裙帶菜凝集素的應用的製作方法

2023-05-22 09:08:36

裙帶菜凝集素的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開一種裙帶菜凝集素的應用，它利用裙帶菜凝集素來提高蝦夷馬糞海膽的免疫力，相比於傳統的其他免疫促進劑，其毒副作用更小，它通過提高水產動物免疫相關酶的活性，來達到提高機體免疫功能的目的，通過促進細胞的對外源物質的吞噬作用，來達到降低蝦夷馬糞海膽病害發生機率的效果。可以說本發明為目前裙帶菜凝集素作為水產動物免疫增強劑提供理論依據，以期為水產養殖業的綠色發展開闢一條新道路。
【專利說明】裙帶菜凝集素的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種裙帶菜凝集素的應用，特別是一種裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應用。
【背景技術】
[0002]奸夷馬糞海膽(51 trongylocen tro tus in termedi),又稱中間球海膽，棘皮動物門，遊走亞門，海膽綱。蝦夷馬糞海膽原產於日本北海道和俄羅斯的遠東等地沿海，由於其性腺色澤好，味甜，在國際市場上很受歡迎，是日本的海膽類中經濟價值最高的種類之一。該種1989年由大連水產學院從日本引入，其後對其人工育苗及增殖等進行了研究，國內每年的種苗生產量已達億枚以上，目前已成為我國主要的養殖種類。其出口價格高於我國的其他固有的經濟海膽類，發展前進良好。隨著海膽養殖規模的擴大，病害問題也日趨嚴重，這些疾病大都具有傳染性，所以一旦感染就會造成很大的損失。其常見的病害有以下幾種:
(I)海膽禿斑病
病原體為革蘭氏陰性桿菌。患病海膽的殼上首先出現紫黑色斑點，繼之棘開始脫落，而後死亡。對該病的防治一般採用四環素，大環內酯類藥物等。四環素等的長期使用不僅會使病原菌產生抗性和耐藥性，而且這些藥物的殘留會對人體造成潛在危害，可引起溶血性貧血、多發性神經炎、眼部損害和急性肝壞死等疾病。目前已被歐盟等國家禁用。
[0003](2)海膽黑嘴病
病原體為芽孢桿菌。症狀為圍口膜變黑，棘刺脫落後不久死亡。該病對常用抗生素如磺胺甲基異噁唑，複方新諾明，頭孢噻肟等，比較經濟的抗生素如土黴素，青黴素，氯黴素等卻無作用。此藥的長期添加，已發現對水產養殖動物的肝、腎能造成很大的破壞，引起水產養殖動物肝臟腫大、腹水，造成水產動物的死亡。如果長期使用該類藥，則會造成耐藥性。導致腸球菌廣為流行，嚴重危害人類健康。歐盟等禁用。
[0004](3)海膽吸蟲病
吸蟲主要寄生於海膽的生殖腺，管足基部，口器的肌肉中，嚴重影響海膽的攝食，目前沒有對該病有效防止的藥物。
[0005]而如果能夠有意識的提高海膽本身的免疫性，則可以在一定程度上防止發生上述病害，或者將上述病害限制在相對較小的範圍內，現在理論上已經成熟的免疫促進劑有以下幾種:
(1)脂多糖(LPS)
使用方法:脂多糖作為免疫刺激劑時一般採用注射或者同飼料混合後投餵海膽，注射劑量大約為100-500ug/只。投餵量為7.5和1.5 mg/kg。
[0006]存在問題及缺陷:影響其作用效果的因素例如免疫途徑、製劑的生產方法以及怎樣同其他
物質交互作用等都存在技術難題，目前脂多糖的提取方法多用於科學研究，並未涉及工業化生產，因此，在水產養殖中沒有探究出生產高效、價格低廉的生產方式，也使其成為水產養殖業發展的瓶頸。
[0007](2)中草藥免疫增強劑
使用方法:在選用中草藥時一般選擇多種具有不同藥理作用的，組成中藥複方製劑，進而可以獲得藥效互補，療效增強的作用。
[0008]存在問題及缺陷:雖然已經有實驗證明中草藥單種成分可以提高海膽非特異性免疫功能，這些單個成分如果以複合物形態存在，會不會在養殖中產生其他毒副作用，這個是未知的，所以在海膽養殖業中沒有得到有效利用。
[0009](3)靈芝多糖和葡聚糖
近年的研究也有將這些多糖作為免疫促進劑的，通過提高過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力以及增加海膽吞噬細胞的數量來增強免疫能力，但是均以代價太高，不適用於水產養殖業的集約化和規模化生產，而沒有得到大範圍的使用。
[0010]因此現在需要一種可以廣泛應用於海膽養殖的新型免疫力增強劑。

【發明內容】

[0011]本發明是為了解決現有技術所存在的上述不足，提出一種裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應用。
[0012]本發明的技術解決方案是:一種裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應用。
[0013]本發明同現有技術相比，具有如下優點:
本發明所公開的方法，利用裙帶菜凝集素來提高蝦夷馬糞海膽的免疫力，相比於傳統的其他免疫促進劑，其毒副作用更小，它通過提高水產動物免疫相關酶的活性，來達到提高機體免疫功能的目的，通過促進細胞的對外源物質的吞噬作用，來達到降低蝦夷馬糞海膽病害發生機率的效果。可以說本發明為目前裙帶菜凝集素作為水產動物免疫增強劑提供理論依據，以期為水產養殖業的綠色發展開闢一條新道路。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1裙帶菜凝集素凝集活性。
[0015]稀釋倍數從左至右依次為27，28，29，空白對照，注:初始濃度為 0.43 mg/ml。
[0016]圖2裙帶菜凝集素對蝦夷馬糞海膽吞噬細胞吞噬率的影響。
[0017]圖3裙帶菜凝集素對蝦夷馬糞海膽吞噬指數的影響。
【具體實施方式】
[0018]本發明提供了裙帶菜凝集素在提高蝦夷馬糞海膽體液免疫力方面的應用，測定了各個溫度梯度下蝦夷馬糞海膽體腔液中吞噬細胞吞噬率的變化，並利用外源性注射的方式添加裙帶菜凝集素，檢測注射後吞噬細胞的吞噬活性變化。
[0019]注射的裙帶菜凝集素濃度分別為1.13 mg/ml>0.57mg/ml、0.28mg/ml,然後分別收集注射後5d，IOd，12d，14d，16d，18d的體腔液樣品，測定吞噬率和吞噬指數。[0020]動物重量(g) X0.219=總體腔液(ml) X2=注射的凝集素的微克數 吞噬率(PI)=吞噬酵母的吞噬細胞數/100個吞噬細胞X 100%
吞噬指數(PR)=吞噬酵母總數/100個吞噬細胞 實驗結果如下:
不同溫度不同時間對吞曬細胞的吞曬率的影響
在吞噬反應開始15、30、60 min後測定不同溫度下吞噬細胞的吞噬率,從表2可看出吞噬率隨溫度的升高而增加。在15 min和30min時，30°C組吞噬率最高，60 min時由於30°C組細胞發生凝集而無法計數，其他3組以25 °C最高。在30°C時吞噬反應開始後的30 min,吞嗤率最聞(表1)。
[0021]表1不同溫度不同時間對吞曬細胞的吞曬率(%)的影響
【權利要求】
1.一種裙帶菜凝 集素在提高蝦夷馬糞海膽免疫力的應用。
【文檔編號】A61P37/04GK103656619SQ201310580567
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月19日 優先權日:2013年11月19日
【發明者】李丹彤, 張穎, 常亞青, 項揚, 宋堅 申請人:大連海洋大學, 李丹彤