活性肽以及包含其的美白霜的製作方法

2023-04-23 05:17:01 4

本發明涉及具有皮膚美白效果的非天然肽及以及它們在化妝和個人護理組合物中的應用。發明背景截至目前，已經發現多種天然和合成肽都廣泛用於化妝組合物。通常，化妝品中包含肽是利用它們的功能活性，例如對酶的抑制，抗病毒和抗細菌等活性。美國專利6,620,419公開了化妝組合物，其包含多肽，例如lys-thr-thr-lys-ser，據報導它們誘導膠原和糖胺聚糖的合成以治療皮膚老化。美國專利6,821,524描述了小的天然存在的多肽胸腺素-β-4(tb4)在改善老化或損傷皮膚外觀的化妝組合物中的應用。據稱血管內皮生長因子(vegf)和轉化生長因子β1(tgfβ)肽也用於包括在所述的化妝組合物中。美國專利6,777,389描述了化妝組合物，其包含與內源性彈性蛋白的各部分對應或同源的肽，包括纈氨酸-纈氨酸-脯氨酸-谷醯胺、纈氨酸-丙氨酸-丙氨酸-精氨酸-脯氨酸-甘氨酸、亮氨酸-甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丙氨酸-甘氨酸和纈氨酸-甘氨酸-纈氨酸-羥基脯氨酸-甘氨酸，以及它們增強遭受與彈性蛋白不足有關的問題的皮膚外觀的應用。美國專利6,372,717公開了化妝組合物，其包含tyr-arg肽的合成性親脂衍生物，包括n-乙醯基-l-tyr-l-arg-o-鯨蠟基，用於緩解刺激，輕度疼痛，熱、冷的效應，皮膚上的摩擦或機械性攻擊的感覺。美國專利6,245,342公開了包含來源於α-msh(促黑激素)的his-phe-arg-trp的肽的化妝組合物的應用。據稱該化妝組合物具有刺激黑素原生成和抗炎性質。美國專利6,358,929描述了包含序列賴氨酸-脯氨酸-纈氨酸的肽作為添加劑在預防或減少與接觸性過敏反應有關的不耐受反應的化妝組合物中的應用。美國專利6,235,291描述了肽(tyrd-phephed-hisleu-metnh2)和肽(d-niclyspro3-palprod-cl2pheasnd-trpphed-trpleunlenh2)作為p物質拮抗劑在治療敏感性皮膚的化妝品中的應用。美國專利6,235,291涉及具有對抗細菌、黴菌和/或病毒活性的肽(glyileglyaspprovalthrcysleulysserglyalailecyshisprovalphecysproargargtyrlysglnileglythrcysglyleuproglythrthrcyscyslyslyspro)的應用和它在化妝組合物中的應用。用於化妝組合物的其他肽添加劑包括抑制彈性蛋白酶的大豆肽，抑制膠原蛋白酶的植物肽，肽例如甘氨醯基-l-組氨醯基-l-賴氨酸、l-纈氨醯基-l-組氨醯基-l-賴氨酸和l-丙氨醯基-l-組氨醯基-l-賴氨酸的銅絡合物(美國專利公開2003/0148927)，抑制降解彈性蛋白或膠原的蛋白酶的卵轉鐵蛋白肽，和具有結構乙醯基穀氨醯基-穀氨醯基-蛋氨醯基-穀氨醯基-精氨醯基-精氨醯基醯胺的抗皺紋肽乙醯基六肽-3(美國專利公開2005/0118124a1)，具有序列lys-thr-thr-lys-ser的棕櫚醯寡肽和棕櫚醯五肽。全世界人民都想要身體健康和外表顯得健康。良好且平衡的生活方式，包括食用衛生食品，運動和儘可能減少外應力如汙染、熱、塵和紫外線(uv)幅射據信能賦予人們健康的身體。除了也能使人顯得健康的上述生活方式變化之外，人們還使用美容品來改善外貌。促成身體健康和外表顯得健康的兩個最重要特質在於控制體重(不過重或不過輕)以及裸露皮膚的外貌。儘管營養在控制體重方面起重要的作用，外貌則一定程度上藉助於局部施用的美容產品得以控制。在熱帶國家，人們通常具有暗色皮膚，他們希望皮膚表觀更為美白。在非熱帶區域生活的人們通常具有較亮白的皮膚。但是他們的皮膚暴露於陽光常導致斑點狀皮膚，稱作雀斑，並且有些情況下他們局部皮膚區域會出現過度色素沉著。多種美容手段可令膚色更美白或色調均勻。一種常見的手段是將防曬遮光劑或防曬隔離劑引入美容組合物中。防曬遮光劑通常為有機化合物，它們的作用是經由吸收指定波長範圍的太陽紫外輻射從而使該紫外輻射無法到達皮膚表面。紫外輻射據信是皮膚著色或曬黑的原因，倘若曬黑不均勻，消費者不喜歡這種曬黑。防曬隔離劑通常為無機化合物，它們的作用是作為物理屏障以防各種太陽幅射(既包括紫外線又包括可見光)。另一種常見的手段是將皮膚美白劑引入美容組合物中。皮膚美白劑通常為分子或組合物，它們改變皮膚中經由皮膚中生化轉化實現的黑素形成，由此改變皮膚的顏色和表觀。在人類皮膚中，黑素色素的形成起源於l-酪氨酸這一胺基酸的聚合，途經一組酶催化的和自發的化學反應。這特別涉及在黑素細胞的黑素小體隔間內存在的酪氨酸酶的作用。黑素小體內容物從該黑素細胞傳遞至多個周邊角質細胞。整個過程受多種激素的影響，在這些激素中促黑激素(msh)已得以充分的研究。jp2001002527(lion)公開了皮膚外用製劑，其包括基於組合物總重為0.000001-30wt％的針對黑素細胞的細胞粘著重排劑，例如包括精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸(rgd)序列在內的肽、包括酪氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-絲氨酸-精氨酸這一胺基酸序列在內的肽、3-脫氮腺苷、甲醯胺衍生物、肌醇多胺、水楊酸和三萜酸的衍生物、乳糖等。美國專利5,126,327公開了促黑激素抑制劑，其在分子中具有下式胺基酸序列：-his-ser-arg-trp-，-trp-arg-ser-his-，-leu-ala-cys-ala-arg-，其中his、ser、arg、trp、leu、ala和cys分別代表l-或d-組氨酸、絲氨酸、精氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸和半胱氨酸殘基。其公開了促黑激素抑制劑和含有該抑制劑的皮膚外用製劑，該抑制劑預防或治療由黑素細胞功能增強所致過多黑素產生所引起的黃褐斑和雀斑症狀。雖然對使用肽的皮膚美白產品進行了許多嘗試，它們的皮膚美白效果尚不令人滿意。發明簡述為開發具有皮膚美白效果的新型肽，本發明人進行了堅持不懈的研究並篩選了肽文庫。最終，本發明人已發現具有優良的皮膚美白功效的新型肽，最終實現本發明的目的。本發明的一個目的為提供具有皮膚美白效果的肽。本發明的另一個目的為提供一種用於皮膚美白的組合物。本發明的又一個目的為提供一種用於皮膚美白的方法。為實現本發明的目的，本發明的第一方面，提供了肽，其選自如下肽：(i)肽，其包含或由如下的胺基酸殘基組成：val-lys-ser-arg-glu-arg-asp-gln(vksrerdq)(seqidno:1)；或(ii)肽，其包含或由如下的胺基酸殘基組成：his-gly-his-pro-asp-gln-ala-pro-phe(hghpdqapf)(seqidno:2)。根據本發明的優選的方面，提供了肽的組合，其包含seqidno:1和seqidno:2的肽組合。根據本發明的第二方面，提供了皮膚美白組合物，其包含本發明的seqidno:1的肽以及美容上可接受的載體。根據本發明的優選的方面，提供了皮膚美白組合物，其包含本發明的seqidno:1和seqidno：2的肽組合以及美容上可接受的載體。根據本發明的第三方面，提供了本發明的seqidno:1的肽用於皮膚美白的用途。根據本發明的優選方面，提供了本發明的seqidno:1和seqidno：2的肽組合用於皮膚美白的用途。本發明的還提供了一種用於皮膚美白的美白霜，其包含：(a)本發明的單獨的肽或肽組合；(b)抗氧化劑；(c)保溼劑；(d)植物油；(e)卵磷脂；(f)防腐劑；(g)精油；和(h)純化水。在閱讀了下面的本發明的詳細描述，包括示例性的實施方案和實施方案後，本發明這些和其他方面對於本領域技術人員將變得顯而易見。詳細描述在本發明中要求保護兩個肽，亦即具有seqidno:1的肽(i)或具有seqidno:2的肽(ii)。這兩個新肽與α-msh(α-促黑激素)結合以致抑制α-msh結合到mc1r上。當這些肽用於皮膚美白組合物時，該抑制提供皮膚美白方面的益處。這兩個肽經使用噬菌體展示(pd)技術鑑別出來，噬菌體展示(pd)技術是生物
技術領域：
中用以鑑別特異地結合靶分子的肽的方法。從極多的可能肽中，首先鑑別出四個個獨特的肽作為潛在的α-msh結合物。從這四個肽中，發現有兩個肽就α-msh結合物而言有極強的結合性，選擇這兩個肽用於功能益處研究。然後在黑素含量試驗中測試這些肽減少黑素含量的功效亦即潛能。不僅證實了這兩個肽各自能減少黑素含量，而且還注意到它們在一起使用時協同相互作用。當在本文中使用時，除非另有特殊定義所有術語都意欲具有它們在本領域的一般含義。術語「胺基酸」意欲包括天然存在的胺基酸以及非天然存在的胺基酸，廣義地包括所有具有一個羧基和至少一個能形成肽鍵的伯或仲胺基的小分子。術語「肽」意欲包括所有具有至少一個肽鍵的分子，因此包括二肽、三肽、寡肽和最多具有約20個胺基酸殘基的多肽。術語「肽」也包括具有一個或多個連接基、間隔基或末端基的、不是胺基酸的結構。本發明的肽是在美容上可接受的載體中提供的。載體可以是疏水的或親水的。適當的疏水載體包括例如，化妝品中常用蠟樣非離子物質，例如脂肪醇和脂肪酸的酯和醚，碳鏈長度為c4到c22，優選c8到c18，最優選c12到c18。脂肪性疏水載體的例子包括肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸辛酯、羊毛酸異丙酯、乙醯化羊毛脂醇、c12-c15醇的苯甲酸酯、辛酸鯨蠟酯、棕櫚酸鯨蠟酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、乳酸肉豆蔻酯、醋酸鯨蠟酯、二辛酸/癸酸丙二醇酯、油酸癸酯、乙醯化羊毛脂、庚酸硬脂酸酯、蘋果酸二異硬脂酸酯、羥基硬脂酸辛酯、羥基硬脂酸辛酯、異硬脂酸異丙酯等等。適當的親水載體溶液可以是，例如二醇和化妝品中常用的烷氧基化的二醇，包括乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、丙二醇、二丙二醇等等。皮膚美白組合物可以配製成營養液、精華液、美白霜、乳膏、化妝水、漿液、噴霧劑、棒劑和本領域技術人員已知的其他形式。乳膏和化妝水是當前優選的產品形式。在美容上可接受的載體中，肽的濃度範圍可以是1μm到200μm，優選10ppb到150μm，更優選20μm到100μm，最優選36μm到50μm。皮膚美白組合物典型地包含上述的載體溶液，其水平為約0.01％到約90％重量，優選約0.1％到約50％重量，更優選約0.1％到約20％重量，最優選約1％到約10％重量。作為抗氧化劑，可列舉例如丁基羥基苯甲醚、二丁基羥基甲苯、亞硫酸氫鈉、異抗壞血酸及其鹽、穀胱甘肽、穀胱甘肽過氧化酶、穀胱甘肽-s-轉移酶、過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、硫氧還蛋白、牛磺酸、硫代牛磺酸、亞牛磺酸、維生素e等。其中，優選穀胱甘肽、維生素e和過氧化氫酶。這些抗氧化劑可以使用1種或將2種以上組合使用，優選為穀胱甘肽和維生素e的組合。在本發明的皮膚外用組合物(例如美白霜)中添加抗氧化劑時，其添加比例沒有特別限定，但相對於皮膚外用組合物的總量，通常為0.001～6重量％，優選為0.01～3重量％，進一步優選為0.2～2重量％。作為保溼劑，可列舉例如丙氨酸、絲氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、甘氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、天冬氨酸、精氨酸、茶氨酸等胺基酸及其衍生物；乙二醇、1,3-丙二醇、1，3-丁二醇、二甘醇、三甘醇、四甘醇、二丙二醇、二甘油、聚乙二醇等多元醇；乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚、乙二醇單丙基醚、二乙二醇單甲基醚、二乙二醇單乙基醚、二乙二醇單丙基醚、二乙二醇單丁基醚、丙二醇單乙基醚、丙二醇單丙基醚、二丙二醇單乙基醚、二丙二醇單丙基醚等二醇醚；甘露醇、山梨糖醇、赤蘚醇、木糖醇、海藻糖等糖醇；卵磷脂、氫化卵磷脂等磷脂；透明質酸鈉、乙醯基透明質酸鈉、肝素類似物、軟骨素硫酸鈉等粘多糖；骨膠原、彈性蛋白、角蛋白、甲殼質、脫乙醯殼多糖、明膠、聚穀氨酸等高分子化合物；乳酸鈉、吡咯烷酮羧酸鈉等成分；洋甘菊提取物、蘆薈提取物、庫拉索蘆薈提取物、金縷梅提取物、迷迭香提取物、百裡香提取物、茶提取物、紫蘇提取物等植物提取物等。其中，優選甘氨酸、1，3-丙二醇、二丙二醇、二甘油、二乙二醇單乙基醚、透明質酸鈉、乙醯基透明質酸鈉、吡咯烷酮羧酸鈉、聚穀氨酸。這些保溼劑可以使用1種或將2種以上組合使用，優選為1,3-丙二醇和透明質酸鈉。在本發明的皮膚外用組合物(例如美白霜)中添加保溼劑時，其添加比例沒有特別限定，但相對於皮膚外用組合物(例如美白霜)的總量，通常為0.001～40重量％，優選為0.1～30重量％，進一步優選為5～20重量％。作為植物油，其選自玫瑰果油、甜杏仁油、玫瑰果油、荷荷巴油、小麥胚芽油、橄欖油、胡蘿蔔油、酪梨油、蓖麻油、鱷梨油、椰子油、棕櫚油、可可油、可可脂、棕櫚仁油、大豆油、米糠油、蘆薈油、婆羅月旨、霧冰藜脂、牛油樹脂、花生油、玉米油、澳洲堅果油、石慄子油、沙刺油、亞麻油、西番蓮花油、金盞花、芒果核油、薔薇果油，優選為甜杏仁油、霍霍巴油、蘆薈油的一種或者兩種以上的組合。優選地，本發明的組合物中的植物油是玫瑰果油。在本發明的皮膚外用組合物(例如美白霜)中添加植物油時，其添加比例沒有特別限定，但相對於皮膚外用組合物(例如美白霜)的總量，通常為0.001～10重量％，優選為0.5～8重量％，進一步優選為1.0～8.0重量％。作為防腐劑，其選自苯甲醇、苯乙醇、苯氧乙醇和月桂醯精氨酸乙酯，優選為月桂醯精氨酸乙酯。在本發明的皮膚外用組合物(例如美白霜)中添加防腐劑時，其添加比例沒有特別限定，但相對於皮膚外用組合物(例如美白霜)的總量，通常為0.001～5重量％，優選為0.1～5重量％，進一步優選為0.2～3重量％。作為卵磷脂，其優選為大豆卵磷脂。在本發明的皮膚外用組合物(例如美白霜)中添加卵磷脂時，其添加比例沒有特別限定，但相對於皮膚外用組合物(例如美白霜)的總量，通常為0.01～5重量％，優選為0.1～5重量％，進一步優選為0.2～2重量％。優選地，本發明的美白霜包含重量％計的穀胱甘肽2.0-4.0、維生素e0.5-2.5、玫瑰果油0.5-2.5、光果甘草提取液2.0-4.0、桑葉提取物4.0-6.0、1，3-丙二醇2.0-4.0、透明質酸鈉4.0-6.0、玫瑰精油1.5-3.5、大豆卵磷脂2.0-4.0、白藜蘆醇5.0-12.0、卡波姆0.4-0.8、葡聚糖2.0-4.0、和銀耳提取物2.0-4.0。更優選地，本發明的美白霜包含0.0005-0.001重量％的seqidno：1肽和/或seqidno：2肽。還優選地，本發明的美白霜還包含適當量的月桂醯精氨酸乙酯以及餘量的水。如本文所使用的，「包含」與「包括」、「含有」或「特徵在於」同義，並且是包括在內的或開放性的，並且不排除另外的未陳述的元件或方法步驟。術語「包含」在本文中的任何表述，特別是在描述本發明的方法、用途或產品時，應理解為包括基本上由所述組分或元件或步驟組成和由所述組分或元件或步驟組成的那些產品、方法和用途。本文示例性描述的本發明適當地可以在不存在本文未具體公開的任何一種或多種元件、一種或多種限制的情況下進行實踐。本發明的皮膚美白產品中所包含的涉及該皮膚美白產品的說明書可以含有如下內容：作用與功效(例如皮膚美白)、施用方法(例如均勻塗抹至皮膚，例如臉部和頸部)以及可能產生的副作用等等。本文已採用的術語和表述用作描述性而不是限制性術語，並且在此種術語和表述的使用中不預期排除所示和所述特徵或其部分的任何等價物，但應認識到各種修飾在請求保護的本發明的範圍內是可能的。因此，應當理解儘管本發明已通過優選實施方案和任選特徵具體公開，但本領域技術人員可以採用本文公開的概念的修飾和變化，並且此類修飾和變化被視為在如由附加權利要求定義的本發明的範圍內。為更清楚地說明本發明，現結合如下實施例進行詳細說明，但這些實施例僅僅是對本發明的示例性描述，並不能解釋為對本申請的限制。實施例下面的實施例是用於以非限制性的方式說明本發明。實施例1：本發明肽的皮膚美白效果的分析用各種濃度的seqidno：1或seqidno：2的肽處理細胞，然後測量在黑素生成抑制中的活性。在37℃下5％co2氣氛中在補充有10％fbs的dmem中培養小鼠黑素細胞。將細胞接種在24孔板(1x105細胞/孔)的各孔中並且證實其附著。用各個測試組培育細胞3天：(a)僅用溶劑，作為陰性對照；(b)用20μg/mlα-msh，作為陽性對照；(c)用20μg/mlα-msh加1、10、100和150μg/ml肽。離心之後，去除培養基並且肉眼觀察黑素生成的水平。結果表明，肽以濃度依賴方式對黑素生成具有抑制效果。相比於α-msh處理組，在本發明的肽處理組中的培養基的顏色變得透明，並且觀察到細胞數極小變化或無變化，表明發生對黑素生成的抑制效果。為了分析黑素的釋放量，在490nm下測量培養基的吸光度值。結果表明，相比於陰性對照組和陽性對照組，本發明的肽處理組中黑素的釋放量均明顯減少。這些結果表明，不管黑素生成誘發因子是否作用於皮膚上，本發明的肽均可以通過抑制黑素生成而亮白膚色。實施例2：協同作用包含1x105小鼠表皮角質細胞和5x104深著色的小鼠表皮黑素細胞的2:1比例混合物在24孔細胞培養板中每孔接種，以建立共培養系統。溫育過夜後，細胞用包含本發明肽的新鮮培養基處理，處理後溫育72小時。然後移除培養基，替換為80μl二甲基亞碸(dmso)。培養板進一步在65℃用dmso溫育1小時，之後研磨孔內容物，將同一樣品用於黑素含量試驗(在450nm在板讀數器中讀數)和蛋白質評估(bicinchoninicacid法)。黑素含量降低百分率是相對於未經處理的對照而言的。結果示於下表1。表1從表1的數據可以看出，本發明的兩種肽間協同相互作用由此賦予加強的皮膚美白效果。實施例3：美白霜的配製成分含量(重量％)本發明的肽(seqidno：1)0.001穀胱甘肽3.0維生素e1.5玫瑰果油1.5光果甘草提取液3.0桑葉提取物5.01，3-丙二醇3.0透明質酸鈉5.0玫瑰精油2.5大豆卵磷脂3.0白藜蘆醇10.0卡波姆0.6葡聚糖3.0銀耳提取物3.0月桂醯精氨酸乙酯適當量純化水殘餘量總計100將卡波姆溶於純化水中並加入1，3-丙二醇，攪拌均勻後加入其他組分後攪拌並調製成美容霜。實施例4：美白霜的配製將卡波姆溶於純化水中並加入1，3-丙二醇，攪拌均勻後加入其他組分後攪拌並調製成美容霜。實施例5：美白霜的配製成分含量(重量％)本發明的肽(seqidno：1)0.0005本發明的肽(seqidno：2)0.0005穀胱甘肽4.0維生素e2.5玫瑰果油2.5光果甘草提取液4.0桑葉提取物6.01，3-丙二醇4.0透明質酸鈉6.0玫瑰精油3.5大豆卵磷脂4.0白藜蘆醇12.0卡波姆0.8葡聚糖4.0銀耳提取物4.0月桂醯精氨酸乙酯適當量純化水殘餘量總計100將卡波姆溶於純化水中並加入1，3-丙二醇，攪拌均勻後加入其他組分後攪拌並調製成美容霜。實施例6按照實施例3、4和5所示的配方，調製乳膏狀的皮膚外用組合物(美白霜)，並市購美白美白霜作為對比實施例。對於各皮膚外用組合物，分別讓10名30-35歲的女性在臉部按照下述標準評價塗布製劑時的使用感。5分：皮膚表面光滑、緊緻，美白效果突出；4分：皮膚表面光滑，美白效果可見；3分：沒有可見的變化；2分：皮膚表面略有粗澀的感覺，沒有美白效果；1分：皮膚表面有粗澀的感覺，沒有美白效果。算出上述評價結果的平均分，結果表明，實施例3、4和5的平均分均在4.2分以上，對照樣品的平均分為3.6分。實施例5的效果最突出，平均分為4.6。已經通過上述優選實施方案的描述對本發明進行了說明，但是應當理解的是，技術人員可以對這些實施方案做出改變和變更，而不脫離如下列權利要求所表達的本發明的精神或範圍。序列表溫州千瑞生物科技有限公司活性肽以及包含其的美白霜sgyx17012patentinversion3.318prt人工序列美白肽1vallysserarggluargaspgln1529prt人工序列美白肽2hisglyhisproaspglnalaprophe15當前第1頁12