翠雲草提取物及其製備方法和用途的製作方法

2023-04-27 16:42:31 1

專利名稱：：翠雲草提取物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
：本發明提供了翠雲草提取物及其製備方法和用途，屬於中藥領域。
背景技術：
：缺氧是指氧氣缺乏症，即空氣中缺氧或氧氣缺乏狀態的總稱,機體缺氧時會弓I起機能代謝變化，包括機體對缺氧的代償性反應和由缺氧引起的代謝與機能障礙。對機體的呼吸系統，循環系統，血液系統等各個系統均會產生不同程度的影響。我國1/2的國土面積位於西部，處於自然環境相對惡劣地區，高原低氧等自然因素嚴重影響了此地人群的居住、生存、開發與發展。特別是佔我國國土面積近l/5的"世界屋脊"青藏高原和帕米爾高原等地區的初步勘測已發現了多個重要的戰略礦產資源，而進一步的勘察、挖掘和運輸需要大量的人力，更需要有效地醫學防護。隨著青藏鐵路的修通，沿路將有四萬人登上高原工作。在不遠的將來，川藏、滇藏等鐵路也將修通，再加上遊客的逐年遞增，低壓缺氧嚴寒環境對人體的影響顯得尤為突出。"世界屋脊"青藏高原和帕米爾高原以及廣闊的沙漠地區位於我國西部邊陲要地。進行建設和保障安全都要求大規模人群進駐。在這一歷史進程中，對低氧、高寒和高溫等危害因素的預警一預防一診斷一治療的四位一體的衛勤保障體系將在保障進駐人群的作業能力和生命安全方面發揮不可替代的作用。對缺氧症的研究有助於管理與開發這些少數民族聚集的邊陲要地。低氧等惡劣環境因素與機體交互作用研究並不限定於高原地區。作為個體，人體面對的是外在環境中的惡劣環境因素，而對於生命的基本單位一細胞而言，面對的是內環境中的惡劣環境因素。生物、化學、物理等因素外在環境因素都可以通過破壞內環境的平衡、造成內環境紊亂進一步影響細胞功能，而心跳停止造成的內環境極度缺氧正是生命體死亡的最終通路。許多重大疾病的發病與轉歸中都涉及了機體內環境的低氧、低溫等問題。如我國死亡率前四名的心臟病、腦中風、腫瘤、呼吸系統疾病都直接或間接與機體內環境的低氧有關。機體進入高海拔低壓、低氧環境後，受低氧、寒冷等環境刺激引起周邊小血管收縮，中心循環量增加，心功能失調和肺動脈壓升高，引起組織器官水腫，另一方面則由於周邊組織和器官血管阻力增加，血流緩慢和減少，更進一步缺血和缺氧，產生嚴重急慢性高原病。神經系統對於缺氧最為敏感，即便輕度缺氧也有可能出現智力和視覺的功能紊亂。腦是人體各器官中對氧的需求最大的器官。腦的重量只佔體重的2%3%，而腦的耗氧量佔人體總耗氧量的20%30%。心臟輸出血量的15%都供給了腦。但是，腦組織本身幾乎沒有一點點供能物質儲備，全部依靠腦循環帶來新鮮血液裡面的氧氣來維持生存和執行正常的生理功能。所以，腦組織對缺氧(缺血)的耐受能力最.低。腦的慢性輕度缺氧即可引發睏倦、注意力分散、記憶力降低等症狀，隨之出現意識障礙、驚厥、昏睡或昏迷，以至死亡。如果腦的供血供氧完全中斷，在815秒就會喪失知覺，610分鐘就會造成不可逆轉的損傷。[4]由於缺氧造成的腦疾病包括缺氧缺血性腦損傷，腦缺血再灌注損傷，腦缺血再灌注後所致肺損傷，腦卒中，腦栓塞，新生兒缺血缺氧性腦病，缺氧性神經細胞凋亡。心臟也是耗氧量大、代謝率高和氧儲備少的器官，所以對於缺氧也很敏感，最容易受到損傷。嚴重缺氧和持續缺氧，可使心肌收縮力降低、心率緩慢、心臟的血液輸出量減少，與缺氧症狀形成惡性循環，甚至心肌細胞變性、壞死。持續的慢性缺氧容易發生心力衰竭。心肌缺氧缺血造成的疾病包括心肌缺血再灌注損傷，冠心病，心絞痛，繼發性彌散性血管內凝血等。身體的其它器官由於缺氧還會造成各種缺血再灌注損傷肝臟缺血再灌注損傷，腸缺血再灌注損傷，視網膜缺血再灌注損傷等。此外，缺氧與腫瘤的增生和轉移直接相關。等有關。並且，缺氧性聽功能損傷，一氧化碳中毒，休克，心力衰竭以及許多呼吸系統疾病，如肺動脈高壓等疾病都於缺氧有關。另外缺氧還易引起疲勞，衰老等非器質性疾病，使人處於亞健康狀態。氧對生物體來說是必不可少的，但生物體內的氧過量時氧在生物體內通過單電子還原產生化學性質活潑的物質稱活性氧(R0S)，它們包括超氧負離子自由基(02—)、過氧化氫01202)和羥基自由基(OH)等。儘管活性氧的半衰期很短，它們可以與DNA、蛋白質和多元不飽和脂肪酸(PUFA)作用，造成DNA鏈斷裂和氧化性損傷、蛋白一蛋白交聯、蛋白一DNA交聯和脂質過氧化。脂質過氧化是造成生物體氧化損傷的主要原因。PUFA是生物膜的基本組成，極易被ROS引發的脂質過氧化所損傷，造成生物膜結構和功能的破壞，從而引起各種疾病。經過多年的研究現已證明自由基與一百多種人類疾病有關，目前抗氧化劑在醫學上已取得了廣泛的應用。簡述如下1、腫瘤。腫瘤的發生與活性氧過量有關，自由基能引起致癌物質在人體內的擴展和連鎖反應，攻擊DNA造成多種形式的損傷，誘發腫瘤形成。維持機體氧化與抗氧化平衡，是預防與治療腫瘤的一條合理途徑，目前己從抗氧化劑中發現了許多有苗頭的化學預防藥物。2、心血管疾病。自由基在動脈粥樣硬化過程中扮演重要角色，血管壁內可產生多種自由基，它們獨自或聯合參與了動脈粥樣硬化的發生與發展過禾呈，抗氧化劑抗動脈粥樣硬化發生和發展的作用是肯定的。實驗證明亦顯示抗氧化劑對內皮細胞損傷、心肌缺血再灌注損傷具有保護作用，在冠心病、高血壓、急性心肌梗死後心臟重塑、心力衰竭、血管成形術後再狹窄等芯血管疾病的治療中都起到積極的作用。3、腦損傷。腦損傷後，活性氧自由基R0S增加，以不同的細胞分子機制引起組織損傷。抗氧化劑可防止腦組織損傷，改善神經細胞存活率及功能。因此，抗氧化劑還應用於治療缺血性腦血管疾病(中風)、新生兒缺氧缺血性腦病，腦卒中，腦缺血，腦梗死等腦部疾病以及癲癇、中樞神經系統感染等神經系統病變。4、衰老及由衰老引起的疾病。目前認為，自由基攻擊生物膜多聚不飽和脂肪酸、DNA、蛋白質和其他生物大分子引發的氧化損傷是導致機體老化及許多老年病的主要因素，體內過多的氧自由基誘發脂質過氧化，引起細胞的破壞、衰亡，最終導致機體的衰老和功能障礙，因此抗氧化劑能夠起到抗衰老及治療由衰老引起包括:阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、瀰漫性Lewy體病，Pick's病、老年感音神經性聾等疾病在內的各種神經變性疾病。5、腎臟疾病。氧自由基及脂質過氧化反應在腎臟疾病的發生、發展過程中起重要作用，因此抗氧化治療可提高腎臟疾病的治癒率，延緩或減少腎功能不全的發生率。近幾年來，對急性腎小管壞死、色素性腎功能不全、腎病綜合症、溶血尿毒綜合症、急慢性腎衰竭、腎小球疾病、腎缺血-再灌注、慢性血液透析、腎功能不全、腎移植、小兒間質性腎炎、腎盂腎炎等腎臟疾病的抗氧化治療取得了較好的治療效果。6、肺部疾病。肺臟終生暴露於不利的環境中，從生理學功能來看，同時受到來自吸入氣體，體循環和本身病理過程釋放的自由基的不斷損害，因此，對抗氧化的要求較高。氧化、抗氧化失衡在肺部許多疾病的發生和發展中起重要作用。與氧化性損傷相關的肺疾病主要有慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纖維化、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)、肺癌、慢性支氣管炎、哮喘、支氣管肺發育不良(BPD)、呼吸道細菌感染、肺水腫、氧中毒、異物引起的氧化劑肺損傷、氣體吸入引起的肺損傷等。7、各種肝病。氧化應激是包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病(ALD)、自身免疫性肝臟疾病(AILD)、非酒精性脂肪肝(NASH)、肝硬化、肝癌等在內的各種肝臟疾病發生和發展的常見病理機制，抗氧化劑理論上有可能成為治療慢性肝病的一種有效方法。目前的一些試驗性研究也均獲得較為肯定的結果，值得進一步研究。8、消化道疾病。消化道是動物體內營養素消化、吸收和代謝的主要器官，因此過量的自由基極易誘發消化道疾病，其特徵是腺體分泌異常、腸道損傷及腸黏膜通透性升高，導致消化系統功能異常和腸源性感染。實驗證明與氧由基有密切的關係而且抗氧化劑可預防和治療的消化系統疾病包括胃黏膜損害、慢性胃炎、消化性潰瘍、急性胰腺炎、炎性腸病、反流性食管炎、結腸炎、消化道的缺血再灌注、消化道炎症、消化道腫瘤等。9、婦科疾病。實驗證明多種婦科疾病宮頸癌、卵巢癌、惡性滋養體細胞癌、宮體癌、子宮肌瘤、卵巢囊腫、子宮內膜異位症、妊娠高血壓症候群、自然流產、胎膜早破、子癇前期、妊娠滋養細胞疾病(良性葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨毛膜上皮癌)與自由基的增加有關，氧化/抗氧化角度是治療婦科疾病的新途徑。10、皮膚病。人皮膚是機體直接暴露於外界環境的第一屏障，其承受著來自外界環境的氧化壓力。紫外線等多種汙染物可產生氧化壓力，其所致的氧化損傷在多種皮膚病的發病中起著重要的作用。氧化損傷主要是由於皮膚中氧化壓力與抗氧化防禦系統的失衡所致。氧化損傷使機體受損而處於各種病理狀態，其與皮膚腫瘤、光老化、多形性日光疹、紅斑狼瘡、白癜風及銀屑病等多種皮膚疾病的發生有一定的相關性。合理運用抗氧化劑可有助於皮膚拮抗外源性氧化應激物，在防曬劑中加入抗氧化劑可提高光防護產品的安全性及療效。11、糖尿病及其併發症。高血糖引起的自由基產生過多或消除障礙導致氧化應激的出現，氧化應激與糖尿病及其併發症(動脈硬化、糖尿病血管併發症、糖尿病神經病變、糖尿病腎病、糖尿病視網膜病變、白內障等)的發生發展密切相關。抗氧化治療為糖尿病及併發症的防治提供了新的思路。12、病毒感染。氧化應激與病毒感染之間存在多種病理學關係。病毒誘導宿主細胞產生氧化應激，釋放大量活性氧介質(R0S),R0S又對病毒的複製及宿主細胞抗病毒作用產生影響。在病毒性感染(流感病毒，B肝病毒和HIV)的控制上有人嘗試應用抗氧化劑作為治療手段。13、眼科疾病。各種原因和各種途徑均可導致晶體自由基的產生，如自由基產生過多或清除過少，導致自由基聚集而產生晶體細胞、蛋白質和脂質過氧化，隨之晶體發生混濁。近年來研究表明，氧自由基損傷是白內障及老年性黃斑變性等眼科疾病發生的首位危險因素。14、口腔疾病。具有良好的抗氧化性能和顯著的清除自由基能力能力的抗氧化劑在口腔齲齒、口臭、牙周炎、口腔白斑以及口腔黏膜的炎性損fe、潰瘍、癌變等口腔疾病治療中取得了廣泛的應用。15、肥胖。目前各國的研究比較一致地發現肥胖與機體氧應激水平顯著升高、抗氧化能力下降有關，氧應激可能是肥胖引起一系列疾病的病因之一，因此可以此為靶點採取預防措施，減少肥胖以及相關疾病的發生。缺氧與氧化之間存在著必不可分的關係，在缺氧條件下，生物機體內自.由基代謝紊亂，其濃度升高，機體抗氧化系統遭到破壞；高濃度自由基通過生物膜脂質過氧化，使生物膜流動性減小，剛性增強,通透性增大，細胞內鈣超載，細胞信號傳導異常;攻擊蛋白質和酶，使其結構破壞，功能喪失，活性降低，導致物質代謝和能量代謝障礙;攻擊DNA分子，使其發生突變甚至發生斷裂，從而誘發機體病變。因此，外源性抗氧化劑能夠減輕缺氧對機體的損傷。
發明內容'本發明的首要目的在於提供翠雲草提取物用於製備抗缺氧或/和抗氧化藥物的用途。本發明的另一目的在於提供具有上述用途的翠雲草提取物。本發明的再一目的在於提供一種製備上述翠雲草提取物的方法。翠雲草提取物用於製備抗缺氧的藥物，可用於由缺氧引起的急慢性高原病、缺氧缺血性腦損傷、腦缺血再灌注損傷、腦缺血再灌注後所致肺損傷、腦卒中、腦栓塞、新生兒缺血缺氧性腦病、心肌缺氧缺血及缺血再灌注損傷、冠心病，心絞痛、各種缺血再灌注損傷、腫瘤增生、肺動脈高壓疾病。翠雲草提取物用於製備抗氧化的藥物，可用於由自由基引起的動脈粥樣硬化、內皮細胞損傷、心肌缺血再灌注損傷、冠心病、高血壓、急性心肌梗死後心臟重塑、心力衰竭、血管成形術後再狹窄，缺血性腦血管疾病、新生兒缺氧缺血性腦病'、腦卒中、腦缺血、腦梗死，癲癇、中樞神經系統感染，阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、老年感音神經性聾，急性腎小管壞死、色素性腎功能不全、腎病綜合症、溶血尿毒綜合症、急慢性腎衰竭、腎小球疾病、腎缺血-再灌注、慢性血液透析、腎功能不全、腎移植、小兒間質性腎炎、腎盂腎炎，慢性阻塞性肺病、肺纖維化、急性呼吸窘迫症候群、肺癌、慢性支氣管炎、哮喘、支氣管肺發育不良、呼吸道細菌感染、肺水腫、氧中毒、異物引起的氧化劑肺損傷、氣體吸入引起的肺損傷，慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝臟疾病、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌，胃黏膜損害、慢性胃炎、消化性潰瘍Z急性胰腺炎、炎性腸病、反流性食管炎、結腸炎、消化道的缺血再灌注、消化道炎症、消化道腫瘤，宮頸癌、卵巢癌、惡性滋養體細胞癌、宮體癌、子宮肌瘤、卵巢囊腫、子宮內膜異位症、妊娠高血壓症候群、自然流產、胎膜早破、子癇前期、良性葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨毛膜上皮癌，皮膚腫瘤、光老化、多形性日光疹、紅斑狼瘡、白癜風、銀屑病、糖尿病及其併發症、流感病毒、B肝病毒、白內障、老年性黃斑變性、口腔齲齒、口臭、牙周炎、口腔白斑、口腔黏膜的炎性損傷、潰瘍、癌變和肥胖。所述翠雲草提取物含有翠雲草非黃酮類提取物或翠雲草總黃酮類提取物或兩者的混合物。所述翠雲草提取物和藥學上可接受的載體製成各種抗缺氧或/和抗氧化的口服藥物，可製成片劑、膠囊劑等各種劑型。上述翠雲草提取物用下述製備方法得到-(1)將翠雲草的乾燥全草粉碎，用810倍翠雲草重量的水性溶劑回流提取；(2)過濾或離心去除不溶物，減壓乾燥，得到翠雲草初提物；(3)將翠雲草初提物進行大孔樹脂開放柱層析，用體積百分比為30%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草非黃酮類提取物，用體積百分比為95%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草總黃酮類提取物。步驟(1)所述的水性溶劑是純水或體積百分比為20%80%的乙醇、甲醇水溶液。步驟(1)所述的回流提取是冷浸提取、滲漏提取、索氏提取或熱回流提取。步驟(1)所述的回流提取的提取溫度為20-100°C，分26次進行，每次回流提取15小時，然後合併提取液。本發明的作用機理是本發明提供的翠雲草提取物具有較強的抗氧化作用，易於與體內的自由基相結合，可以降低缺氧狀態下生物機體內過高的自由基濃度，保護機體抗氧化系統不被破壞。具體實施例方式實施例1(1)將翠雲草的乾燥全草4.2公斤粉碎，用8倍翠雲草重量的60%乙醇索氏提取2次，每次1小時，提取溫度為55。C，合併提取液；(2)過濾去除不溶物，減壓乾燥，得到翠雲草初提物856g;(3)取翠雲草初提物800g進行大孔樹脂開放柱層析，用體積百分比為3:0%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草非黃酮類提取物500g，用體積百分比為95%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草總黃酮類提取物250g。實施例2(1)將翠雲草的乾燥全草2.0公斤粉碎，用9倍翠雲草重量的20%甲醇滲漏提取3次，每次4小時，提取溫度為25。C，合併提取液；(2)過濾去除不溶物，減壓乾燥,，得到翠雲草初提物382g;(3)取翠雲草初提物330g進行大孔樹脂開放柱層析，用體積百分比為30%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草非黃酮類提取物210g，用體積百分比為95%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草總黃酮類提取物93g。實施例3(1)將翠雲草的乾燥全草2.0公斤粉碎，用10倍翠雲草重量的水熱回流提取6次，每次5小時，提取溫度為95。C，合併提取液；(2)過濾去除不溶物，減壓乾燥，得到翠雲草初提物446g;(3)取翠雲草初提物400g進行大孔樹脂開放柱層析，用體積百分比為300%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草非黃酮類提取物262g，用體積百分比為》5%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草總黃酮類提取物105g。實施例4取實施例1製得的翠雲草提取物配製成濃度為25昭/L、50jig/L、IOO昭/L的藥液作為藥物組，以10%CH3OH、10%DMSO為對照組，對PC12細胞進行細胞缺氧保護試驗，計算PC12細胞存活百分率。實驗結果經Student'sttest計算，表示為mean士SD。結果見表1表i翠雲草提取物對PC12細胞缺氧損傷的影響tableseeoriginaldocumentpage11注與對照組相比*P<0.05，**P<0.01結論與空白溶劑對比翠雲草初提物、翠雲草總黃酮類提取物以及翠雲草非黃酮類提取物對缺氧PC12細胞均有強弱不等的保護作用。其中，翠雲草總黃酮類化合物作用最強，翠雲草非黃酮類提取物作用次之，翠雲草初提物作用較弱。總之，實驗結果表明這三種翠雲草提取物均具有較強的體外抗缺氧活性。實施例5取實施例1製得的翠雲草提取物分別配製成濃度為40mg/mL的藥液作為藥物組，以20%DMSO為對照組，於缺氧前30min灌胃處理小鼠(20mg/0.5ml、相當於lg/Kg體重)，進行小鼠密閉性缺氧耐力試驗，觀察小鼠在密閉條件下的存活時間。結果見表2。表2胃內灌注各翠雲草提取物對密閉性缺氧小鼠存活時間的影響tableseeoriginaldocumentpage11注與對照組相比*P<0.05,**P<0.01結論與空白對照相比，這三種翠雲草提取物均能提高小鼠在密閉缺氧條件下的存活時間。其中，胃內灌注翠雲草總黃酮類提取物提取物的小鼠的存活時間最長；胃內灌注翠雲草初提物以及翠雲草非黃酮類提取物的小鼠的存活時間次之。總之，實驗結果表明這三種翠雲草提取物均具有較強的體內抗缺氧活性，可以作為抗缺氧藥物應用。實施例6將10g翠雲草初提物和20g可壓性澱粉混合均勻，加入適量濃度為10%的澱粉漿製成軟材，制粒後置於80°C下乾燥後於12目篩整粒，加入滑石粉5g混合後，單衝壓片機壓片，即得翠雲草初提物片劑。將3g翠雲草總黃酮類提取物和20g可壓性澱粉混合均勻，加入適量濃度為10%的澱粉漿製成軟材，制粒後置於80°C下乾燥後於12目篩整粒，加入滑石粉2g混合後，單衝壓片機壓片，即得翠雲草總黃酮類提取物片劑。將5g翠雲草非黃酮類提取物和20g可壓性澱粉混合均勻，加入適量濃度為10%的澱粉槳製成軟材，制粒後置於so。c下乾燥後於'i2目篩整粒r加入滑石粉3g混合後，單衝壓片機壓片，即得翠雲草非黃酮類提取物片劑。實施例7將實施例6中製得的三種提取物片劑配製成濃度為40mg/mL的藥液作為藥物組，以20。/。DMSO為對照組，進行小鼠密閉性缺氧耐力試驗，觀察'小鼠在密閉條件下的存活時間。結果見表3。表3胃內灌注各片劑藥物對密閉性缺氧小鼠存活時間的影響tableseeoriginaldocumentpage12注與對照組相比*P<0.05，*P<0.01結論從表3以看出，與空白對照組相比實施例4製得的翠雲草提取物片劑藥物(處方l、處方2和處方3)均能顯著的提高小鼠在密閉缺氧條件下的存活時間，具有一定的體內抗缺氧活性，可以作為抗缺氧藥物使用。實施例8將15g翠雲草初提物和20g澱粉混合均勻，加入適量濃度為10%的澱粉漿製成軟材，制粒後置於80。C下乾燥後於12目篩整粒，加入硬脂酸鎂2g混合後，灌裝膠囊，即得翠雲草初提物膠囊劑。將5g翠雲草總黃酮類提取物和20g澱粉混合均勻，加入適量濃度為10%的澱粉漿製成軟材，制粒後置於80°C下乾燥後於12目篩整粒，加入硬脂酸鎂lg混合後，灌裝膠囊，即得翠雲草總黃酮類提取物膠囊劑。將8g翠雲草非黃酮類提取物和20g澱粉混合均勻，加入適量濃度為10%的澱粉漿製成軟材，制粒後置於80。C下乾燥後於12目篩整粒，加入硬脂酸鎂4g混合後，灌裝膠囊，即得翠雲草非黃酮類提取物膠囊劑。實施例9將實施例8中製得的三種提取物膠囊劑配製成濃度為40mg/mL的藥液作為藥物組，以20。/。DMSO為對照組，進行小鼠密閉性缺氧耐力試驗，觀察小鼠在密閉條件下的存活時間。結果見表3。表4胃內灌注各膠囊劑藥物對密閉性缺氧小鼠存活時間的影響，(分'秒〃)"，樣品(20mg/0.5ml)動物數(n)劑量(g/kg)~~存活時間(分'秒")~~~tableseeoriginaldocumentpage13注與對照組相比*P<0.05，*P<0.01結論從表4可以看出，與對照組相比實施例7製得的三種翠雲草提取物膠囊劑均能顯著的提高小鼠在密閉缺氧條件下的存活時間，具有一定的體內抗缺氧活性，可以作為抗缺氧藥物使用。實施例10:本實驗原理為螢光素鈉在485nm光激發下，發射527nm螢光，可以被AAPH釋放的過氧自由基氧化而使螢光特性消失。當抗氧化劑存在時，可與螢光素鈉競爭氧化劑，減緩其螢光消退的速度。根據這一特性，可用來測定樣品氧自由基清除活性。實驗結果表達為螢光衰退曲線下積分面積，扣除無抗氧化劑的空白曲線下面積，得出抗氧化劑的保護面積。不同抗氧化劑的保護面積統一換算成1umolU1Trolox(TE)的保護面積進行比較。具體測定方法是將96孔板每個微孔中加入待測樣品溶液20uL，再加入磷酸鉀緩衝液20wL和AAPH140yL(終濃度12.8mmolL")，最後添加螢光素鈉20UL至終濃度為63nmol"U1，立即啟動反應並迅速將酶標板置於預溫37。C的螢光酶標儀中開始測定。採用動力學方式，每2min測定一個點，至螢光強度衰減為零為止。實驗結果經Student'sttest計算，表示為mean士SD。結果見表5。表5翠雲草提取物在氧自由基吸收能力(ORAC)體系中的抗氧化活性樣品(4pg/ml)氧自由基吸收能力OiMTE)Vc3.56±U7翠雲草乙醇浸膏7.60±0.87翠雲草總黃酮部分14.89±1.32翠雲草非黃酮部分13.81±2.1結論在氧自由基吸收能力(ORAC)體系中，翠雲草乙醇浸膏、翠雲草總黃酮部分提取物以及翠雲草非黃酮部分提取物的氧自由基清楚能力指數均強於Vc，說明它們均具有較強的抗氧化能力，可以作為抗氧化藥物應用。權利要求1、翠雲草提取物用於製備抗缺氧或/和抗氧化的藥物的用途。2、根據權利要求1所述的用途，其特徵在於所述抗缺氧的藥物是用於治療和預防由缺氧引起的急慢性高原病、缺氧缺血性腦損傷、腦缺血再灌注損傷、腦缺血再灌注後所致肺損傷、腦卒中、腦栓塞、新生兒缺血缺氧性腦病、心肌缺氧缺血及缺血再灌注損傷、冠心病，心絞痛、各種缺血再灌注損傷、腫瘤增生、肺動脈高壓疾病的藥物。3、根據權利要求1所述的用途，其特徵在於所述抗氧化的藥物是用於治療和預防由自由基引起的動脈粥樣硬化、內皮細胞損傷、心肌缺血再灌注損傷、冠心病、高血壓、急性心肌梗死後心臟重塑、心力衰竭、血管成形術後再狹窄，缺血性腦血管疾病、新生兒缺氧缺血性腦病、、腦卒中、腦缺血、腦梗死，癲癇、中樞神經系統感染，阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、老年感音神經性聾，急性腎小管壞死、色素性腎功能不全、腎病綜合症、溶血尿毒綜合症、急慢性腎衰竭、腎小球疾病、腎缺血-再灌注、慢性血液透析、腎功能不全、腎移植、小兒間質性腎炎、腎盂腎炎，慢性阻塞性肺病、肺纖維化、急性呼吸窘迫症候群、肺癌、慢性支氣管炎、哮喘、支氣管肺發育不良、呼吸道細菌感染、肺水腫、氧中毒、異物引起的氧化劑肺損傷、氣體吸入引起的肺損傷，慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝臟疾病、非酒精性脂肪肝、肝硬化、肝癌，胃黏膜損害、慢性胃炎、消化性潰瘍、急性胰腺炎、炎性腸病、反流性食管炎、結腸炎、消化道的缺血再灌注、消化道炎症、消化道腫瘤，宮頸癌、卵巢癌、惡性滋養體細胞癌、宮體癌、子宮肌瘤、卵巢囊腫、子宮內膜異位症、妊娠高血壓症候群、自然流產、胎膜早破、子癇前期、良性葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨毛膜上皮癌，皮膚腫瘤、光老化、多形性日光疹、紅斑狼瘡、白癜風、銀屑病、糖尿病及其併發症、流感病毒、B肝病毒、白內障、老年性黃斑變性、口腔齲齒、口臭、牙周炎、口腔白斑、口腔黏膜的炎性損傷、潰瘍、癌變和肥胖的藥物。4、根據權利要求1或2所述的用途，其特徵在於翠雲草提取物和藥學上可接受的載體組合製成所述抗缺氧或/和抗氧化的藥物。5、根據權利要求4所述的用途，其特徵在於所述抗缺氧或/和抗氧化的藥物製成片劑或膠囊劑。6、一種翠雲草提取物，其特徵在於含有翠雲草非黃酮類提取物或翠雲草總黃酮類提取物或兩者的混合物。7、如權利要求6所述的翠雲草提取物，其特徵在於由下述製備方法得到(1)將翠雲草的乾燥全草粉碎，用810倍翠雲草重量的水性溶劑回流提取；(2)過濾或離心去除不溶物，減壓乾燥，得到翠雲草初提物；(3)將翠雲草初提物進行大孔樹脂開放柱層析，用體積百分比為30%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草非黃酮類提取物，用體積百分比為95%的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草總黃酮類提取物。8、根據權利要求7所述的翠雲草提取物的製備方法，其特徵在於步驟(1)所述的水性溶劑是純水或體積百分比為20%80%的乙醇、甲醇水溶液。9、根據權利要求7所述的翠雲草提取物的方法，其特徵在於步驟(l)所述的回流提取是冷浸提取、滲漏提取、索氏提取或熱回流提取。10、根據權利要求7所述的翠雲草提取物的方法，其特徵在於步驟(l)所述的回流提取的提取溫度為20-100°C，分26次進行，每次回流提取l5小時，然後合併提取液。全文摘要本發明提供了翠雲草提取物用於製備抗缺氧和抗氧化藥物的用途。本發明提供的翠雲草提取物含有翠雲草非黃酮類提取物或翠雲草總黃酮類提取物或兩者的混合物。本發明同時提供了上述翠雲草提取物的製備方法將翠雲草的乾燥全草粉碎，用水性溶劑回流提取；過濾或離心去除不溶物，減壓乾燥，得到翠雲草初提物；將翠雲草初提物進行大孔樹脂開放柱層析，用體積百分比為30％的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草非黃酮類提取物，用體積百分比為95％的乙醇水溶液洗脫得到翠雲草總黃酮類提取物。文檔編號A61K36/11GK101357144SQ20081019859公開日2009年2月4日申請日期2008年9月17日優先權日2008年9月17日發明者丁愛石,吳麗穎,姚新生,毅戴,王乃利,明範,鄭俊霞,陳海峰,昊高申請人:暨南大學