高效降解多環芳烴和苯系有機物的分枝桿菌16f及其應用的製作方法

2023-05-13 00:04:11

專利名稱:高效降解多環芳烴和苯系有機物的分枝桿菌16f及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及微生物學領域及環境生物技術領域：
，具體地說，涉及一株高效降解多環芳烴和苯系有機物的分枝桿菌16F及其應用。
背景技術：
多環芳烴(PAHs)是指兩個或兩個以上苯環以稠環和非稠環形式相連接的有機化合物。PAHs在環境中普遍存在，其極低的水溶性、穩定的環狀結構是造成這類化合物持久性的主要原因。人類及動物癌症病變有70%-90%是環境中化學物質引起的，而PAHs則是環境致癌化學物質中最大的一類。由於這類化合物具有致癌、致畸和致突變的特性，對人類健康和生態環境均具有潛在的危險而引起世界各國的普遍重視。近幾十年來，環境中的多環芳烴(PAHs)含量不斷增加，美國環保局已經列出了 16種PAHs作為環境汙染的優先控制汙染物(Keith&Telliard，1979)，我國政府也將7種PAHs列入中國環境優先汙染物黑名單。因 此，淨化與修復PAHs汙染的環境已成為研究的熱點。
儘管PAHs能夠通過化學氧化、光解和揮發等途徑降解和轉移，但是微生物降解是影響自然界中PAHs持久性的最關鍵因素。生物修復被認為是目前去除環境中有機物的最經濟有效的方法。一般來說，隨著多環芳烴苯環數量的增加，其生物降解速率降低。因此，低分子量的多環芳烴在環境中能較快被降解，在環境中存在的時間較短，而高分子量的多環芳烴因水溶性更低，吸附性更強，從而降低了生物可利用性，較長期存在於環境中。目前關於微生物降解PAHs的研究，主要集中於PAHs降解微生物的篩選、分離與純化，目前分離到的降解微生物主要有分枝桿菌(Mycobacterium)、紅球菌屬(Rhodococcus)Jg單胞菌屬(Pseudomonas)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)、微球菌屬(Micrococcus)、新鞘氨醇桿菌屬(Novosphingomonas)、氣單胞菌屬(Aeromonas)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、諾卡氏菌屬(Nocardioides)、海桿菌屬(Marinobacter)、弧菌屬(Vibrio)、拜葉林克氏菌屬(Bei jernckia)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、藍細菌(Cyanobacteria)、解環菌屬(Cycloclastieus)等。其中分枝桿菌是一類非常重要的降解細菌。Mycobacteriumvanbaalenii PYR-I 是第一株降解花的分枝桿菌(Hetikamp, 1988 ；Heitkamp 等,1988)。之後，研究人員又發現許多不同的分枝桿菌，如Mycobacterium sp. strain BBl (Boldrin等，1993)、Mycobacterium sp. RJGII-135 (Schneider 等，1996)、Mycobaterium sp. KR20(Rehmann 等，1998)、Mycobaterium sp. API (Vila 等，2001)及 Mycobaterium sp. JLS(Miller 等，2004)>Mycobacterium flavescens (Dean-Ross, 1996)>Mycobaterium sp. KMS(Chun 等，2012)等。其中 Mycobacterium vanbaalenii PYR-I^Mycobacterium sp. JLS 和Mycobaterium sp. KMS已經完成全基因組的測序工作(http://img. jgi. doe. gov )。美國Cerniglia實驗室對Mycobacterium vanbaalenii PYR-I的研究最為深入，率先闡明了花、熒蒽的完整代謝途徑和不同多環芳烴降解的代謝網絡(Kim等，2006 ;Kweon等，2007 ；Kweon等，2011)。
苯系化合物是一類易揮發的單環芳香類化合物，包括苯、甲苯、乙苯、二甲苯等，簡稱為BTEX，BTEX主要存在於原油和石油產品中，廣泛應用於農藥、化纖紡織、塑料化工等行業，是環境中分布較廣的一類有毒化合物。與多環芳烴類似，BTEX也具有「三致效應」，被許多國家列入優先控制汙染物，且已被確認為強致癌物質。研發廢水、廢氣中BTEX的汙染控制技術顯得十分重要和迫切。
目前，微生物降解技術是降解苯系有機物的最有效方法之一。採用微生物法處理環境中BTEX等有毒化合物的關鍵之一便是獲得具有高效降解BTEX能力的優良菌株。人們已經分離出了多株BTEX降解菌，主要包括假單胞菌屬(Pseudomonas)、紅球菌屬(Rhodococcus)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、諾卡氏菌屬(Nocardioides)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、羅爾斯通氏菌屬(Ralstonia)、產喊桿菌屬(Alcaligenes)和Cladophialophora等。但是這些已有的降解菌株僅能降解某一種或兩種苯系化合物，降解底物範圍有限，且大多數菌株的降解效率有待進一步提高。
由上可知，目前用於多環芳烴或苯系有機物汙染修復的菌劑多是針對兩類汙染物中的一種或多種，利用單一細菌或真菌以及混合菌系進行降解。比如在「一種多環芳烴降解·菌劑的製備方法(公開號CN101423807A)」中，利用新型菌株Mycobacterium sp. SN12，經過7天，對芘和菲的降解率分別為91. 5%和95. 2%。在「一種用於多環芳烴汙染土壤修復的固定化細菌製備方法(公開號CN 101177679A)」中，42天後微球菌對芘和苯並芘的降解率分別為30. 7%和25. 7%，動膠桿菌對芘和苯並芘的降解率分別為31. 4%和21. 9%。而在「具有降解苯系化合物能力的分枝桿菌及其應用(公開號CN 101624576A)」中，菌株Mycobacteriumcosmeticum byf-4在35h時，甲苯被降解完全，苯、乙苯、鄰二甲苯先後在41h、45h、50h被降解完。事實上，土壤或者水體等環境中的汙染尤其是工業場地的環境汙染常常表現出明顯的複合汙染特徵。因此，單獨使用現有菌劑中的任何一種，往往很難奏效。而對PAHs和BTEX兩類汙染物均能實現高效降解的菌株較鮮見。

發明內容
本發明的目的是提供一種同時具有降解多種多環芳烴和單環苯系有機物的分枝桿菌(Mycobacterium sp. ) 16F 及其應用。
為了實現本發明目的，本發明的一株高效降解多環芳烴和苯系有機物的分枝桿菌(Mycobacterium sp. ) 16F,分離自北京焦化廠重度汙染土壤中，經過人工富集培養、分離純化獲得，該菌經Biolog和16SrDNA雙重鑑定為分枝桿菌屬(Mycobacterium sp. ), 16S rDNA的GenBank登錄號為JN966739，菌株命名為16F。微生物學特性革蘭氏染色陽性，短杆狀，無芽孢，生物學特性為接觸酶、氧化酶陽性，菌落呈鮮黃色、圓形、邊緣整齊、表面光滑、較溼潤、不透明，專性需氧，24°C至37°C生長良好，可利用麥芽糖、乙酸、龍膽二糖碳源生長，最適生長pH為6. 5-7. 55,對50mg/L的氨節青黴素具有抗性。該菌株現已保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，郵編100101，保藏日期2012年07月18日，保藏編號=CGMCC No. 6367。
本發明還提供含有所述分枝桿菌16F的菌劑。
本發明還提供所述分枝桿菌16F或所述菌劑在降解多環芳烴和/或單環苯系有機物中的應用。所述多環芳烴為芴、萘、蒽、苊、苊烯、硫芴、咔唑、屈、菲、芘、熒蒽、苯並熒蒽、苯並蒽或苯並芘等中的一種或多種，所述單環苯系有機物為苯、甲苯、乙苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、苯酚、水楊酸或鄰苯二酚等中的一種或多種。
前述的應用，其是將分枝桿菌16F的菌懸液加入到含有多環芳烴和/或單環苯系有機物的基礎鹽培養基中，在30°C 150rpm避光條件下搖床培養，進行底物降解。其中，分枝桿菌 16F 的菌懸液濃度為 3. 5 X IO8 4. 5 X 108CFU/mL,優選 4. I X 108CFU/mL。
所述基礎鹽培養基配方為硫酸銨2. 5g，硫酸亞鐵O. 28mg，磷酸氫二鈉I. 5g，磷酸二氫鉀I. 36g，硫酸鎂O. 25g，氯化鈣10. 7mg,氯化鈉O. 5g，氯化鐵O. 004g, I. OmL微量金屬液，ImL維生素複合溶液，加水至IOOOmL並將pH控制在7. 2-7. 4，搖勻後作為液體培養基備用。其中微量金屬液的組成為=CoCl2 · 6H2035mg, CuCl2O. 20mg, Η3Β036· Omg, MnCl2 · 4H2025mg, Na2MoO4 · 2H20 3. Omg, NiCl2 · 2H20 2. Omg, ZnCl22. 5mg，加水至 IOOOmL ;維生素複合溶液的組成為:維生素B61. Omg,維生素H O. 5mg,維生素C I. 5mg,加水至IOOOmL0
分枝桿菌16F的功能特性如下可以在好氧條件下以芴、萘、蒽、苊、菲、芘和苯並花為唯一碳源和能源生長並降解。例如，當荷、花、苯並花的初始濃度分別為50m g/L、IOOmg/L和12. 5mg/L時，7天、5天和15天後的降解去除率分別為91. 3%,92. 9%和48. 8%，並且還能利用苯、間二甲苯、甲苯、水楊酸、鄰苯二酹等其他多種芳香有機物，對初始濃度為200ppm的苯、200ppm的甲苯和IOOppm的二甲苯，在5天、4天和3天後的降解去除率分別為99. 9%，99. 6%和90%。對鏈黴素、利福平、四環素、卡那黴素等抗生素敏感，對老化土壤中的混合多環芳烴降解效果較好，21天對總多環芳烴的去除率達到了 76. 45%。
本發明進一步提供用於擴增所述分枝桿菌16F 16SrDNA的引物對，包括上遊引物5』 -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3』 和下遊引物 5』 -GGTTACCTTGTTACGACTT-3』。
本發明的分枝桿菌(Mycobacterium sp. ) 16F可以高效、安全、快速地降解多環芳烴和單環苯系化合物，其可在好氧條件下以芴、萘、蒽、苊、菲、芘和苯並芘為唯一碳源和能源生長並降解，並且還能利用苯、間二甲苯、甲苯、水楊酸、鄰苯二酚等其他多種芳香有機物。對鏈黴素、利福平、四環素、卡那黴素等抗生素敏感，對老化土壤中的混合多環芳烴和水體中的單環苯系有機物降解效果較好，可以用於芳香烴類有機複合汙染的水土環境的修復與淨化，對於促進可持續發展具有重要意義，具有廣闊的應用前景。
本發明提供的同時具有降解多種多環芳烴和單環苯系有機物的分枝桿菌16F，為開展多種高環多環芳烴和苯系有機物降解的機理研究和多環芳烴複合汙染水土環境修復技術的構建提供了新的種質資源，並為研發複合汙染土壤的修復技術體系提供了科學依據。


圖I為本發明實施例2中菌株16F降解初始濃度為IOOppm的芘紫外掃描圖。
圖2為本發明實施例2中菌株16F針對初始濃度為50ppm的芘的降解曲線。
圖3為本發明實施例2中菌株16F針對初始濃度為200ppm的芘的降解曲線。
圖4為本發明實施例2中不同金屬離子對菌株16F降解率的影響。
圖5為本發明實施例2中菌株16F針對初始濃度為50mg/L的芴的降解曲線。
圖6為本發明實施例2中菌株16F針對初始濃度為12. 5mg/L的苯並芘的降解曲線。
圖7為本發明實施例4中菌株16F針對模擬汙染土壤(芘的初始濃度為100mg/L)的降解曲線。
圖8為本發明實施例5中菌株16F針對老化土中16種多環芳烴的去除率。
具體實施方式
以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用原料均為市售商品。
實施例I同時具有降解多種多環芳烴和單環苯系有機物的分枝桿菌(Mycobacterium sp. ) 16F 的分離純化
具體步驟如下
(I)採集北京焦化廠重度汙染的土壤樣品，將其通過8目網篩後立即放置於4°C冰箱中保存備用。
(2)向體積為500mL的開口玻璃瓶中加入2001^濃度為5(^/1芘的丙酮混合溶液，超淨臺中放置4小時除去丙酮，或將玻璃瓶開口放置24小時自然風乾。
(3)向步驟(2)中開口玻璃瓶中加入200-300mL基礎鹽培養基，在轉速為120r/min的條件下攪拌30min,然後加入步驟(I)中的土壤50g ;然後置於溫度為25_30°C轉速為120r/min的搖床中攪拌富集馴化培養14天,然後搖勻後均勻吸取10毫升富集液轉入新的玻璃瓶中，以上操作連續轉接5次。玻璃瓶中同樣加有同等濃度的芘和200-300mL基礎鹽培養基，其中基礎鹽培養基的組成為硫酸銨2. 5g，硫酸亞鐵O. 28mg，磷酸氫二鈉I. 5g，磷酸二氫鉀I. 36g，硫酸鎂O. 25g，氯化鈣10. 7mg,氯化鈉O. 5g，氯化鐵O. 004g, I. OmL微量金屬液，ImL維生素複合溶液，加水至IOOOmL並將pH控制在7. 2-7. 4，搖勻後作為液體培養基備用。其中微量金屬液的組成為=CoCl2 · 6H2035mg, CuCl2O. 20mg, Η3Β036· Omg, MnCl2 · 4H2025mg, Na2MoO4 · 2H20 3. Omg, NiCl2 · 2H20 2. Omg, ZnCl22. 5mg，加水至 IOOOmL ;維生素複合溶液的組成為:維生素B61. Omg,維生素H O. 5mg,維生素C I. 5mg,加水至IOOOmL0
(4)向體積為IOOOmL的錐形瓶內加入600mL基礎鹽培養基、O. 6mL微量金屬液、
O.6mL維生素複合溶液，搖勻後作為液體培養基備用。
(5)向體積為150mL的錐形瓶內加入50mL按步驟(4)配製的液體培養基和O. 9g瓊脂，然後在溫度為121 °C的高壓鍋中滅菌20分鐘，在室溫下冷卻至65-70 °C時，在超淨工作檯中將其倒入直徑9cm的培養皿中，將該培養皿在超淨工作檯中半開蓋放置6小時，以除去培養基表面多餘的水分。
(6)在超淨工作檯中向步驟(5)中的培養皿中加入O. 04mL濃度為50g/L芘的丙酮溶液，來回傾斜轉動培養皿，同時用玻璃棒均勻塗布，使芘的丙酮溶液能夠均勻分布在培養基表面上，該培養皿在超淨工作檯中半開蓋放置12小時，以除去培養基表面的丙酮。
(7)在超淨工作檯中吸取ImL步驟(3)得到的多環芳烴富集液，用無菌水依次稀釋至IOmUlOOmL和IOOOmL,然後從中分別吸取LOmL加入步驟(6)製備好的培養皿中，用無菌玻璃棒塗布培養皿使接種有混合菌群的培養基稀釋溶液均勻分布。將培養皿放入溫度為30°C的培養箱中培養觀察，7-15天後便可發現有明顯的菌落出現。
(8)在超淨工作檯中挑取步驟(7)培養皿中的菌落，進行重複分離，初步分離純化得到可能降解多環芳烴的純菌種。
(9)多環芳烴降解菌的復篩將初步分離純化的各菌株接種於Luria-Bertani培養基中，培養至0D_約為O. 6，離心去上清，用基礎鹽液體培養基洗滌並懸浮菌體；Luria-Bertani培養基(以下簡稱為LB培養基)的組成為胰蛋白腖IOg,酵母抽提物5g,氯化鈉5g，加蒸餾水至lOOOmL，pH 7. 2-7. 4，121 °C溼熱滅菌20min。基礎鹽培養基組成與步驟(3)中成分相同。
(10)吸取步驟(9)中的菌懸液I. OmL接入裝有以芘為唯一碳源的基礎鹽液體培養基中，以芘為唯一碳源的基礎鹽液體培養基組成如下在滅菌三角瓶中加入50g/L芘的丙酮溶液，超淨工作檯內使丙酮溶液揮發完全，再加入無機鹽液體培養基，使多環芳烴終濃度為終濃度為100mg/L ;30°C，150rpm避光搖床培養10天，設置不加菌懸液的作為對照，採用GC-MS測定菌株的降解效果，從而復篩出能降解多環芳烴的降解菌。該菌經Biolog和16S rDNA雙重鑑定為分枝桿菌屬(Mycobacterium sp. ), 16S rDNA的GenBank的登錄號為JN966739，菌株命名為16F。
實施例2分枝桿菌16F的降解實驗(I)在滅菌三角瓶中加入50g/L芘的丙酮溶液，超淨工作檯內使丙酮溶液揮發完全，再加入無機鹽液體培養基，使多環芳烴終濃度為終濃度為100mg/L，接入1%體積含量的Mycobacterium sp. 16F菌懸液,對照為不接菌體的空白對照,30°C, 150rpm避光搖床培養，分別在I天、2天、3天、4天和5天經紫外分光光度計和氣相-質譜聯機檢測，紫外掃描圖見圖1，菌株16F可以在48h內降解75%的初始濃度為100mg/L的花，5天可以降解92%以上。
菌懸液製備方法挑取菌株Mycobacterium sp. 16F的單菌落接種於裝有LB培養基的三角瓶中，於30°C，120rpm搖床振蕩培養72-96小時；然後用無菌水調節至每mL的Mycobacterium sp. 16F 菌懸液中含有 4. I X 108CFU/mL 的 Mycobacterium sp. 16F 菌體,以下實施例中所提及的菌懸液如無特殊說明均按照此方法製備。
(2)在滅菌三角瓶中加入50g/L芘的丙酮溶液，超淨工作檯內使丙酮溶液揮發完全，再加入無機鹽液體培養基，使多環芳烴終濃度為50mg/L，接入1%體積含量的Mycobacterium sp. 16F菌懸液,對照為不接菌體的空白對照,30°C, 150rpm避光搖床培養，分別在O天-7天經紫外分光光度計和氣相-質譜聯機檢測，降解曲線見圖2。從圖2中可以看出，而對於初始濃度為50ppm的芘，5天時可降解94%以上，可以在7天內降解完全。
(3)在滅菌三角瓶中加入50g/L芘的丙酮溶液，超淨工作檯內使丙酮溶液揮發完全，再加入無機鹽液體培養基，使多環芳烴終濃度為200mg/L，接入2%體積含量的Mycobacterium sp. 16F菌懸液,對照為不接菌體的空白對照,30°C, 150rpm避光搖床培養，分別在I天、2天、3天、4天、5天、6天和7天經紫外分光光度計和氣相-質譜聯機檢測，降解曲線詳見圖3。在24h至48h內降解較快，平均降解速率達3. lppm/h,然後降解速度變慢，直至7天時降解率達到99%以上，結果如圖3所示。
(4)為研究各種金屬離子對於菌株的多環芳烴降解能力是否存在影響，設計液體搖瓶實驗，實驗初始條件為含50ppm芘的基礎鹽溶液中添加ImM各類重金屬離子，150rpm,30°C避光搖床培養36h，然後分別檢測降解效果(圖4)。從圖4可以看出，菌株16F在三氯化鐵和氯化亞鐵存在時降解率較不含金屬離子(加菌)的降解率提高了 19. 8%和8. 2%，而其他諸如鋅、銅、錳及微量元素混合液都對菌株16F降解存在抑制作用。
(5)在滅菌三角瓶中加入50g/L芴的丙酮溶液，超淨工作檯內使丙酮溶液揮發完全，再加入無機鹽液體培養基，使多環芳烴終濃度為5 O m g / L，接入2 %體積含量的Mycobacterium sp. 16F菌懸液,對照為不接菌體的空白對照,30°C, 150rpm避光搖床培養，分別在O天、I天、2天、3天、4天、5天、6天和7天經紫外分光光度計和氣相-質譜聯機檢測，降解曲線見圖5。從圖5中可以看出，菌株16F在前48h內對50ppm荷的降解慢於同濃度的芘，在48h至96h內降解較快，平均降解速率達O. 63ppm/h,然後降解速度變慢，直至168h時降解率達到91. 3%。
(6)在滅菌三角瓶中加入5g/L苯並芘的丙酮溶液，超淨工作檯內使丙酮溶液揮發完全，再加入無機鹽液體培養基，使多環芳烴終濃 度為12. 5mg/L，接入2%體積含量的Mycobacterium sp. 16F菌懸液,對照為不接菌體的空白對照,30°C 150rpm避光搖床培養，分別在10天、15天、20天、25天、30天、35天用氣相-質譜聯機檢測，降解曲線見圖6。菌株16F對初始濃度為12. 5ppm的苯並芘，在10天左右降解即可達到48. 34%，但是此後降解基本處於停滯狀態，至30天時降解率達到53. 29%，說明菌株對苯並芘可以較快降解，但是不能將其完全降解。
實施例3分枝桿菌16F降解底物實驗
將Mycobacterium sp. 16F接種至不同濃度(50-500mg/L,見表I)的水楊酸、鄰苯二酚、苯酚、苯、二甲苯、甲苯等底物的基礎鹽培養基中，同時設底物空白對照(只加底物不加菌)，在150r/min，30°C搖床中避光振蕩培養2天、4天和6天後測定生物量和檢測底物的降解情況。Mycobacterium sp. 16F的生長和降解情況見表I,結果表明Mycobacteriumsp. 16F均能利用一定濃度的實驗底物進行生長繁殖並且降解，其中，培養4天後觀察到初始時以固體或油狀漂浮在培養液中的苯、二甲苯、甲苯消失，經GC-MS檢測均已100%降解，而對於高濃度底物的耐受性而言，苯系有機物中苯 > 甲苯〉二甲苯；而水溶性較好的水楊酸、鄰苯二酚、苯酚則通過紫外分光光度計檢測培養液中其存在，初始濃度為50mg/L的水楊酸、初始濃度為100mg/L苯酚、初始濃度為200mg/L鄰苯二酚，分別培養4天、6天和2天後經檢測均已100%降解。這表明菌株Mycobacterium sp. 16F降解底物的範圍很廣。
表I菌株16F對不同底物的降解多樣性
權利要求
1.一株高效降解多環芳烴和苯系有機物的分枝桿菌(Mycobacterium sp. )16F,保藏號為 CGMCC No. 6367。
2.含有權利要求
I所述分枝桿菌16F的菌劑。
3.權利要求
I所述分枝桿菌16F或權利要求
2所述菌劑在降解多環芳烴和/或單環苯系有機物中的應用。
4.根據權利要求
3所述的應用，其特徵在於，所述多環芳烴為芴、萘、蒽、苊、苊烯、硫芴、咔唑、屈、菲、芘、熒蒽、苯並熒蒽、苯並蒽或苯並芘中的一種或多種，所述單環苯系有機物為苯、甲苯、乙苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對二甲苯、苯酚、水楊酸或鄰苯二酚中的一種或多種。
5.根據權利要求
3所述的應用，其特徵在於，其是將分枝桿菌16F的菌懸液加入到含有多環芳烴和/或單環苯系有機物的基礎鹽培養基中，在30°C，150rpm避光條件下搖床培養，進行底物降解。
6.根據權利要求
5所述的應用，其特徵在於，分枝桿菌16F的菌懸液濃度為3. 5 X IO8 4. 5X108CFU/mL。
7.根據權利要求
5所述的應用，其特徵在於，所述基礎鹽培養基配方為硫酸銨2.5g、硫酸亞鐵O. 28mg、磷酸氫二鈉I. 5g、磷酸二氫鉀I. 36g、硫酸鎂O. 25g、氯化I丐10. 7mg、氯化鈉O. 5g、氯化鐵O. 004g、微量金屬液ImL和維生素複合溶液lmL，加水至IOOOmL,pH 值 7. 2-7. 4 ;其中微量金屬液的組成為=CoCl2 · 6H2035mg、CuCl2O. 20mg,、Η3Β036· Omg、MnCl2 · 4H20 25mg、Na2MoO4 · 2Η20 3. Omg、NiCl2 · 2Η202· Omg 和 ZnCl22. 5mg，加水至 IOOOmL ；維生素複合溶液的組成為維生素B61.0mg、維生素H 0. 5mg和維生素C 1.5mg，加水至IOOOmL0
8.用於擴增權利要求
I所述分枝桿菌16F16S rDNA的引物對，包括上遊引物5』 -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3』 和下遊引物 5』 -GGTTACCTTGTTACGACTT-3』。
專利摘要
本發明提供一株高效降解多環芳烴和苯系有機物的分枝桿菌(Mycobacterium sp.)16F，保藏號為CGMCC No.6367。該分枝桿菌16F可以高效、安全、快速地降解多環芳烴和單環苯系化合物，可以在好氧條件下以芴、萘、蒽、苊、菲、芘和苯並芘為唯一碳源和能源生長並降解，並且還能利用苯、間二甲苯、甲苯、水楊酸、鄰苯二酚等其他多種芳香有機物。對鏈黴素、利福平、四環素、卡那黴素等抗生素敏感，對老化土壤中的混合多環芳烴和水體中的單環苯系有機物降解效果較好，可以用於芳香烴類有機複合汙染的水土環境的修復與淨化，對於促進可持續發展具有重要意義，具有廣闊的應用前景。
文檔編號C12N15/11GKCN102899271SQ201210380304
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月29日
發明者郭鵬, 金京華, 程言君, 宋雲, 羅霂, 高振 申請人:輕工業環境保護研究所導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan