紅掌組織植株培養技術的製作方法

2023-04-22 23:45:36

專利名稱：紅掌組織植株培養技術的製作方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養技術領域，特別涉及名稱為紅掌植物的植株組織培養技術。
紅掌原產於美洲的熱帶地區，其繁殖方法主要靠種子和分株。在組織培養階段已有報導的有1986年Keller等人研究用MS、Skoog培養基作葉插(+Kt2mg/L)，1-2個月可形成愈傷組織。1972年，Kuehrle-A等用4種雜交幼苗的葉進行組培(1/2MS+2.4D1-4mg/L+Kt0.33-1mg/l+2％庶糖+1％葡萄糖，在暗中培養1個月，有半透明的胚胎發生。1993年，復旦大學研究表明，在幼苗培養中，晝長夜短可誘導愈傷組織生長，用MS+1mg/L，有利於芽的誘導，1/2MS+0.1mg/LNAA有利於根的形成，還有人研究認為，以葉片為外植體的含高濃度細胞分裂素和低濃度生長素的培養基上誘導產生不定芽等，但單個不定芽較難從緻密的愈傷組織上分離，這種不定芽包裹成人工種了，在1/2MS培養基上獲得11.3％的萌發率，以上技術僅處於實驗室階段，不能批量化生產，且成活率低，均未形成小植株。
本發明的目的是針對以上現有技術的不足，發明一種利用紅掌葉片作為外植體，操作相對簡單，可形成小植株，成活率高，可批量生產的紅掌植株組織培養技術。
本發明的目的可以通過以下技術方案實現提供一種紅掌植株組織培養技術，所述紅掌植株組織培養技術是按以下步驟和方法進行A、外植體的選擇消毒選用25-30天舒展鮮嫩紅掌葉片作為外值體，用自來水衝洗乾淨，在無菌操作臺上用8-12％的次氯酸鈉消毒30分鐘，最後用無菌水衝洗5-6次備用；B、外植體的接種將消毒後備用的葉片剪成1釐米大小，接種在1/2MS+6BA1mg/L的分化培養基上，接種瓶內每瓶平放3-5片，葉面向上，在培養室內暗培養，保持溫度25±2℃，約60天後，葉片傷口發生愈傷組織。
C、愈傷組織轉接將傷口形成愈傷組織的葉片，接種到MS+6BA1mg/L的培養基，約45-60天轉接一次，以保持高速度遞增。
D、紅掌組培苗的分化當愈傷組織達到要求數量後，停止對愈傷組織的分割，在最後一次轉接55天後即可得到大量分化的組培苗E、生根培養以1/2MS+6BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L為培養基，對組培苗進行培養。
本發明提出的紅掌植株組織培養技術，利用紅掌葉片為外植體，使得植體取材容易，數量大，並且操作簡單，本培養技術可形成小植株，成活率高，可批量生產。
下面結合實施例對本發明進一步詳述，我們利用紅掌葉片作為外植體，這是因為紅掌葉面表皮為臘質狀，消毒比較容易，再則是數量大，相對花序取材容易。選用25-30天舒展鮮嫩紅掌葉片作為外值體，用自來水衝洗乾淨，在無菌操作臺上用8-12％的次氯酸鈉消毒30分鐘，最後用無菌水衝洗5-6次備用。將消毒後備用的葉片剪成1釐米大小，接種在1/2MS+6BA 1mg/L的分化培養基上，接種每瓶平放3-5片，葉面向上，在培養室內暗培養，保持溫度25±2℃，約60天後，葉片傷口發生愈傷組織。將傷口形成愈傷組織的葉片，接種到MS+6BA 1mg/L的培養基，約45-60天轉接一次，以保持高速度遞增。當愈傷組織達到要求數量後，停止對愈傷組織的分割，在最後一次轉接55天後即可得到大量分化的組培苗。
以1/2MS+6BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L為生根培養基，對組培苗生根進行培養。
紅掌植株組織生根培養後可進行練苗，練苗以1/2椰絨加1/2珍珠為基質。
實施例一99年1月2號剪取紅掌嫩葉(27天)三片，先用0.1％洗潔淨液浸泡5分鐘，然後用自來水衝洗30分鐘，送入接種室放在超淨工作檯備用。
接種室按常規消毒，超淨工作檯提前20分鐘開機，用經過消毒的1000毫升燒杯配製8％的次氯酸鈉800毫升。
將洗淨的紅掌葉片放入次氯酸鈉溶液中浸泡並不斷振蕩，注意紅掌葉片不能浮出次氯酸鈉表面，30分鐘後，將次氯酸鈉溶液倒出，並即時倒入無菌水，振蕩約1分鐘倒出無菌水，同時倒入新的無菌水，如此循環六次。
將經過消毒的葉片取出，放入經過消毒的培養皿中，用濾紙吸乾葉片表面水珠，然後用經過消毒的鑷子、剪子將葉片剪成1cm的正方形小塊，一共接125瓶，進入暗培養。元月27日觀察汙染情況，細菌汙染10瓶，黴菌汙染20瓶，汙染率為26％，95瓶繼續暗培養。3月3日檢查愈傷組織發生情況，結果95瓶都產生了愈傷組織，愈傷組織發生率為100％，3月4日轉接愈傷組織(一瓶接一瓶)，45天後也就是4月20日轉接第二次(一瓶接三瓶)以後如此往復，到十月份愈傷組織瓶苗達3200多瓶，並停止對愈傷組織分割，12月份紅掌苗高2-3釐米，並開始煉苗，形成工廠化生產。
實施例二材料紅掌嫩葉(30天)三片；經過高壓滅菌的培養皿兩個、1000毫升燒杯兩個、剪刀一把、鑷子一把、濾紙15張，無菌水5升。
將紅掌嫩葉先用0.1％洗潔淨液浸泡5分鐘，然後用自來水衝洗30分鐘，送入接種室，放在超淨工作檯上備用。
接種室按常規消毒，超淨工作檯提前20分鐘開機，並配製0.1％HgCl2和8％次氯酸鈉溶液各1000毫升。
將洗淨的紅掌葉放入70％酒精浸泡1分鐘，取出放入8％的次氯酸鈉溶液中浸泡8分鐘，並不斷振蕩，然後移到0.1％HgCl2溶液中浸泡8分鐘，同時振蕩。倒出HgCl2溶液，倒入無菌水振蕩1分鐘，倒出無菌水並重新加入乾淨無菌水，浸泡三分鐘。並不斷振蕩，往復循環4次，取出紅掌嫩葉放入培養皿中，並用濾紙吸乾其表面水珠。
將消毒後的紅掌嫩葉剪成1釐米的正方形，並把它接種到1/2MS+6BA 1mg/L的培養基上，每瓶接三片，葉面朝上，25天後檢查其汙染情況，一般汙染率為15-20％，60天後開始發生愈傷組織，6個月後一般可達到一定繁殖規模，並可形成規模化育苗生產。
權利要求
1.一種紅掌植株組織培養技術，其特徵在於所述紅掌植株組織培養技術是按以下步驟和方法進行A、外植體的選擇消毒選用25-30天舒展鮮嫩紅掌葉片作為外值體，用自來水衝洗乾淨，在無菌操作臺上用8-12％的次氯酸鈉消毒30分鐘，最後用無菌水衝洗5-6次備用；B、外植體的接種將消毒後備用的葉片剪成1釐米大小，接種在1/2MS+6BA1mg/L的分化培養基上，接種瓶內每瓶平放3-5片，葉面向上，在培養室內暗培養，保持溫度25±2℃，約60天後，葉片傷口發生愈傷組織。C、愈傷組織轉接將傷口形成愈傷組織的葉片，接種到MS+6BA 1mg/L的培養基，約45-60天轉接一次，以保持高速度遞增。D、紅掌組培苗的分化當愈傷組織達到要求數量後，停止對愈傷組織的分割，在最後一次轉接55天後即可得到大量分化的組培苗；E、生根培養以1/2MS+6BA 1mg/L+NAA 0.2mg/L為培養基，對組培苗進行生根培養。
2.根據權利要求1所述的紅掌植株組織培養技術，其特徵在於紅掌植株組織生根培養後可進行練苗，練苗以1/2椰絨加1/2珍珠為基質。
全文摘要
一種紅掌植株組織培養技術,其方法包括:外植體選擇和消毒、外植體接種、愈傷組織轉接、紅掌組培苗的分化及生根培養,該培養技術以紅掌葉片為外植體,操作簡單,取材容易,通過培養可形成小植株,本方法操作簡單,成活率高,可批量大規模生產。
文檔編號A01H4/00GK1353926SQ0013241
公開日2002年6月19日 申請日期2000年11月20日 優先權日2000年11月20日
發明者黃錫瓊 申請人:深圳市金百合生物工程技術有限公司