改進的苦參薄層色譜鑑別方法

2023-04-24 11:34:51

專利名稱：改進的苦參薄層色譜鑑別方法
技術領域：
本發明屬於藥物分析技術領域，涉及一種藥物的真偽鑑別方法。
背景技術：
苦參為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的乾燥根；味苦、性寒；歸心、肝、胃、大腸、膀胱經；具有清熱燥溼，殺蟲，利尿的功效；用於熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢，溼疹，溼瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風，外治滴蟲性陰道炎。近年來，隨著苦參市場用量的逐漸加大，其價格持續攀升，出現了很多以次充好、以假亂真的現象，不僅降低了藥品質量，也給中藥材市場造成極大的負面影響。2010年版中國藥典規定，苦參的鑑別採用薄層色譜法，具體方法如下:(I)取本品粉末0.5g，加濃氨試液0.3ml、三氯甲烷25ml，放置過夜，濾過，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷
0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參鹼對照品和槐定鹼對照品，加乙醇製成每Iml各含0.2mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4 μ 1，分別點於同一用2%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8:3:0.5)為展開劑，展開，展距8cm，取出，晾乾，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2:1)10°C以下放置的上層溶液為展開劑，展開，展距同上，取出，晾乾，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的兩個橙色斑點。(2)另取氧化苦參鹼對照品，加乙醇製成每Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液和該對照品溶液各4 μ 1，分別點於同一用2%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(5:0.6:0.3) 10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑點。上述薄層色譜鑑別方法通過鑑別苦參的 指標成分苦參鹼、氧化苦參鹼和槐定鹼來判斷苦參的真偽，存在以下問題:(I)供試品溶液的製備採用浸泡法，耗時較長(約需12小時)，指標成分溶出率較低；(2)薄層色譜鑑別需用到兩塊薄層板，三種展開劑，兩種顯色劑，進行三次展開操作和四次顯色操作，且兩種展開劑的配製需要在10°C以下放置，顯色劑碘化鉍鉀試液在常溫下保存易產生沉澱，需現配現用，整個過程繁瑣、耗時；(3)該方法的顯色原理實際是先用碘化鉍鉀試液進行顯色，再用亞硝酸鈉乙醇試液進行脫色，在顯色和脫色時劑量較難控制，容易造成顯色過深或者脫色過度，影響對結果的判斷。

發明內容
有鑑於此，本發明的目的在於提供一種改進的苦參薄層色譜鑑別方法，供試品溶液的製備簡單、省時；苦參鹼、氧化苦參鹼和槐定鹼三種組分能夠在同一薄層板上展開；單一顯色劑顯色，顯色斑點清晰，保留時間長，結果易於判斷，且顯色劑能夠長期保存使用。為達到上述目的，經研究，本發明提供如下技術方案:改進的苦參薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟:
a.對照品溶液的製備:取苦參鹼對照品、氧化苦參鹼對照品和槐定鹼對照品，分別加乙醇製成每Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；b.供試品溶液的製備:取苦參供試品粉末lg，加濃氨試液0.3ml，三氯甲烷25ml，250W超聲20分鐘，過濾，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液；C.展開及顯色:吸取步驟a製得的三種對照品溶液和步驟b製得的供試品溶液各4μ1，分別點於同一用2%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以展開劑A展開，展距8cm，取出，晾乾，再以展開劑B展開，展距8cm，取出，晾乾，噴顯色劑顯色；所述展開劑A由甲苯、丙酮、乙醇和氨水按照體積比為6:8:2:0.28混合而成；所述展開劑B由甲醇和氯仿按照體積比為1.6:10混合而成；所述顯色劑由碘化鉍鉀試液和0.6mol/L鹽酸按照體積比為1:1混合而成；d.結果判斷:供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑點，判斷苦參供試品為真品，反之為偽品。本發明的有益效果在於:本發明建立了一種改進的苦參薄層色譜鑑別方法，與2010年版中國藥典一部苦參項下規定的薄層色譜鑑別方法相比，(I)供試品溶液的製備由浸泡法改為超聲法，操作更簡便，耗費時間大大縮短；(2)薄層板由兩塊減少到一塊，苦參鹼、氧化苦參鹼和槐定鹼三種組分能夠在同一薄層板上展開，操作更簡便，展開時間大大縮短，成本降低；(3)展開劑由三種減少為兩種，且製備時不需要進行10°C以下放置等特殊處理，操作更簡便、省時，成本降低；同時，苦參鹼、氧化苦參鹼和槐定鹼三種組分的分離度增大，結果更易於觀察；(4)單一顯色劑顯色，斑點顏色均勻清晰，與背景色對比鮮明，斑點較圓，無明顯拖尾現象，在顯色後30分鐘無明顯褪色現象，結果易於判斷；(5)顯色劑能夠長期保存使用，不需現用現配。經系統適用性考察證實，本發明方法具有良好的重複性、靈敏度和顯色穩定性，適用於苦參的薄層色譜鑑別。


為了使本發明的目的、技術方案和有益效果更加清楚，本發明提供如下附圖進行說明:圖1為採用2010年版中國藥典規定方法鑑別苦參的薄層色譜圖，其中1、4為氧化苦參鹼對照品，2、3、5、8為苦參供試品，6為苦參鹼對照品，7為槐定鹼對照品。圖2為採用本發明改進方法鑑別苦參的薄層色譜圖，其中I為槐定鹼對照品，2為氧化苦參鹼對照品，3為苦參鹼對照品,4為苦參供試品。圖3為採用本發明改進方法鑑別苦參的檢測限試驗結果，其中I為槐定鹼對照品，2為氧化苦參鹼對照品，3為苦參鹼對照品，4 11分別為稀釋倍數為7、6、5、4、3、2、1、0倍的苦參供試品溶液。
具體實施例方式下面將結合附圖，對本發明的優選實施例進行詳細的描述。優選實施例中使用的王要材料:古參喊對照品(中國藥品生物製品檢定所，110805-200508);氧化苦參鹼對照品(中國藥品生物製品檢定所，110780-200506);槐定鹼對照品(上海源葉生物科技有限公司)；苦參藥材購自中藥材公司，按2010年版中國藥典一部第188頁苦參鑑別項下規定方法鑑別為真品；矽膠G (青島海浪矽膠乾燥劑廠)；其餘試劑均為分析純；碘化鉍鉀試液按照2010年版中國藥典一部附錄XVB項下規定方法配製:取鹼式硝酸鉍0.85g，加冰醋酸IOml與水40ml溶解後，加碘化鉀溶液(4 — 10)20ml，搖勻，即得。對比實施例1、應用2010年版中國藥典規定的苦參薄層色譜鑑別方法鑑別苦參按照2010年版中國藥典一部第188頁苦參鑑別項下第(3)、(4)小項規定方法進行。試驗結果如圖1所示，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑點，且斑點顏色均勻清晰，與背景色對比鮮明，無明顯拖尾現象。其中，苦參鹼組分、氧化苦參鹼組分、槐定鹼組分的比移值分別為:0.361±0.052,0.394±0.028,0.127±0.015(n=3)，分離度分別為:1.264±0.046,1.315±0.024,1.893±0.031 (n=3)。實施例1、應用本發明改進的苦參薄層色譜鑑別方法鑑別苦參本發明改進的苦參薄層色譜鑑別方法，包括以下步驟:a.對照品溶液的製備:取苦參鹼對照品、氧化苦參鹼對照品和槐定鹼對照品，分別加乙醇製成每Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；b.供試品溶液的製備:取苦參供試品粉末lg，加濃氨試液0.3ml，三氯甲烷25ml，250W超聲20分鐘，過濾，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液；c.展開及顯色:吸取步驟a製得的三種對照品溶液和步驟b製得的供試品溶液各4μ1，分別點於同一用2%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以展開劑A展開，展距8cm，取出，晾乾，再以展開劑B展開，展距8cm，取出，晾乾，噴顯色劑顯色；所述展開劑A由甲苯、丙酮、乙醇和氨水按照體積比為6:8:2:0.28混合而成；所述展開劑B由甲醇和氯仿按照體積比為1.6:10混合而成 ；所述顯色劑由碘化鉍鉀試液和0.6mol/L鹽酸按照體積比為1:1混合而成；d.結果判斷:供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑點，判斷苦參供試品為真品，反之為偽品。試驗結果如圖2所示，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同的橙色斑點，且斑點顏色均勻清晰，與背景色對比鮮明，斑點較圓，無明顯拖尾現象，在顯色後30分鐘無明顯褪色現象。其中，苦參鹼組分、氧化苦參鹼組分、槐定鹼組分的比移值(Rf)分別為 0.721±0.014,0.304±0.018,0.580±0.025 (n=3)，分離度(R)分別為 1.719±0.106、
4.348±0.175,3.125±0.162 (n=3)，均符合薄層色譜法對 0.2 < Rf I 的要求。而且，與對比實施例1的試驗結果相比，三種目標組分的分離度更大，結果更易於觀察。實施例2、本發明改進的苦參薄層色譜鑑別方法的系統適用性考察1、重複性取三份不同批次的苦參供試品，按實施例1所述改進的苦參薄層色譜鑑別方法進行試驗，每份苦參供試品做三次重複試驗，對9個試驗結果進行評價，考察方法的重複性。試驗結果顯示，9個供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同的橙色斑點，且斑點顏色均勻清晰，與背景色對比鮮明，無明顯拖尾現象。供試品色譜中，苦參鹼組分、氧化苦參鹼組分、槐定鹼組分的比移值和分離度詳見表I。從上述試驗結果可以看出，本發明改進的苦參薄層色譜鑑別方法具有良好的重複性。表I重複性考察試驗結果(n=9 )
權利要求
1.改進的苦參薄層色譜鑑別方法，其特徵在於:包括以下步驟: a.對照品溶液的製備:取苦參鹼對照品、氧化苦參鹼對照品和槐定鹼對照品，分別加乙醇製成每Iml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液； b.供試品溶液的製備:取苦參供試品粉末lg，加濃氨試液0.3ml，三氯甲烷25ml，250W超聲20分鐘，過濾，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液； c.展開及顯色:吸取步驟a製得的三種對照品溶液和步驟b製得的供試品溶液各4 μ 1，分別點於同一用2%氫氧化鈉溶液製備的矽膠G薄層板上，以展開劑A展開，展距8cm，取出，晾乾，再以展開劑B展開，展距8cm，取出，晾乾，噴顯色劑顯色；所述展開劑A由甲苯、丙酮、乙醇和氨水按照體積比為6:8:2:0.28混合而成；所述展開劑B由甲醇和氯仿按照體積比為1.6:10混合而成；所述顯色劑由碘化鉍鉀試液和0.6mol/L鹽酸按照體積比為1:1混合而成； d.結果判斷:供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑點，判斷苦參供試品 為真品，反之為偽品。
全文摘要
本發明公開了一種改進的苦參薄層色譜鑑別方法，與2010年版中國藥典一部苦參項下規定的薄層色譜鑑別方法相比，(1)供試品溶液製備由浸泡法改為超聲法；(2)薄層板由兩塊減少到一塊，苦參鹼、氧化苦參鹼和槐定鹼三種組分在同一薄層板上展開；(3)展開劑由三種減少為兩種甲苯-丙酮-乙醇-氨水(6:8:2:0.28)、甲醇-氯仿(1.6:10)；(4)單一顯色劑顯色碘化鉍鉀試液-0.6mol/L鹽酸(1:1)；本發明方法操作簡便、省時，成本低，分離效果和顯色效果好，結果易於判斷，顯色劑能長期保存使用，經系統適用性考察證實，該方法具有良好的重複性、靈敏度和顯色穩定性，適用於苦參的薄層色譜鑑別。
文檔編號G01N30/90GK103245754SQ201310181078
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月15日 優先權日2013年5月15日
發明者劉娟, 羅藝晨, 凌榕鑌, 宋旭琴, 辛良 申請人:西南大學