一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物的製作方法
2023-05-23 05:09:31 1
一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，它是由下述重量配比的生地、山茱萸有效部位製備而成：生地總環烯醚萜苷提取物2-3份、山茱萸總環烯醚萜苷提取物3-5份、山茱萸總三萜酸提取物0.5-1.5份。該組合物經STZ致C57BL/6小鼠糖尿病模型的研究結果表明，該組合物能夠明顯改善糖尿病小鼠「三多一少」症狀，降低血糖值，增加胰島素的分泌，降低血清肌酐、尿素氮、AGEs水平，增加尿肌酐和減少尿蛋白的排出，改善胰腺、腎臟、睪丸、心臟病理變化。表明該組合物具有降血糖及抗糖尿病血管病變的作用。
【專利說明】一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種中藥的有效部位組合物，特別是一種用於防治糖尿病及其血管病變的有效部位配伍組合物。
【背景技術】
[0002]近年來,糖尿病(DiabetesMellitus, DM)患病人數迅速增加,成為繼腫瘤和心腦血管疾病之後，嚴重威脅人類生命健康的第三大疾病。眾所周知，糖尿病的可怕之處並不在於其表面的「三多一少」症狀，其後續引起的併發症才是糖尿病致死致殘的主要原因，而糖尿病血管病變是糖尿病的主要併發症，其大血管病變性質為動脈粥樣硬化，主要累及主動脈、冠狀動脈等大血管，而糖尿病的微血管病變是糖尿病特有的慢性血管併發症，主要表現為腎臟、睪丸等微血管病變。糖尿病血管病變是由高血糖引起的多種代謝途徑發生異常，使血管細胞的結構功能發生改變的緣故。所以預防和改善糖尿病血管病變的關鍵在於控制血糖和保護血管細胞。糖尿病血管病變的病理機制尚不明確，主要流行的假說有非酶糖基化學說、多元醇通路學說、氧化應激學說等。目前用於治療糖尿病血管病變的化學物質主要有蛋白質非酶糖基化抑制劑(NEDI)、醛糖還原酶抑制劑(ARI)，它們都存在著相應的副作用，且尚未進入到臨床應用中來。因此從目前的治療現狀來看，西醫治療糖尿病血管病變仍然處在摸索階段，尚未發現有效治療的藥物。而中醫藥治療糖尿病及其併發症有著相當悠久的歷史，毒副作用較小且從根本上對症下藥，在治療糖尿病過程中發揮著不可替代的作用。
【發明內容】
[0003]為了克服上述現有技術的不足，本發明目的在於提供了一種用於防治糖尿病及其血管病變的有效部位配伍組合物。
[0004]本發明目的是通過以下的技術方案來實現的:
[0005]一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於它是由下述重量配比的生地、山茱萸有效部位製備而成:
[0006]生地總環烯醚萜苷提取物2-3份、山茱萸總環烯醚萜苷提取物3-5份、山茱萸總三萜酸提取物0.5-1.5份。
[0007]生地總環烯醚萜苷提取物的製備方法為:稱取生地藥材，粉碎過篩，進行3次提取，第一次加入10倍量水，提取2h，過濾得提取液I ;第二次在藥渣中加入6倍量水，提取lh，得提取液II ;第三次在藥渣中加入4倍量水，提取lh，得提取液III，合併各次提取液，濃縮至Ig生藥/mL，加醇至濃度為70 %醇沉，靜置24h，過濾，濃縮後載入DlOl樹脂，用水洗脫，收集水洗脫液，直至梓醇峰基本消失，再將收集的水洗脫液減壓濃縮，載入H103樹脂，用水洗脫，水洗脫液棄去，再用20%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮並冷凍乾燥，得生地環烯醚職苷提取物粉末。
[0008]山茱萸總環烯醚萜苷提取物的製備方法為:稱取山茱萸藥材，加水提取3次，合併水提液，濃縮後加入無水乙醇，過濾，得山茱萸水提醇沉提取液，載入大孔吸附樹脂柱，依次用蒸餾水、30 %乙醇水溶液洗脫，收集流出液，減壓濃縮，冷凍乾燥，再以甲醇溶解，加入矽膠拌樣，減壓回收甲醇至幹，得紅棕色粉末；上矽膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇溶劑系統進行等度洗脫，收集流出液，冷凍乾燥，得到山茱萸總環烯醚萜苷提取物粉末。
[0009]山茱萸總三萜酸提取物的製備方法為:稱取山茱萸藥材，加水提取3次，將水提後藥渣浙幹，用乙酸乙酯索氏抽提，旋轉蒸發回收溶劑至幹，用40%乙醇洗滌，60°C加熱水浴，抽濾，濾渣50°C烘乾，得到山茱萸三萜酸提取物粉末。
[0010]一種藥物有效部位配伍組合物在製備防治糖尿病及其血管病變藥物中的應用。
[0011]有益效果:
[0012](I)本發明生地為玄參科植物地黃(Rehmanniaglutinosa)的乾燥塊根，性甘、寒，歸心、肝、腎經，具有清熱涼血，養陰生津等功效；山茱萸為山茱萸科植物山茱萸(CornusofficinalisSieb.etZucc.)的乾燥成熟果肉，性酸、潘、微溫，歸肝、腎經，具有補益肝腎，收澀固脫的作用。生地-山茱萸藥對是中醫臨床「滋陰清熱」治法的主要方藥體現形式。生地具有清熱涼血、養陰生津功效，為治療糖尿病的「四大聖藥」之一，是臨床上治療糖尿病的常用中藥。山茱萸具有補益肝腎、澀精固脫之功效，能夠保護血管內皮，對糖尿病血管病變具有良好的療效。現代研究表明生地、山茱萸的化學成分主要有環烯醚萜苷、糖類及有機酸等成分，其中環烯醚萜苷類成分具有重要的藥理活性，其在防治糖尿病及其併發症中發揮著重要的作用。
[0013](2)本發明提供的藥物有效部位組合物經STZ致C57BL/6小鼠糖尿病模型的研究結果表明，該組合物能夠明顯改善糖尿病小鼠「三多一少」症狀，降低血糖，增加胰島素的分泌，降低血清肌酐、尿素氮、AGEs水平，增加尿肌酐和減少尿蛋白的排出，改善胰腺、腎臟、睪丸、心臟病理變化。表明該組合物具有降血糖和抗糖尿病血管病變的作用。因此本發明提供的組合物能夠作為防治糖尿病及其血管病變的藥物。
【具體實施方式】
[0014]以下通過實施例形式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例，凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。
[0015]實施例1 一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於它是由下述重量配比的生地、山茱萸有效部位製備而成:
[0016]生地總環烯醚萜苷提取物2份、山茱萸總環烯醚萜苷提取物3份、山茱萸總三萜酸提取物0.5份。
[0017]實施例2 —種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於它是由下述重量配比的生地、山茱萸有效部位製備而成:
[0018]生地總環烯醚萜苷提取物2.5份、山茱萸總環烯醚萜苷提取物4份、山茱萸總三萜酸提取物I份。
[0019]實施例3 —種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於它是由下述重量配比的生地、山茱萸有效部位製備而成:
[0020]生地總環烯醚萜苷提取物3份、山茱萸總環烯醚萜苷提取物5份、山茱萸總三萜酸提取物1.5份。
[0021]實施例4生地總環烯醚萜苷提取物、山茱萸總環烯醚萜苷提取物、山茱萸總三萜酸提取物的製備方法和含量測定:
[0022]1、稱取生地藥材500g，粉碎過篩，進行3次提取。第一次加入10倍量水，提取2h，過濾得提取液I ;第二次在藥渣中加入6倍量水，提取lh，得提取液II ;第三次在藥渣中加入4倍量水，提取lh，得提取液III，合併各次提取液，濃縮至Ig生藥/mL，加醇至濃度為70%醇沉，靜置24h，過濾。濃縮後載入DlOl樹脂，用水洗脫，收集水洗脫液，直至梓醇峰基本消失。再將收集的水洗脫液減壓濃縮，載入H103樹脂，用水洗脫，水洗脫液棄去，再用20%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮並冷凍乾燥，得生地總環烯醚萜苷提取物粉末20.38g。
[0023]生地總環烯醚萜苷提取物粉末中梓醇含量檢測:採用HPLC法測定，色譜條件為:LichrospHer C18 柱(4.6mmX 150mm, 5 μ m);流動相:乙腈-0.1% 磷酸水(I:99);流速
0.8mL.HiirT1 ;進樣量:10μ L ;柱溫30°C;檢測波長210nm。結果:梓醇基線分離良好，進樣量在0.33?1.98 μ g範圍內線性關係良好，回歸方程y = 26752x_6660，相關係數r = 0.995，方法學考察良好，結果為32.03 %。
[0024]2、稱取山茱萸藥材500g，加水提取3次，合併水提液，濃縮後加入無水乙醇，過濾，得山茱萸水提醇沉提取液。載入大孔吸附樹脂柱，依次用蒸餾水、30%乙醇水溶液洗脫，收集流出液，減壓濃縮，冷凍乾燥，再以甲醇溶解，加入矽膠拌樣，減壓回收甲醇至幹，得紅棕色粉末；上矽膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇溶劑系統進行等度洗脫，收集流出液，冷凍乾燥，得到山茱萸總環烯醚萜苷提取物粉末11.765g。
[0025]山茱萸總環烯醚萜苷提取物粉末中馬錢苷、莫諾苷含量檢測:採用HPLC法測定，色譜條件為:LichrospHer C18柱(4.6mmX 150mm, 5 μ m);流動相:乙腈-水梯度洗脫(O?12min，乙腈比例由10%增加到55%);流速ImLiin-1 ;進樣量:10 μ L ;柱溫30°C ;檢測波長240nm。結果:馬錢苷基線分離良好，進樣量在0.088?0.528 μ g與峰面積呈良好線性關係，回歸方程為Y = 1E+06X+1946，相關係數為r = 0.999，方法學考察良好；莫諾苷基線分離良好，進樣量在0.088?0.528 μ g與峰面積呈良好線性關係，回歸方程為Y =1E+06X+4379，相關係數為r = 0.998，方法學考察良好。含量測定結果為55.77%。
[0026]3、稱取山茱萸藥材500g，加水提取3次，將水提後藥渣浙幹，用乙酸乙酯索氏抽提，旋轉蒸發回收溶劑至幹，用40%乙醇洗滌，60°C加熱水浴，抽濾，濾渣50°C烘乾，得到山茱萸總三萜酸提取物粉末2.925g。
[0027]山茱萸總三萜酸提取物粉末中熊果酸、齊墩果酸含量檢測:採用ELSD法測定，色譜條件為:weIchrom-C18 柱(250mmX4.6mm, 5 μ m);流動相:MeOH-1 % NH4AC(85: 15);漂移管溫度90°C，氣流2.4L/min ;柱溫:30°C ;流速:0.8ml/min ;進樣量:20μ I。結果:熊果酸基線分離良好，進樣量在60.00?300.0Oyg範圍內線性關係良好，回歸方程為y =
1.0913X+4.3929，相關係數r = 0.9999，方法學考察良好；齊墩果酸基線分離良好，進樣量在15.00?75.00 μ g範圍內線性關係良好，回歸方程為y = 0.9885x+4.4635，相關係數為r = 0.9999，方法學考察良好。含量測定結果為52.89%。
[0028]實施例5生地山茱萸有效部位配伍組合物對糖尿病小鼠的作用
[0029]實驗藥品及試劑:生地山茱萸有效部位配伍組合物，按照上述實施例方法分別提取生地總環烯醚萜苷提取物、山茱萸總環烯醚萜苷提取物、山茱萸總三萜酸提取物，並按照生地總環烯醚萜苷提取物2.5份、山茱萸總環烯醚萜苷提取物4份、山茱萸總三萜酸提取物1份進行配比。鏈脲佐菌素(STZ)，美國Sigma公司；二甲雙胍，中美上海施貴寶製藥有限公司。血清胰島素Elisa試劑盒，B1science公司；血清AGEsElisa試劑盒，B1science公司；血清肌酐Elisa試劑盒,B1science公司；血清尿素氮Elisa試劑盒,B1science公司；血糖試紙，羅氏製藥有限公司。
[0030]實驗動物:C57BL/6J雄性小鼠，揚州大學比較醫學中心，SCXKK蘇2012-0004。
[0031]實驗儀器:代謝籠，上海瑞曼信息科技有限公司；分析天平，上海HANGPING公司；層流架，蘇州市蘇杭科技器材有限公司；純水儀，德國MILLIP0RE公司。酶標儀，美國B1TeLK 公司。
[0032]實驗過程:選取6周齡大的C57BL/6J雄性小鼠，體重在18_22g，先適應性餵養I周，然後開始造模，造模前禁食12h，於第I天、第4天以STZ100mg/kg的劑量腹腔注射，在第8天測量小鼠空腹血糖，若空腹血糖值大於15mmol/L，即作為糖尿病造模成功。此後將糖尿病小鼠隨機分組，並進行灌胃給藥，每天I次，連續8周。
[0033]1、對血糖和血清胰島素、AGEs、肌酐、尿素氮的影響
[0034]於給藥前、給藥4周和8周，分別測量小鼠空腹血糖值。於8周末摘眼球取血，離心取血清測定胰島素、AGEs、肌酐、尿素氮水平。
[0035]表1對糖尿病小鼠血糖的影響0- 士S)
[0036]
【權利要求】
1.一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於它是由下述重量配比的生地、山茱萸有效部位製備而成: 生地總環烯醚萜苷提取物2-3份、山茱萸總環烯醚萜苷提取物3-5份、山茱萸總三萜酸提取物0.5-1.5份。
2.如權利要求1所述的一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於所述的生地總環烯醚萜苷提取物的製備方法為:稱取生地藥材，粉碎過篩，進行3次提取，第一次加入10倍量水，提取2h，過濾得提取液I ;第二次在藥渣中加入6倍量水，提取lh，得提取液II ;第三次在藥渣中加入4倍量水，提取lh，得提取液III，合併各次提取液，濃縮至Ig生藥/mL，加醇至濃度為70%醇沉，靜置24h，過濾，濃縮後載入DlOl樹脂，用水洗脫，收集水洗脫液，直至梓醇峰基本消失，再將收集的水洗脫液減壓濃縮，載入H103樹月旨，用水洗脫，水洗脫液棄去，再用20%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮並冷凍乾燥，得生地總環烯醚萜苷提取物粉末。
3.如權利要求1所述的一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於所述的山茱萸總環烯醚萜苷提取物的製備方法為:稱取山茱萸藥材，加水提取3次，合併水提液，濃縮後加入無水乙醇，過濾，得山茱萸水提醇沉提取液，載入大孔吸附樹脂柱，依次用蒸餾水、30%乙醇水溶液洗脫，收集流出液，減壓濃縮，冷凍乾燥，再以甲醇溶解，加入矽膠拌樣，減壓回收甲醇至幹，得紅棕色粉末；上矽膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇溶劑系統進行等度洗脫，收集流出液，冷凍乾燥，得到山茱萸總環烯醚萜苷提取物粉末。
4.如權利要求1所述的一種防治糖尿病及其血管病變的藥物有效部位配伍組合物，其特徵在於所述的山茱萸總三萜酸提取物的製備方法為:稱取山茱萸藥材，加水提取3次，將水提後藥渣浙幹，用乙酸乙酯索氏抽提，旋轉蒸發回收溶劑至幹，用40%乙醇洗滌，60°C加熱水浴，抽濾，濾渣50°C烘乾，得到山茱萸總三萜酸提取物粉末。
5.如權利要求1所述的一種藥物有效部位配伍組合物在製備防治糖尿病及其血管病變藥物中的應用。
【文檔編號】A61P9/00GK104173568SQ201410446080
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年9月3日 優先權日:2014年9月3日
【發明者】許惠琴, 狄留慶, 李偉, 趙騰斐, 王慧珠, 呂高虹 申請人:南京中醫藥大學