Withaphysalin型化合物及其用途的製作方法

2023-05-17 11:48:31 1

本發明涉及新型的化合物及其用途，尤其是Withaphysalin型化合物及其用途，屬於化學
技術領域：
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背景技術：
：小酸漿(PhysalisminimaLinn.),屬於茄科酸漿屬一年生草本植物，在我國主要分布於廣東、廣西、四川、山東、安徽等地。小酸漿作為傳統民間草藥，以全草入藥，其全株水煎劑有清熱、化痰、消炎、解毒之效，可治感冒發熱，咽喉腫痛。根據文獻調研可知，小酸漿中含有大量的withaphysalin型化合物。Withaphysalin型化合物是一類具有28個碳原子的麥角甾烷型的化合物，其結構特點是具有C-22與C-26氧化縮合形成δ-內酯環側鏈,C-18與C-20氧化縮合形成內酯或內半縮醛。我們在對小酸漿化學成分及藥理活性進行系統研究的過程中，得到了四個抗炎活性顯著的withaphysalin型化合物，其中兩個為新化合物，兩個為已知化合物，並對其結構進行了解析，闡明了小酸漿發揮抗炎機制的物質基礎。技術實現要素：本發明的目的是針對現有技術存在的缺陷，提出一種Withaphysalin型化合物及其用途。本發明公開了兩個新化合物，分別是結構式Ⅰ和Ⅱ的化合物。本發明的withaphysalin型化合物自小酸漿地上部分提取、分離、純化得到，結構式Ⅰ和Ⅱ的化合物分別命名為withaminimaB和withaminimaD。本發明提供了withaphysalin型化合物製備抗炎藥物的應用。體外抗炎實驗表明，withaminimaB和withaminimaD可抑制LPS誘導的巨噬細胞NO的釋放，IC50分別達到8.68μM、3.91μM，效果明顯優於陽性對照藥L-NMMA(36.40μM)，表明withaminimaB和withaminimaD對LPS誘導的巨噬細胞NO的釋放有較強的抑制作用，可以作為具有抗炎作用的新藥成分或先導化合物。結構與之相近的已知化合物WithaphysalinA和DihydrowithaphysalinC也具有該藥效，IC50分別為22.26μM、16.52μM。化合物結構式如下：下面為藥理學實驗。NO抑制活性測試：取處於對數生長期且狀態良好的RAW264.7細胞以6×104個細胞/孔的密度接種於96孔板中，每孔加入100μL的培養液，37℃培養18h後，選擇對細胞增殖無顯著影響的藥物作用濃度，以L-單甲基精氨酸(L-NMMA)為陽性藥，每個濃度設置3個復孔，每孔加入10μL，模型組(僅加LPS)和空白組(不做任何處理組)均加入等體積的培養基。繼續培養1h後，每孔加入10μL的LPS(1μg/mL)，空白組加入等體積的培養基。孵育18h後，取50μL的細胞上清液於新的96孔板中，先後加入等體積的一氧化氮試劑盒Ⅰ液和Ⅱ液。充分搖勻15min後，以酶標儀測定570nm處吸光度，重複實驗3次取平均值，計算不同濃度的抑制率及IC50值。抑制率(％)＝(A模型組-A加藥組)/(A模型組-A空白組)×100％結果見表1。化合物IC50(μM)withaminimaB8.68±2.95withaminimaD3.91±0.49WithaphysalinA22.26±8.51DihydrowithaphysalinC16.52±2.45L-NMMA36.40±4.40表1化合物Ⅰ～Ⅳ藥學上可接受的鹽包括化合物Ⅰ～Ⅳ與下列酸形成的酸加成鹽：鹽酸、硫酸、醋酸、草酸、酒石酸等，這些化合物Ⅰ～Ⅳ的藥學可接受鹽與化合物Ⅰ～Ⅳ具有同樣的藥理功效。本發明所述的化合物可製成任何一種藥劑學上的常規劑型，如片劑、粉針劑、膠囊劑等，可添加藥劑學上常用的矯味劑、助溶劑、崩解劑、緩衝劑等藥用輔料。本發明所述的化合物在臨床上可採取口服、注射等給藥方式。附圖說明圖1新化合物Ⅰ和Ⅱ的分子結構式。圖2新化合物Ⅰ的HR-ESI(-)-MS譜。圖3新化合物Ⅰ的1H-NMR譜。圖4新化合物Ⅰ的13C-NMR譜。圖5新化合物Ⅰ的HSQC譜。圖6新化合物Ⅰ的HMBC譜。圖7新化合物Ⅰ的ROESY譜。圖8新化合物Ⅱ的HR-ESI(-)-MS譜。圖9新化合物Ⅱ的1H-NMR譜。圖10新化合物Ⅱ的13C-NMR譜。圖11新化合物Ⅱ的HSQC譜。圖12新化合物Ⅱ的HMBC譜。圖13新化合物Ⅱ的ROESY譜。具體實施方式實施例1化合物Ⅰ～Ⅳ的提取分離及結構鑑定取小酸漿(3kg)地上部分，用3倍量95％EtOH室溫超聲提取3次，每次2h，合併濾液，減壓濃縮至約200mL。粗提物濃縮液過D101大孔吸附樹脂，分別用20％EtOH-H2O、40％EtOH-H2O、60％EtOH-H2O、80％EtOH-H2O進行洗脫，95％EtOH卸柱，共得到五個部位(A-E)。C部位(21g)進行矽膠柱層析，依次用CH2Cl2-MeOH40:1、20:1、10:1、0:1進行洗脫，得到4個部位(C1-C4)。C1部位(10g)通過中壓製備層析用40-65％MeOH-H2O進行洗脫得到4段(C1A-C1D)。C1A段通過中壓製備層析用40％MeOH-H2O進行洗脫得到3段(C1A1-C1A3)。C1A2段用高效液相製備色譜以50％MeOH進行洗脫得結構式Ⅰ化合物8.0mg。C1B段的甲醇溶液靜置後分層，將樣品進行抽濾得到結構式Ⅲ化合物純品230mg及濾液C1B1段。C1B1段用高效液相製備色譜以50％MeOH進行洗脫得結構式Ⅱ化合物4.7mg、結構式Ⅳ化合物190mg。化合物Ⅲ和化合物Ⅳ通過與文獻數據對比確定為WithaphysalinA和DihydrowithaphysalinC。通過1DNMR及2DNMR對化合物Ⅰ和化合物Ⅱ進行結構解析，並命名為withaminimaB和withaminimaD。withaminimaB，白色無定形粉末，分子式C28H34O8。withaminimaD,白色無定形粉末,分子式C28H34O6。withaminimaB和withaminimaD的1H-NMR及13C-NMR數據。實施例2NO抑制活性測試取處於對數生長期且狀態良好的RAW264.7細胞以6×104個細胞/孔的密度接種於96孔板中，每孔加入100μL的培養液，37℃培養18h後，選擇化合物Ⅰ～Ⅳ對細胞增殖無顯著影響的藥物作用濃度(分別為1.0、2.5、5.0、7.5、10.0μmol/L)，以L-單甲基精氨酸(L-NMMA)為陽性藥，每個濃度設置3個復孔，每孔加入10μL，模型組(僅加LPS)和空白組(不做任何處理組)均加入等體積的培養基。繼續培養1h後，每孔加入10μL的LPS(1μg/mL)，空白組加入等體積的培養基。孵育18h後，取50μL的細胞上清液於新的96孔板中，先後加入等體積的一氧化氮試劑盒Ⅰ液和Ⅱ液。充分搖勻15min後，以酶標儀測定570nm處吸光度，重複實驗3次取平均值，計算不同濃度的抑制率及IC50值。抑制率(％)＝(A模型組-A加藥組)/(A模型組-A空白組)×100％測試結果表明，化合物Ⅰ～Ⅳ均可顯著的抑制LPS誘導的巨噬細胞NO的釋放(IC50分別為8.68、3.91、22.26、16.52μM)，可用於製備預防和治療炎症相關疾病的藥物。除上述實施外，本發明還可以有其他實施方式。凡採用等同替換或等效變換形成的技術方案，均落在本發明要求的保護範圍。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp