抗cxcr3抗體的製作方法
2023-04-25 05:33:56
抗cxcr3抗體的製作方法
【專利摘要】本發明提供抗CXCR3抗體，以及使用這些抗體診斷和/或治療CXCR3相關的疾病，例如I型糖尿病(T1D)、尤其新發生T1D的方法。在某些實施例中，本文公開了CXCR3中和抗體。
【專利說明】抗CXCR3抗體
[0001] 本申請基於35U.S.C. § 119要求於2012年1月20日提交的美國臨時申請序列號 61/588,936的權益，該申請通過引用全部併入本文。
[0002] 本發明是關於抗體及使用抗體治療與CXCR3信號傳導相關疾病（例如I型糖尿病 (I型糖尿病；T1D))的方法。
[0003] 糖尿病的特徵在於因缺乏胰島素作用而導致的慢性高血糖症以及伴發的各種特 徵性的代謝異常。糖尿病從廣義上可以分為I型和II型。T1D的特徵在於朗格罕氏島 (Langerhans'islets)胰腺0細胞的缺失，而II型糖尿病的特徵是胰島素分泌和胰島素 敏感性二者降低（胰島素抵抗）。在美國，糖尿病的發病率為人群的約2%至4%，其中I型 糖尿病（亦稱之為胰島素依賴性或IDDM)佔所有病例的約7%至10%。
[0004] I型糖尿病的特點在於無法產生足量的胰島素以維持葡萄糖穩態。人們認為該 病症是由自身免疫介導的對胰腺0細胞破壞而引起的。與I型糖尿病相關的自身免疫 性涉及B和T自身反應性淋巴細胞二者的參與。實際上，高達98%的I型糖尿病患者具 有抗一種或多種自身0細胞抗原及異原性胰島細胞胞質抗原（ICAs)，其中自身0細胞 抗原包括胰島素、穀氨酸脫羧酶（GAD)、胰島素瘤抗原-2以及胰島素瘤抗原-2b(IA-2及 IA-2P)。儘管可能並非總是起決定性作用，但是一種或多種自身抗體的含量通常與@細 胞破壞相關。Irvine等人，Diabetes, 26:138-47 (1997);Riley等人，N.EngLJ,Med, 323:1 187-72(1990)。因此，自身抗體可以用作自身免疫性糖尿病發展的標誌物，也可以與代謝變 化一起用於預測T1D患者的親屬中出現糖尿病的風險。
[0005] I型糖尿病的發生可以由自身反應性T細胞介導，正如通過藉助於T1D 診斷時獲得的組織活檢證實經活化的T細胞浸潤胰島。Bottazzo等人，N,EngL J.Med, ,313:353-80 (1985);Hanninen等人，J，Clin.Invest, 90:1901-10 (1992);Itoh等 人，J.Clin,invest, 92:2313-22 (1993);Imagawa等人，Diabetes, 50:1289-73 (2001)。
[0006]趨化因子（c-x-c基序）受體3 (CXCR3)，亦稱之為G蛋白偶聯受體9 (GPR9)、 ⑶183、IP-10受體和Mig受體，是在自身反應性T細胞上表達的趨化因子受體，其 與一系列生理過程和相關疾病（例如T1D)相關。CXCR3幾乎不存在於初始T細胞 中，但在經抗原活化後上調且因一級配體（CXCL9、CXCL10及CXCL11)將活化細胞募 集至組織發炎位點。已顯示，在T1D的小鼠模型（(Christen等人，TheJournalof Immunology, 2003,171:8838-6845;orimoto等人，JImmunol2004 ；173 ；7017-7024 ； Sarkar等人.Diabetes. 2012Feb;81 (2) : 436-46)中及在患有胰島炎的T1D患者的胰島 (Uno等人 2010;Roep等人ClinicalandExperimentalImmunology, 2003, 159:338-343 ; Sarkar等人.Diabetes. 2012Feb;61 (2) :438-46)中，P細胞主要表達CXCL10,並且CXCL9 含量較低。另外，已顯示，在T1D小鼠模型中和在I型糖尿病胰腺樣本中，已浸潤胰腺的T 細胞表達CXCR3(Christen等人，TheJournalofImmunology, 2003, 171:8838-6845;Van Haiteren等人，Diabetologia48:75-82(2005);Unoetal2010;Roep等人，Clinical andExperimentalimmunology, 2003, 159:338-343;Sarkar等人，Diabetes. 2012Feb; 81 (2) :436-46)。此外，CXCR3缺陷的基因敲除小鼠出現發作顯著性延遲及T1D發病率降低 (Frigerio等人，NatureMedicine8:1414-1420 (2002))，而CXCL10 在轉基因小鼠胰島中 過表達促進T細胞浸潤並加速T1D發作（Rhode等人，J.Immunol. 175 (6) : 3516-24 (2005))。 通過抗體治療中和CXCL10是具有保護性（Christen等人，TheJournalofImmunolo gy，2003, 171:6838-6845)。
[0007] 在人類中已鑑定CXCR3有三種亞型，表示為A、B及Alt(Lasagni等人，1￡叉口. Med. 2003197:1537;EhlertetalJ.Immunol. 2004 ; 173 ;6234-6240) 〇CXCR3-A結合至CXC 趨化因子CXCL9(MIG)、CXCLIO(IP-IO)及CXCL11 (I-TAC) ;CXCR3-B亦結合至這些靶標，也 結合CXCL4 ;CXCR3-Alt似乎與CXCL11互相作用。儘管選擇性剪接產生CXCR3的若干蛋白 亞型，但是CXCR3-A是活體內主要形式，這是因為CXCR3-B和CXCR3-AU在蛋白水平上的表 達量遠遠更低。Lasagni等人，J.Exp.Med. 2003197:1537;EhlertetaiJ,Immunol. 2004; 173 ；8234-624Q〇
[0008] 尚未證實使用CXCR3小分子抑制劑破壞CXCR3途徑的努力是完全有效的。 Christen等人，ClinExp.Immunol. 185:318-328(2011)。研究主要集中於在糖尿病發作前 破壞CXCL10 的抗體和其他方法。Morimoto等人，J.Immun. 173:7017-7024(2004) ;0ikawa etai.，Rev.DiabetStud. 7:209-224(2010)。
[0009] 鑑於與CXCR3相關的T1D及其他疾病的盛行，因此需要一些靶向性CXCR3信號傳 導的其他方法，例如，從而治療或減少諸如T1D等病症或降低其進展。
[0010] 本發明公開了能夠結合至CXCR3的抗體及其使用方法。在一些實施例中，該抗體 可通過靶向CXCR3途徑來預防、治療個體的T1D或降低其早期進展。該抗體及方法至少部 分依賴於以下令人驚訝的結果：針對CXCR3的中和抗體在疾病發作前給予可預防N0D小鼠 的T1D發作，或在N0D小鼠的T1D新發生階段給予可逆轉疾病進行。此外，中和CXCR3活性 並不與患者免疫系統的正常運行顯著受損相關，因此降低了抗體療法的不合意副作用。
[0011] 因此，一方面，本文公開了能夠中和CXCR3活性的抗體及抗原結合片段。在某些實 施例中，CXCR3中和抗體的特點在於能夠結合至選自SEQIDN0:1的1-58、1-16或1-37位 殘基的肽。在一些實施例中，抗體包含全部或部分命名為Cl12、C1 135、C1 82、C1 53及/ 或Cl4的抗體克隆（Cl)。在某些實施例中，提供抗體Cl12、C1 135、C1 82、C1 53及/或 Cl4的變體，包括所公開的抗體⑶R-移植、人源化、回復突變（backmutated)及完全人類 變體。在特定實施例中，抗體包含本文所公開的克隆Cl12、C1 135、C1 82、C1 53和/或C1 4或克隆4、12、53、82和135的任一變體的一個或多個互補決定區（⑶R)，例如，一個或多個 重鏈⑶R1、⑶R2及⑶R3及/或一個或多個輕鏈⑶R1、⑶R2、⑶R3。在一些實施例中，源自 克隆Cl12、C1 135、C1 82、C1 53和/或C1 4或其嵌合和人源化的抗體相對於抗hCXCR3 克隆5H7、7H5、V44D7、1C6及49801顯示出某些有益的特性。例如，本申請所公開的抗體與 抗hCXCR3克隆5H7、7H5、V44D7、1C6及49801相比可表現出增加的結合親和力。例如，該抗 體可相對於抗CXCR抗體（例如1C6)體現出1倍、2倍、3倍、4倍、5倍或更大的親和力（或 其間的任意值），例如，通過表面等離子共振（surfaceplasmonresonce)測定（例如，使 用BIAC0RE?分析）。在此也預測本申請中所公開的人源化抗體與小鼠抗hCXCR3克隆5H7、 V44D7,1C6,及49801相比在免疫原性方面有所降低。另外，本申請所公開的克隆4. 7-4. 11 重鏈通過去除58位和59位的一個脫醯胺位點而優化（使用MGT編碼），且藉此相對於初 始小鼠抗hCXCR3重鏈可變區（VH)⑶R2序列穩定性增強。
[0012] 另一方面，本申請公開了在T1D發作前，如同治療新發生T1D或減少其進展中給予 個體有效量的CXCR3中和抗體的方法。在特定實施例中，個體是哺乳動物，例如，人類。
[0013] 在某些實施例中，新發生的T1D個體在臨床診斷6個月以內按照本申請所公開的 方法進行治療。在其他實施例中，在臨床診斷超過6個月的患者中進行治療,其中該個體保 留至少約CL2nmol/L的殘餘空腹積分血清C肽濃度（residualfastingintegratedserum C-peptidelevels)〇
[0014] 在一些實施例中，個體的特點在於在外源性胰島素不存在時升高的空腹血糖， 濃度高於120mg/dL;或在C肽刺激期間異常低的空腹積分血清C肽濃度，為約0. 033至 1.0nmol/Lxmin。在特定實施例中，CXCR3中和抗體以約0. 03-3. 7mg/kg/劑量給予。在 一些實施例中，給予個體至少一個劑量的抗體。在某些實施例中，給予個體重複劑量的抗體 (例如，至少每年一次，每季度一次，每兩月一次，每月一次，每兩周一次，每周一次或兩天一 次）。在其他實施例中，上述方法還進一步包含在給予CXCR3中和抗體的同時或依序（之前 或之後）給予免疫抑制劑和/或3細胞刺激劑的步驟。
[0015] 在多數實施例中，本文中公開的抗CXCR3抗體是用於治療CXCR3表達異常為特徵 的狀態。在一些實施例中，抗CXCR3抗體可以用於治療那些受益於CXCR3活性下調或中和 的任何情況。在一些實施例中，在本文中公開的抗CXCR3抗體是用於治療T1D。
[0016] 本發明的其他實施例及優點將在下文說明書中部分地加以陳述，並且部分是根據 本說明書是顯而易見的，或者通過對本發明的實施而知曉。通過隨附的權利要求中特別指 出的要素和組合實現並達成本發明的實施及優點。
[0017] 需要理解的是，上文的一般性說明以及下文的詳細說明書僅具有示例性和解釋 性，並非限制所主張的發明。
[0018] 併入說明書中並構成說明書中一部分的附圖闡釋了本發明的一個（若干個）實施 例，且與說明書一起用於解釋本發明原理。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019] 圖1顯示了來自6周齡雌性N0D小鼠（第一行）、10周齡雌性N0D小鼠（第二行）、 及新發生糖尿病雌性N0D小鼠（第三行）的胰腺切片中胰島素（左面板）、CXCL10(中面 板）、CD3(右面板）的表達。
[0020] 圖2是對來自患有新發生糖尿病的雌性N0D小鼠胰腺中T細胞CXCR3表達的流式 細胞儀分析。鑑別⑶4+及⑶8+T細胞並針對CXCR3表達進行染色，如通過由底部兩個圖中 的實線所顯示。同種型對照染色是在相同的兩個圖中由陰影曲線來顯示。
[0021] 圖3顯示了在糖尿病發作前，對於從10周齡開始用PBS、抗CXCR3及對照IgG治 療的動物而言，非糖尿病雌性N0D小鼠隨時間的百分比。兩次獨立研究結果顯示於圖3A和 3B中。
[0022] 圖4顯示的是對於10周齡開始即用抗CXCR3抗體預防性治療且針對胰島素（左 面板）或CD3/Foxp3 (中面板及右面板）染色的26周非糖尿病雌性N0D小鼠的胰腺切片。 右面板是中面板中所示切片放大後的圖片。
[0023] 圖5顯示的是在診斷為糖尿病後3-4天內開始用PBS、抗CXCR3及對照IgG及鼠類 抗胸腺細胞球蛋白（murinethymoglobulin，mATG)抗體治療的雌性N0D小鼠每天早上的血 糖值。各條線代表各只小鼠。箭頭指不提供治療的時間。
[0024] 圖6A是用PBS、抗CXCR3及對照IgG及mATG抗體治療的雌性N0D小鼠的CD4+ (左 圖）及CD8+(右圖）T細胞百分比的條狀圖。在治療過程中的第五次注射待測物後從小鼠 收集胰腺，同時從年齡匹配的經mATG治療的小鼠收集胰腺。圖6B是用PBS、對照抗體或抗 CXCR3治療小鼠後胰腺的⑶4+T細胞的⑶44+表達（縱軸）對⑶62L表達（橫軸）的繪圖。 G1和G2分別是指門控性高⑶44/低⑶62L和低⑶44/高⑶62LT細胞。圖6C顯示的是與 用同種型對照抗體染色且淋巴細胞門控的細胞中CXCR3表達相比較，G1和G2中⑶4+T細 胞的CXCR3表達。
[0025] 圖7顯示的是用對照IgG(左面板）、抗CXCR3抗體（中面板）和mATG(右面板） 治療且針對胰島素（頂行）或CD3/Foxp3(底行）染色的雌性N0D小鼠的胰島切片。
[0026] 圖8A-D是年齡匹配的非糖尿病雌性N0D小鼠（圖8A)、用PBS治療的糖尿病N0D 小鼠（圖8B)、抗CXCR3抗體治療後疾病緩解的NOD小鼠（圖8C)及用對照IgG抗體治療的 糖尿病N0D小鼠（圖8D)在進行葡萄糖篩查後血糖含量的曲線圖。在初始糖尿病診斷及研 究註冊後100天對小鼠實施葡萄糖篩查。各條線代表各個獨立動物的數據。
[0027] 圖9A-B顯示對接受自PBS、抗CXCR3、對照IgG或mATG抗體治療的雌性N0D小鼠 分離採集供體CD4+及CD8+T細胞的NOD.Scid接受者而言，非糖尿病小鼠隨時間的百分比。 T細胞是在用PBS或對照IgG治療後約80-90天從糖尿病雌性小鼠中分離，或在用抗CXCR3 或mATG抗體治療後約80-90天從疾病緩解的雌性N0D小鼠中分離。兩次獨立研究結果見 圖9A和9B。
[0028] 圖10A展示了如圖9中所示的用PBS、抗CXCR3、對照IgG或mATG抗體治療雌性 N0D小鼠中分離的⑶4+及⑶8+供體T細胞百分比（左板面）。各治療組中⑶4+和⑶8+T 細胞供體採集物中的效應和中央記憶細胞的百分比見圖10A的右面板。圖10B顯示供體T 細胞採集物中通過⑶4和⑶25的表達或通過⑶4、⑶25及Foxp3的表達鑑別的調節性T細 胞百分比。圖10C顯示供體T細胞採集物中亦表達CXCR3的⑶8+(左面板）及⑶4+(右面 板）的百分比。
[0029] 圖11A-B顯示的是將來自於供體0VA特異性TCR轉基因小鼠的T細胞過繼性的轉 移至保持未經治療或用抗CXCR3抗體或對照IgG治療的RIP-0VA接受者小鼠中，非糖尿病 小鼠隨時間的百分比。兩次研究結果見圖11A和11B中。
[0030] 圖12A顯示在過繼性轉移至RIP-0VA接受者小鼠之前通過流式細胞儀分析供體T 細胞CXCR3的表達（實線曲線）。用同種型對照抗體染色見於陰影曲線中。圖12B顯示在 過繼性轉移後的第2天、第4天、第7天、第9天及第15天用抗CXCR3或對照IgG抗體治療 的接受者小鼠血液、脾及胰腺淋巴結中供體細胞的百分比。圖12C顯示在過繼性轉移後用 CXCR3或對照IgG抗體治療的接受者小鼠血液、脾、胰腺淋巴結增殖性供體細胞的百分比。 圖12D顯示在過繼性轉移後用CXCR3或對照IgG抗體治療的接受者小鼠血液、脾、胰腺淋巴 結中CXCR3+供體細胞的百分比。
[0031] 圖13顯示來自保持未經治療且針對胰島素（左上）或⑶3(右上）染色或用抗 CXCR3抗體治療且針對胰島素（左下）或CD3(右下）染色的RIP-0VA接受者小鼠的胰腺切 片。在過繼性轉移供體T細胞後60天收集胰腺。
[0032]圖14八-(：顯示由克隆(：14，12,53,82及135介導的由0乂〇?3介導的向0乂(^11的 趨化性的抑制程度。數據顯示為在趨化性分析中遷移細胞的平均相對螢光單位（RFU)。圖 14D顯示抗體克隆C1 4,12, 53和135將鈣動員抑制50%所需的抗體濃度。
[0033] 圖15A-C顯示由由克隆C1 4，12,53,82及135介導的由0乂〇?3介導的向0乂(^9(圖 15A)、CXCL10 (圖15B)及CXCL11 (圖15C)的趨化性的抑制程度。數據顯示為在趨化性分 析中遷移細胞的平均相對螢光單位（RFU)。
[0034] 圖16顯示抗體與表達各種不同趨化因子的受體細胞結合的直方圖。各直方圖中 結合抗體的濃度沿橫軸增加。
[0035] 圖17A顯示克隆4. 0 (標記為"親本"）與某些人源化變體（標記為VH1-3、7_11及 VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區的比對。圖17B顯示克隆12. 0(標記為"親本"） 與其他人源化變體（標記為VH1-3、和VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區的比對。圖 17C顯示克隆53. 0 (標記為"親本"）與某些人源化變體（標記為VH1-6及VK1-9)的重鏈 (VH)和輕鏈（VK)可變區的比對。圖17D顯示克隆82. 0(標記為"親本"）與其他人源化 變體（標記為VH1-3、和VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區的比對。圖17E顯示克隆 135.0(標記為"親本"）與其他人源化變體（標記為VH1-3、和VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈 (VK)可變區的比對。圖17F顯示克隆4.0 (標記為"親本"）與某些4D人源化變體（標記 為VH4-6、和VK4-7)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區的比對。圖17G顯示克隆53. 0(標記 為"親本"）與某些4D人源化變體（標記為VH7-10、和VK10-13)的重鏈（VH)和輕鏈（VK) 可變區的比對。圖17A-G中各比對的底部序列代表最接近人類種系的序列。黑框指示⑶R 區，陰影殘基序列與對應種系殘基（圖17A-E)或對應親本殘基（圖17F-G)有所不同，使用 MGT編碼及CDR劃界。圖17H顯示克隆4. 0，12. 0,82. 0和135以及抗體克隆5H7和7H5的 重鏈（VH)及輕鏈（VL)可變區比對。黑框指示CDR區，陰影殘基序列與比對中的先前序列 有所不同，使用MGT編碼。
[0036] 圖18顯示抗體克隆4,12, 53,82和135的最小表位殘基的邊界。對於結合活性至 關重要的殘基表不為X。
[0037] 圖19是顯示嵌合克隆4，12,53,82和135以及人源化變體肋1，肋2，11113在人類 CXCR3轉染300. 19細胞中的抗體結合直方圖。抗體是以5yg/ml(黑線），0. 5yg/ml(深灰 線），or0.li!g/ml(黑虛線）或5i!g/ml單獨的二級抗體（填滿灰色的直方圖）給予，並 且將數據繪製為細胞數（橫軸）對最大螢光百分比的曲線。
[0038] 圖20A-C顯示在10g/ml克隆4,12, 53,82和135或商業化克隆1C6的嵌合（chim) 或人源化（Hul，Hu2orHu3)抗體變體存在或不存在的情況下，對人類CXCR3轉染細胞向 CXCL9 (圖20A)，CXCL10 (圖20B)和CXCL1 1 (圖20C)遷移的抑制百分比（縱軸）。
[0039] 圖21是顯示克隆4,12, 53,82和135以及商業化克隆1C6的嵌合（chim)或人源 化（Hul，Hu2orHu3)抗體變體抑制人類CXCR3_Gqi4qi4轉染CH0細胞中鈣動員能力的曲線 圖。繪製抗體濃度（橫軸）對應最大抑制百分比（縱軸）的曲線。
[0040] 圖 22A-D顯示抗CXCR3 抗體治療對N0D-scid/L2rynull(NSG)小鼠中CD3+/CD4+T cells(圖 22A)，CD3+/CD8+Tcells(圖 22B)，CXCR3+/CD3+/CD4+Tcells(圖 22C)，and CXCR3+/CD3+/CD8+Tcells(圖 22D)的百分比的效應。HulgGI是指人類IgGl(Here印tin)， 克隆4, 12, 53, 82和135是指嵌合抗體克隆。
[0041] 圖23A顯示克隆12. 0的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖23B顯示克隆12. 1的重鏈 和輕鏈胺基酸序列。圖23C顯示了克隆12. 2的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖23D顯示克 隆12. 3的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。
[0042] 圖24A顯示克隆135. 0的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖24B顯示克隆135. 1的重 鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖24C顯示了克隆135. 2的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖24D顯 示克隆135. 3的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。
[0043] 圖25A顯示克隆4. 0的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖25B顯示克隆4. 1的重鏈和 輕鏈的胺基酸序列。圖25C顯示了克隆4. 2的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖2?顯示克隆 4. 3的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖25E顯示克隆4. 4的重鏈胺基酸序列。圖25F顯示克 隆4. 5的重鏈胺基酸序列。圖25G顯示克隆4. 6的重鏈胺基酸序列。圖25H顯示克隆4. 7 的重鏈胺基酸序列。圖251顯示克隆4. 8的重鏈胺基酸序列。圖25J顯示克隆4. 9的重鏈 胺基酸序列。圖25K顯示克隆4. 10的重鏈胺基酸序列。圖25L顯示克隆4. 11的重鏈氨基 酸序列。圖25M顯示克隆4. 4的輕鏈胺基酸序列。圖25N顯示克隆4. 5的輕鏈胺基酸序列。 圖250顯示克隆4. 6的輕鏈胺基酸序列。圖25P顯示克隆4. 7的輕鏈胺基酸序列。
[0044] 圖26A顯示克隆53. 0的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖26B顯示克隆53. 1的重鏈 和輕鏈的胺基酸序列。圖26C顯示了克隆53. 2的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖26D顯示 克隆53. 3的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖26E顯示克隆53. 4的重鏈胺基酸序列。圖26F 顯示克隆53. 5的重鏈胺基酸序列。圖26G顯示克隆53. 6的重鏈胺基酸序列。圖26H顯示 克隆53. 4的輕鏈胺基酸序列。圖261顯示克隆53. 5的輕鏈胺基酸序列。圖26J顯示克隆 53. 6的輕鏈胺基酸序列。圖26K顯示克隆53. 7的輕鏈胺基酸序列。圖26L顯示克隆53. 8 的輕鏈胺基酸序列。圖26M顯示克隆53. 9的輕鏈胺基酸序列。圖26N顯示克隆53. 7的重 鏈胺基酸序列。圖260顯示克隆53. 8的重鏈胺基酸序列。圖26P顯示克隆53. 9的重鏈氨 基酸序列。圖26Q顯示克隆53. 10的重鏈胺基酸序列。圖26R顯示克隆53. 10的輕鏈氨基 酸序列。圖26S顯示克隆53. 11的輕鏈胺基酸序列。圖26T顯示克隆53. 12的輕鏈胺基酸 序列。圖26U顯示克隆53. 13的輕鏈胺基酸序列。
[0045] 圖27A顯示克隆82. 0的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖27B顯示克隆82. 1的重鏈 和輕鏈的胺基酸序列。圖27C顯示了克隆82. 2的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。圖27D顯示 克隆82. 3的重鏈和輕鏈的胺基酸序列。
[0046] 圖28A-P顯示克隆12. 0-12. 3的重鏈和克隆12. 0-12. 3的輕鏈、克隆135. 0-135. 3 的重鏈和克隆135. 0-135. 3的輕鏈、克隆4. 0-4. 11的重鏈和克隆4. 0-4. 11的輕鏈、克隆 53. 0-53. 6的重鏈和克隆53. 0-53. 9的輕鏈、以及克隆82. 0-82. 3的重鏈和克隆82. 0-82. 3 的輕鏈的核酸序列。
【具體實施方式】
[0047] 現在將詳細的參考本發明的某些示例性實施例，本發明的某些實施例在附圖中予 以闡釋。
[0048] CXCR3
[0049] CXCR3(MIM:300574,人類GeneID:2833,趨化因子（C-X-C基序）受體 3 ;亦稱之 為CD182,CD183,CKR-L2,CKAR3,GPR9,IP10-R，Mig-R，MigR，G蛋白偶聯受體 9,IP-10 受 體，SP10受體，Mig受體，趨化因子（C-X-C)受體3,幹擾素誘導型蛋白10受體）幾乎不 存於初始T細胞中，但在經抗原活化後上調且因其一級配體（CXCL9(人類GeneID:4283)，CXCL10(人類GenelD;3827)，和CXCL11(人類GeneID:6373))將這些細胞募集至組 織炎症部位的趨化因子受體。朗格罕氏（Langeriians)島中的0細胞表達CXCL9和 CXCL10(Frigerio等人，NatureMedicine8:1414-1420(2002))並且那些已經浸潤了膜腺 的T細胞表達CXCR3(Christen等人，TheJournalofImmunology，2003，171:6838_8845; VanHalteren等人，Diabetologia48:75-82(2005);Uno等人 2010;Roep等人， ClinicalandExperimentalImmunology，2003,159:338-343;Tanaka等人，Diabetes 58:2285-2291 (2009);SarkaretaL，Diabetes. 2012Feb;61 (2):436-46)。
[0050] CXCR3在多種有機體中表達，包括例如，人類、小鼠、大鼠、奶牛、黑猩猩、短尾猴、 狗、蛙、鴨嘴獸、豬及斑馬魚。表1列出了多種CXCR3在美國國家生物技術信息中心（NCBI) 的GenelD及蛋白參考序列。SEQIDN0:1是人CXCR3的全長序列（剪接變體A)。剪接變 體B的肽序列通過參考序列NP_001136269. 1提供。人CXCR3剪接變體A的預測胞外結構 域在文獻Colvin等人，Mol.Cell.Bio. ,26:5838-49(2006)中記載，並且包括SEQIDN0:1 的 1-58, 1-16, 111-126, 190-223, 278-301 位殘基，如下文所示：
[0051] SEQIDNO: 1NP-001495 人類CXCR3,A亞型
[0052] 1 mvlevsdhqvlndaevaallenfsssydygenesdscctsppcpqdfslnfdraflpaly
[0053] 61 sllfllgllgngavaavllsrrtalsstdtfllhlavadtIlvltlplwavdaavqwvfg
[0054] 121 sglckvagalfninfyagalIlacisfdrylnivhatqlyrrgpparvtltclavwglcl
[0055] 181 lfalpdfif1 sahhderinathcqynfpqvgrtalrylqlvagfflpllvmaycyahila
[0056] 241 vllvsrgqrrIramrlvvvyvvafalcwtpyhlvvivdilmdlgalarncgresrvdvak
[0057] 301 svtsglgymhcclnpllyafvgvkfrermwmlllrlgcpnqrglqrqpsssrrdsswset
[0058] 361seasysgl
[0059] 表 1
[0060]
【權利要求】
1. 一種能夠結合CXCR3的抗體或抗原結合片段，其中該抗體或片段包含重鏈可變區 (VH)和輕鏈可變區（VL)，其中： a) 重鏈可變區包含三個互補決定區（⑶R)，其與來自SEQ ID NO:2、4、6和8中任一者 的三個⑶R至少約95%-致；和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，其與來自SEQ ID N0:3、5、7 和9中任一者的三個⑶R至少約95%-致； b) 重鏈可變區包含三個CDR，其與來自SEQ ID N0:10、12、14、16中任一者的三個CDR 至少約95%-致；和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，其與來自SEQ ID NO: 11、13、15、17中任 一者的三個⑶R至少約95 %-致； c) 重鏈可變區包含三個CDR，其與來自SEQ ID N0:18、20、22、24、和26-33中任一者的 三個⑶R至少約95%-致；和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，其與來自SEQ ID N0:19、21、 23、25、34-37中任一者的三個CDR至少約95%-致； d) 重鏈可變區包含三個CDR，其與來自SEQ ID N0:38、40、42、44、46-48和63-66中任一 者的三個⑶R至少約95%-致；和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，其與來自SEQ ID NO: 39、 41、43、45、49-54和67-70中任一者的三個CDR至少約95%-致； 或e)重鏈可變區包含三個CDR，其與來自SEQ ID勵:55、57、59、61中任一者的三個0? 至少約95%-致；和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，其與來自SEQ ID N0:56、58、60、62中任 一者的三個⑶R至少約95 %-致。
2. 如權利要求1所述的抗體或片段，其中所述的抗體或片段是嵌合的抗體或片段、經 CDR移植的抗體或片段、突變的抗體或片段、突變去除一個或多個脫醯胺位點的抗體或片 段、人的抗體或片段、人源化的抗體或片段、經人源化和回復突變的抗體或片段、合成的抗 體或片段或重組的抗體或片段。
3. 如權利要求1或2所述的抗體或片段，其中該抗體或片段是Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv、 單鏈Fv(SCFv)、雙鏈抗體（Fd)、線性抗體、納米抗體（VHH)、雙特異性抗體或多特異性抗體。
4. 如權利要求1至3中任一項所述的抗體或片段，其中該抗體或片段能夠結合選自以 下的肽：a)包含SEQ ID NO: 1的殘基1至58的肽；b)包含SEQ ID NO: 1的殘基1至16的 肽；和/或c)包含SEQ ID NO: 1的殘基1至37的肽。
5. 如權利要求1至4中任一項的抗體或片段，其中抗體或片段能夠結合選自以下的 肽： a) 包含胺基酸序列SDHQVLNDAE的肽； b) 包含胺基酸序列SDHQVLND的肽； c) 包含胺基酸序列DHQVLND的肽； d) 包含胺基酸序列VLNDAE的肽； e) 包含胺基酸序列VLND的肽； f) 包含胺基酸序列XDXXVXNDXX的肽； g) 包含胺基酸序列XDXXVXND的肽； h) 包含胺基酸序列DXXVXND的肽； i) 包含胺基酸序列VXNDXX的肽； 和/或j)包含胺基酸序列VXND的肽， 其中X是指任意胺基酸。
6. 如權利要求1至5中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區包含與SED ID N0:2、4、6、8中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列； b) 重鏈可變區包含與SED ID勵：10、12、14、16中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列； c) 重鏈可變區包含與SED ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者至少約85%、90%、 95 %或99 %-致的序列； d) 重鏈可變區包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者至少約 85%、90%、95%或 99%-致的序列； 或e)重鏈可變區包含與SED ID N0:55、57、59、61中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列。
7. 如權利要求1至6中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 輕鏈可變區包含與SED ID N0:3、5、7、9中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列； b) 輕鏈可變區包含與SED ID勵：11、13、15、17中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列； c) 輕鏈可變區包含與SED ID N0:19、21、23、25、34至37中任一者至少約85%、90%、 95 %或99 %-致的序列； d) 輕鏈可變區包含與SED ID N0:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者至少約 85%、90%、95%或 99%-致的序列； 或e)輕鏈可變區包含與SED ID勵:56、58、60、62中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列。
8. 如權利要求1到7中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區包含與SED ID NO:2、4、6、8中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列；和輕鏈可變區包含與SED ID NO:3、5、7和9中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列； b) 重鏈可變區包含與SED ID勵：10、12、14、16中任一者至少約85%、90%、95%或 99%-致的序列；和輕鏈可變區包含與SED ID NO:ll、13、15、17中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列； c) 重鏈可變區包含與SED ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者至少約85%、90%、 95%或99%-致的序列；和輕鏈可變區包含與SED ID NO:19、21、23、25、34至37中任一者 至少約85%、90%、95%或99%-致的序列； d) 重鏈可變區包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者至少約 85%、90%、95%或99%-致的序列；和輕鏈可變區包含與SED ID NO:39、41、43、45、49至 54、67至70中任一者至少約85%、90%、95%或99%-致的序列； 或e)重鏈可變區包含與SED ID NO:55、57、59、61中任一者至少約85%、90%、95% 或99%-致的序列；和輕鏈可變區包含與SED ID N0:56、58、60、62中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列。
9. 如權利要求1到8中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區包含與SED ID N0:2、4、6、8中任一者中的三個⑶R-致或包含1個、2 個或3個胺基酸殘基突變的序列； b) 重鏈可變區包含與SED ID勵:10、12、14、16中任一者中的三個^1?一致或包含相對 於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； c) 重鏈可變區包含與SED ID勵：18、20、22、24、26至33中任一者中的三個〇?-致或 包含相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； d) 重鏈可變區包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者中的三個 ⑶R -致或包含相對於上述三個⑶R具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； 或e)重鏈可變區包含與SED ID N0:55、57、59、61中任一者中的三個⑶R-致或包含 相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列。
10. 如權利要求1至9中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 輕鏈可變區包含與SED ID NO:3、5、7、9中任一者中的三個⑶R-致或包含相對於上 述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； b) 輕鏈可變區包含與SED ID勵:11、13、15、17中任一者中的三個^1?一致或包含相對 於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； c) 輕鏈可變區包含與SED ID勵：19、21、23、25、34至37中任一者中的三個0?-致或 包含相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； d) 輕鏈可變區包含與SED ID NO:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者中的三個 ⑶R -致或包含相對於上述三個⑶R具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； 或e)輕鏈可變區包含與SED ID N0:56、58、60、62中任一者中的三個⑶R-致或包含 相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列。
11. 如權利要求1到10中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區包含與SED ID NO:2、4、6、8中任一者中的三個⑶R-致或包含相對於 上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區包含與SED ID NO: 3、5、7、9中任一者中的三個⑶R-致或包含相對於上述三個⑶R具有1個、2個或3 個胺基酸殘基突變的序列； b) 重鏈可變區包含與SED ID N0:10、12、14、16中任一者中的三個⑶R-致或包含相 對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區包含與 SED ID勵:11、13、15、17中任一者中的三個^1?一致或包含相對於上述三個^1?具有1個、 2個或3個胺基酸殘基突變的序列； c) 重鏈可變區包含與SED ID勵：18、20、22、24、26至33中任一者中的三個〇?-致或 包含相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區 包含與SED ID勵：19、21、23、25、34至37中任一者中的三個0?-致或包含相對於上述三 個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； d) 重鏈可變區包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者中的三個 CDR -致或包含相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列；和/或 輕鏈可變區包含與SED ID N0:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者中的三個CDR-致 或包含相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列； 或e)重鏈可變區包含與SED ID N0:55、57、59、61中任一者中的三個⑶R-致或包含 相對於上述三個CDR具有1個、2個或3個胺基酸殘基突變的序列；輕鏈可變區包含與SED ID N0:56、58、60、62中任一者中的三個⑶R-致或包含相對於上述三個⑶R具有1個、2個 或3個胺基酸殘基突變的序列。
12. -種能夠結合CXCR3的抗體或抗原結合片段，其中抗體或片段包含重鏈可變區 (VH)和輕鏈可變區（VL)，並且其中： a) 重鏈可變區包含與SED ID N0:2、4、6、8中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列；和/或輕鏈可變區包含與SED ID N0:3、5、7和9中任一者至少約85%、90%、 95 %或99 %-致的序列； b) 重鏈可變區包含與SED ID勵：10、12、14、16中任一者至少約85%、90%、95%或 99%-致的序列；和/或輕鏈可變區包含與SED ID勵:11、13、15、17中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列； c) 重鏈可變區包含與SED ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者至少約85%、90%、 95%或99%-致的序列；和/或輕鏈可變區包含與SED ID NO:19、21、23、25、34至37中任 一者至少約85 %、90 %、95 %或99 % -致的序列； d) 重鏈可變區包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者至少約 85%、90%、95%或99%-致的序列；和/或輕鏈可變區包含與SED ID NO:39、41、43、45、49 至54、67至70中任一者至少約85%、90%、95%或99%-致的序列； 或e)重鏈可變區包含與SED ID NO:55、57、59、61中任一者至少約85%、90%、95%或 99%-致的序列；和/或輕鏈可變區包含與SED ID勵:56、58、60、62中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列。
13. 如權利要求12所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區包含與SEQ ID NO:2、4、6、8中任一者一致或包含相對於上述序列具有1 至10個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:3、5、7、9中任一者一 致或包含相對於上述序列具有1至10個胺基酸殘基突變的序列； b) 重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 10、12、14、16中任一者一致或包含相對於上述序列具 有1至10個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 11、13、15和17 中任一者一致或包含相對於上述序列具有1至10個胺基酸殘基突變的序列； c) 重鏈可變區包含相對於SEQ ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者一致或包含相 對於上述序列具有1至10個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 19、21、23、25、34至37中任一者一致或包含相對於上述序列具有1至10個胺基酸殘基 突變的序列； d) 重鏈可變區包含相對於SEQ ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者一致或 包含相對於上述序列具有1至10個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區包含與SEQ 10勵:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者一致或包含相對於上述序列具有1至10個 胺基酸殘基突變的序列； 或e)重鏈可變區包含與SEQ ID勵:55、57、59、61中任一者一致或包含相對於上述序 列具有1至10個胺基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區包含相對於SEQ ID N0:56、58、 60、62中任一者一致或包含相對於上述序列具有1至10個胺基酸殘基突變的序列。
14. 如權利要求12或13所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:2、4、6、8中任一者的三個⑶R至少約 95%-致，和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:3、5、7、9中任一者的三個⑶R 至少約95 %-致； b) 重鏈可變區包含三個⑶R，與來自SEQ ID NO: 10、12、14和16中任一者的三個⑶R 至少約95%-致，和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，與來自SEQ ID NO: 11、13、15、17中任一 者的三個⑶R至少約95 %-致； c) 重鏈可變區包含三個CDR，與來自SEQ ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者的三 個⑶R至少約95%-致，和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:19、21、23、25、 34至37中任一者的三個⑶R至少約95%-致； d) 重鏈可變區包含三個CDR，與來自SEQ ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任 一者的三個⑶R至少約95%-致，和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，與來自SEQ ID NO: 39、 41、43、45、49至54、67至70中任一者的三個CDR至少約95%-致； 或e)重鏈可變區包含三個CDR，與來自SEQ ID N0:55、57、59、61中任一者的三個CDR 至少約95%-致，和/或輕鏈可變區包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:56、58、60、62中任一 者的三個⑶R至少約95 %-致。
15. 如權利要求1至14中任一項所述的抗體或片段，其抗體或片段包含表2中的重鏈 和輕鏈可變區的任一組合。
16. 如權利要求1至15中任一項所述的抗體或片段，其中該抗體能夠以至少約10 ^T1的親和力常數結合CXCR3。
17. 如權利要求1至16中任一項所述的抗體或片段，其中該抗體或片段能夠結合 CXCR3的A和B同種型。
18. 如權利要求1至17中任一項所述的抗體或片段，其中抗體或片段能夠優先結合至 CXCR3的A同種型。
19. 如權利要求1至18中任一項所述的抗體或片段，其中抗體或片段能夠中和CXCR3 活性。
20. -種分離的核苷酸，其編碼如權利要求1至19中任一項抗體或片段的胺基酸序列。
21. -種載體，其包含權利要求20的分離的核苷酸。
22. -種經分離的宿主細胞，其包含權利要求21的載體。
23. -種產生如權利要求1至19中任一項的抗體或片段的方法，其包含在適於產生抗 體或片段的條件下在培養基中培養權利要求19的宿主細胞。
24. -種試劑盒，其包含權利要求1至19中任一項的抗體或片段或權利要求20的核酸 和關於使用該抗體或片段用於研究、診斷或治療目的的說明書。
25. -種預防、治療新發生I型糖尿病（T1D)或減少其進展的方法，其包含： a) 鑑別有發生T1D風險或患有新發生T1D的個體；及 b) 向該個體給予有效量的權利要求1至19中任一項的抗體或片段，藉此預防T1D發 生，或治療新發生T1D或減少其進展。
26. 如權利要求25所述的方法，其中的個體是哺乳動物。
27. 如權利要求25或26所述的方法，其中的個體是人體。
28. 如權利要求25至27中任一項所述的方法，其中該個體具有大於或等於約 0. 2nmol/L的基礎血清C肽濃度，和/或其中患者在C肽刺激期間具有介於約0. 033nmol/ LXmin和1. Onmol/LXmin之間的空腹積分血清C肽濃度。
29. 如權利要求25至28中任一項所述的方法，其中該患者在外源性胰島素不存在時具 有大於約120mg/dL的空腹血糖濃度。
30. 如權利要求25至29中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是人源化的。
31. 如權利要求25至30中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是以約0. 03mg/kg/ 劑量至3. 7mg/kg/劑量的劑量給予。
32. 如權利要求25至31中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是以至少每天一次、 每周一次、每兩周一次、每月一次、每兩月一次、每季度一次或每年一次給予。
33. 如權利要求25至32中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是以約0. 16mg/kg至 18mg/kg的全部給予總劑量給予。
34. 如權利要求25至33中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是經靜脈內、經腹膜 內、經鼻、經眼、經口、腸道外、皮下或經皮給予。
35. 如權利要求25至34中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是直接給予到胰腺。
36. 如權利要求35所述的方法，其中該抗體或片段是給予到鄰近胰腺的胰島細胞。
37. 如權利要求25至36中任一項所述的方法，其中該方法進一步包含給予3細胞刺 激劑、胰島素或產生胰島素的細胞。
38. 如權利要求25至37中任一項所述的方法，其中該方法進一步包含給予免疫抑制 劑。
39. -種治療新發生1型糖尿病（T1D)或減少其進展的方法，其包含： a)鑑別患有新發生T1D並且具有大於或等於約0. 2nmol/L基礎血清C肽濃度和/或C 肽刺激期間具有約0. 〇33nmol/LXmin和1. Onmol/LXmin之間的空腹積分血清C肽濃度的 人類個體； 以及b)給予約0? 03mg/kg/劑量至3. 7mg/kg/劑量的權利要求1至19中任一項的抗 體或片段，藉此治療新發生T1D或減少其進展。
40. -種CXCR3中和抗體或其片段，其用於個體預防、治療新發生1型糖尿病（T1D)或 減少其進展，其中該抗體或其片段包含如權利要求1至19中任一項所述的抗體或片段。
41. 一種選自權利要求1至19中任一項的抗體或片段的CXCR3抗體或其片段的用途， 其用於製備治療疾病或病症的藥劑。
42. 如權利要求41所述的用途，其中所述的疾病或病症是CXCR3相關的疾病或病症。
43. 如權利要求41或42的用途，其中所述疾病或病症是新發生1型糖尿病（T1D)。
44. 一種偶聯物，其包含權利要求1至19中任一項的抗體或片段以及至少一種其他試 劑。
45. 如權利要求44所述的偶聯物，其中所述的其他試劑是治療劑、solubalizing、穩定 齊U、免疫抑制劑、受體或抗原結合肽。
46. -種藥物組合物，其包含如權利要求1至19中任一項的抗體或片段或權利要求20 中的核酸以及藥學上可接受的載體。
47. 如權利要求46所述的藥物組合物，其中該組合物進一步包含至少一種其他治療 劑。
48. 如權利要求47所述的藥物組合物，其中至少一種其他治療劑包含用於治療與 CXCR3相關的疾病或病症的藥劑。
49. 如權利要求47或48的藥物組合物，其中至少一種其他的治療劑包含0細胞刺激 齊U、胰島素或產生胰島素的細胞。
50. -種檢測測試試樣中CXCR3存在或濃度的體外方法，其包含使該測試試樣與權利 要求1至19中任一項的抗體或片段以及可檢測標記接觸，其中CXCR3的存在或濃度與該檢 測標記產生的信號直接或間接相關。
51. 如權利要求50所述的方法，其中使用該方法診斷與CXCR3相關的病況。
52. 如權利要求50所述的方法，其中該病況是T1D。
【文檔編號】C07K16/28GK104507967SQ201380015401
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2013年1月18日 優先權日:2012年1月20日
【發明者】M·尤德, J·特德斯通, T·洛迪, K·B·卡特, T·D·康納斯, J·R·平克尼, E·馬斯特約翰, R·丘 申請人:建新公司