黑麴黴一次發酵生產獲得多酶種高酶活複合酶的製作方法

2023-05-12 14:29:01 1

專利名稱：黑麴黴一次發酵生產獲得多酶種高酶活複合酶的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物化學和酶工程領域。
飼用酶製劑是飼料添加劑中新崛起的一員。自1975年美國首次使用微生物飼用酶製劑以來已經有了長足的發展。飼用酶製劑的開發和應用是生物技術在動物營養和飼料工業中應用最成功的例子，它在提高動物生產性能和飼料飼料利用率，開發新的飼料資源，生產天然、無毒、無殘留的天然畜產品以及環境保護等多方面，逐漸顯示出巨大的潛力。發達國家的飼料已有80％以上使用了酶製劑。我國飼料工業起步晚，但發展很快，年產約7000萬噸，市場空間很大。
目前國外生產飼用複合酶製劑以及國內少數單位是以液體深層發酵幾種單純酶製劑按一定配方復配、稀釋而成，酶系不全，成本高，難以滿足飼料成分複雜的需要。
本發明的目的，就是提供生產成本低、產品的酶系全、酶活高、符合環保要求的綠色飼料添加劑的方法。
本發明的優點1.採用經誘變篩選獲得的優秀黑麴黴單一菌種(Aspergillus nigerHQ978)；保藏號為CGMCC NO0696。保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地點中國、北京、中關村，保藏時間2002年1月23日。
2.應用固體發酵機厚層通風發酵，該機具有自動調溫、攤括、翻料、出料以及無菌加溼設備；不具備發酵機時也可用淺盤發酵方式生產。
3.發酵培養基是以麩皮、豆粕為主體和少量無機鹽，其原料來源廣、價格較低的農副產品，生產成本較低；4.一次發酵即可獲得多酶種，高酶活的發酵曲料，經低溫烘乾、粉碎，製備出複合酶飼料添加劑；5.生產過程不產生廢水廢渣，造成二次環境汙染。
具體實施步驟一、菌種製備菌種為黑麴黴HQ978。保藏號為CGMCC NO0696菌種製備分為一、二、三級菌種製備1.一級菌種 培養基為常規馬鈴薯蔗糖瓊脂斜面，劃線法接種，28±1℃培養96～120h，2.二級菌種 培養基為麩皮和豆粕，(8∶2)，每個300ml玻璃瓶裝10g。料∶水為1∶0.6，121℃滅菌30min，冷卻，接入一級種孢子懸液，每瓶5ml，28±1℃培養72～74h。
3.三級菌種 培養基同二級。方法同本公司發明專利「微生物菌種擴大培養的簡易容器」，即，每個22×30cm的聚丙烯塑膠袋裝入經潤水的培養基90g，121℃滅菌30min，冷卻，接入二級種子孢子懸液，每袋15ml，29～30℃恆溫培養，24h倒袋一次，即將結塊抖捏成小塊，繼續培養；48～60h各翻袋一次。一般培養72～75h，大量黑孢子成熟，即可供發酵生產使用或冷藏備用。
二、發酵生產1.發酵機 固體通風發酵機，每次投料(幹基計)1000kg。
2.發酵培養基配製 培養基為麩皮60～80％，豆粕15～35％，硫酸銨3～4％，磷酸二氫鉀1～2％，自然PH，先將麩皮和豆粕拌勻，把硫酸銨和磷酸二氫鉀溶入相當於乾料70％的自來水中，均勻噴入物料中，高壓滅菌40～50min，冷卻備用。
3.接種 以相當於培養基幹料50％的無菌水洗滌60～80袋的三級菌種(相當於乾料0.3～0.8％)的孢子，均勻噴入滅菌過的發醇培養基。
4.發酵 將接好菌種的物料投入經過空罐滅菌的發酵罐進行培養。設定溫度29～30℃，一般培養至24h左右，菌體生長良好結塊，進行第一次翻料，以後視菌體生長結塊情況而進行第二、三次翻料，以保持3～5cm的團塊為宜。在第一、二次翻料時，若水分＜30％時可酌情噴入無菌水，有利於產酶，發酵時間一般控制在60～62h結束髮酵。
三、烘乾和粉碎出罐後，曲料經破碎機破碎，低溫烘乾，一般＜45℃烘乾到物料含水分8～10％即可，然後粉碎，檢測，得成品。產品的酶種和酶活單位酸性蛋白酶10000～11000u/g、纖維素酶18000～20000u/g、木聚糖酶60000～80000u/g、β-葡聚糖酶50000～60000u/g、果膠酶18000～20000u/g、以及澱粉酶、植酸酶等。
權利要求
1.一種複合酶飼料添加劑，其特徵是黑麴黴(Aspergillus nigerHQ978)菌種，經一次固態發酵即獲得多酶種高酶活的產品酸性蛋白酶10000～11000u/g、纖維素酶18000～20000u/g、木聚糖酶60000～80000u/g、β-葡聚糖酶50000～60000u/g、果膠酶18000～20000u/g以及澱粉酶、植酸酶等。該產品適用於畜、禽、水產等養殖動物飼料添加劑，一般添加量為0.1％。該菌種保藏號為CGMCC NO0696。
2.根據權利要求(1)所述的複合酶飼料添加劑生產工藝包括菌種製備工藝和發酵工藝；
3.根據權利要求(2)所述的菌種製備包括一、二、三級菌種，逐級放大培養菌種的工藝一級菌種 培養基為常規馬鈴薯蔗糖瓊脂斜面，劃線法接種，28±1℃培養96-120h。二級菌種 培養基為麩皮和豆粕，(8∶2)，每300ml玻璃瓶裝10g。料∶水為1∶0.6，121℃滅菌30min，冷卻，接入一級種孢子懸液，每瓶5ml，28±1℃培養72-74h。三級菌種 培養基同二級。方法同本公司發明專利「微生物菌種擴大培養的簡易容器」，即，每個22×30cm的聚丙烯塑膠袋裝入經潤水的培養基90g，121℃滅菌30min，冷卻，接入二級種子孢子懸液，每袋15ml，29-30℃恆溫培養，24h倒袋一次，即將結塊抖捏成小塊，繼續培養；48-60h各翻袋一次。一般培養72-75h，大量黑孢子成熟，即可供發酵生產使用或冷藏備用。
4.根據權利要求(2)所述的發酵工藝發酵培養基為麩皮60～80％、豆粕為15～35％，硫酸銨3～4％，磷酸二氫鉀1～2％，自然PH值；採用固體發酵機厚層通風發酵或淺盤發酵方式生產；培養溫度28～30℃，發酵時間55～60h。
全文摘要
「黑曲酶一次發酵生產獲得多酶種高酶活複合酶」發明屬於生物化學和酶工程領域。經誘變篩選得到一種適用於固態發酵的優良菌種——黑麴黴HQ978。利用麩皮、豆粕等農副產品為主體的發酵培養基,應用固體發酵機厚層通風發酵,即獲得高酶活單位的酸性蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、β－葡聚糖酶、果膠酶等複合酶。該產品為畜、禽、水產等養殖動物的綠色飼料添加劑。
文檔編號C12N9/00GK1374402SQ02104870
公開日2002年10月16日 申請日期2002年2月26日 優先權日2002年2月26日
發明者黃文彩, 戚秀芳 申請人:東莞市豪發生物工程開發有限公司