來普黴素化合物的製作方法

2023-04-25 06:53:46 1

>本發明化合物能用於治療疾病，例如但不限於高增生疾病，包括頭部和頸部癌症，包括頭，頸，鼻腔，鼻旁竇，鼻咽，口腔，口咽，喉，下咽部，唾液腺的腫瘤和副神經節瘤；肝臟和膽道癌，特別是肝細胞癌；腸癌，特別是結腸直腸癌；治療卵巢癌；小細胞和非小細胞肺癌；乳癌；肉瘤，如纖維肉瘤，惡性纖維組織細胞瘤，胚胎性橫紋肌肉瘤，平滑肌肉瘤，神經纖維肉瘤，骨肉瘤，滑膜肉瘤，脂肉瘤和蜂窩狀軟部肉瘤；中樞神經系統的瘤，特別是腦瘤；淋巴瘤，如Hodgkin氏淋巴瘤，淋巴漿細胞增多性(lymphoplasmacytoid)淋巴瘤，濾泡性淋巴瘤，黏膜相關的淋巴組織淋巴瘤，套細胞淋巴瘤，B-品系大細胞淋巴瘤，Burkitt淋巴瘤和T-細胞惡性大細胞淋巴瘤。臨床上，實施在此所述的方法和使用所述的組合物會導致癌生長的尺寸變小、數量減少和/或相關症狀減輕(當可適用時)。病理上，實施在此所述的方法和使用所述的組合物會產生病理上的相應反應，如抑制癌細胞增殖，減小癌或腫瘤的大小，防止進一步的擴散以及抑制腫瘤血管發生。治療這類疾病的方法包括給予對象治療有效量的本發明的組合物。必要時可重複該方法。特別是，所述癌症可以是前列腺癌、人乳頭瘤病毒(HPV)相關的宮頸癌、白血病(尤其是慢性骨髓性白血病或CML)和膀胱癌。本發明的化合物還能治療以細胞高增殖為特徵的非癌症紊亂。這種紊亂的說明性例子包括但不限於萎縮性胃炎，炎性溶血性貧血(inflammatoryhemolyticanemia)，移植排斥，炎性中性粒細胞減少(inflammatoryneutropenia)，大皰性類天皰瘡，乳糜瀉，脫髓鞘神經病(demyelinatingneuropathies)，皮肌炎，炎性腸疾病(inflammatoryboweldisease)(潰瘍性結腸炎和Crohn疾病)，多發性硬化，心肌炎，肌炎，鼻息肉，慢性鼻旁竇炎，慢性天皰瘡，原發性腎小球腎炎，牛皮癬，外科手術粘連(surgicaladhesions)，狹窄或再狹窄，鞏膜炎，硬皮症，溼疹(包括特異反應性皮炎，刺激性皮炎，過敏性皮炎)，牙周病(即，牙周炎)，多囊腎病和I型糖尿病。其它例子包括脈管炎(如，Giant細胞動脈炎(暫時性動脈炎，Takayasu動脈炎)，結節性多動脈炎，變應性脈管炎和肉芽腫瘤(Churg-Strauss病)，多脈管重疊症候群，過敏性脈管炎(Henoch-Schonlein紫癜)，血清病，藥物誘發的脈管炎，感染性脈管炎，腫瘤性脈管炎，結締組織病相關的脈管炎，補體系統先天性缺陷相關的脈管炎，Wegener肉芽腫病，Kawasaki病，中樞神經系統脈管炎，Buerger病和系統性硬化)；胃腸道疾病(如，胰腺炎，Crohn病，潰瘍性結腸炎，潰瘍性直腸炎，原發硬化型膽管炎，包括自發的任何原因的良性狹窄(如，膽管、食管、十二指腸、小腸或結腸狹窄)；呼吸道疾病(如，哮喘，過敏性肺炎，石棉肺，矽肺和其它形式矽肺，慢性支氣管炎和慢性阻塞性氣道疾病)；鼻淚管病(如，包括自發的任何原因的狹窄)；和咽鼓管疾病(eustacheantubediseases)(如，包括自發的任何原因的狹窄)。尤其是非癌的病症可以是足底疣，心肥大(cardiachypertrophy)或癌性惡病質。本發明的化合物可以與其它抗癌劑或細胞毒劑組合給藥，所述抗癌劑或細胞毒劑包括烷基化劑，血管發生抑制劑，抗代謝劑，DNA清除劑，DNA交聯劑，DNA插入劑，DNA小溝粘合劑，烯二炔，熱休克蛋白質90抑制劑，組蛋白脫乙醯酶抑制劑(histonedeacetylaseinhibitor)，微管穩定劑，核苷(嘌呤或嘧啶)同型物，核輸出抑制劑(nuclearexportinhibitor)，蛋白酶抑制劑，拓撲異構酶(I或II)抑制劑，酪氨酸激酶抑制劑。特異性的抗癌劑或抗細胞毒素劑包括β-拉帕醌，柄型菌素P3，金他汀(auristatin)，比卡魯胺，博來黴素，波特唑米(bortezomib)，白消安，刺孢黴素，卡利他汀(callistatin)A，喜樹鹼，卡培他濱，CC-1065，順鉑，克利素(cryptophycin)，紅比黴素，盤批海綿內酯(discodermolide)，地索唑(disorazole)，多西他賽，阿黴素，倍癌黴素，代納黴素A(dynemycinA)大環內酯類抗腫瘤藥(epothilone)，依託泊苷，氟尿苷，氟達拉濱，氟尿嘧啶，傑菲替尼(gefitinib)，格爾德黴素，17-烯丙基氨基-17-脫甲氧基格爾德黴素(17-AAG)，17-(2-二甲基氨基乙基)氨基17-脫甲氧基格爾德黴素(17-DMAG)，吉西他濱，羥基脲，伊馬替尼(imatinib)，幹擾素，白介素，伊立替康，來普黴素B，美登素，氨甲喋呤，絲裂黴素C，奧沙利鉑，紫杉醇，海綿他汀(spongistatin)，辛二醯苯胺異羥肟酸(suberoylanilidehydroxamicacid)(SAHA)，硫替派，託泊替康，曲古抑菌素A，長春花鹼，長春新鹼和長春鹼醯胺。本發明化合物優選經過例如柱層析、高壓液相色譜、重結晶或其它純化技術，以純化和分離的形式提供。本發明的化合物表示為特定的立體異構體時，這種立體異構體優選基本上不含其它立體異構體。本發明化合物可以以藥物製劑施用，所述製劑包含本發明的化合物和賦形劑。可使用的賦形劑包括載體、表面活性劑、增稠劑或乳化劑、固體粘合劑、分散助劑或懸浮助劑、增溶劑、著色劑、調味劑、包衣、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、防腐劑、等滲劑以及它們的組合。在Gennaro，編，RemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy，第20版(LippincottWilliamsWilkins2003)中揭示了合適賦形劑的選擇和使用，該文獻內容參考結合於本文。組合物可以是任何適當形式，如固體、半固體或液體形式。一般而言，藥物製劑可含有與適用於外部、腸內或腸胃外施用的有機或無機載體或賦形劑混合的一種或多種本發明的化合物作為活性組分。活性組分可以與例如常用的無毒性的藥學上可接受的載體摻混，所述載體適用於片劑、顆粒劑、膠囊劑、栓劑、子宮帽、溶液、乳液、懸浮液和其它任何適用的形式。可使用的載體包括水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠、明膠、甘露醇、澱粉糊料、三矽酸鎂、滑石、玉米澱粉、角蛋白、膠體二氧化矽、馬鈴薯澱粉、尿素和其它適合製備固體、半固體或液體形式的載體。此外，可使用輔助的穩定劑、增稠劑、著色劑和香料。優選的給藥方式包括靜脈內給藥，在某些適應症如子宮頸癌、膀胱癌或足底疣情況下局部用藥。可以將本發明的化合物配製成微膠囊和納米微粒。例如在Bosch等，US5,510,118(1996)；DeCastro，US5,534,270(1996)；和Bagchi等，US5,662,883(1997)中描述了常用的製備方法，這些專利文獻參考結合於本文。通過提高表面積與體積的比值，這些製劑實現了用其它方法不能口腔遞送的化合物的口腔遞送。本發明化合物的劑量按體重在約0.1-100mg/kg/天的數量級範圍，優選約1-50mmg/kg/天。更優選劑量為5-20mg/kg/天，相應於假定一個70kg的病人350-1400mg/病人/天。本發明化合物可基於一定間隔，即半周一次、每周一次或每月一次給藥。與載體混合製備單一劑型的活性組分的量可依據治療的主體以及給藥的特定方式進行變化。例如，用於給人類口服的製劑可含有載體材料，其量佔總組合物的約5-95％。單位劑型一般含有約5-500mg活性組分。但是，應理解，對任意特定的患者的具體劑量應取決於許多因素。這些因素包括所用特定化合物的活性；對象的年齡、體重、健康狀況、性別和飲食；給藥的時間和途徑以及藥物的排洩速率；治療時是否採用藥物組合；以及具體疾病的嚴重性或治療的病況。本領域的技術人員應理解，本發明具有伯胺或仲胺基團的化合物，如化合物15-17可用於治療結合物，所述結合物包含尋靶部分、聯接子部分和活性劑。這種結合物中，來普黴素化合物是活性劑或者是彈頭，通過尋靶部分的作用傳遞到靶細胞。尋靶部分可以是一種顯示對靶細胞上的特徵分子親合力的抗體(尤其是單克隆抗體)。為了具體說明，在癌症化療中，特徵分子可以是被單克隆抗體識別的與腫瘤相關的抗原。聯接子部分設計為在結合物被癌細胞接納到其內部或在癌細胞附近時切割，釋放來普黴素作為抗癌藥物的來普黴素化合物。伯胺或仲胺用作將來普黴素化合物與聯接子部分相連的方便結合點，特別是「自貢獻」基團，如對氨基苄氧基羰基(PABC)基團。例如，可參見Carl等，J.Med.Chem.1981，24(3)，479-480；和Carl等，WO81/01145(1981)；其內容參考結合於本文。不受理論的束縛，我們相信本發明的化合物的作用是通過類似於LMB的機制來抑制CRM-I介導的目標癌細胞中的核輸出過程，因此誘發凋亡。LMB中的2，3-脫氫-δ-戊內酯部分是Michael反應的受體。已表明LMB能通過在該位置與CRM1的半胱氨酸529形成Michael加成物來抑制CRM1(Kudo等，Proc.Nat′lAcad.Sci(USA)1999，96(3)，9112-9117)。本發明化合物保留了這種重要的2，3-脫氫-δ-戊內酯藥效基團，因此可以預期有同樣抑制機制的功能。許多癌細胞具有突變，導致凋亡誘導性腫瘤抑制蛋白質p53喪失功能。Vousden等，Nat.Rev.Cancer2002，2，594-504。這類癌症的例子包括前列腺癌和人乳頭瘤病毒(HPV)相關的宮頸癌。LMB顯示能使p53蛋白在宮頸癌細胞的細胞核內累積。Lane等，Proc.Nat′lAcad.Sci(USA)2000，97，8501-8506。在以由於DNA受損的p53缺陷性正向調節為特徵的前列腺癌中，細胞核缺乏p53。LMB顯示能將p53限制在細胞核中並誘發凋亡。因此，前列腺癌細胞對LMB非常敏感。Peehl等，Prostate2003，54，258-267。本發明化合物可與其它抗癌劑，特別是酪氨酸激酶抑制劑如伊馬替尼(imatinib)(其甲磺酸鹽具有商品名GleevecTM)協同治療適當類型的癌症。某些癌症如慢性粒細胞性白血病(CML)的特徵是融合蛋白質Bcr-Abl的表達。雖然正常的Bcr-Abl並不輸入細胞核，但是Bcr-Abl/伊馬替尼絡合物輸入到細胞核。如果LMB也存在，它能防止Bcr-Abl從細胞核輸出。此外，受核限制的Bcr-Abl誘發凋亡，導致Bcr-Abl陽性細胞死亡。參見如Vigneri等，NatureMedicine2001，7，228-234；Wang等，US2003/0162740A1(2003)。因此，伊馬替尼與本發明LMB化合物的組合能提供協同攻擊Bcr-Abl陽性癌細胞的機制。因此，本發明化合物通過與CRM1形成共價加成物，並幹擾CRM1介導的蛋白質(諸如p53、p73、Bcr-Abl、STAT1、(i)ADAR1、Rev和肌動蛋白)的輸出過程，可用於抑制如上所述的蛋白質從細胞核輸出。一個實施方式中，被抑制的蛋白質是p53。在另一個實施方式中，被抑制的蛋白質是Bcr-Abl。雖然預期視細胞類型和目標蛋白質可變化，所用的抑制物量一般在0.3-740nM，優選0.3-20nM，更優選0.3-2.0nM範圍。參考下面的實施例能進一步理解本發明的實施情況，這些實施例只是達到說明目的，不構成限制。實施例1-溶液相合成的通用方法本發明化合物可採用溶液相方法合成，即由下面反應式，用LMB作為原型合成。通過發酵來自美國典型培養物保藏中心(Manassas，Virginia)的鏈黴菌(Streptomycessp.)ATCC39366，獲得LMB。由從ATCC接受的試樣篩選單個分離物，產生高產分離物，可用於發酵。LMB也可以從Sigma-Aldrich(St.Louis，Missouri)購得。將LMB(12.2mg，0.027mmol，1當量)、N-羥基苯並三唑(「HOBt」，3.4mg，0.025mmol，1.1當量)和六氟-磷酸(苯並三唑-1-氧基)三吡咯烷基(「PyBOP」，13mg，0.025mmol，1.1當量)溶於無水N，N-二甲基甲醯胺(「DMF5」400μL)。順序加入胺A(0.025mmol，1.1當量)和二異丙基乙胺(「DIEA」，也稱作Hünig鹼，16μL，0.09mmol，4當量)。氮氣下室溫攪拌反應物20小時。將反應物分配在水和二氯甲烷(「DCM」)之間。有機層用水(2×)、飽和碳酸氫鈉(1×)和鹽水(1×)洗滌。用硫酸鈉乾燥該有機層，過濾並真空濃縮。將粗製產物(油狀物)加到二氧化矽閃蒸柱(0.5×5cm)上，用0-60％丙酮/己烷或0-10％甲醇/DCM進行洗脫。收集含產物Ia的餾份並真空濃縮。實施例2-固相合成的常用方法或者，採用固相合成，製備本發明的化合物，如以下化學式所示在一個10mL固相反應器中加入PS-HOBT(HL)樹脂(B，267mg，～0.24mmol，1.0當量，0.9mmol/g，Argonaut；該樹脂基質在上面化學式中用黑色小球標註)和4-二甲基氨基吡啶(「DMAP」，18mg，0.144mmol.0.6當量)在DCM(3.2mL)中的溶液。在該反應混合物中加入LMB(200mg，0.37mmol，1.53當量)在無水DMF(960μL)溶液中，氮氣中攪拌1分鐘。在反應物中加入二異丙基碳二亞胺(「DIC」，170μL，1.06mmol，4.4當量)的DCM溶液，室溫下反應混合物在一個振動臺上攪拌3小時。真空過濾除去溶劑。樹脂用DMF(3×)、DCM(3×)、DMF(3×)和四氫呋喃(3×)洗滌，獲得加入了LMB的樹脂C，回收並於-20℃儲存。將胺A(0.036mmol，0.6當量)和二異丙基乙胺(7μL，0.04mmol，0.67當量)溶解在無水DCM(1mL)中。將加入了LMB的樹脂C(110mg，約0.06mmol，1當量)懸浮於該溶液中，室溫攪拌3小時。過濾該溶液，樹脂用DCM(3×)漂洗。合併的濾液真空濃縮，產生黃色油狀物。將該粗製油狀物應用於二氧化矽閃蒸柱(0.5×5cm)，並用0-60％丙酮/己烷或0-10％甲醇/DCM進行洗脫。收集含產物Ia的餾份並真空濃縮。實施例3-化合物1按照實施例1的方法，用甲胺(Sigma-Aldrich)製備化合物1。對C34H51NO5計算的LRMS553.4；基準554.4(M+H)。實施例4-化合物2按照實施例1的方法，用2-氨基乙醇(Sigma-Aldrich)製備化合物2。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.27，13.02，13.25，13.52，16.06，17.94，20.91，26.45，30.90，32.22，33.27，33.48，40.76，42.27，45.11，45.59，547.25，62.47，73.41，81.59，119.50，119.85，122.50，128.06，130.20，135.04，135.42，136.37，136.96，151.83，152.69，164.58，168.37，215.39；對C35H53NO6計算的HRMS583.39729；基準584.39423(M+H)。實施例5-化合物3按照實施例1的方法，用4-苯基苄胺(Sigma-Aldrich)製備化合物3。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.27，12.65，13.00，13.35，13.67，16.09，18.04，20.92，26.49，32.23，33.30，33.48，40.77，42.91，45.00，545.49，46.92，73.98，81.48，119.60，119.92，122.59，126.99，127.23，127.31，128.02，128.23，128.72，130.16，135.07，135.46，136.30，136.91，137.69，151.56，152.58，164.35，166.69，215.25；對C46H59NO5計算的LRMS705.4；基準707.0(M+H)。實施例6-化合物4按照實施例1的方法，用3-(2-氨基乙基)吡啶(從LancasterSynthesis購得)製備化合物4。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.27，12.99，13.09，13.52，16.11，17.96，20.87，26.46，30.87，32.19，32.95，33.30，33.48，40.06，40.76，44.96，45.55，47.20，73.59，81.48，119.57，119.90，122.58，123.54，127.96，l28.15，130.11，134.78，135.09，135.42，136.28，136.54，136.91，147.52，149.86，151.64，152.33，164.37，167.05，215.20；對C40H56N2O5計算的LRMS644.9；基準646.0(M+H)。實施例7-化合物5按照實施例1的方法，用6-氨基吲唑(Sigma-Aldrich)製備化合物5。對C40H53N3O5計算的LRMS655.9；基準657.0(M+H)。實施例8-化合物6按照實施例1的方法，用N-Boc-乙二胺(Sigma-Aldrich)製備化合物6。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.26；12.87，12.97，13.51，16.11，17.84，20.84，26.30，26.38，26.45，28.30，32.15，33.28，33.48，39.94，40.50，40.74，45.05，45.51，45.60，46.19，46.23，47.03，73.82，79.29，81.46，119.80，119.91，5122.60，127.91，128.16，130.08，135.10，135.40，136.23，136.89，151.60，151.96，156.62，164.34，167.53，215.24；對C40H62N2O7計算的LRMS682.5；基準683.6(M+H)。實施例9-化合物7按照實施例1的方法，用N，N-二甲基乙二胺(Sigma-Aldrich)製備化合物7。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.29，12.68，12.99，13.53，13.61，16.09，17.77，20.81，26.48，32.13，33.25，33.49，36.28，40.75，45.02，45.52，46.82，57.90，73.93，81.43，119.97，122.66，127.90，128.17，130.05，135.15，135.39，136.27，136.90，151.49，164.25，166.92，215.25；對C37H58N2O5計算的LRMS610.4；基準612.0(M+H)。實施例10-化合物8按照實施例1的方法，用4-(3-氨基丙基)嗎啉(Sigma-Aldrich)製備化合物8。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ8.61，12.28，12.84，12.99，13.56，16.11，17.86，20.84，25.16，26.47，32.17，33.22，33.49，38.17，40.76，45.03，45.52，46.01，46.95，53.43，57.15，66.61，73.72，81.46，119.94，120.03，122.62，127.94，128.14，130.09，135.12，135.42，136.31，136.90，151.57，215.27；對C40H62N2O6計算的LRMS666.5；基準667.5(M+H)。實施例11-化合物9按照實施例1的方法，用2-苯氧基乙胺(Sigma-Aldrich)製備化合物9。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.28，12.65，13.00，13.54，13.63，16.08，17.95，20.87，26.48，32.19，33.26，33.48，38.57，40.76，44.99，45.51，46.85，66.75，74.00，81.45，114.39，119.60，119.96，121.00，122.62，127.98，128.17，129.47，130.10，135.09，135.43，136.30，136.89，151.53，152.58，158.46，166.87，215.20；對C41H57NO6計算的LRMS659.4；基準661.0(M+H)。實施例12-化合物10按照實施例1的方法，用甘氨酸甲酯(從Novabiochem購得)製備化合物10。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.27，12.77，12.99，13.52，16.06，18.00，20.84，26.47，31.36，32.16，33.25，33.47，36.43，40.74，40.94，45.06，45.52，46.90，52.22，73.91，81.45，118.95，119.94，122.62，127.95，128.14，130.10，135.09，135.41，136.30，136.89，151.56，153.58，162.49，164.32，166.74，170.67，215.16；對C36H53NO7計算的LRMS611.4；基準613.0(M+H)。實施例13-化合物11按照實施例1的方法，用2-(2-氨基乙基)-1，3-二氧戊環(從TCI-America購得)製備化合物11。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.28，12.65，12.98，13.52，13.58，16.07，17.84，20.82，26.47，32.14，32.75，33.24，33.48，34.27，40.74，44.95，45.51，46.81，64.85，74.02，81.43，103.67，119.95，120.08，122.64，127.93，128.14，130.06，135.11，135.41，136.29，136.88，151.40，151.52，164.27，166.68，215.20；對C38H57NO7計算的LRMS639.4；基準641.0(M+H)。實施例14-化合物12按照實施例1的方法，用(R)-2-氨基-3-苄氧基-1-丙醇(Sigma-Aldrich)製備化合物12。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.28，12.84，13.00，13.57，16.08，17.88，20.84，26.48，32.16，33.25，33.48，40.76，45.16，45.52，46.93，50.56，63.87，70.30，73.39，73.81，81.45，119.62，119.94，122.63，127.66，127.84，127.95，128.16，128.45，130.08，135.12，135.41，136.30，136.90，137.59，151.56，152.94，164.34，167.26，215.21；對C43H61NO7計算的LRMS703.4；基準705.0(M+H)。實施例15-化合物13按照實施例1的方法，用D-丙胺酸叔丁酯(Novabiochem)製備化合物13。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.28，12.60，13.00，13.56，16.07，17.85，18.79，20.85，26.48，27.90，32.18，33.26，33.48，40.74，45.08，45.46，46.80，48.25，74.13，81.50，81.77，119.61，119.97，122.61，127.97，128.18，130.18，135.08，135.42，136.29，136.91，151.52，152.68，165.97，172.53，215.18；對C40H61NO7計算的LRMS667.4；基準669.0(M+H)。實施例16-化合物14按照實施例1的方法，用N-Boc-1，4-丁二胺(從Fluka獲得)製備化合物14。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.25，12.96，13.05，13.51，16.09，17.84，20.83，26.29，26.37，26.45，26.75，27.52，28.33，32.14，33.28，33.46，38.70，40.73，45.00，45.52，46.07，46.17，46.21，47.14，73.67，81.43，119.88，119.96，122.60，127.88，128.16，130.04，135.10，135.38，136.22，136.87，151.43，151.61，156.04，164.32，167.05，215.18；對C42H66N2O7計算的LRMS710.5；基準711.6(M+H)。實施例17-化合物15按照實施例1的方法，用乙二胺(Sigma-Aldrich)製備化合物15，但變化是省略二異丙基乙胺。1HNMR，部分數據，(400MHz，CD3OD)57.13(dd，1H)，6.71(d，1H)，6.01(d，1H)，55.96(dd，1H)，5.78(dd，1H)，5.69-5.61(m，2H)，5.24(d，1H)，5.10(ddd，1H)，5.03(d，1H)，3.77(m，1H)，3.56(dd，1H)，3.42(appt，2H)，3.07(appt，2H)，2.84(m，1H)，2.73(m，1H)，2.63(m，1H)，2.26-1.82(m)，1.59(m，1H)，1.14(d，3H)，1.08-1.02(m，9H)，0.97(d，3H)，0.69(d，3H)。實施例18-化合物16按照實施例1的方法，用N-甲基乙二胺製備化合物16，但變化是省略二異丙基乙胺。對C36H57N2O5計算的HRMS597.4262；基準597.4278(M+H)。實施例19-化合物17按照實施例1的方法，用N-異丙基乙二胺(Sigma-Aldrich)製備化合物17，但變化是省略二異丙基乙胺。1HNMR，部分數據，(400MHz，CD3OD)δ7.13(dd，1H)，6.71(d，1H)，6.03-5.96(m，2H)，5.78(dd，1H)，5.68-5.61(m，2H)，5.24(d，1H)，5.10(dd，1H)，5.03(d，1H)，3.77(m，1H)，3.55(dd，1H)，3.46(appt，2H)，3.26(m，1H)，03.04(appt，2H)，2.84(m1H)，2.71(m，1H)，2.63(m，1H)，2.27-1.83(m)，1.59(m，1H)，1.26(d，6H)，1.14(d，3H)，1.10-1.02(m，9H)，0.98(d，3H)，0.69(d，3H).實施例20-化合物18按照實施例1的方法製備化合物18，但室溫下反應時間為12小時。從MolecularProbes，Eugene，Oregon獲得胺。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ6.58，11.04，12.28，13.00，13.41，13.51，14.43，16.12，17.59，20.73，26.31，26.39，32.05，33.10，33.50，40.75，45.71，46.18，43.23，47.56，71.96，81.40，111.30，114.39，119.13，119.91，122.68，127.73，128.24，129.90，135.27，136.17，136.89，146.03，147.84，151.55，154.62，160.33，160.89，164.28，166.86，214.74；對C43H59N3O7計算的LRMS729.4；基準731.0(M+H)。實施例21-化合物19按照實施例1的方法製備化合物19。從MolecularProbes獲得胺。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ11.25，12.27，12.82，12.97，13.53，14.88，16.12，17.78，20.85，24.73，26.30，26.38，26.47，29.62，32.16，33.25，33.49，35.53，39.72，40.75，45.08，45.51，46.26，47.00，73.77，81.47，117.24，119.73，119.92，120.42，122.63，123.79，127.93，128.16，130.10，133.25，135.11，135.43，136.26，136.90，143.95，151.58，152.26，160.29，164.34，167.56，172.80，215.25；對C49H68BF2N4O6計算的HRMS857.51945；基準857.52108(M+H)。實施例22-化合物20按照實施例1的方法製備化合物20。從MolecularProbes獲得胺。對C60H73BF2N4O7SNa計算的HRMS1053.51457；基準1053.51533(M+Na)。實施例24-化合物21將LMB(20mg，0.037mmol，1當量)溶於無水Et2O(150μL)和THF(100μL)中。在該清澈溶液中加入三乙胺(6.1μL，0.044mmol，1.2當量)和氯甲酸乙酯(4.2μL，0.044mmol，1.2當量)，N2中，室溫攪拌反應物45分鐘。2分鐘後反應混合物變混濁。將粗製活化的LMB滴加到甘氨酸(3.2mg，0.042mmol，1.1當量)在50mMNa2HPO4(100μL)，EtOH(50μL)和EtOAc(50μL)的溶液中。室溫攪拌該反應混合物1.5小時，不時添加濃的含水KOH，以保持pH約為9。用2NHCl將反應混合物酸化至pH2，然後分配在EtOAc(2mL)和飽和NH4Cl(2mL)之間。含水層用EtOAc(2mL，2×)萃取。合併的有機部分用鹽水(5mL，1×)洗滌，用Na2SO4乾燥，過濾和真空濃縮，獲得淡黃色油狀物。將該粗製產物施用於二氧化矽閃蒸柱(0.5×3cm)，用0,5和10％(+0.1％AcOH)MeOH/CH2Cl2洗脫。收集洗脫在5％MeOHZCH2Cl2中的餾份，並真空濃縮，獲得化合物21(8.3mg，0.014mmol，37％)。13CNMR(100MHz，CDCl3)δ12.23，12.95，13.27，13.51，13.71，16.06，17.88，20.78，26.47，29.07，32.13，33.15，33.45，40.73，41.47，45.32，45.61，47.40，53.73，73.30，81.49，119.16，0119.82，122.59，127.86，128.09，128.22，130.10，135.15，135.41，136.31，136.88，151.79，153.65，164.59，167.86，173.35，175.76，215.05；對C35H51N4O7Na計算的HRMS620.65511；基準620.35577(M+Na)。本領域的技術人員應理解，採用上述方法，用其它起始物質或試劑作必要修正，能製備本發明的其它化合物。生物活性本發明化合物的活性可通過測定所述化合物抑制各種腫瘤細胞系的增殖的作用來評價。表2列出了包括對LMB的比較例的結果。MCF-7，A549和SKOV-3分別是人乳房、肺和卵巢癌細胞系。NCI/ADR是耐受多種藥物的乳房癌細胞系。CCRF-CEM和CCRF-CEM/PTX是人白血病細胞系，後者是耐受紫杉醇的子系。LNCaP是前列腺癌細胞系。表2中數據表明，本發明化合物作為抗增殖劑具有和LMB類似的活性。還獲得本發明的幾種化合物對K562，一種Bcr-Abl陽性CML細胞系的細胞毒性的數據，列於表3，表3中還有對LMB的比較數據。對選擇的代表性化合物，確定靜脈給予小鼠的基於單劑量的最大耐受劑量(MTD)。數據列於表4，表4中還列出對LMB的比較數據。表5列出LMB和選擇的本發明化合物對MB49細胞(鼠類膀胱癌細胞系)的細胞毒性。此外，確定了LMB對人膀胱癌細胞兩個品系(UMUC-3和T24)的細胞毒性。EC50值分別為0.00033μM和0.0012μM。前面對本發明的詳細描述包括主要或專門涉及到本發明特定部分和方面的段落。應理解，這些描述是為了清楚和方便理解，具體特徵可能與揭示該特徵的段落更相關，在此揭示的內容包括在不同段落中的信息的適當組合。類似地，雖然在此的各種圖和說明都於本發明的具體實施方式相關，但應理解，特定的圖或實施方式的內容中揭示的具體特徵也可以在適當範圍用於另一個圖或實施方式中的內容，與另一個特徵組合，或者大體在本發明中。此外，雖然按照特定的優選實施方式具體描述了本發明，但本發明不限於這些優選的實施方式。而本發明的範圍由權利要求書限定。權利要求1.具有以下結構式I的化合物，和其藥學上可接受的鹽，酯，溶劑化物，水合物和前藥形式式中，m是0，1，2，3，4或5；R0是H，C1-C5烷基，C2-C5鏈烯基或C2-C5炔基；各R1獨立地是H，C1-C5烷基，C2-C5鏈烯基或C2-C5炔基；R2是H，芳基，環烷基，雜環部分，其中，R3是H，C1-C5烷基，C2-C5鏈烯基或C2-C5炔基，前提是，當m為0時R3不是H；R4是H，C1-C5烷基，C2-C5鏈烯基，C2-C5炔基，芳基，環烷基或雜環部分；R5是H，C1-C5烷基，C2-C5鏈烯基，C2-C5炔基，芳基，環烷基，雜環部分，或C(＝O)O(C1-C5烷基)；R6是H，C1-C5烷基，C2-C5鏈烯基，C2-C5炔基，環烷基或螢光部分；或者R5和R6與它們共同連接的氮結合形成4元，5元，6元或7元含氮雜環結構；R10是CH3或CH2OH；R11是H或OH；R12是CH3，CH2CH3或CH(OH)CH3；R13和R14中的一個是H或CH3，另一個是H或OH.2.如權利要求1所述的化合物，該化合物具有以下結構式Ia的結構。3.如權利要求2所述的化合物，其特徵在於，結構式Ia中的部分選自以下和4.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，R0是H，R10是CH3，R11是H，R12是CH3，R13是CH3，R14是H。5.如權利要求1所述的化合物，其特徵在於，R0是H，R10是CH3，R11是H，R12是CH3或CH2CH3，R13是H和R14是H。6.如權利要求1所述的化合物，R0是H，R10是CH2OH，R11是H，R12是CH3或CH2CH3，R13是CH3和R14是H。7.一種抑制目標細胞增殖的方法，該方法包括使目標細胞與有效量的權利要求1或2所述的化合物接觸的步驟。8.如權利要求7所述的方法，其特徵在於，目標細胞是人乳癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌或白血病細胞。9.如權利要求7所述的方法，其特徵在於，目標細胞是HPV相關的子宮頸癌或膀胱癌細胞。10.一種治療高增生疾病的方法，該方法包括給予患這種高增生疾病的患者治療有效量的權利要求1或2所述的化合物。11.如權利要求10所述的方法，其特徵在於，高增生疾病是乳癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌或白血病，所述患者是人。12.如權利要求10所述的方法，其特徵在於，高增生疾病是HPV相關的宮頸癌或膀胱癌。13.如權利要求12所述的方法，其特徵在於，所述化合物局部給藥。14.如權利要求10所述的方法，其特徵在於，所述化合物與另一種治療劑組合給藥。15.如權利要求14所述的方法，其特徵在於，另一種治療劑是酪氨酸激酶抑制劑。16.如權利要求15所述的方法，其特徵在於，酪氨酸激酶抑制劑是伊馬替尼。17.一種藥物組合物，包含權利要求1或2所述的化合物，以及賦形劑。18.一種抑制蛋白質通過CRM1介導過程從細胞核輸出的方法，該方法包括使所述細胞與抑制量的權利要求1或2所述的化合物接觸。19.如權利要求18所述的方法，其特徵在於，蛋白質是p53。20.如權利要求18所述的方法，其特徵在於，蛋白質是Bcr-Ab1。21.如權利要求18所述的方法，其特徵在於，抑制量為0.3-20nM。22.如權利要求1或2所述的化合物在製備用於治療高增生局部的藥劑中的用途。23.一種治療膀胱癌的方法，該方法包括給予膀胱癌的患者治療有效量的來普黴素B。24.如權利要求23所述的方法，其特徵在於，來普黴素B局部給藥。25.來普黴素在製備用於治療膀胱癌的藥劑中的用途。全文摘要結構式I的來普黴素化合物具有抗腫瘤活性，結構式I中，R文檔編號A61K31/35GK1964718SQ200580018248公開日2007年5月16日申請日期2005年6月3日優先權日2004年6月3日發明者S·D·董,D·V·桑蒂,D·C·邁爾斯,B·希恩申請人:高山生物科學股份有限公司