠體金標記的抗四環素單克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的支撐層是PVC 板。
3.根據權利要求1所述的四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的吸收墊是由植物長纖維為原材料製成的純白濾紙。
4.根據權利要求1所述的四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的樣品墊和金標抗體結合墊是由玻璃纖維棉製作而成的。
5.根據權利要求1所述的四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的樣品墊和金標抗體結合墊的疊壓寬度為2 mm,吸收墊與硝酸纖維素膜的疊壓寬度為2 mm。
6.根據權利要求1所述的四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的樣品墊、金標抗體結合墊和吸收墊上方覆蓋有膠膜保護層。
7.根據權利要求1所述的四環素的免疫學檢測試紙卡，其特徵在於:所述的硝酸纖維素膜兩端分界處有標記線。
【文檔編號】G01N33/577GK203385730SQ201320434943
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年7月19日 優先權日:2013年7月19日
【發明者】原小燕, 王玉橋, 王文典, 郭芳, 王洪潤, 張紹鈴, 慄克文 申請人:河南知微生物工程有限公司