一種骨質疏鬆症治療藥物及其生產方法

2023-05-14 14:28:41 2

專利名稱：一種骨質疏鬆症治療藥物及其生產方法
技術領域：
本發明涉及一種骨質疏鬆症治療藥物，尤其是一種以天然中藥材製成的純中藥製劑，本發明還涉及該製劑的生產方法。
背景技術：
骨質疏鬆症是以骨量減少為特徵，骨組織顯微結構改變和骨折危險頻度增加的疾病，是一種多因多果的老年性常見疾病。目前，在治療方面，臨床使用的無論是中藥，還是西藥，均存在難以使骨質疏鬆症患者的骨量恢復正常的缺點。相對於中藥製劑，西藥治療更具有服藥時間長，副作用大，費用高等問題。

發明內容本發明的目的是為了克服目前治療骨質疏鬆症藥物的骨量恢復效果差的缺點，提供一種見效快、臨床症狀緩解徹底、骨量恢復明顯、副作用小、費用低的藥物。
本發明的目的還在於提供該製劑的生產方法。
本發明是這樣實現的採用天然中藥材補骨脂、肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參為原料製成的口服製劑，其劑型為口服液、口服散劑、衝劑、片劑或膠囊等。其中黃芪應選用北黃芪，淫羊藿應選用制淫羊藿。
本發明的中藥複方製劑包括下列組分製成的(用量為重量比)補骨脂100～180份，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各120～200份，配以常規輔料，製成口服製劑，其劑型為口服液、口服散劑、衝劑、片劑或膠囊機劑等。
本發明的中藥複方製劑各組分的優先重量比為補骨脂120～150份，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各130～170份，配以常規輔料，製成口服製劑，其劑型為口服液、口服散劑、衝劑、片劑或膠囊劑等。
本發明的中藥複方製劑各組分的最佳配比為補骨脂130份，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各150份，配以常規輔料，製成口服製劑，其劑型為口服液、口服散劑、衝劑、片劑或膠囊劑等。
本發明中的口服液製備方法是取上述方中各藥全量，加水煎煮3次，過濾，合併三次煎液，濃縮至相對密度，再過濾，添加常規口服液輔料(如果葡糖、山梨酸鉀)及蒸餾液、蒸餾水，製成口服液。
口服液劑量與服法口服，10ml/支/次，1.43g生藥/ml/支，每天服二次，早晚飯後各服一次。
本發明中的口服散劑製備方法是取上述方中各藥全量，經粉碎加工成口服散劑。
本發明中的衝劑製備方法是取上述方中各藥全量，加水浸沒後提取1～3次，合併提取液，濃縮，進一步添加輔料(如糖粉)制粒，製成衝劑。
本發明中的片劑製備方法是將上述衝劑添加常規片劑輔料(如澱粉、糖粉、糊精、硫酸鎂、滑石粉)，並通過壓片機，製成片劑。
本發明中的膠囊劑製備方法是取各藥全量，加水浸沒後提取1～3次，合併提取液，添加輔料，烘乾成藥粉，分裝，製成膠囊。
本發明的解決方案基於中國傳統醫學理論，諸藥合用，相輔相成，相得益彰，共達補中寓通，補而不滯之目的。該方補腎壯陽，滋陰益精，同時培補後天生化之源以充腎精。腎陽得充，脾得健運，氣機得調，氣血運行通暢，從而達到緩解症狀，提高骨量之功效。
本發明的藥物主治骨質疏鬆症，能緩解症狀及提高骨量和改善骨的生物力學性能，使骨的質量有不同程度的恢復，其具有見效快、服用方便、骨量提高明顯、副作用小等優點。
具體實施方式下面結合實施例對本發明作進一步說明。
實施例1補骨脂130g，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各150g製成口服液。其生產方法是全部藥材加水煎煮3次，過濾，合併三次煎液，濃縮至相對密度，再過濾，添加常規口服液輔料(如果葡糖、山梨酸鉀)及蒸餾液、蒸餾水，製成口服液。
實施例2補骨脂130g，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各150g製成口服散劑。其生產方法是全部藥材經粉碎加工成口服散劑。
實施例3補骨脂130g，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各150g製成衝劑。其生產方法是全部藥材加水浸沒後提取1～3次，合併提取液，添加糖粉制粒，製成衝劑，分裝。
實施例4補骨脂130g，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各150g製成片劑。其生產方法是全部藥材加水浸沒後提取1～3次，合併提取液，添加澱粉制粒，進一步添加硫酸鎂，滑石粉，經壓片機壓成片劑。
實施例5補骨脂130g，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各150g製成膠囊。其生產方法是全部藥材加水浸沒後提取1～3次，合併提取液，添加輔料，烘乾成藥粉，分裝，製成膠囊。
取實施例1進行有關藥效學試驗及毒理學實驗。
實施例1有關藥效學試驗實驗1防治去卵巢大鼠骨質疏鬆的實驗研究1.材料1.1 實驗動物健康雌性SD大鼠90隻，4月齡，體重200-220g。隨機分為6組，每組15隻。
1.2 實驗藥物實施例1以蒸餾水定容至所需濃度、蒸餾水、尼爾雌醇、3％戊巴比要鈉、鹽酸四環素、Calcein(USA)、甲基丙烯酸甲酯。
2.方法2.1 造模方法均採用背側入路雙側卵巢摘除手術造模。
2.2 給藥方法術後第3天開始給藥，連續給藥至術後3個月時處死全部實驗動物。
3.結果3.1 實施例1對去勢大白鼠骨面密度(BMD)(表1)、骨礦含量(BMC)(表2)變化的影響。
表1 實施例1對去卵巢大鼠BMD變化的影響(x±s)(g/cm2)組別 N 右脛骨幹骺端左脛骨幹骺端空白對照組110.23±0.03*0.22±0.02*模型組100.17±0.05# 0.17±0.04#實施例1高劑量組 100.23±0.02*0.22±0.02*實施例1中劑量組 110.18±0.05# 0.19±0.02#實施例1低劑量組 100.21±0.02*0.20±0.02*#尼爾雌醇組100.22±0.04*0.21±0.04*注與模型組比較，*P＜0.05**P＜0.01；與空白組比較，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 實施例1對去卵巢大鼠BMC變化的影響(x±s)(g)組別n 右脛骨幹骺端左脛骨幹骺端空白對照組 110.09±0.01**0.09±0.01**模型組 100.07±0.02##0.07±0.02##實施例1高劑量組 100.09±0.01**0.09±0.01**實施例1中劑量組 110.07±0.05# 0.07±0.02#實施例1低劑量組 100.08±0.01##0.08±0.01##尼爾雌醇組 100.09±0.02**0.08±0.01*#表1、表2表明實施例1灌胃3個月時各組大鼠在左、右側脛骨幹骺端處的骨密度和骨礦含量均有顯著差別，其中模型組最低；實施例1高劑量組明顯高於模型組，與陽性對照組無顯著差異。說明實施例1可顯著提高脛骨幹骺端處的BMD和BMC，二者作用相當，說明均能提高骨量。
3.2 骨生物力學測定(表3)表3 實施例1對去卵巢大鼠左側股骨生物力學指標的影響(x±s)組別 n M(N.m) K(N.m/du)空白對照組110.70±0.09**0.49±0.05模型組100.55±0.05##0.48±0.04實施例1高劑量組 100.71±0.08**0.51±0.08實施例1中劑量組 110.64±0.04**# 0.51±0.09實施例1低劑量組 100.55±0.06##0.48±0.07尼爾雌醇組100.57±0.05##0.49±0.07表3表明實施例1灌胃3個月時各組大鼠左側股骨扭轉實驗中最大扭矩(M)有明顯差異，但扭轉剛度(K)差異不顯著。實施例1中、高劑量組最大扭矩明顯高於模型組，說明實施例1能促進骨小梁重建，提高骨的力學性能，增加骨的韌度，使骨抗扭轉強度增高，其中又以實施例1高劑量組效果最好。
3.3 血CT(表4)、BGP(表5)測定表4 實施例1對去卵巢大鼠降鈣素(CT)的影響(x±s)(ng/L)組別 n手術前 給藥3個月空白對照組11 221.30±30.63213.70±19.42*模型組10 233.25±24.39195.07±20.83#實施例1高劑量組 10 225.69±28.18326.16±41.59**##實施例1中劑量組 11 208.46±20.41345.33±36.16**##實施例1低劑量組 10 221.54±24.94246.19±34.13**#尼爾雌醇組10 223.31±19.23405.36±24.49**##表4表明術前各組大鼠血清CT含量無明顯差異；給藥3個月後各組大鼠血清CT含量有明顯差異，均明顯高於模型組，實施例1高、中、低劑量組和陽性對照組均明顯高於空白對照組，陽性對照組又明顯高於中藥治療組，說明實施例1能提高血中降鈣素的水平。
表5 實施例1對去卵巢大鼠骨鈣素(BGP)的影響(x±s)(ng/ml)組別 n手術前給藥3個月空白對照組11 2.71±0.262.83±0.32**模型組10 2.72±0.362.13±0.36##實施例1高劑量 10 2.71±0.283.79±0.66**實施例1中劑量 11 2.85±0.423.40±0.25**實施例1低劑量 10 2.83±0.252.78±0.28**尼爾雌醇組10 2.94±0.344.17±0.65**
表5表明術前各組大鼠血清BGP含量無明顯差別；給藥3個月後各組大鼠血清BGP含量有明顯差異，均明顯高於模型組，實施例1高、中劑量組和陽性對照組均明顯高於空白對照組，陽性對照組又明顯高於實施例1各治療組，說明實施例1有提高血中骨鈣素含量的作用。
3.4 血清E2測定(表6)表6實施例1對去卵巢大鼠血清雌二醇(E2)含量的影響(x±s)(pg/ml)組別 n手術前 給藥3個月空白對照組11 14.57±3.9915.77±3.57**模型組10 14.23±3.467.78±2.28##實施例1高劑量組 10 15.63±2.0420.31±2.96**#實施例1中劑量組 11 15.17±1.9118.68±2.59**#實施例1低劑量組 10 14.07±4.1216.12±2.39**尼爾雌醇組10 14.74±3.2328.86±7.85**##表6表明術前各組大鼠血清E2含量無明顯差異；給藥3個月後各組大鼠血清E2含量有顯著差異，均明顯高於模型組，實施例1高、中劑量組和陽性對照組均明顯高於空白對照組，陽性對照組又明顯高於中藥各組，說明實施例1能有效的提高體內E2含量，其中又以高劑量組E2含量最高，且有明顯量效關係。同時，我們採用放免法對高、中、低三種不同濃度的實施例1進行測定，發現各種劑量實施例1中均含有雌激素樣作用物質，且呈量效關係。
3.5 子宮溼重測定表7 實施例1對大鼠子宮溼重的影響(x±s)(mg)組別 n 子宮溼重空白對照組11136.00±29.43**模型組1055.77±9.62##實施例1高劑量組 1088.75±25.89**##實施例1中劑量組 1198.64±20.44**##實施例1低劑量組 1085.38±23.41**##尼爾雌醇組10122.86±26.15**表7表明實驗動物於3個月後處死時各組大鼠子宮重量有明顯差異，其中模型組最低，空白對照組最高，實施例1高、中、低劑量組均明顯高於模型組，但明顯低於陽性對照組。說明切除卵巢後由於大鼠體內雌激素水平下降，其對子宮內膜的刺激作用下降，故模型組子宮內膜明顯萎縮；實施例1有不同程度提高血內雌激素水平的作用，而使子宮內膜增生。
3.7 骨組織形態計量學測定表8 實施例1對去卵巢大鼠左側脛骨近端骨組織形態結構的影響(x±s)骨小梁數骨小梁面積 面積百分率骨小梁寬度骨小梁間隙組別 n目(Tb.Ar)(Tb.Ar％)(Tb.Wi)(Tb.Sp)(Tb.N)空白對照組112.45±0.8122.76±3.6055.27±4.944.01±1.34313.22±48.33模型組102.24±0.7520.22±3.2954.01±5.003.88±1.28318.36±53.02實施例1高劑量組 102.41±0.9322.39±3.7755.16±5.773.98±1.30317.96±49.52實施例1中劑量組 112.36±0.4021.58±3.4254.99±4.553.89±0.74315.66±50.51實施例1低劑量組 102.33±0.5621.92±4.8854.07±5.793.97±1.06316.20±48.35尼爾雌醇組102.43±0.5622.89±4.0352.24±5.263.92±0.76317.80±52.08表8表明實驗動物於3個月後處死時對各組大鼠左側脛骨近端處的骨組織進行骨組織形態計量學測定，結果實施例1治療組大鼠的骨小梁面積(Tb.Ar)、骨小梁面積百分率(Tb.Ar％)、骨小梁寬度(Tb.Wi)和骨小梁數目(Tb.N)較模型組相比，有增高的趨勢；骨小梁間隙(Tb.Sp)較模型組相比，有減小的趨勢，但均無統計學意義。說明實施例1既能促進骨形成，又能抑制骨吸收。
表9 實施例1對去卵巢大鼠尿鈣(Ca)、尿羥脯氨酸(Hop)含量的影響(x±s)(mg/dl)組別n 尿鈣(Ca) 尿羥脯氨酸(Hop)空白對照組 1144.56±8.54**0.35±0.07**模型組 1064.43±9.23##0.48±0.11##實施例1高劑量組 1045.36±6.04**0.37±0.12**實施例1中劑量組 1145.45±9.28**0.35±0.06**實施例1低劑量組 1044.51±7.55**0.36±2.39**尼爾雌醇組 1043.69±8.36**0.35±0.15**表9表明實驗動物於3個月後處死時對各組大鼠進行尿鈣(Ca)、尿羥脯氨酸(Hop)含量測定，結果實施例1高、中、低劑量組和陽性對照組的24小時尿鈣、尿羥脯氨酸含量均顯著低於模型組(P＜0.01)，與空白對照組無明顯差異(P＞0.05)。說明實施例1能有效抑制去卵巢大鼠體內的骨丟失。
實驗2防治去睪大鼠骨質疏鬆的實驗研究1.材料1.1 實驗動物健康雄性SD大白鼠60隻，六月齡，體重280～300g。隨機分為6組，每組10隻。
1.2 實驗用藥實施例1以蒸餾水定容至所需濃度、蒸餾水、特樂定、3％戊巴比妥鈉。
2.方法2.1 造模方法[1]均採用從腹側入路行完整雙側睪丸摘除術造模。
2.2 給藥方法術後第3天開始給藥，連續給藥至術後3個月時處死全部實驗動物。
3.結果3.1 骨密度測定(表1、2)表1 實施例1對去睪大鼠BMD變化的影響(x±s)(g/cm2)組別n Global 右股骨下端 左股骨下端空白對照組 100.1316±0.0053**0.1702±0.0176**0.1856±0.0142**模型組 100.1200±0.0045##0.1329±0.0079##0.1438±0.0096##實施例1高劑量組 9 0.1314±0.0022**0.1828±0.0276**0.1764±0.0179**實施例1中劑量組 100.1289±0.0054**0.1629±0.0191**0.1770±0.0165**實施例1低劑量組 100.1251±0.0051*# 0.1570±0.0150**0.1697±0.0163**#特樂定組100.1294±0.0049**0.1572±0.0169**0.1763±0.0113**注與模型組比較，*P＜0.05**P＜0.01；與空白組比較，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 實施例1對去睪大鼠BMC變化的影響(x±s)(g)組別n Global 右股骨下端 左股骨下端空白對照組 109.0156±0.4147**0.0654±0.0063**0.0723±0.0067**模型組 107.3655±0.6638##0.0514±0.0043##0.0563±0.0039##實施例1高劑量組 9 8.3943±0.8107*# 0.0682±0.0078**0.0646±0.0065*#實施例1中劑量組 108.3523±0.9195*# 0.0641±0.0082**0.0687±0.0079**實施例1低劑量組 108.6034±0.5385**0.0615±0.0057**0.0629±0.0082*#特樂定組109.0773±0.9950**0.0646±0.0092**0.0686±0.0055**表1、2表明給藥3個月時各組大鼠全身、右股骨下端及左股骨下端的骨密度和骨礦含量均有顯著差別，實施例1高、中、低劑量組明顯高於模型組。說明實施例1可顯著提高去睪大鼠BMD和BMC，能提高去睪大鼠全身、左、右股骨下端骨量。
3.2骨生物力學測定(表3)表3 實施例1對去睪大鼠左側股骨生物力學指標的影響(x±s)組別 n M(N.m) K(N.m/du)空白對照組100.66±0.091 0.096±0.01模型組100.60±0.072 0.095±0.01實施例1高劑量組 9 0.64±0.084 0.098±0.01實施例1中劑量組 100.74±0.090**#0.094±0.01實施例1低劑量組 100.62±0.085 0.097±0.01特樂定組 100.66±0.081 0.095±0.01表3表明給藥3個月時實施例1中劑量能明顯增加大鼠左側股骨扭轉實驗中最大扭矩。說明實施例1能促進骨小梁重建，提高骨的力學性能，增加骨的韌度，增高骨抗扭轉強度。
3.3血清睪酮(T)測定(表4)表4、實施例1對去睪大鼠睪酮(T)含量的影響(x±s)組別n 術前術後4個月空白對照組 103.20±1.123.49±1.13**模型組 103.26±0.830.19±0.11##實施例1高劑量組 9 3.25±0.650.67±0.49##**實施例1中劑量組 103.03±1.110.44±0.24##**實施例1低劑量組 103.33±0.670.30±0.19##特樂定組103.01±0.850.28±0.19##表4表明術前各組大鼠血清T含量無明顯差異；給藥3個月後各組大鼠血清T含量有顯著差異，各組均明顯高於模型組，說明實施例1能有效提高體內T含量。
實驗3防治維甲酸致大鼠骨質疏鬆的實驗研究1.材料1.1 實驗動物健康雌性SD大白鼠60隻，3月齡，體重200±300g。隨機分為6組，每組10隻。
1.2 實驗用藥實施例1以蒸餾水定容至所需濃度、蒸餾水、氟鈣定。
2.方法2.1 造模方法大鼠每日灌服維甲酸造模。
2.2 飼養及給藥方法用維甲酸灌胃造模2周後，開始給藥，連續給藥2周，處死全部實驗動物。
3.結果3.1 骨密度測定(表1、2)表1 實施例1對維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型BMC變化的影響(x±s)(g)組別n 右脛骨幹骺端左脛骨幹骺端空白對照組 100.0547±0.0067**0.0548±0.0070**模型組 100.0451±0.0068##0.0474±0.0074##實施例1高劑量組 9 0.0583±0.0066**0.0544±0.0078**實施例1中劑量組 100.0519±0.0035**0.0546±0.0055**實施例1低劑量組 100.0477±0.0072*# 0.0539±0.0056**#氟鈣定組100.0522±0.0072**0.0548±0.0030**注與模型組比較，*P＜0.05**P＜0.01；與空白組比較，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 實施例1對維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型BMD變化的影響(x±s)(g/cm2)組別 n 右脛骨幹骺端左脛骨幹骺端空白對照組 100.1382±0.0105**0.1518±0.0135**模型組 100.1162±0.0179##0.1205±0.0157##實施例1高劑量組 9 0.1320±0.0111**0.1492±0.0168*#實施例1中劑量組 100.1305±0.0120**0.1458±0.0109**實施例1低劑量組 100.1299±0.0144**0.1422±0.0138**#氟鈣定組 100.1359±0.0080**0.1483±0.0101**表1、2表明用維甲酸灌胃造模2周，再用實施例1灌胃2周時，實施例1高、中、低劑量組大鼠左、右側脛骨幹骺端處的BMC和BMD均明顯高於模型組。說明實施例1可顯著提高維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型的BMD和BMC。
3.2 骨生物力學測定(表3)表3 實施例1對維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型左側股骨生物力學指標的影響(x±s)組別 n M(N.m) K(N.m/du)空白對照組100.50±0.09 0.13±0.03模型組100.48±0.08 0.12±0.04實施例1高劑量組 9 0.48±0.07 0.12±0.03實施例1中劑量組 100.49±0.09 0.12±0.04實施例1低劑量組 100.49±0.08 0.13±0.05氟鈣定組 100.50±0.07 0.13±0.04表3表明用維甲酸灌胃造模2周，再用實施例1灌胃2周時，實施例1治療組大鼠的左側股骨生物力學指標雖較模型組相比，有增高的趨勢，但無統計學意義。這可能與實驗時間較短，同時骨的類骨質增加較快、骨結構修復較慢有關。
實驗4健脾作用的實驗研究1.材料1.1 實驗動物健康SD大白鼠，3-4月齡SD大鼠，雌雄各半，共84隻，體重200±10克。隨機分為六組，每組14隻，雌雄各7隻。
1.2 試驗用藥實施例1以蒸餾水定容至所需濃度、0.9％生理鹽水、附子理中丸、大黃水煎液。
2.方法2.1 造模方法用100％大黃水煎液1ml/(100g·d)連續灌胃20天。
2.2 給藥方法造模成功後，各組均繼續灌胃15天。
3.結果3.1 血清木糖含量的測定(表1)
表1 造模20天及灌藥15天時血清木糖含量測定(x±s，mg/L)組別 造模20天時 灌藥15天時空白對照組2.10±0.29 2.05±0.24△△模型組1.78±0.40*1.64±0.29實施例1高劑量組 1.57±0.32**2.24±0.61△△實施例1中劑量組 1.65±0.40**2.11±0.27△實施例1低劑量組 1.60±0.49*2.13±0.41△附子理中丸組 1.61±0.43*2.21±0.46△△注*造模20天時與空白對照組比P＜0.05；**P＜0.01△灌藥15天時與模型組比P＜0.05，△△P＜0.01表1說明經實施例1治療後，血清木糖含量回升，實施例1高、中、低劑量組正常組相比，血清木糖含量差別無顯著性意義(P＞0.05)，說明實施例1能促進脾虛大鼠得以康復；實施例1高、中、低劑量組與模型組相比，血清木糖含量明顯升高(P＜0.05～0.01)，可說明實施例1的健脾作用。
實驗5活血化瘀作用的實驗研究1.材料1.1 動物與分組SD大鼠，雄性，體重180-240g，共75隻，隨機分為5組。
1.2 實驗用藥實施例1以蒸餾水定容至所需濃度、0.9％生理鹽水、複方丹參注射液。
2.方法2.1 造模方法高分子右旋糖酐大鼠血瘀模型法2.2 給藥方法預先給藥6天，1次/天，造模當天給藥二次，末次給藥一小時後，注射10％高分子右旋糖酐(NS配)10ml/kg。造模後16h眼底靜脈叢取血。
3.結果3.1 血液流變學檢測結果(見表1)表1 實施例1對血液流變學的影響(x±s)實施例1高劑量實施例1中劑量 實施例1低劑量丹參組 陰性對照組組別組n＝14 組n＝15 組n＝15 n＝15 n＝15低切粘度7.72±1.72**7.90±1.26**7.86±1.95*7.30±0.92**9.54±1.48高切粘度3.17±0.27**3.59±0.29 3.36±0.36*3.02±0.40***3.74±0.451.66±血漿粘度1.75±0.058**1.74±0.093**1.73±0.10**1.85±0.0870.088***血沉10.93±14.14 8.55±11.83 6.19±9.89 13.27±15.207.73±9.37RBC壓積 37.36±3.25 35.18±2.18 34.33±2.47*34.87±2.47*37.26±3.59還原粘度18.02±4.48**20.18±4.34*19.18±4.38*18.19±3.12**23.42±3.67RBC聚集 2.42±0.40 2.25±0.39 2.25±0.36*2.44±0.30 2.52±0.35RBC硬化 0.57±0.08 0.72±0.08 0.67±0.08 0.60±0.15 0.68±0.1117.93±血沉K 28.43±36.70 21.45±30.0918.6±27.56 39.93±424620.65注與陰性對照組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.0013.2 血小板聚集率檢測結果(見表2)表2 實施例1對血小板聚集率的影響(％，x±s)組別 例數聚集率實施例1高劑量組10 50.00±22.67實施例1中劑量組10 40.05±21.88**實施例1低劑量組12 56.54±32.76複方丹參組 936.67±22.22**陰性對照組 11 70.92±20.42注與陰性對照組比較，**P＜0.01表1、表2說明實施例1能降低血瘀模型大鼠的全血粘度、血漿粘度及還原粘度、抑制血小板聚集。
實驗6鎮痛作用的實驗研究1.材料1.1 動物與分組NIH小鼠，雄性，體重18-22g，共75隻，隨機分為5組。
1.2 實驗用藥實施例1提取液、硫酸顱痛定注射液、0.9％生理鹽水。
2.方法2.1 小鼠鎮痛試驗一——扭體法2.2 小鼠鎮痛試驗二——熱輻射法3.結果3.1 對小鼠扭體反應的影響(見表1)表1說明實施例1對醋酸引發的扭體反應有顯著的抑制作用，並有量效關係，其中高、中劑量組的鎮痛強度與顱痛定相當。
表1 對小鼠扭體反應的影響(x±s)組別 例數 扭體次數/15分鐘實施例1高劑量組1014.5±6.67***實施例1中劑量組1413.29±11.22***實施例1低劑量組1523.33±9.65**顱痛定對照組 1414.43±6.77***陰性對照組 1441.07±10.49注與陰性對照組比較**P＜0.01***P＜0.0013.2 對小鼠熱輻射反應的影響(見表2)表2 實施例1對小鼠熱輻射反應的影響(秒，x±s)給藥前後痛閾差值組別 例數30分鐘90分鐘 150分鐘實施例1高劑量組9 5.17±6.112.39±5.365.72±5.35**實施例1中劑量組125.29±4.984.88±6.431.96±5.37實施例1低劑量組123.50±5.241.00±3.200±3.63顱痛定對照組 126.71±4.395.88±3.46*5.46±3.38***陰性對照組 123.46±5.751.54±6.28-1.29±5.22注與陰性對照組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表2說明實施例1對熱輻射引起的疼痛，僅在高劑量組150分鐘時點有提高痛閾的作用，而其他時點以及中低劑量組雖能一定程度提高痛閾，但未達統計學差異。
實驗7治療絕經後骨質疏鬆性骨折的實驗研究1.材料1.1 實驗動物十二月齡雌性SD大鼠40隻，體重340±20g。隨機分為四組。
1.2 實驗藥物實施例1提取藥液、生理鹽水、尼爾雌醇、3％戊巴比妥鈉溶液。
2.方法2.1 造模方法背側入路完整摘除雙側卵巢造模成功後切開左小腿，在脛骨中上1/3處內側2/3造成2mm骨缺損，外側1/3骨質保持其連續性。術後不用抗生素及作外固定。
2.2 給藥方法術後二天開始各組分別灌胃給藥，三個月後處死。
3.結果3.1 游離後的各組脛骨骨折端可見大量骨痂形成，骨折線均消失；經雙能X線檢查，得到骨康對大鼠BMD變化的數據(表1)表1 骨康對大鼠左脛骨骨折端、全段、中段、遠端BMD變化的影響(x±s)(g/cm2)組別 n 左脛骨骨折端 左脛骨全段 左脛骨中段 左脛骨遠端空白對照組 9 0.197±0.007**0.169±0.005*0.148±0.004△#0.161±0.007△模型組 9 0.168±0.007 0.156±0.006 0.150±0.004△0.159±0.005△實施例1治療組 10 0.195±0.009**0.175±0.011*0.164±0.005 0.171±0.007陽性治療組10 0.200±0.015**0.177±0.011**0.155±0.007△#0.166±0.008注各組與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01各組與實施例1治療組比較，△P＜0.01各組與正常組比較，#P＜0.01表1表明，實驗動物用實施例1灌胃三月後，各組大鼠的左脛骨骨折端(幹骺端)及左脛骨全段的BMD與模型組均有顯著性的差異，實施例1治療組與正常對照組及陽性治療組的差異不明顯，說明(1)大鼠去勢後骨質疏鬆症的造模是成功的；(2)實施例1治療骨質疏鬆性骨折的療效等同於尼爾雌醇。各組大鼠的左脛骨中段BMD與實施例1治療組差異顯著，正常對照組及模型組的左脛骨遠端的BMD與實施例1治療組有顯著性差異，說明實施例1不但可以提高松質骨骨密度，而且能夠提高密質骨骨密度。
3.2 大鼠體重的變化(表2)表2 各組大鼠造模術前及術後的體重變化(x±s)組別 n術前(g) 術後一月(g)術後二月(g)術後四月(g)正常對照組9323±21 349±18341±21354±20#模型組9344±27 381±35*392±39*383±39實施例1治療組 9334±35 368±35347±27357±22陽性治療組9335±32 367±32350±24347±25#注各組與正常對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05表2表明，各組大鼠術前體重無差異，術後一月、二月及四月模型組大鼠體重增加明顯，與正常對照組有明顯的差異，而實施例1治療組和陽性治療組與正常對照組比較體重增加無顯著性差異，術後四月陽性治療組與模型組體重比較差異明顯；說明去勢後，由於雌激素缺乏，致模型組大鼠體重增加，而使用實施例1治療後，可控制大鼠去勢後的增重，其作用等同於尼爾雌醇，但隨著時間推移，其抑制增重的作用可能比尼爾雌醇弱。
3.3左脛骨上端病理切片光鏡檢查實施例1治療組成骨細胞肥大，增生明顯，骨小梁增多、增粗，連續性好，骨皮質增寬。而模型組成骨細胞增生不明顯，有較多的軟骨細胞，且骨小梁稀疏，有斷裂，骨痂量少。
3.4 骨生物力學測定(表3)表3 實施例1對去勢大鼠左股骨骨生物力學指標的影響(x±s)組別nF(N) σ(Mpa)正常對照組 8149.86±26.21**232.87±35.24**模型組 895.36±7.15151.63±13.22##實施例1治療組 8124.98±19.00**203.31±17.74**陽性治療組 8119.14±14.33**190.82±21.53**#注與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01從表3中可以看出，與模型組比較，正常組的最大載荷和極限強度明顯高於模型組，統計結果差別顯著(P＜0.01)，表明雌性大鼠切除卵巢後，可使大鼠的生物力學性能下降，造模成功。實施例1組和陽性治療組與模型組比較，其骨的生物力學參數最大載荷、極限強度均有明顯差別(P＜0.01)；陽性治療組與正常組比較，其極限強度明顯低於正常組(P＜0.05)，而實施例1組與正常組則無顯著性差異。最大載荷是骨的結構力學指標，極限強度反映的是骨的材料力學性能，由此可見，實施例1能有效地增強整體骨的結構和材料力學性能，其效果在改善大鼠骨的的材料力學性能方面優於尼爾雌醇。
2.5 放射免役學檢查(表4、表5)表4 實施例1對去勢大鼠血清E2的影響(x±s)組別 n 術後一月E2(pg/ml) 術後四月E2(pg/ml)正常對照組 9 96.99±26.35 11.36±4.30##模型組 9 62.58±14.36**0.30±0.03**實施例1治療組10 60.07±13.50**1.23±0.78**#陽性治療組 10 56.97±25.60**1.29±0.86**#注各組與正常組比較，**P＜0.01各組與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01表4顯示，大鼠去卵巢一月後，與正常對照組相比，其他各組的血清E2水平明顯低於正常組，差別顯著(P＜0.01)，表明造模成功；術後四月，與正常組比較，其他各組仍明顯低於正常組，但與模型組對比，實施例1組和陽性對照組明顯高於模型組(P＜0.05)，表明實施例1能增加血清E2的含量，作用與尼爾雌醇相似，且二者之間無顯著性差異。
表5 實施例1對去勢大鼠血清CT、TNF的影響(x±s)組別 n CT(ng/L) TNF(ng/ml)正常對照組 9 67.32±29.84*3.35±0.30模型組 9 32.21±6.82 3.60±0.32實施例1治療組9 58.56±22.26*3.12±0.24*陽性治療組 9 59.70±21.56*3.36±0.39注各組與模型組比較，*P＜0.05表5顯示，使用實施例1治療三月後，各組大鼠的血清CT水平明顯高於模型組(P＜0.05)，其血清TNF的含量低於模型組(P＜0.05)，表明實施例1可明顯抑制卵巢切除後的骨吸收增強，減少骨丟失，其抑制破骨細胞的活性作用可能強於尼爾雌醇。
實施例1有關毒理學實驗實驗8急性毒性實驗1.試驗目的觀察實施例1一次給予動物後，所產生的毒性反應和死亡情況，如藥物毒性較低，測不出LD50時，則進一步測定動物一日內的最大給藥量。
2.受試藥物實施例1流浸膏由廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院提供，批號971210，所含生藥量為4.3g生藥/ml。成人用量口服每次一支，日服二次(10ml/支)。實施例1臨床用量1支/次，2次/日，10ml/支，1.43g生藥/ml。以成人平均體重60kg計，則成人劑量為1×2×10×1.43÷60＝0.477g生藥/kg。試驗時用蒸餾水將藥物稀釋至所需濃度。
3.實驗動物NIH系小鼠，普通級，雌雄各半，體重20～22g，由廣東省衛生廳醫用動物場購入，合格證號97A017。
4.試驗方法與結果4.1 預試驗取NIH小鼠20隻，雌雄各半，體重20～22g，禁食12小時，以實施例1最大濃度(以藥物剛好通過小鼠灌胃針頭為最大濃度)3.9g生藥/ml，最大體積30ml/kg，劑量117g生藥/kg灌胃給藥一次，觀察小鼠毒性反應情況，連續七天。結果動物無一死亡，給藥後出現蜷臥，活動減少，但於給藥40分鐘後逐漸恢復，其餘未見異常反應。表明實施例1LD50未能測出(LD50＞117g/kg)。故只能測定最大給藥量。
4.2 最大給藥量的測定因受試藥物的濃度和體積的限制，一次給藥無法測出LD50，本實驗仍按上述濃度和體積給小白鼠灌胃給藥(NIH系小鼠，雌雄各半，體重20～22g，共20隻，禁食12小時後給藥)，連續兩次，每隔6小時一次，以測定動物的最大給藥量，藥後連續觀察7天。結果動物無一死亡，給藥10分鐘後，各組小鼠出現蜷臥，活動減少；40分鐘後小鼠蜷臥、活動減少逐漸恢復正常。食量正常，毛髮光亮，皮毛無疏鬆，無驚厥，無震顫，也無嗜睡，口、眼、鼻、耳無異常分泌物，大小便未見異常改變。七天後處死動物，肉眼剖檢心、肝、脾、肺、腎等重要臟器，結果均未見異常改變。全天總用藥量為234g/kg體重，相當於臨床用藥量的490.6倍。
5.結論5.1 實施例1半數致死量未能測出，其LD50＞117g/kg體重。
5.2 實施例1一日兩次給藥的最大給藥量為234g/kg體重，相當於臨床用藥量的490.6倍。
實驗結果表明，實施例1無急性毒性反應。
實驗9長期毒性試驗1.試驗目的本試驗主要觀察實施例1連續重複給藥對大白鼠所產生的毒性反應，提供毒副反應的靶器官及其恢復和發展情況，確定無毒反應劑量。
2.受試藥物同實驗8。
3.動物普通級SD系大白鼠，共140隻，隨機分為四組，每組35隻，雌雄各半，體重為90～100g。
4.主要試劑園生試劑、總膽紅素測定試劑5.試驗方法5.1 劑量和給藥方法實施例1高、中、低劑量分別為臨床劑量的80、40、20倍，按生藥量計，相當於38.16g/kg體重、19.08g/kg體重、9.54g/kg體重。藥物用蒸餾水稀釋至所需濃度，按10ml/kg體重經口灌胃給藥，每日定時給藥1次，每周根據體重調整給藥量1次，每周給藥6天。
5.2 給藥周期180天。
6.結果6.1 一般情況實施例1給藥180天和停藥後21天期間，各用藥組和對照組大白鼠均無一死亡，外觀體徵無異常改變，行為活動正常，毛色有光澤且緊帖身體，口、眼、耳、鼻均無異常分泌物。各用藥組大白鼠取食量與對照組比較，無明顯差異。糞便無粘液，無稀爛等異常改變；尿量正常，中、高劑量組大白鼠尿的顏色較對照組和低劑量組大白鼠尿的顏色稍黃，但均澄清透明。各組大白鼠均發育良好，體重呈正常增長。說明實施例1長期給藥，未見對體重增長造成不良影響。
6.2 實施例1長期給藥和停藥21天後均未造成大白鼠血液學指標的異常。
6.3 實施例1長期給藥和停藥21天後，三個劑量組大白鼠血液生化指標均未見異常改變。
6.4 大體屍解實施例1給藥90天、180天和停藥21天後，分別對各組大白鼠進行屍解觀察，肉眼所見，各組大白鼠各主要臟器大小正常，表面光滑，無腫脹，無出血點，無異常分泌物，彈性良好，無包塊，無結節等。胃腸黏膜無糜爛，無缺損等改變。
6.5 病理組織學檢查實施例1長期給藥(180天)和停藥21天後，未造成大白鼠重要器官的病理損害。
骨質疏鬆症是以骨量減少為特徵，骨組織顯微結構改變和骨折危險頻度增加的疾病。因而提高骨量，改善骨組織微結構，降低骨折率是其重要的治療措施。
實驗結果表明，實施例1具有抑制骨吸收和促進骨形成的雙重作用；能提高骨密度，改善骨生物力學狀態；能提高脾虛大鼠的血清木糖含量；對血瘀模型有較好的活血化瘀作用；有較好的鎮痛作用；實驗顯示無明顯毒副作用。這些作用為實施例1治療骨質疏鬆症提供了實驗依據。
實施例1經臨床觀察，表明其能顯著提高骨密度，緩解腰腿痛等症狀。
本發明的其它實施例經實驗表明與實施例1有相類似的藥效、毒性結果及臨床療效。
本發明不限於上述實施例。
權利要求
1.一種骨質疏鬆症治療藥物，包括以下天然藥物補骨脂、肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、吐絲子、丹參，各藥物的重量比為補骨脂100～180份，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各120～200份。
2.根據權利要求1所述的骨質疏鬆症治療藥物，其特徵在於所述各天然藥物的重量比為補骨脂120～150份，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各130～170份。
3.根據權利要求1或2所述的骨質疏鬆症治療藥物，其特徵在於所述各天然藥物的配比為補骨脂130份，肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、菟絲子、丹參各150份。
4.根據權利要求1或2所述的骨質疏鬆症治療藥物，其特徵在於所述骨質疏鬆治療藥物的劑型為口服液、口服散劑、衝劑、片劑或膠囊。
5.根據權利要求1或2所述的骨質疏鬆症治療藥物，其特徵在於黃芪選用北黃芪，淫羊藿選用制淫羊藿。
6.一種根據權利要求1所述的骨質疏鬆症治療藥物的製備方法，其特徵在於取補骨脂、肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、吐絲子、丹參各藥全量，加水煎煮3次，過濾，合併三次煎液，濃縮至相對密度，再過濾，添加常規口服液輔料及蒸餾液、蒸餾水，製成口服液。
全文摘要
本發明涉及一種骨質疏鬆症治療藥物及其生產方法，採用補骨脂、肉蓯蓉、黃芪、淫羊藿、吐絲子、丹參為主要原料，共同製成口服液、口服散劑、衝劑、片劑或膠囊劑型等口服劑型。本發明的藥物具有補腎壯骨、活血通絡、健脾益氣之功效，主治骨質疏鬆症，能緩解症狀及提高骨量和改善骨的生物力學性能，使骨的質量有不同程度的恢復，具有見效快、服用方便、骨量提高明顯、副作用小等優點。其生產方法簡單。
文檔編號A61K9/14GK1579442SQ0314016
公開日2005年2月16日 申請日期2003年8月14日 優先權日2003年8月14日
發明者劉慶思, 莊洪, 黃宏興, 邵敏 申請人:廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院