一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用的製作方法

2023-05-03 19:21:16 1

專利名稱：一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種試劑盒，具體地說關於一種RhoGDI2基因的原位雜交 ;險測試劑盒及其檢測方法和應用。
背景技術：
根據國內外權威機構提供的資料，我國每年癌症的新增人數170萬， 死亡人數近160萬，患者600多萬，全球每年新增癌症患者800萬，死亡 人數接近800萬，患者約有8400多萬人，到2020年以上人數將翻一番， 這是一組可怕的數字。2005年美國衛生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家單位做了一個 年度報告，"認為人類在抗癌大戰中是失敗"，也就是說癌症死亡率沒有降 低，其列舉出造成抗癌大戰失敗的幾個因素是1、腫瘤細胞異質性；2、 腫瘤細胞耐藥性；3、抗癌藥物設計思路不完善等。同時，該報告中亦提 出應重新審視現有診治癌症的措施。本發明人在研究中發現，導致癌症死 亡率不降的另二個重要原因是1、不能做到真正的早期診斷；2、轉移的病理機制不清楚。依照傳統的醫學影4象及和其它生化(如蛋白標記物)指標 來診斷癌症，認為佔位性癌塊在2公分下是屬於早期癌症的診斷(更小些 有時無症狀體徵)，這一臨床概念值得認真討論。影1象醫學的2公分以下癌塊屬早期這一界定科學性是不夠嚴謹的，從細胞學角度，l公分的腫塊約有一億個胂瘤細胞，2公分的腫塊其三維空間的細胞疊加數遠不止2億 個腫瘤細胞，從癌變前期到單克隆癌細胞產生及形成2公分的癌塊，其病 理演變過程相當長，可能是一年或兩年、甚至三年以上，4艮難證實的是在 這個過程中，腫塊是癌症唯一的發生地和單獨的病灶。臨床上已證實一 旦形成腫塊的同時，其他癌細胞通過不同途徑遷移到其他部位克隆生長； 一旦切除原發灶後，其他器官復發灶或多發癌塊灶先後形成或轉移。因此， 在臨床上以2公分以下的腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴謹(有些病例， 在發現原發病灶時，同時發現轉移病灶，不在我們表述的內容中)，這時 已經是晚期了，這是導致癌症死亡率不降的真正原因。隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌症基因組學等研究的 深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌 變前期或癌細胞形成(單克隆)時或癌細^^包突-皮血管壁早期轉移時，就能 做到早期預測診斷。維吉尼亞大學的泌尿學與分子生理學教授Dan Theodorescu 博士領導的科學小組研究表明，RhoGDI2基因與膀胱癌細胞轉移 有關係，當RhoGDI2基因在癌細胞中有活性時，細胞就產生一種 能夠阻止癌細胞浸入到其他器官的蛋白。目前對RhoGDI2基因的研究都釆用高通量基因晶片技術，而這些方法 多用於科研方面，不適應臨床應用，特別是個性化的應用在我國現階段條 件尚不成熟。原位雜交技術Un situ hybridization)是將分子生物學與細月包化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是〗吏含有特異序列、經過標記的核酸單鏈(即揮: 針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即耙核貌義生雜交，再 以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DM或RNA分子。原位雜交的探針是已知序列的分子或序列未知但分子已知的核酸分 子(雖不明確該分子全部序列，但已知其針對何靶分子)，探針的種類按 核酸性質不同又可分為DNA探針、cDNA探針、cRNA探針和合成寡核苷酸 探針。為了便於示蹤，探針必須用一定的手段加以標記，以利於以後的抬r 測。常用的標記物包括》文射性核素和非;^文射性標記物兩大類。常用的同位 素標記物有3H、 35S、 125I和32P。同位素標記物雖然有靈敏性高、背底 較為清晰等優點，但是由於放射性同位素對人和環境均會造成傷害，近來 有被非同位素取代的趨勢。非同位素標記物中目前最常用的有生物素、地 高辛和螢光素三種。；險測這些標記物的方法都是極其靈敏的。根據所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為 DNA-DNA，RNA-DNA， RNA-RNA雜交。但不論哪一種形式的雜交，都必須經過 五大過程，即組織細胞的固定，預雜交、雜交、沖洗和顯示。中國專利文獻CN1556410公開了 "一種魚類病毒的檢測試劑盒及其 檢測方法"。中國專利文獻CN1680597公開了 "一種用於定量檢測丙型肝 炎病毒(HCV)的螢光定量PCR試劑盒"。中國專利文獻CN2918435，公開了 "一種檢測肥胖相關基因SNP的寡核苷酸晶片及試劑盒"。但是，關於 RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒及其4企測技術未見報導。發明內容本發明的目的在於 (1 )、提供一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒；(2) 、提供一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測方法；(3) 、提供一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒的應用。 本發明的目的是通過以下技術方法來實現的本發明人在對大量樣本廣泛性腺癌(肝、肺、腎、胃、子宮、卵巢、乳房、直腸 等血液細胞)檢測中觀察到，癌症病人伴有轉移者，RhoGDI2基 因表達量降低或大部分是零表達，該指標有重要的臨床價值。我 們檢測了近800例各種類型癌症患者(大部分已轉移)血液標本， 近800例正常對照組人群，經統計學分析，癌症患者體內RhoGDI2 基因表達量為8%左右，正常人群表達量平均為50%,病例組中有 600多例該基因是零表達。同時^r測兩個家族性癌症好發家屬的 直系親屬，該基因的表達量比正常人表達量都低。本發明提供的 肺瘤轉移抑制基因RhoGDI2是人類同源基因，位於染色體12P12. 3的一個 Rho家族基因，它們與GTP和GDP-1功能和細胞內移動有關。RhoGDI2在 正常人體組織或器官中廣泛表達,但在人類各種類型肺瘤及肺瘤轉移患者 中表達明顯下降，甚至缺失。這是它與其它腫瘤轉移抑制基因不同之處， 具有廣譜的癌症轉移抑制作用。本發明的檢測試劑盒是採用核酸雜交技術 和組化免疫方法相結合，以RhoGDI2基因為檢測對象，合成探針是RhoGDI2 基因的DNA或RNA序歹。，檢測的底物是人體血液標本白細胞或組織細胞的RNA的表達量。原位雜交技術的顯示方法能提供RhoGDI2基因的半定量或 定量表達程度判定。根據雜交後免疫組化顯色判定以上基因的表達量，癌 症病人RhoGDI2基因表達低或不表達，即不顯色，正常人有50°/。的表達量， 顯色深。本發明的核酸雜交基本過程包括下列幾個步驟。(l)製備樣品 首先需要從待檢測組織樣品提取RNA。 RNA樣品則可直接在變性條件下電 泳分離，然後轉印並交聯固定。(2)製備探針探針是指一段能和待檢測 核酸分子^Utt配對原則而結合的核酸片段。在核酸雜交實驗中，探針需 要被標記上可直接檢測的元素或分子。這樣，通過檢疫與恩印膜上的核酸 分子結合上的探針分子，既可知道被檢測的核酸片段在膜上的位置，也就 是在電泳凝膠上的位置，也就知道了它的分子大小。本試劑盒中探針用地 高辛標記。(3)雜交首先要進行預雜交，即用非特異的核酸溶液封閉膜 上的非特異性結合位點。由於轉印在膜上的核酸分子已經是變性的分子， 所以雜交過程中只需變性標記好的探針,再讓探針與膜在特定的溫度下反 應，然後洗去未結合的探針分子即可。(4)檢測用相應的免疫組織化學 的方法進行4全測。具體操作步驟是標本處理、預雜交、雜交、免疫組化染 色、鏡下進行定量分析、結果報告，其中雜交的具體步驟包括1)、將待測標本》t^反應槽中；2)、儀器自動棄去液體，自動力口消化液；3)、儀器自動棄去液體，自動後固定；4)、儀器自動棄去液體，自動預雜交(42。C);5)、儀器自動棄去液體，l)動清洗；6)、儀器自動棄去液體，自動雜交(42°C );7) 、儀器自動棄去液體，自動清洗；8) 、儀器自動棄去液體，自動與DIG抗體培養(室溫)；9) 、儀器自動棄去液體，自動清洗，顯色；10) 、取出去於片4竟鬥企。 本發明的技術方案如下一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記 物、雜交液、增效劑，其中，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1 所示。所述的標記物選自；^射性核素或非》文射性標記物。 所述的放射性核素選自3H、 35S、 1251或32p中的一種。 所述的非放射性標記物選自生物素、地高辛、鹼性磷酸酶、辣根 過氧化酶或螢光素中的 一種。所述的非放射性標記物優選自地高辛。 所述的雜交液增效劑是鹼性磷酸酶抗體。 一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測方法，該方法包括以下步驟a、 將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交複合體；b、 檢測a步驟得到的雜交複合體。a步驟中形成雜交複合體的條件為核酸雜交的溫度為42 °C;核酸雜交的時間為16 - 24小時，所述的底物選用血液單核 細胞標本。一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒在製備檢測癌症早期轉移、 復發疾病藥物中的應用。所述的癌症是肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、子宮 癌或胰腺癌。本發明所公開一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法 和應用，其優點表現在本發明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強的 特點。同時，本發明的檢測方法操作方便、簡單，能在區級以上醫院普遍 使用和推廣。克服了目前對RhoGDI2基因的研究都釆用高通量基因晶片方 法，而這些方法多用於科研方面，不適應臨床應用的缺陷。本發明的臨床 意義是更早期跟蹤檢測癌症發生和病理演變過程中癌細胞發生轉移的情 況。本發明的診斷試劑盒與臨床上其它檢測癌胚蛋白標誌物，以及影像醫 學檢查有顯著不同。本發明可以在基因水平上檢測RhoGDI2基因異常表 達，在影像醫學檢查未發現佔位性癌病灶復發之前，癌症生化指標未產生 異常之前，亦未形成肺瘤之前，能及早做到以上基因表達異常的信息採集， 給臨床癌症病患一個真正的早期診斷以及治療後轉移復發及早預測。這樣 才有可能實施癌症的早期診斷、早期預防、早期治療，有可能從源頭上徹 底根治癌症惡疾。


圖1:正常人血液RhoGDI2原位雜交結果。 圖2:癌症病y^jk液RhoGDI2原位雜交結果。圖3:正常人及各年齡段的RhoGDI2基因表達量方塊圖(統計學分析)。圖4:正常人及各年齡段的RhoGDI2基因表達量曲線圖(統計學分析)。 圖5:各類癌症患者及各年齡段的RhoGDI2基因表達量方塊圖(統計 學分析)。圖6:各類癌症患者及各年齡段的RhoGDI2基因表達量曲線圖(統計 學分析)。
具體實施方式
下面結合實施例，更具體地說明本發明的內容。應該理解，下面的實 施例用於說明而非限定本發明內容，任何形式上的改變或變通將落入本發 明的保護範圍。實施例1一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒一種RhoGDI2基因的原位雜交4全測試劑盒，包括雜交糹果針、標記 物、雜交液、增效劑，其中，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO. 1 所示。雜交探針用地高辛標記。試劑盒中的其它液體和標本組成 如下消化液100n 1/管l管/盒無色透明液體保護液100|a 1/管l管/盒無色透明液體預雜交液1300ja 1/管2管/盒無色透明液體正義雜交液10ju 1/管l管/盒無色透明液體反義雜交液10pl/管l管/盒無色透明液體封閉液lOOOp 1/管l管/盒無色透明液體石威性-舞酸酶抗體l"/管l管/盒無色透明液體顯色劑A175)il/管l管/盒黃色液體顯色劑B320|u 1/管l管/盒無色透明液體緩沖液I 10x90ml/瓶l瓶/盒淺黃色或無色透明液體緩衝液II 10x80ml/瓶1瓶/盒淺黃色或無色透明液體緩沖液m iox20ml/瓶3瓶/盒淺黃色或無色透明液體緩衝液IV 10x90ml/瓶l瓶/盒淺黃色或無色透明液體固定液90ml/瓶l瓶/盒無色透明液體陽性對照標本6片/盒上述試劑成分說明(所有試劑購自SIGMA)1、 消化液20mg/ml蛋白酶K， 100mg蛋白酶K,力卩DEPC-H20 5ml;2、 保護液0. 2g的glycine加入lml的1 x |￡沖液I ;3、 預雜交液lx緩沖液II 7. 5ml 50 xD 3ml10mg/ml yest t-RNA 750ul llmg/ml SALMON TESTES DNA 682ul 0. 04M EDTA 3ml 50% formamide 15ml;4、 封閉液0. 03g的bloking (購買自羅氏公司)加入lml lx緩 衝液III;5、 lOx緩衝液I: (PH7, 1-7. 4)NaCl 80gNa2HP04. 12H20 360g KC1 2g KH2P04 2g加三蒸水至ll,並高壓滅菌；6、 lOx緩衝液II: (PH7. 0) NaCl 175. 3g檸檬酸鈉 88. 2g HC1 幾滴加三蒸水至ll，並高壓滅菌；7、 緩沖液III: (PH7. 9) Tris 121. lgNaCl 87. 66g HC1 60ml左右 加三蒸水至ll,並高壓滅菌；8、 緩沖液IV:1M Tris-HCl (PH9. 5) Tirs 121.1g加HCl 3ml左右，加水900ml，調 PH至9. 5,加水至ll，並高壓滅菌；1M NaCl: NaCl 58. 44加水至11,並高壓滅菌；0. 5MMgCl2: 101. 65g MgC12. 6&0加水至11，並高壓滅菌；9、 固定液多聚甲醛40g加lx緩衝液l至ll,稍加熱(約50-60度) 攪拌至溶解；1310、 顯色劑A: NBT lg加70%DMF11. 44ml;11、 顯色劑B: BCIP lg加100°/。DMF30ml。 本發明的試劑盒可以多人份使用或一人份使用。實施例2一種RhoGDI2基因的原位雜交4企測方法一、 標本處理1、 用10ml的離心管，裝4. 5ml淋巴細胞分離液，再將3 ml抗凝血緩 慢加入含有淋巴細胞分離液(血淋巴細胞分離液=1: 1. 5)的離心管 中，2000r/min離心10 min;2、 吸取中間層白細胞至另一離心管中，再在此管中加入約兩倍的lx 緩沖液I，混勻，1500g/min離心10 min;3、 棄上清.沉澱加入約兩倍的lx緩衝液1,混勻，1500g/min離心10min;4、 棄上清，並把試管口多餘的液體用擦手紙吸去。再將沉澱製成懸液， 滴在玻片上推片，自然乾燥。(有條件的醫院可以用製片機製片。)3ml血， 可以做4張片子；5、 用40ml 4°/。固定液,在玻璃缸中，固定30min,再用lx緩沖液I洗 5min。每釭可以》文16片；6、 標本可保存在-20。C，或繼續啦支實馬企。二、 將實施例1製得的試劑盒中試劑配製成使用濃度1、 將10 x緩衝液I用三蒸水按1: 10稀釋成1 x緩衝液I ;2、 將20x緩衝液n用三蒸水按1:10稀釋成2x緩衝液n;按1: 100稀釋成0. 2 x緩衝液II;按1: 200稀釋成0. 1 x緩沖液II;3、 將10 x緩沖液III用三蒸水按1: 10稀釋成1 x緩衝液III;4、 10x緩沖液IV用三蒸水按1: 10稀釋成x緩衝液IV (取1#, 2#, 3#各10ml,加水至100ml既可)。三、實驗步驟1、 取每位待檢者標本兩張，(另外兩張留作複查用)及陽性對照標本 兩張(每次實驗做一對陽性對照)；2、 在玻璃缸裡加消化液(消化液100ul力。1 x緩衝液199. 9ml，即為使 用濃度)20ml。 37。C水浴預熱IO分鐘。放進16張玻片，37。C處理12min， 再用1 x緩衝液I洗5min;3、 用0. 2%的保護液(保護液lml力口 1 x緩沖液199ml即為使用濃度) 洗10min，三蒸水洗5min，以上過程都在玻璃缸進行。玻片自然乾燥；4、 將玻片放入保溼盒內，加預雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保溼 盒，》文在42。C恆溫水浴箱中3h以上；5、 取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內，用70%, 90%,95%的乙 醇各洗2min ,自然乾燥；6、 將玻片放入保溼盒內，每位病人標本兩張， 一張加正義雜交液20u1/ 片，另一張加反義雜交液20ul/片，蓋上蓋玻片，蓋緊保溼盒，放在42。C 恆溫水浴箱中16-24h;7、 取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內，在42。C恆溫水浴箱中用2 x i爰衝液II洗兩次，每次15min， 在42。C恆溫水浴箱中用0. 2 x緩衝液II洗一次，每次15min,在42。C恆溫水浴箱中用0. 1 x緩衝液II洗兩次，每次15min，8、 用lx緩沖液in洗30s，取出玻片，自然乾燥；9、 將玻片方t7vf呆溼盒內，力口 0. 5%1封閉液(lml封閉液加5mll x緩衝 液III) 100ul/片，蓋緊保溼盒，在室溫下作用30min;10、 取出玻片，用1 x緩衝液ni洗30s，自然乾燥；11、 將玻片放入保溼盒內，加鹼性磷酸酶抗體(加入1. 8ml1 x緩沖液 in)100ul/片，蓋緊保溼盒在室溫下作用30min;12、 取出玻片，用1 x緩沖液III洗3次，每次15min;13、 1 x緩衝液iv洗2min，加顯色劑(顯色劑A73. 3ul，顯色劑B157. 5ul 加到30mll x緩衝液IV中，混勻)，室溫避光12h以上；14、 用三蒸水洗5min，自然乾燥，(用甘油加10%的1 x緩沖液I混勻) 封片鏡檢。四、結果判斷在光鏡下計數100-300個細胞，計算染上紫色細胞的百分比。陽性對 照標本加反義雜交液的應該80。/。以上染上紫色。所有加正義雜交液的陰性 內對照應無色。地高辛標記的cDNA、 RNA和寡核苷酸糹採針，不但糹笨針的具 有生物素標記優點，還克服了生物素標記的探針在原位雜交過程中受組織 內源性生物素幹憂等缺點，將該雜交探針與人體血液白細胞的待測RNA 核酸進行雜交，再用免疫組化的方法顯色，在光鏡下觀察mRNA的存在和 定位,根據染色的細胞數，判斷目的基因的表達量。本發明方法是目前常 用的核酸原位雜交技術，該方法通過檢測底物細胞中的RhoGDI2基因表達 量，用來確定癌症是否發生和/或轉移。臨床研究表明，RhoGDI2基因並基因在正常人中高表達(正常人血液RhoGDI2 原位雜交結果見圖1,正常人及各年齡段的RhoGDI2基因表達量見圖3, 圖4 )。如果RhoGDI2基因表達低或零表達(癌症病Ajk液RhoGDI2原位 雜交結果見圖2,各類癌症患者及各年齡段的RhoGDI2基因表達量見圖5, 圖6),說明癌症已經復發、轉移、擴散，從而獲得癌症的診斷信息。當 檢測到RhoGDI2基因的表達低於正常對照時，則可預測受試者為癌症早期 轉移或癌症轉移易感者，這些癌症包括肺癌、胃癌、乳腺癌、結腸癌、前 列腺癌、子宮癌、胰腺癌。SEQUENCE LISTING 芮屈生物技術(上海)有限公司 —種RhoGDI2基因的原位雜交4全測試劑盒及其檢測方法和應用 / 1 Patentln version 3.1 1 1216 DNA 智人(Homo sapiens) 1ctcattgacttccttcctgttctaactgccagtactcagaagtcagagttgagagacaga60ggc歸ccggacagagacgtgaagcactgaataaatagatcagaatgactgaaaaagccc120cagagccacatgtggaggagg"gatgatg3tgagctggacagcaagctcaattataagc180ctccaccacagaagtccctgaaagagctgcagg謹tggacaaagatgatgagagtctaa240ttaagtacaagaaaacgctgctgggagatggtcctgtggtgacagatccgaaagccccca300atgtcgttgtcacccggctcaccctggtttgtgagagtgccccgggaccaatcaccatgg360accttactggagatctggaagccctcaaaaaggaaaccattgtgttaaaggaaggttctg420aat"agagtcaaaattcacttcaaagtgaacagggatattgtgtcaggcctgaaatacg480ttcagcacacctacaggactggggtg扁gtggataaagcaacatttatggttggcagct540atggacctcggcctgaggagtatgagttcctcactccagttgaggaggctcccaagggca600tgctggcgcgaggcacgtaccacaacaagtccttcttcaccgacgatgacaagc汪agacc660acctcagctgggagtggaacctgtcgattaag卿gagtggacagaatgaatgcatccac720ccctttccccacccttgccacctggaagaattctctcaggcgtgttcagcaccctgtccc780tcctccctgtccacagctgggtccctcttcaacactgccacatttccttattgatgcatc840ttttcccaccctgtcactcaacgtggtccctagaacaaga ggcttaaaaccgggctttca900cccaacctgctccctctgatcctccatcagggcc柳tcttccacgtctccatctcagta960taatatttccctgtcttacccctattcaagcaactagaggccagaaaatg1020ggcaaattat cactaacagg tctttgactc aggttccagt agttcattct aatgcctaga 1080ttcttttgtg gttgttgctg gcccaatgag tccctagtca catcccctgc cagagggagt 1140tcttcttttg tgagagacac tgtaaacgac acaagagaac aagaataaaa caataactgt 1200gtgtgttctg gctgag 121權利要求
1、一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針、標記物、雜交液、增效劑，其特徵在於所述的雜交探針序列如SEQ IDNO.1所示。
2、 根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述的標記物 選自放射性核素或非放射性標記物。
3、 根據權利要求2所述的試劑盒，其特徵在於所述的放射性 核素選自3H、 35S、 1251或32P中的一種。
4、 根據權利要求2所述的試劑盒，其特徵在於所述的非放射 性標記物選自生物素、地高辛、鹼性磷酸酶、辣根過氧化酶或螢光素中的 一種。
5、 根據權利要求4所述的試劑盒，其特徵在於所述的非放射 性標記物優選自地高辛。
6、 根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述的雜交液 增效劑是鹼性磷酸酶抗體。
7、 一種RhoGDI2基因的原位雜交4全測方法，其特4正在於，該方 法包括以下步驟a、 將權利要求1所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接 觸，形成雜交複合體；b、 檢測a步驟得到的雜交複合體。
8、 根據權利要求7所述的檢測方法，其特徵在於a步驟中形 成雜交複合體的條件為核酸雜交的溫度為42°C;核酸雜交的時間為16-24小時，所述的底物選用血液細胞標本。
9、 根據權利要求1-6任一所述的試劑盒在制^^企測癌症早期轉移、復 發疾病藥物中的應用。
10、 根據權利要求9所述的應用，所述的癌症是肝癌、肺癌、胃癌、乳 腺癌、結腸癌、前列腺癌、子宮癌或胰腺癌。
全文摘要
本發明涉及一種RhoGDI2(Rho GDP dissociation inhibitor beta)基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用。所述的試劑盒包括雜交探針、標記物、雜交液、增效劑，其中所述的雜交探針序列如SEQ ID N0.1所示。一種RhoGDI2基因的原位雜交檢測方法包括以下步驟a.將試劑盒中的雜交探針與底物中待測RNA接觸，形成雜交複合體；b.檢測a步驟得到的雜交複合體。所述的試劑盒在製備檢測癌症早期轉移、復發疾病藥物中的應用。本發明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點。同時，本發明的檢測方法操作方便、簡單，能在區級以上醫院普遍使用和推廣。
文檔編號G01N33/53GK101328499SQ20081004082
公開日2008年12月24日 申請日期2008年7月22日 優先權日2008年7月22日
發明者張雲福, 裘建英 申請人:芮屈生物技術(上海)有限公司