新型螯合劑、高度發光和穩定的螯合物及其用途的製作方法

2023-05-17 06:49:11 1

專利名稱：新型螯合劑、高度發光和穩定的螯合物及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一組新型的螯合劑、新型的螯合物、用所述螯合物或螯合劑做標記的生命分子以及與所述螯合物、螯合劑或標記生命分子共軛的固體載體。
背景技術：
此處用於闡明本發明背景的各種公開及其它材料、特別是提供有關涉及到實施的補充細節的案例通過引用併入本文。
由於各種鑭系元素(III)螯合物具有獨特的發光性能，人們通常在各種各樣的常規和科學研究應用中將其用作非放射性標記物。因為鑭系元素(III)螯合物能夠發出強烈的、長衰變期的輝光，因而在敏感度要求高的分析中它們是理想的標記物。基於鑭系元素螯合物的時間分辨螢光分析在診斷學、科研和高通量篩選中的應用日趨廣泛。非均相DELFIA技術應用於要求特殊敏感度、耐久性和多標記途徑的分析中[Hemmil等，Anal.Biochem.1984，137，335-343]。高度發光的穩定螯合物的研製成功將時間分辨的用途擴展至基於螢光共振能傳遞(TR-FRET)、螢光淬滅(TR-FQA)或結合反應期間螯合物的發光性能發生改變的均相分析[Hemmil，I.；Mukkala，V.-M.Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.2001，38，441-519]。
絕大多數情況下共軛反應是在溶液中介於生物活性分子(如蛋白質、肽、核酸、低聚核苷酸或半抗原)的氨基或巰基與鑭系元素(III)螯合物的異硫氰醯基(isothiocyanato)、滷代乙醯基、3，5-二氯-2，4，6-三嗪基衍生物以及其它信息基團之間進行的。由於在所有的情況中所述標記反應均採用過量的活化標記進行，因此繁複的純化過程是無可避免的。特別是在幾個反應性相似的功能團的存在下當需要附著數個標記分子或特異部位的標記時，所需生命分子共軛的離析與表徵極其困難，並且通常是幾乎不可能做到的。大的生命分子(如蛋白質)的液相標記自然無法避免。在這些情況中，所述標記反應必須儘可能地具有選擇性和有效性。
為了開發出適合於各種時間分辨螢光應用的新型高度發光的螯合物標記，人們進行了大量的嘗試。這些成果包括，例如穩定的螯合物，它們由作為能量調節基團的各種吡啶衍生物[US 4,920,195、US4,801,722、US 4,761,481、PCT/FI91/00373、US 4,459,186、EP A-0770610、Remuinan等，J.Chem.Soc.Perkin Trans 2，1993，1099]；各種聯吡啶衍生物[US 5,216,134]；各種三聯吡啶衍生物[US4,859,777、US 5,202,423、US 5,324,825]或各種酚類化合物[US4,670,572、US 4,794,191、義大利專利42508 A789]以及作為螯合組成部分的多元羧酸所組成。此外，人們還公開了各種二元羧酸鹽衍生物[US 5,032,677、US 5,055,578、US 4,772,563]、大環穴狀化合物[US4,927,923、WO 93/5049、EP-A-493745]和大環席夫鹼[EP-A-369-000]。人們還公開了通過固相合成方法，用發光標記物標記生物特異粘合反應劑(如半抗原、肽、受體配體、藥物或PNA低聚物)的方法[US6,080,839]。人們也開發出在固相上多重標記低聚核苷酸的類似策略[EP A 1152010、EP A 1308452]。
雖然人們已經公開過包含芳基吡啶二酸和芳基取代的2，6-雙[N，N-二(羧基烷基)氨基烷基]吡啶部分的螢光稀土螯合物[Hemmil等，J Biochem Biophys Methods 26；283-90(1993)；US 4,761,481]，但本發明在此處所述的螯合物或螯合劑並未在此前公開過。
發明目的及概述本發明的主要目的在於提供各種可用於標記生命分子，在時間分辨螢光光譜、磁共振成像(MRI)或正電子成像術(PET)中用作探針的螯合劑及其金屬螯合物。
本發明的特別目的在於提供用不同的螯合鑭系元素離子，特別是用銪(III)、釤(III)、鋱(III)和鏑(III)發出很強螢光的螯合劑。這些鑭系元素螯合物在多參數生物親和分析以及候選藥物的高通量篩選中尤其有用。
本發明的另一個目的在於提供各種螯合劑，得到高穩定性的金屬螯合物。一個特別的目的在於獲得穩定性足夠強、能夠用於體內各種應用(如在MRI或PET應用)中的螯合物。
本發明的另一個目的在於提供適合於在溶液中標記生命分子的螯合物或螯合劑。
本發明的另一個目的在於提供適合於與其在固相上合成的同時標記低聚肽或低聚核苷酸的螯合物。
本發明的另一個目的在於提供與本發明的螯合物、螯合劑或生命分子共軛的固體載體。
因此，本發明的第一個方面涉及螯合劑，所述螯合劑包含-包含兩個或兩個以上芳族單元的發色部分，其中至少一個芳族單元為三烷氧基苯基吡啶基基團，其中所述烷氧基相同或不同，並且所述吡啶基為i)彼此之間直接系留在一起，分別形成聯吡啶基或三聯吡啶基基團；或ii)彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起；-包含至少兩個直接或通過含N的烴鏈附著於發色部分的芳族單元上的羧酸或膦酸基團或所述酸的酯或鹽的螯合部分；和-任選直接或通過連接體x系留於所述發色部分或系留於螯合部分的反應基A，所述反應基A能夠粘合於固相的生命分子或官能團上。
本發明的另一個方面涉及螯合物，所述螯合物包含-金屬離子；-包含兩個或兩個以上芳族單元的發色部分，其中至少一個芳族單元為三烷氧基苯基吡啶基基團，其中所述烷氧基相同或不同，並且所述吡啶基為i)彼此之間直接系留在一起，分別形成聯吡啶基或三聯吡啶基基團；或ii)彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起；-包含至少兩個直接或通過含N的烴鏈附著於發色部分的芳族單元上的羧酸或膦酸基團或所述酸的酯或鹽的螯合部分；和-任選直接或通過連接體x系留於所述發色部分或系留於螯合部分的反應基A，所述反應基A能夠粘合於固相的生命分子或官能團上。
本發明的第三個方面涉及與本發明螯合物共軛的生命分子。
本發明的第四個方面涉及與本發明螯合劑共軛的生命分子。
本發明的第五個方面涉及與本發明的螯合物或標記生命分子共軛的固體載體。
本發明的第六個方面涉及標記的低聚肽，通過將本發明適宜的螯合劑引入到低聚肽合成器上的低聚肽結構內，接著進行脫保護並任選引入金屬離子在固相上進行合成獲得所述標記的低聚肽。
本發明的第七個方面涉及標記的低聚核苷酸，通過將本發明適宜的螯合劑引入到低聚核苷酸合成器上的低聚核苷酸結構內，接著進行脫保護並任選引入金屬離子在固相上進行合成獲得所述標記的低聚核苷酸。
本發明的第八個方面涉及適用於低聚核苷酸合成中的、與權利要求1的螯合劑共軛的固體載體，其中反應基A通過連接體x與所述螯合劑連接，並且A為-E-O-x』-其中x』為與固體載體連接的連接體，與連接體x相同或不同；E可不存在，或為適用於改性低聚核苷酸合成中的嘌呤或嘧啶基團或任何其它改性鹼基，所述鹼基通過i)用受保護的羥乙基取代的烴鏈與氧原子連接；或通過ii)適用於改性低聚核苷酸合成中的呋喃環或吡喃環或任何改性的呋喃或吡喃環與氧原子連接。
發明詳述螯合劑基於其中發色部分絕大多數為包含一個或一個以上三烷氧基苯基吡啶基團的二價芳族結構的螯合劑和金屬螯合物是新型的。所述三烷氧基苯基吡啶基團能夠吸收光或能量，並將激發能傳遞給被螯合的鑭系元素離子，從而得到強的螢光而與所用的鑭系元素離子無關。除了所述的三烷氧基苯基吡啶基團之外，發色單元還可包含未取代的吡啶基團、含有其它取代基的吡啶基團和/或其它芳族基團。
在此處各具體的實施例所舉例說明的化合物中，吡啶基團的4-位含有三烷氧基苯基取代基。雖然我們相信該位置是最優選的，但所述吡啶環的其它位置也可用於取代。
烷氧基基團優選為C1-C4烷氧基。
根據優選的實施方案，所述發色部分包含兩個或三個吡啶基團，其中至少一個被三烷氧基苯基所取代。這些吡啶基彼此之間可以直接系留在一起，分別形成聯吡啶基或三聯吡啶基基團。或者更優選所述吡啶基彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起。含N的烴鏈應理解為除了N之外不含其它雜原子或沒有芳族基團的鏈。在這種情況中能獲得穩定性相對好的螯合物。這種結構的螯合劑使得金屬螯合物足夠的穩定，同時也適合於在MRI和/或PET各種應用中的體內用途。
在螯合部分附著於發色部分的芳族單元的情況中，該螯合部分可附著於吡啶環或其上的取代基(如苯基)。
為了使螯合劑或螯合物共價粘合於生命分子或固體載體上，螯合劑或螯合物必須含有反應基A。但也存在其中這種共價粘合併非必不可少的應用。本發明的螯合化合物也可用於其中螯合物不需要反應基的應用中。這種技術的一個例子在例如Blomberg等，J.Immunological Methods，1996，193，199中有舉例說明。另一個不需要反應基A的例子是嗜酸性細胞和嗜鹼性細胞的分離。在該應用中，正電荷和負電荷的螯合物分別粘合於負電荷與正電荷的細胞表面上。
雖然原則上在許多應用中反應基A可以直接附著於發色基團或螯合部分上，但最理想的是在反應基A與發色基團之間或反應基A與螯合部分之間分別具有連接體x(特別是由於空間上的原因)。在螯合物必須用於低聚肽和低聚核苷酸的固相合成的情況中，所述連接體特別重要，但在生命分子的溶液標記中也是合乎需要的。
根據優選的實施方案，所述反應基A選自異硫氰酸根、滷代乙醯氨基、馬來醯亞氨基、二氯三嗪基、二氯三嗪氨基、吡啶聯硫基、硫代酸酯基、含氧氨基、醯肼基、氨基、聚合基團、羧酸或滷化醯基或其活性酯基。特別是在所述螯合物或螯合劑必須附著於微粒或納米微粒的情況中，優選具有聚合基團的反應基。在這種情況下可以在顆粒的製造過程中將標記物引入至顆粒內。
所述連接體x優選由1-10個部分形成，每一個部分選自亞苯基、含有1-12個碳原子的亞烷基、乙炔二基(-C≡C-)、乙烯二基(-C＝C-)、醚基(-O-)、硫醚基(-S-)、醯胺基(-CO-NH-、-CO-NR』-、NH-CO和-NR』-CO-)、羰基(-CO-)、酯基(-COO-和-OOC-)、二硫化物(-SS-)、二氮雜(-N＝N-)和叔胺，其中R』代表含有少於5個碳原子的烷基。
根據特別優選的實施方案，所述螯合劑為以下特定結構中的一種
其中Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基；R6為烷基酯或烯丙酯；R7為烷基，n為0或1。
用於肽合成中的螯合劑根據一個優選的實施方案，本發明的螯合劑適用於低聚肽的合成。在該應用中，反應基A通過連接體x與所述螯合劑連接，A為胺基酸殘基-CH(NHR1)R5，其中R1為瞬變保護基，R5為羧酸或其鹽、醯基滷或酯。特別優選的螯合劑為如下結構
其中x如前所定義，保護基R1選自Fmoc(芴基甲氧基羰基)、Boc(叔丁氧基羰基)或Bsmoc(1，1-二氧合苯並[b]苯硫-2-基甲氧基羰基)，R6為烷基酯或烯丙酯，R7為烷基，Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基，n為0或1。
藉助於肽合成器可將螯合劑引入至生命分子內。例如通過碳二亞胺化學可使螯合劑與氨基系留的固體載體或固定化胺基酸偶合(也就是說在活化劑的存在下，標記試劑的羧酸官能團與固體載體或胺基酸的氨基基團進行反應)。當縮合步驟完成時，標記試劑的瞬變氨基保護基被選擇性地移出，而所述材料仍附著於固體載體上(如在Fmoc-保護基的情況中通過哌啶附著於固體載體上)。然後如上述進行螯合劑或其它試劑(胺基酸、半抗原)的第二次偶合。當所需分子的合成完成後，將材料從固體載體上移除並進行脫保護。可通過HPLC技術進行純化。最後通過加入已知量的鑭系元素(III)離子將純化後的配體轉化為相應的鑭系元素(III)螯合物。
用於低聚核苷酸合成的螯合劑根據另一個優選的實施方案，本發明的螯合劑適用於低聚核苷酸的合成。在該情況中反應基A通過連接體x與螯合劑連接，A為-E-O-PZ-O-R4其中氧原子中的一個任選被硫所置換，Z為氯或NR2R3，R4為保護基，R2和R3為烷基，E不存在或為適用於改性低聚核苷酸合成中的嘌呤鹼基或嘧啶鹼基或任何其它改性的鹼基。所述鹼通過i)用受保護的羥乙基取代的烴鏈與氧原子連接；或通過ii)適用於改性低聚核苷酸合成中的呋喃環或吡喃環或任何改性的呋喃或吡喃環與氧原子連接。
藉助於低聚核苷酸合成器可將螯合劑引入至低聚核苷酸內。一個基於Mitsonobu烷基化反應(J Org Chem，1999，64，5083；Nucleosides，Nucleotides，1999，18，1339)的方法公開於EP-A-1152010中。所述專利公開了一種在鏈成形期間將所需數量的共軛基團直接附著於低聚核苷酸結構上的方法。從而避免了液相標記和繁複的純化過程。核苷低聚核苷酸結構單元合成策略中的關鍵反應是將各種螯合劑引入至核苷，最後引入至所述低聚核苷酸結構的上述Mitsunobu烷基化反應。在鏈成型期間引入螯合劑。合成後在脫保護步驟期間發生了轉化為鑭系元素螯合物的反應。
正常情況下由於未改性的低聚核苷酸被存在於活細胞內的酶所降解，因此在生理條件下其穩定性較低。因而根據已知的方法生成改性的低聚核苷酸以增強其抵禦化學降解與酶降解是大家所祈望的。在先有技術中關於低聚核苷酸的各種改性已有大量的公開。參見US 5,612,215。我們知道在RNA鏈中從核糖中移除或置換2』-OH基團將使其穩定性更好。WO 92/07065和US 5,672,695公開了採用滷素、氨基、疊氮基或巰基置換核糖2』-OH基團。US 5,334,711公開了烷基或鏈烯基(優選甲基或烯丙基)置換2』-OH基團中的氫。此外，例如可對核苷酸磷酸二酯間鍵合進行改性，從而使一個或一個以上的氧被硫、氨基、烷基或烷氧基所置換。在核苷酸間鍵合中優選的改性為硫代磷酸鍵合。對核苷酸中的鹼也可進行改性。
優選E為任何以下鹼的基團胸腺嘧啶、尿嘧啶、腺苷、鳥嘌呤或胞嘧啶，並且所述鹼通過i)用受保護的羥乙基取代的烴鏈與氧原子連接；或通過ii)在其4-位上具有受保護的羥乙基和任選在其2-位上具有羥基、受保護的羥基或改性的羥基的呋喃環與氧原子連接。
優選反應基-E-O-P(NR2R3)-O-R4的結構選自以下結構之一 其中-為連接體x的位置，DMTr為二甲氧基三苯甲基。
特別優選的螯合劑選自以下公開的特定結構中的一種
其中R6為烷基酯或烯丙基酯，R7為烷基，x如前所定義，A為如上所定義的-E-O-P(NR2R3)-O-R4，Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基，n為0或1。
螯合物所述螯合物包含上述的螯合劑和被螯合的金屬離子。
在螯合物用於生物親和分析的情況中，被螯合的金屬離子優選為鑭系元素，尤其是銪(III)、釤(III)、鋱(III)或鏑(III)。螯合劑優選為上述優選螯合劑中的一種。
特別優選的鑭系元素螯合物為 其中Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基，n為0或1。
本發明的螯合物也可用於體內MRI應用或PET應用中。用於MRI的優選金屬為釓。在PET應用中，在即將使用前將放射性金屬同位素引入至螯合劑內。特別適宜的放射性同位素為Ga-66、Ga-67、Ga-68、Cr-51、In-111、Y-90、Ho-166、Sm-153、Lu-177、Er-169、Tb-161、Dy-165、Ho-166、Ce-134、Nd-140、Eu-157、Er-165、Ho-161、Eu-147、Tm-167和Co-57。為了得到相當穩定的螯合物，優選具有其中數個吡啶基團彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起的發色部分。
生命分子與本發明的螯合劑或螯合物共軛的生命分子優選為低聚肽、低聚核苷酸、DNA、RNA、改性的低聚核苷酸或多核苷酸(如一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、氨基磷酸酯)和/或糖改性或鹼改性的低聚核苷酸或多核苷酸、蛋白質、寡糖、多糖、磷脂、PNA、LNA、抗體、半抗原、藥物、受體粘合配體和外源凝集素。
固體載體共軛物本發明的螯合物、螯合劑和生命分子均可共軛至固體載體上。所述固體載體優選為顆粒(如微粒或納米微粒)、玻片或薄板。
在螯合物或螯合劑具有聚合基作為反應基的情況中，可在製備固體載體(如顆粒)的同時將螯合物或螯合劑引入其中。
與所述固體載體共價或非共價共軛的生命分子優選為標記過的低聚肽，通過將螯合劑引入到低聚肽合成器上的低聚肽結構內，接著進行脫保護並任選引入金屬離子在固相上進行合成獲得所述標記的低聚肽。或者，與所述固體載體共價或非共價共軛的生命分子優選為標記過的低聚核苷酸，通過將螯合劑引入到低聚核苷酸合成器上的低聚核苷酸結構內，接著進行脫保護並任選引入金屬離子在固相上進行合成獲得所述標記的低聚核苷酸。
與具有通過連接體x與螯合劑連接的反應基A(A為如上所述的-E-O-x』-)的螯合劑共軛的固體載體適用於低聚核苷酸的合成。
以下將通過非限制性的實施例對本發明進行舉例說明。
實施例本發明將通過以下的各實施例進行闡明。在實驗部分中所用的結構和合成路線見述於方案1-7中。方案1說明低聚肽標記反應物4的合成。在實施例1-4中給出了各實驗細節。方案2說明螯合物6-11的合成。在實施例6-11中給出了各實驗細節。方案3說明螯合物20、22和23的合成。在實施例12-23中給出了各實驗細節。方案4說明用於將鑭系元素螯合物引入至固相上低聚核苷酸的結構單元29的合成以及螯合物30和31的合成。在實施例24-31中給出了各實驗細節。方案5和6分別說明結構單元4和29在固相上製備合成低聚肽及低聚核苷酸的用途。在實施例32和33中給出了各實驗細節。方案7說明基於1，4，7-triazecane的低聚核苷酸標記試劑的製備。在實施例34中給出了各實驗細節。
在示例性的實施例中所合成的各螯合物的各項光化學性能匯總於表1中。
實驗方法用於機器輔助的低聚肽合成的各種試劑購自AppliedBiosystems(Foster City，CA)。吸附柱色譜法在裝有矽膠60(Merck)的柱子上進行。分別在1H 250.13和399.8MHz處運行的Brucker 250或Jeol LA-400分光計上記錄NMR光譜。所用的內標為Me4Si。偶合常數的單位為Hz。在Perkin Elmer 2000 FT-IR分光光度計上記錄IR光譜。在Applied Biosystems Mariner ESI-TOF儀上記錄電霧化質譜。採用推薦的試驗方案，在Applied Biosystems 433A合成器上合成低聚肽，而在Applied Biosystems Expedite儀上合成低聚核苷酸。在PerkinElmer LS 55儀上記錄螢光光譜。
如在以下方案1-7中的概述進行各化合物的合成。
實施例1合成四(叔丁基)2，2』，2」，2-{[6-N-(4-甲氧基三苯甲基)氨基己基-亞氨基]雙(亞甲基)雙[4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-6，2-二基]雙(亞甲基次氮基}四(乙酸酯)1將四(叔丁基)2，2』，2」，2-{[6-N-(4-甲氧基三苯甲基)己基亞氨基]雙(亞甲基)雙-(4-溴吡啶-6，2-二基)雙(亞甲基次氮基)}四(乙酸酯)(4.0克，2.4毫摩爾)和三甲氧基苯基硼酸(1.1克，5.3毫摩爾)溶解於無水DMF(50毫升)中，加入Cs2CO3(2.0克，6.0毫摩爾)和Pd(PPh3)4(0.1克，96微摩爾)。在95℃下攪拌過夜後，加入三甲氧基苯基硼酸(0.5克，2.4毫摩爾)、Cs2CO3(0.79克，2毫摩爾)和Pd(PPh3)4(50毫克，43毫摩爾)。反應過夜後將混合物冷卻至室溫，過濾並蒸發。將混合物溶解於CH2Cl2中，用水(2·40毫升)洗滌。產物通過急驟層析法(矽膠，石油醚(40-60℃)/AcOEt/TEA 5∶2∶1，v/v/v)進行純化。收率為3.1克(90％)。IR(薄膜)1737(C＝O)，1128(C-O)。1H NMR(CDCl3)δ1.15-1.25(4H，m)；1.40-1.45(40H，m)；2.04(2H，t，J 6)；2.55(2H，t，J 7)；3.50(1H，s)；3.51(3H，s)。ESI-MS[M+H]+1417.5，C82H109N6O15+的計算值為1417.8。
實施例2合成四(叔丁基)2，2』，2」，2-{(6-氨基己基亞氨基)雙(亞甲基)-雙[4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-6，2-二基]雙(亞甲基次氮基)}四(乙酸酯)2將化合物1(1.0克，0.7毫摩爾)溶解於二氯甲烷(25毫升)中，加入三氟乙酸(0.25毫升)。在環境溫度下攪拌4小時後，用飽和NaHCO3(2·50毫升)洗滌混合物。有機相在Na2SO4上乾燥、過濾並蒸發。產物通過急驟層析法(矽膠，石油醚(40-60℃)/AcOEt/TEA 5∶5∶1、2∶5∶1，最後為CH2Cl2中的10％MeOH、1％的TEA)進行純化。收率為0.60克(74％)。IR(薄膜)1730(C＝O)，1128(C-O)。ESI-MS[M+H]+1145.7，C82H109N6O15+的計算值為1145.7，[M+2H]2+573.3，計算值為573.3。
實施例3合成烯丙基保護的低聚肽標記反應物3將化合物2(0.55克，0.48毫摩爾)溶解於無水二氯甲烷(5毫升)中。加入DCC(0.11克，0.53毫摩爾)和Fmoc-Glu-OAII(0.20克，0.48毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。濾去生成的DCU，在真空下濃縮濾液。在矽膠上進行純化(二氯甲烷中的10％MeOH)，得到固體狀的標題化合物(300毫克)。ESI-MS[M+H]+1536.8，C85H114N7O19+的計算值為1536.8。
實施例4合成低聚肽標記反應物4將化合物3(157毫克，0.1毫摩爾)溶解於無水二氯甲烷(2毫升)中。加入Pd(Ph3P)4(2.3毫克)和PhSiH3(25微升)，混合物在環境溫度下攪拌過夜。然後反應混合物用10％的檸檬酸水溶液洗滌，並在分子篩上乾燥。收率為95毫克(63％)。ESI-MS[M+H]+1496.8，C82H110N7O19+的計算值為1496.8。
實施例5合成游離酸5將化合物1(0.40克，0.28毫摩爾)溶解於三氟乙酸(10毫升)中，在室溫下攪拌1小時後濃縮。殘餘物用二乙醚研製。過濾收集產物並乾燥。收率為260毫克(100％)。ESI-MS[M+H]+921.42，C46H61N6O14+的計算值為921.4。
實施例6合成鋱螯合物6將化合物5(78毫克，0.085毫摩爾)溶解於水(2毫升)中，在pH為6.5下於15分鐘內加入氯化鋱(III)(35毫克，0.093毫摩爾)。在室溫下2小時後通過加入1M的NaOH使反應混合物的pH上升至8.5。離心除去所生成的沉澱，濃縮水相，用丙酮沉澱產物。ESI-MS[M+H]+1075.9，C46H55N6O14Tb-的計算值為1075.3。
實施例7合成鏑螯合物7如實施例6進行合成，但採用的是氯化鏑(III)。ESI-MS[M+H]+1080.3，C46H55N6O14Dy-的計算值為1080.2。
實施例8合成銪螯合物8如實施例6進行合成，但採用的是氯化銪(III)。ESI-MS[M+H]+1092.3，C46H55N6O14Eu-的計算值為1092.3。
實施例9合成碘乙醯氨基活化的鏑螯合物9將化合物7(16毫克，14.3微摩爾)溶解於水中。加入碘乙酸酐(51.3毫克，0.145毫摩爾；預先溶解於0.2毫升的氯仿內)和DIPEA(25微升)，混合物在室溫下攪拌1.5小時。除去有機相，通過從THF沉澱出來使產物與水相分離。ESI-MS[M+H]+1248.2，C48H57N6O15IDy-的計算值為1248.2。
實施例10合成碘乙醯氨基活化的鋱螯合物10如實施例9所述對化合物6進行活化，得到化合物10。ESI-MS[M+H]+1243.8，C48H57N6O15ITb-的計算值為1243.8。
實施例11合成異硫氰醯基活化的銪螯合物11將化合物8(15毫克，0.014毫摩爾)溶解於吡啶、水和三乙胺的混合物(200微升；9∶1.5∶0.1；v/v/v)中。加入1，4-亞苯基二異硫氰酸酯(7.9毫克)，混合物在室溫下攪拌4小時。
實施例12合成4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2，6-二羧酸二乙酯12將2，4，6-三甲氧基苯基硼酸(2.12克，10.0毫摩爾)和4-溴吡啶-2，6-二羧酸二乙酯(3.33克，11.0毫摩爾)溶解於無水DMF(50毫升)中。加入碳酸銫(4.56克，14.0毫摩爾)和四(三苯基膦)-鈀(O)(0.23克，0.20毫摩爾)，混合物用氬脫氣。混合物在95℃下加熱48小時。將混合物冷卻至室溫，然後過濾。真空下濃縮濾液，將殘餘物溶解於氯仿(60毫升)內，用10％的檸檬酸水溶液和水洗滌，在Na2SO4上乾燥並濃縮。在矽膠上進行純化(洗脫液為石油醚，沸點40-60℃；乙酸乙酯，5∶3→2∶5，v/v)。收率為2.09克(54％)。1H NMR(CDCl3)δ1.45(6H，t，J 7.1)；3.74(6H，s)；3.90(3H，s)；4，49(4H，q，J 7.1)；6.22(2H，s)；8.28(2H，s)。IR(薄膜)/cm-11743，1610(C＝O)；1339，1238，1128(C-O)。ESI-MS[M+H]+390.19，C20H24NO7+的計算值為390.15。
實施例13合成4-(2，4，6-三甲氧基苯基)-6-(羥基甲基)吡啶-2-羧酸乙酯13將化合物12(2.83克，7.27毫摩爾)懸浮於乙醇(140毫升)中，混合物加熱至45℃。加入氫硼化鈉(0.29克)，混合物攪拌1小時，並冷卻至室溫。用6M的HCl將溶液的pH調節至3並濃縮。將殘餘物懸浮於二氯甲烷中，用飽和的NaHCO3洗滌。有機層在Na2SO4上乾燥，並且在矽膠上純化(洗脫液為石油醚(沸點40-60℃)∶乙酸乙酯∶三乙胺，2∶5∶1；v/v/v)。ESI-MS[M+H]+348.14，C18H22NO6+的計算值為348.14。
實施例14合成4-(2，4，6-三甲氧基苯基)-6-(溴甲基)吡啶-2-羧酸乙酯14將三氯化磷(0.778克，2.87毫摩爾)溶解於0℃的無水DMF(10毫升)中。加入化合物13(1.0克，2.8毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌3.5小時，然後用飽和NaHCO3中和。用二氯甲烷萃取混合物。有機相進行乾燥、濃縮並在矽膠上純化(洗脫液採用二氯甲烷中1％乙醇)。ESI-MS[M+H]+410.10，C18H21BrNO5+的計算值為410.05。
實施例15合成N-(2-(2，2，2-三氟乙醯氨基)乙基)-6-(羥基甲基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-醯胺15將化合物13(1.0克，2.8毫摩爾)溶解於乙二胺(10毫升)內，在室溫下攪拌2.5小時並進行濃縮(油泵)。將殘餘物溶解於DMF(25毫升)中，加入三氟乙酸乙酯(5毫升)。在室溫下2小時後，在真空中除去所有揮發組分，殘餘物在矽膠上純化(洗脫液為二氯甲烷中的10％MeOH)。ESI-MS[M+H]+458.14，C20H23F3N3O6+的計算值為458.15。
實施例16合成N-(2-(2，2，2-三氟乙醯氨基)乙基)-6-(溴甲基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-醯胺16如實施例14所述對化合物15進行溴化處理，得到標題化合物。ESI-MS[M+H]+520.06，C20H22BrF3N3O5+的計算值為520.07。
實施例17合成7-((6-(2-(2，2，2-三氟乙醯氨基)乙基氨基甲醯基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-基)甲基)-1，4，7-triazonane-1，4-二羧酸二叔丁基酯17將[1，4，7]三氮雜環壬烷-1，4-二羧酸二叔丁基酯(0.75克，2.3毫摩爾)和化合物16(2.3毫摩爾)溶解於無水DMF(60毫升)中。加入2.0毫升的DIPEA(11.4毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑蒸發至幹，產物在矽膠上純化(洗脫液為二乙醚)。收率為1.20克。ESI-MS[M+H]+769.34，C36H52F3N6O9+的計算值為769.37。
實施例18合成6-((1，4，7-triazonan-1-基)甲基)-N-(2-(2，2，2-三氟乙醯氨基)-乙基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-醯胺18將化合物17(1.0克，1.3毫摩爾)溶解於三氟乙酸(25毫升)內，混合物在室溫下攪拌30分鐘。將溶劑蒸發至幹。ESI-MS[M+H]+569.28，C26H36F3N6O5+的計算值為569.27。
實施例19合成6-((4-((6-(2-(2，2，2-三氟乙醯氨基)乙基氨基甲醯基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-基)甲基)-7-((6-(乙氧基羰基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-基)甲基)-1，4，7-triazonan-1-基)甲基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-羧酸乙酯19將化合物18(0.39克，0.7毫摩爾)和14(0.43克，1.4毫摩爾)溶解於無水乙腈(20毫升)中。加入K2CO3(0.48克，3.5毫摩爾)，混合物回流3小時。濾去沉澱，蒸發溶劑。產物在矽膠上純化(10％EtOH/CH2Cl2)。ESI-MS[M+H]+1227.4，C62H74F3N8O15+的計算值為1227.5。
實施例20合成6-((4-((6-(2-氨基乙基氨基甲醯基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)-吡啶-2-基)甲基)-7-((6-羧基-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-基)甲基)-1，4，7-triazonan-1-基)甲基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-羧酸鏑(III)20將化合物19溶解於0.1M的氫氧化鉀甲醇溶液內，並在室溫下攪拌4小時。在真空中除去所有揮發組分。用氯化鏑處理殘餘物得到標題化合物。ESI-MS[M+H]+1239.1，C56H66DyN8O14+的計算值為1238.4。
實施例21合成6-((4，7-雙((6-(乙氧基羰基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)-吡啶-2-基)甲基)-1，4，7-triazonan-1-基)甲基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)-吡啶-2-羧酸乙酯21將1，4，7-三氮雜環壬烷(31.5毫克)和化合物14(0.3克，0.76毫摩爾)溶解於無水乙腈(20毫升)內。加入碳酸鉀(0.17克)，混合物回流過夜。使混合物冷卻至室溫，過濾並濃縮。在矽膠上純化(洗脫液CH2Cl2∶EtOH∶HOAc為80∶20∶1，v/v/v)，得到標題化合物(0.17克，62％)。ESI-MS[M+H]+1117.5，C60H73N6O15+的計算值為1117.5。
實施例22合成6-((4，7-雙((6-羧基-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-基)甲基)-1，4，7-triazonan-1-基)甲基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-羧酸鏑(III)22對化合物21進行脫保護，然後如實施例20所述用氯化鏑處理，得到標題化合物。
實施例23合成6-((4，7-雙((6-羧基-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-基)甲基)-1，4，7-triazonan-1-基)甲基)-4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-2-羧酸鋱(III)23對化合物21進行脫保護，然後如實施例20所述用氯化鋱處理，得到標題化合物。
實施例24合成2-二甲基-4-溴-6-溴甲基-2-吡啶基甲基亞氨基-(二乙酸酯)24將4-溴-2，6-二(溴甲基)吡啶(2.66克，7.7毫摩爾)和亞氨乙醯二甲醚(1.24克，7.7毫摩爾)溶解於60℃的無水乙腈(60毫升)內。加入碳酸鉀(5.3克)，混合物攪拌40分鐘，然後冷卻至室溫，過濾並濃縮。將殘餘物溶解於二氯甲烷中，用水洗滌兩次並在Na2SO4上乾燥。在矽膠上純化(洗脫液為石油醚(沸點40-60℃)∶乙酸乙酯，10∶1-5∶1，v/v)，得到標題化合物(1.45克)。ESI-MS[M+H]+424.06，C13H17Br2N2O4+的計算值為424.09。
實施例25合成2，2』，2」，2-{[6-羥基己基亞氨基]-二(亞甲基)雙(4-溴)吡啶-6，2-二基)二(亞甲基次氮基)}四(乙酸)四(甲酯)25將化合物24(2.8克，6.6毫摩爾)溶解於無水DMF內。加入DIPEA(6.0毫升，34.0毫摩爾)和6-氨基-1-己醇(0.2克，3.6毫摩爾)，反應混合物在60℃下攪拌4小時，然後蒸發至幹。殘餘物溶解於CH2Cl2(30毫升)中，用水洗滌兩次。有機相在Na2SO4上乾燥，並蒸發至幹。產物通過矽膠色譜法純化(CH2Cl2中0-3％的MeOH)，得到2.4克(91％)的化合物25。ESI-MS[M+H]+802.16，C32H46Br2N5O9+的計算值為802.22。
實施例26合成2，2』，2」，2-{[6-(甲氧基三苯甲基氧基己基亞氨基]二(亞甲基)雙(4-溴)吡啶-6，2-二基)二(亞甲基次氮基)}四(乙酸)四(甲酯)26將化合物25(1.0克，1.24毫摩爾)溶解於吡啶(30毫升)中。加入氯化MMTr(0.57克，1.86毫摩爾)，反應混合物在室溫下攪拌過夜。混合物蒸發至幹，將殘餘物溶解於CH2Cl2，用飽和NaHCO3洗滌。有機相在Na2SO4上乾燥，並蒸發至幹。產物通過矽膠色譜法純化(石油醚/AcOEt v/v，5/1→5/1→1/1)，得到1.0克(75％)的化合物26。ESI-MS[M+H]+1074.28，C52H61Br2N5O10+的計算值為1074.27。
實施例27合成2，2』，2」，2-{[6-(甲氧基三苯甲基)氧基己基亞氨基]二(亞甲基)雙(4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-6，2-二基)二(亞甲基次氮基)}四(乙酸)四(甲酯)27如實施例1所述進行化合物27與三甲氧基苯基硼酸之間的反應，得到標題化合物。收率為97％。ESI-MS[M+H]+1250.66，C70H84N5O16+的計算值為1250.59。
實施例28合成2，2』，2」，2-{[6-(羥基己基亞氨基]二(亞甲基)雙(4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-6，2-二基)二(亞甲基次氮基))四(乙酸)四(甲酯)28將化合物27(0.8克，0.64毫摩爾)溶解於TFA在二氯甲烷(16毫升)的5％(v/v)溶液內，反應混合物在室溫下攪拌3小時。加入甲醇(10毫升)，將混合物蒸發至幹。殘餘物溶解於二氯甲烷中，用飽和NaHCO3洗滌。有機相在Na2SO4上乾燥並蒸發至幹。產物通過矽膠色譜法純化，得到0.4克(64％)的化合物28。ESI-MS[M+H]+978.53，C50H68N5O15+的計算值為978.46。
實施例29合成亞磷醯胺29將化合物28(0.35克，0.36毫摩爾)從無水乙腈中三次蒸發至幹，並溶解於相同的溶劑內。加入2-氰乙基四異丙基亞磷二醯胺(171微升，0.54毫摩爾)和四唑(0.45M乙腈溶液；800微升，0.36毫摩爾)，反應混合物在室溫下振動2小時。將反應混合物倒入飽和的NaHCO3(5毫升)內，並劇烈攪拌。加入二氯甲烷，有機相在Na2SO4上乾燥並蒸發至幹。產物通過矽膠色譜法純化(石油醚/AcOEt/三乙胺v/v/v，2/5/1)，得到0.20克(47％)的化合物29。
實施例30合成2，2』，2」，2-{[6-(羥基己基亞氨基]二(亞甲基)雙(4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-6，2-二基)二(亞甲基次氮基)}四(乙酸)鋱(III)30對化合物28進行脫保護，然後如實施例20所述用氯化鋱處理得到標題化合物。ESI-MS[M+H]+1076.24，C46H55N5O15Tb-的計算值為1076.30。
實施例31合成2，2』，2」，2-{[6-(羥基己基亞氨基]二(亞甲基)雙(4-(2，4，6-三甲氧基苯基)吡啶-6，2-二基)二(亞甲基次氮基)}四(乙酸)鏑(III)31對化合物28進行脫保護，然後如實施例20所述用氯化鏑處理得到標題化合物。ESI-MS[M+H]+1081.31，C46H55N5O15Dy-的計算值為1081.30。
實施例32採用嵌段4在固相上合成低聚肽採用Peuralahti等在Bioconjugate Chem.，13，2002，870中所述的方法，用化合物4將鑭系元素(III)螯合物引入到低聚肽結構內。因此以常規的方式合成低聚肽，反應物4偶合至氨基末端。如上所述進行脫保護、轉化為相應鑭系元素(III)螯合物以及純化處理。
實施例33採用嵌段29在固相上合成低聚核苷酸採用Hovinen和Hakala在Org.Lett.3，2001，2473中所述的方法，用化合物29將鑭系元素(III)螯合物引入到低聚核苷酸結構內。因此以常規的方式合成低聚核苷酸，反應物50偶合至其5』-末端。如上所述進行脫保護、轉化為相應鑭系元素(III)螯合物以及純化處理。
實施例34合成9-[(三苯甲基氧基)甲基]-1，4，7-triazecane 1，4，7-三-(2-硝基苯)磺醯胺32將2-((三苯甲基氧基)甲基)丙烷-1，3-二醇(1.0毫摩爾)、2-硝基苯磺醯基保護的亞乙基三胺(1.0毫摩爾)和三苯基膦(3.0毫摩爾)溶解於無水THF(5毫升)內。在15分鐘分四次加入DIAD(3.0毫摩爾)，在室溫下反應過夜。在真空中除去所有揮發組分，將殘餘物從二乙醚中沉澱出來。沉澱物重新溶解於二氯甲烷中，在矽膠柱(洗脫液CH2Cl2的0.5％MeOH；v/v)上分離出產物。ESI-MS[M+H]+971.21，C45H43N6O13S3+的計算值為971.20。
方案1
方案2
方案3
方案4
方案5
方案6
方案7
表1.所合成的一些螯合物的光化學性能
權利要求
1.一種螯合劑，所述螯合劑包含-包含兩個或兩個以上芳族單元的發色部分，其中至少一個芳族單元為三烷氧基苯基吡啶基基團，其中所述烷氧基相同或不同，所述吡啶基為i)彼此之間直接系留在一起，分別形成聯吡啶基或三聯吡啶基基團；或ii)彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起；-包含至少兩個直接或通過含N的烴鏈附著於發色部分的芳族單元上的羧酸或膦酸基團或所述酸的酯或鹽的螯合部分；和-任選直接或通過連接體x系留於所述發色部分或系留於螯合部分的反應基A，所述反應基A能夠粘合於固相的生命分子或官能團上。
2.權利要求1的螯合劑，其中所述發色部分的吡啶基團彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起。
3.權利要求1的螯合劑，其中反應基A通過連接體x連接於螯合劑上。
4.權利要求1的螯合劑，其中所述連接體x由1-10個部分所形成，每一個部分選自亞苯基、含有1-12個碳原子的亞烷基、乙炔二基(-C≡C-)、乙烯二基(-C＝C-)、醚基(-O-)、硫醚基(-S-)、醯胺基(-CO-NH-、-CO-NR』-、NH-CO和-NR』-CO-)、羰基(-CO-)、酯基(-COO-和-OOC-)、二硫化物(-SS-)、二氮雜(-N＝N-)和叔胺，其中R』代表含有少於5個碳原子的烷基。
5.權利要求1的螯合劑，其中所述反應基A選自異硫氰酸根、滷代乙醯氨基、馬來醯亞氨基、二氯三嗪基、二氯三嗪氨基、吡啶聯硫基、硫代酸酯基、含氧氨基、醯肼基、氨基、聚合基團、羧酸或滷化醯基或其活性酯基。
6.權利要求1的螯合劑，所述螯合劑選自 其中Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基；R6為烷基酯或烯丙酯；R7為烷基，n為0或1。
7.權利要求1的螯合劑，所述螯合劑適用於低聚肽合成，其中所述反應基A通過連接體x與所述螯合劑連接，A為胺基酸殘基-CH(NHR1)R5，其中R1為瞬變保護基，R5為羧酸或其鹽、醯基滷或酯。
8.權利要求7的螯合劑，所述螯合劑選自 其中x如權利要求4中所定義，保護基R1選自Fmoc、Boc或Bsmoc，R6為烷基酯或烯丙酯，R7為烷基，Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基，n為0或1。
9.權利要求1的螯合劑，所述螯合劑適用於低聚核苷酸合成，其中所述反應基A通過連接體x與所述螯合劑連接，A為-E-O-PZ-O-R4其中氧原子中的一個任選被硫所置換；Z為氯或NR2R3；R4為保護基；R2和R3為烷基；E不存在或為適用於改性低聚核苷酸合成中的嘌呤鹼基或嘧啶鹼基或任何其它改性的鹼基，所述鹼通過i)用受保護的羥乙基取代的烴鏈與氧原子連接；或通過ii)適用於改性低聚核苷酸合成中的呋喃環或吡喃環或任何改性的呋喃或吡喃環與氧原子連接。
10.權利要求9的螯合劑，其中E為任何以下鹼的基團胸腺嘧啶、尿嘧啶、腺苷、鳥嘌呤或胞嘧啶，所述鹼通過i)用受保護的羥乙基取代的烴鏈與氧原子連接；或通過ii)在其4-位上具有受保護的羥乙基和任選在其2-位上具有羥基、受保護的羥基或改性的羥基的呋喃環與氧原子連接。
11.權利要求9的螯合劑，其中-E-O-P(NR2R3)-O-R4選自 其中-為連接體x的位置。
12.權利要求11的螯合劑，所述螯合劑選自 其中R6為烷基酯或烯丙酯，R7為烷基，x如權利要求4中所定義，A為權利要求11中所定義的-E-O-P(NR2R3)-O-R4，Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基，n為0或1。
13.一種螯合物，所述螯合物包含-金屬離子；-包含兩個或兩個以上芳族單元的發色部分，其中至少一個芳族單元為三烷氧基苯基吡啶基基團，其中所述烷氧基相同或不同，所述吡啶基為i)彼此之間直接系留在一起，分別形成聯吡啶基或三聯吡啶基基團；或ii)彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起；-包含至少兩個直接或通過含N的烴鏈附著於發色部分的芳族單元上的羧酸或膦酸基團或所述酸的酯或鹽的螯合部分；和-任選直接或通過連接體x系留於所述發色部分或系留於螯合部分的反應基A，所述反應基A能夠粘合於固相的生命分子或官能團上。
14.權利要求13的螯合物，其中所述發色部分的吡啶基團彼此之間通過含N的烴鏈系留在一起。
15.權利要求13的螯合物，其中反應基A通過連接體x連接於螯合劑上。
16.權利要求13的螯合物，其中A選自異硫氰酸根、滷代乙醯氨基、馬來醯亞氨基、二氯三嗪基、二氯三嗪氨基、吡啶聯硫基、硫代酸酯基、含氧氨基、醯肼基、氨基、聚合基團、羧酸或滷化醯基或其活性酯基。
17.權利要求13的螯合物，其中所述連接體x由1-10個部分所形成，每一個部分選自亞苯基、含有1-12個碳原子的亞烷基、乙炔二基(-C≡C-)、乙烯二基(-C＝C-)、醚基(-O-)、硫醚基(-S-)、醯胺基(-CO-NH-、-CO-NR』-、NH-CO和-NR』-CO-)、羰基(-CO-)、酯基(-COO-和-OOC-)、二硫化物(-SS-)、二氮雜(-N＝N-)和叔胺，其中R』代表含有少於5個碳原子的烷基。
18.權利要求13的螯合物，所述螯合物選自 其中Z1、Z2和Z3為相同或不同的烷基；n為0或1。
19.權利要求18的螯合物，其中所述金屬M為鑭系元素或適用於正電子成像或磁共振成像的金屬。
20.一種生命分子，所述生命分子與權利要求13-19中任一項的螯合物共軛。
21.一種生命分子，所述生命分子與權利要求13-19中任一項的螯合物共軛，其中所述生命分子選自低聚肽、低聚核苷酸、DNA、RNA、改性的低聚核苷酸或多核苷酸、蛋白質、寡糖、多糖、磷脂、PNA、LNA、抗體、半抗原、藥物、受體粘合配體和外源凝集素。
22.權利要求21的生命分子，其中所述改性的低聚核苷酸或多核苷酸為一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、氨基磷酸酯和/或糖改性或鹼改性的低聚核苷酸或多核苷酸。
23.一種生命分子，所述生命分子與權利要求1-12中任一項的螯合劑共軛。
24.一種固體載體，所述固體載體與權利要求13-19中任一項的螯合物共軛。
25.一種固體載體，所述固體載體與權利要求13-19中任一項的螯合物共軛，其中所述固體載體選自納米微粒、微粒、玻片或薄板。
26.一種標記的低聚肽，所述低聚肽通過將權利要求7或8的螯合劑引入到低聚肽合成器上的低聚肽結構內，接著進行脫保護並任選引入金屬離子在固相上進行合成獲得。
27.一種標記的低聚核苷酸，所述低聚核苷酸通過將權利要求9-12中任一項的螯合劑引入到低聚核苷酸合成器上的低聚核苷酸結構內，接著進行脫保護並任選引入金屬離子在固相上進行合成獲得。
28.一種與權利要求26的標記低聚肽或權利要求27的標記低聚核苷酸共軛的固體載體，其中所述低聚肽或低聚核苷酸共價或非共價固定在所述固體載體上。
29.一種與權利要求26的標記低聚肽或權利要求27的標記低聚核苷酸共軛的固體載體，其中所述低聚肽或低聚核苷酸共價或非共價固定在所述固體載體上，所述固體載體選自納米微粒、微粒、玻片或薄板。
30.一種與適用於低聚核苷酸合成的權利要求1的螯合劑共軛的固體載體，其中所述反應基A通過連接體x與所述螯合劑連接，A為-E-O-x』-其中x』為與所述固體載體連接的連接體，與連接體x相同或不同；E可不存在，或為適用於改性低聚核苷酸合成中的嘌呤或嘧啶基團或任何其它改性鹼基，所述鹼通過i)用受保護的羥乙基取代的烴鏈與氧原子連接；或通過ii)適用於改性低聚核苷酸合成中的呋喃環或吡喃環或任何改性的呋喃或吡喃環與氧原子連接。
全文摘要
本發明涉及一組新型的螯合劑、新型的螯合物、用所述螯合物或螯合劑做標記的生命分子以及與所述螯合物、螯合劑或標記生命分子共軛的固體載體。特別是本發明涉及可用於低聚核苷酸或低聚肽固相合成的新型螯合劑以及由此得到的低聚核苷酸和低聚肽。
文檔編號C07D471/16GK1918149SQ200480041688
公開日2007年2月21日 申請日期2004年11月15日 優先權日2003年12月18日
發明者J·霍維寧, V·-M·穆卡拉, H·哈卡拉, J·佩伊拉拉蒂 申請人:沃拉克有限公司