從哺乳動物乳腺組織中獲得乳腺上皮細胞的方法
2023-05-17 10:21:46
專利名稱：從哺乳動物乳腺組織中獲得乳腺上皮細胞的方法
技術領域：
本發明涉及細胞工程和轉基因動物技術研究領域，特別是對乳腺細胞的採集、培養技術。
隨著細胞工程和轉基因動物技術研究的不斷深入發展，一種純淨的專一細胞的體外培養有著越來越廣泛的用途。但是，在某些特種細胞培養的樣品採集時，常常會出現獲得的細胞系不純的問題。由於這一問題的存在，英國科學家雖然是從綿羊的乳腺組織培養細胞克隆得到體細胞克隆綿羊—多莉，但由於其中摻雜有多種其它細胞(如成纖維細胞、白細胞、單核細胞、表皮細胞等)，至今尚不能知道究竟來自於何種類型的細胞，而只能統稱來自於乳腺細胞。
傳統的乳腺細胞採集有以下缺點1、必須從動物體上切下乳腺組織塊，因此對動物的損傷大，出血多，需要進行全身或局部麻醉。
2、傳統的方法從組織塊中分離乳腺上皮細胞比較困難，因組織塊中夾雜有許多其它細胞，其中有些細胞，如成纖維細胞的生長能力較強，必須有比較昂貴的選擇培養基來進行培養。
3、獲得的乳腺上皮細胞純度差。
4、獲得的細胞數量極少。
本發明的目的是發明一種從哺乳動物乳腺組織中獲得乳腺上皮細胞的方法，對動物損傷小，收集細胞數量多，純度高。
本發明由以下步驟完成a、以注射器注入清洗液，至乳房脹滿為止；b、按摩1-2分鐘；c、拔出注射器，從乳房中擠出液體；d、以注射器注入灌注液，至乳房脹滿為止；e、按摩1-2分鐘；f、拔出注射器，從乳房中擠出液體；g、以注射器注入消化液，至乳房脹滿為止；h、按摩1-2分鐘；I、拔出注射器，從乳房中擠出液體；J、將步驟I中擠出的液體通過離心分離器分離出細胞後，再在細胞中加入培養液培養。
本發明是應用加壓衝洗的方法將清洗液、灌注液和消化液通過乳導管注入乳腺組織，經反覆衝洗後獲得脫落的乳腺上皮細胞，加培養液培養，回收得到的乳腺上皮細胞純淨度高、對動物損傷小，並能作若干代(8-15代)培養。特別是本發明中因活體經乳導管注入硝化液後獲得細胞數量多，本發明可應用於科學研究、工廠化大量哺乳動物乳腺上皮細胞的培養、生物製藥、醫學細胞和基因治療。
現舉一實施例，進一步說明本發明。
先將哺乳動物仰臥保定，洗淨乳房組織及乳頭，再以70％酒精消毒，將帶有矽膠管的16-18號鈍針頭連接50ml注射液，緩慢向乳房中注入0.9％的氯化納溶液，直至乳房脹滿為止，然後輕輕按摩1-2分鐘，拔出針頭，用擠奶的方法擠出乳房內液體，擠出的液體量約等於注入的溶液量。
再用同樣的方法注入磷酸緩衝液，經按摩，擠出液體，擠出的液體量約等於注入的溶液量。
再注入含有0.3％胰蛋白酶的DMEM溶液或含有0.4％膠原酶的DMEM溶液，經按摩，擠出液體，將本次擠出的液體置於離心器中分離出細胞，再在盛細胞的容器中加入培養液培養。
權利要求
1.從哺乳動物乳腺組織中獲得乳腺上皮細胞的方法，其特徵在於由以下步驟完成a、以注射器注入清洗液，至乳房脹滿為止；b、按摩1-2分鐘；c、拔出注射器，從乳房中擠出液體；d、以注射器注入灌注液，至乳房脹滿為止；e、按摩1-2分鐘；f、拔出注射器，從乳房中擠出液體；g、以注射器注入消化液，至乳房脹滿為止；h、按摩1-2分鐘；I、拔出注射器，從乳房中擠出液體；J、將步驟I中擠出的液體通過離心分離器分離出細胞後，再在細胞中加入培養液培養。
2.根據權利要求1所述方法，其特徵在於步驟a中的清洗液為0.9％的氯化納溶液。
3.根據權利要求1所述方法，其特徵在於步驟d中的灌注液為磷酸緩衝液。
4.根據權利要求1所述方法，其特徵在於步驟g中的消化液為含有0.1-0.4％胰蛋白酶或膠原酶的DMEM溶液。
全文摘要
本發明涉及細胞工程和轉基因動物技術研究領域,特別是對乳腺細胞的採集、培養技術。應用加壓衝洗的方法將清洗液、灌注液和消化液通過乳導管注入乳腺組織,經反覆衝洗後獲得脫落的乳腺上皮細胞,加培養液培養,回收得到的乳腺上皮細胞純淨度高、對動物損傷小,並能作若干代(8－15代)培養。特別是本發明中因活體經乳導管注入硝化液後獲得細胞數量多,本發明可應用於科學研究、工廠化大量哺乳動物乳腺上皮細胞的培養、生物製藥、醫學細胞和基因治療。
文檔編號C12N5/06GK1375554SQ0211284
公開日2002年10月23日 申請日期2002年4月3日 優先權日2002年4月3日
發明者成勇 申請人:揚州揚大港藥基因工程有限公司