皮膚和黏膜製劑的製作方法

2023-05-15 02:13:06 2

專利名稱：皮膚和黏膜製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及基於含硝酸還原產物的硝酸水溶液的新製劑，它用於治療皮膚和黏膜病變，特別是大面積或小面積的皮膚和黏膜表層的良性的病變，皮膚和黏膜的表面層感染還涉及這種製劑的生產方法。
幾個世紀以來，皮膚缺陷、疣和類似物的「燒除」必需使用腐蝕性的製劑，特別是強酸製劑。在此情況下，皮膚病醫生的「藥箱」中或多或少的特異位置特別被水楊酸、濃硝酸和一些滷代乙酸所佔據，而很少用鹽酸。用腐蝕性製劑治療一般疼痛，而且已知很多情況下會留下或多或少的不可見疤痕。
另外，為了治療疣，曾建議使用乳酸、草酸和乙酸。但這些酸的角質層分離作用低，因此它們幾乎總是與水楊酸一起使用(German Auslegeschriftl，266，448)。
另一方面，為治療疣和其它皮膚疾病，十九世紀曾建議使用各種金屬鹽包括銅鹽如乙酸銅或硫酸銅，鉛鹽與硫酸鋅結合、硫酸銅與乙酸一起、還有銻鹽、砷鹽、鉻鹽、汞鹽、銀鹽、鋅鹽和鎘鹽。在這些鹽中，只有氯化鋅與三氯乙酸聯合-Mohs＇方法-產生了治療皮膚癌的暫時顯著性。
為局部治療皮膚和黏膜的表層病變，EP-A-26，532推薦使用6-10M的硝酸水溶液，其含有硝酸金屬鹽或亞硝酸，其含量為每ml溶液0.01-5mg，優選0.1-0.5mg。如EP-A-26，532所公開的那樣，這種製劑產生(測量皮膚變色)與濃硝酸相似的快速化學反應，但沒有這種或其它強酸的劇烈腐蝕作用、不加分辨地破壞所有組織。在此製劑作用下，實際上表層蛋白當時變性，解剖結構在生活期內被固定，而沒有損壞(乾屍化)。
對於該已知製劑剖的組成和作用，已證明通過向硝酸中加入可氧化的有機羧酸或可能向該製劑中加入這種可氧化的有機羧酸對產生該製劑特別有利。可氧化羧酸如草酸、乳酸、乙醇酸、二羥乙酸、蘋果酸和類似物與硝酸反應形成一系列產物，特別是硝酸還原產物如亞硝氣和亞硝酸，還有縮合產物如O-腈和O-亞硝醯衍生物。這種氧化方法所得到的製劑特別產生長時間內的活性改進。不清楚具體哪一種反應產物對臨床有用活性起主要作用，儘管當可用亞硝酸根測量的反應產物含量減低很多時這種活性消失。
可氧化有機羧酸與6-10M硝酸反應形成亞硝氣、二氧化碳等。因此，根據EP-A-26，532的公開，重要的是此方法產生的製劑不密封，但被貯存在一鬆散關閉的容器中。由於此原因，EP-A-26，532推薦使用不同氧化速度的羧酸的混合物，如使用丙酮酸、乳酸和草酸的混合物，以補償容器貯存和打開可能產生的亞硝酸根含量的下降。但實際上很明顯，被用於形成亞硝酸根的可氧化羧酸的反應在室溫下進行得太慢。
相應的製劑由本申請人公司以Solcoderm和Solcogyn的名稱上市，實際上已證明它們能提供有效的亞硝酸根濃度。
但該已知製劑的缺點在於可氧化羧酸的反應速度嚴重依賴於溫度。結果，隨著貯存溫度和貯存時間，亞硝酸根的濃度可能波動相當大。因此，只有儘可能準確地遵守推薦的貯存溫度和所示的使用日期，才能保證製劑的組成和作用的足夠重現性。另外，在某性情況下在硝酸根的濃度可能降低到製劑無活性的範圍。已經觀察到已變得無效的這種製劑的付作用危險增大，例如導致健康皮膚上形成潰瘍。
現在發現一種新製劑具有同等優良並且可重現的活性，而無已知製劑的缺陷，同時此製劑令人驚異地允許硝酸濃度進一步降低。另外，該新製劑的製備特別簡單，從1-5.5M硝酸水溶液和每升硝酸45-170mmol的一級C1-C5鏈烷醇製得，其組成得到簡化。後者實際上是另一優勢，因為由許多種活性物質組成的製劑在現代藥理學上一般被認為是成問題的。
本發明局部治療皮膚和黏膜表層病變的製劑包括1-5.5M硝酸水溶液、相當於每ml溶液0.1-6mg濃度的硝酸還原產物、濃度不高於第l溶液170mmol的C1-C5-烷酸。本發明的製劑一般每升溶液含有至少約5mmol C1-C5烷酸，例如45-170mmol C1-C5-烷酸。這些製劑一般優選每升溶液含至少約9mmol而不高於約90mmol的C1-C5烷酸。
在本發明的情況下，亞硝酸根濃度值是通過N.G.Bunton.N.T.Crosby和S.J.Patterson在Analyst94，585(1969)中描述的方法得到的，先與對氨基苯磺酸和1-萘胺反應，然後用光度計檢測。在此方法中，溶液中其它的硝酸還原產物如亞硝氣被轉化為亞硝酸根，然後檢測。因此，這樣得到的亞硝酸根濃度都代表硝酸還原產物總濃度。
根據本發明，該新製劑可通過1-5.5M硝酸水溶液與每升硝酸45-170mmol的一級C1-C5-鏈烷醇反應簡單地產生。驚人地發現，一有C1-C5-鏈烷醇在硝酸水溶液中甚至在室溫下或加熱下反應迅速完全，這樣就轉化為C1-C5烷酸和二氧化碳，同時形成一系列有效的硝酸還原產物。反應優選溫度為約20-60℃。
優選使用C2-C5-鏈烷醇如乙醇或1-丙醇。特別優選乙醇，它在室溫下簡單地與硝酸混合即可反應完全，並被轉化為角質層分離活性的乙酸(部分轉化為二氧化碳)。因此，本發明的製劑中的烷酸優選為C2-C5-烷酸，特別是乙酸。


圖1-5用曲線圖形式表示本發明製劑和對照製劑在一系列實驗中所得結果。
圖1表示已知製劑Solcoderm的亞硝酸根濃度對貯存溫度和貯存時間的函數曲線圖。為了確定此函數，起始混合物每ml溶液含625.2mg的65%硝酸、41.5mg的98%乙酸、57.4mg二水合草酸、4.5mg乳酸和48μg三水硝酸銅(Ⅱ)的市售製劑，在不同溫度下在密封玻璃安瓿中貯存數目，定期測定亞硝酸根的濃度。如圖1中結果所示亞硝酸根濃度可隨著溫度產生相當大的波動，這使得其安全應用困難更大。特別在貯存溫度低至5℃時，還觀察到亞硝酸根含量減低並因此損失活性。另一方面，在30℃和45℃下，觀察到亞硝酸根濃度突增，這會由於加速羧酸的反應而影響貯存壽命。
與已知製劑相反，本發明的製劑由於反應快速完全，其組成明確並可重現，從而極大地消除了活性的不確定性。
但是讓製劑敞開，無論本發明的製劑還是已知製劑都會導致幾小時內硝酸還原產物含量明顯降低，這是亞硝氣散發的結果。因此，本發明的製劑優選貯存在氣體密封容器中如玻璃安瓿，或必要時在使用前短時間內製備。
本發明的製劑貯存在氣密容器中，優選密封的安瓿中時，其組成和作用恆定並基本是非溫度依賴性的，並且基本上其貯存期是無期限的。另外，與已知製劑相反，在長期貯存中不再繼續生成二氧化碳和亞硝氣，這一事實對氣密貯存幫助很大。相應地，貯存中形成的過高壓力的危險在本發明製劑中被減低至基本為零，這種危險在極端情況下，是貯存溫度高時導致安瓿突然破裂或溶液從開口處爆炸性地噴出。
氣密製劑的生產原則上可先如上所述生產該製劑然後將此製劑以氣密方式密封在適當的容器中。優選步驟為在低於反應溫度的溫度下將1-5.5M硝酸與一級C1-C5-鏈烷醇混合，優選至少低於反應溫度10℃(如在約0℃)，將混合物以氣密方式密封在適當容器中，優選為安瓿，然後將混合物加熱至反應溫度或以上。如果使用乙醇，組分優選在不高於10℃下混合，如0-5℃，然後混合物在優選約20-40℃溫度下反應。據研究，一級C1-C5-鏈烷醇與硝酸反應生成的硝酸還原產物的濃度基本不依賴於硝酸的濃度，如實施例1和2所表明。但它嚴重依賴於所用鏈烷醇的濃度，發現了鏈烷醇濃度和測得亞硝酸根濃度之間的非線性關係。如圖2和乙醇的實施例1和2所示，在乙醇濃度低於45mmol/l時只有少量硝酸還原產物形成，測得的亞硝酸根濃度一般明顯低於0.1mg/ml，後者代表治療活性的開始。如果乙醇濃度繼續升高，測得的亞硝酸根濃度都突然升高。這種效果的原因還不清楚。但它提供了通過C1-C5-鏈烷醇與硝酸的反應(如果所用鏈烷醇濃度至少為45mmol)得到有效製劑的可能性，它還提供了另一可能性，即如果鏈烷醇嘗試繼續增加，用亞硝氣使溶液過飽和。
在實施例3描述的頭髮實驗中，本發明的製劑被證明與用6.4M硝酸按相同方法產生的製劑以及市售製劑Solcoderm有相當的效果。在每種情況下，頭髮迅速變為黃色並抑制了頭髮分解，而加入鏈烷醇不足或用純硝酸時則導致頭髮分解。因此，本發明驚異地並與EP-A-26，532相反，使得在明顯低於6mol/l的硝酸濃度下還原，同時保持活性。
為了更精確地確認製劑活性的區別，實施例4中描述的胃蛋白酶實驗被用作乾屍化的第一步反應的模型。圖3表示作為時間函數的樣品1-6在胃蛋白酶實驗中測得的光密度(OD)。曲線的「斜率b」用來測定活性模型(變色的速度)。圖4表示在胃蛋白酶實驗中斜率b對乙醇濃度(5.4M和6.4M硝酸的情況下)的依賴性。圖5表示在胃蛋白酶實驗中斜率b對硝酸濃度的依賴性[用恆定的乙醇濃度60mmol/l即0.35%(體積)]。
用濃度至少為45mmol/l的鏈烷醇產生的製劑在胃蛋白酶實驗中也被證明很有效。但結果驚異地表明變色的速度在胃蛋白酶實驗中不但隨著硝酸濃度增加，而且隨著鏈烷醇的濃度增加。隨著這一發現，硝酸濃度降低引起的變色速度的降低很大程度上可用提高鏈烷醇濃度(如需要)來補償，導致硝酸還原產物濃度的相應提高(參見圖2)。
本發明的製備方法使鏈烷醇反應完全，形成相應的羧酸和有時(特別是當使用甲醇或乙醇時)還產生二氧化碳。
鏈烷醇的使用濃度以不高於約170mmol/l為好，優選不超過約130mmol/l。這意味著如果在氣密下製備此製劑可避免過高的壓力。從胃蛋白酶實驗的結果看，一般鏈烷醇的使用濃度優選為60-90mmol/l。
相應地，本發明的製劑含有濃度不超過170mmol/l的C1-C5-烷酸，優選為約9-90mmol/l，硝酸還原產物的濃度(以亞硝酸根測定)較好為每ml約0.1到約6，優選為1-5，特別優選為約2-4mg亞硝酸根。
為了促進亞硝氣形式的硝酸還原產物的形成，在氣密容器中產生和/或貯存的情況下，容器的大小優選液體體積或容器的總容積的比例不超過1∶2，特別優選約1∶10到1∶5。本發明的製劑例如可在1ml的玻璃安瓿中產生或貯存，每個安瓿中的量為約0.1-0.2ml，這一般足夠用於一次治療。這幾乎可以完全免除多餘溶液的廢棄和可能施用變為無效的溶液的危險。
如實驗例5中皮膚實驗所示，本發明的製劑甚至在上限硝酸濃度下也無任何付作用，除了輕微的發紅和非常輕微的水泡，而這些也會在幾小時內消失。甚至由於處理不當引起的硝酸還原產物的含量完全減低時，由於硝酸濃度低，付作用也會保持相當小。用6.4mol/l濃度的硝酸用類似方法產生的製劑其付作用略大，但已證明比市售製劑Sodcoderm好。但在兩個對比製劑的情況下，存在相對嚴重的付作用的危險，如開放性創傷或潰瘍，這會在由於處理不當時發生。所以，根據本發明，所用硝酸濃度以不超過5.5mol/l較好。
這樣，本發明的製劑使得其可能有與已知製劑大約相同的良好活性而應用相當安全，因為付作用發生少，組成明確而活必存在，甚至在處理不當時付作用的危險還保持相當低。
本發明的製劑可用於化妝品和藥物，並適合於EP-A-26，352所示的所有施用部位和適應症。它們特別被指明用於局部治療表層良性皮膚病變，例如疣(如普通疣和蹠疣)、良性痣、皮脂溢的和光化性的角化病，以及黏膜良性病變，例如良性頸損害如部分異位(如tetropium、增殖性紅斑和假糜爛)、變形區、納博特氏囊腫、子宮頸管息肉、溼疣和手術後肉芽腫。
因為它們的付作用危險非常小，本發明的製劑不象EP-A-26，532中描述的製劑，其不但適合於治療皮膚和黏膜的表層小面積病變，而且還適合於治療皮膚和黏膜的偏平損害和感染、表層大面積病變，特別還合適於治療皮膚和黏膜的真菌疾病，例如腳真菌病和甲癬。
本發明的所有製劑原則上都適用於上述適應症。但治療皮膚和黏膜的真菌感染和表層大面積偏平損害，一般優選使用硝酸濃度為1-4mol/l的製劑。另外，治療增生，即皮膚和黏膜的突起的區域明確的病變，優選使用硝酸濃度為4-5.5mol/l的製劑。
正如EP-A-26，532中所描述的，本發明的製劑可用於在組織的病理改變區上和/或裡局部施用或其它形式的局部治療。施加器可能並優選使用小尖木棒或薄的多孔塑料棒或刷子，以治療比較大的面積。
在下列實施例中更詳細地說明本發明。室溫均指22℃。亞硝酸根濃度均用Analyst94，585(1969)中描述的方法測定，即與對氨基苯磺酸及1-萘胺反應，該嘗試均與硝酸還原產物總濃度相關，後者可用亞硝酸根衡量。
實施例11份(體積)70%的硝酸(15.7mol/l)和1.907份(體積)的水用冰浴在不同容器中預冷至低於5℃。然後將冷硝酸在攪拌和冷卻下慢慢加入到冷水中，在冰浴中繼續混合該溶液(5.4M硝酸)15分鐘。然後該溶液與量為每l溶液60mmol的乙醇混合併攪拌。用安瓿填充機在每個1ml的有斷裂環DIN安瓿中裝入0.2ml此溶液，並立刻封口。在加入乙醇過程中及整個填充過程中溶液在冰浴中保持在0-2℃。樣品在0-2℃保持24小時，沒有觀察到反應，因此此方法還能保證大批量生產。
讓封好的安瓿升至室溫，乙醇開始自動並完全地反應，生成乙酸和亞硝氣。24小時後用高壓液相色譜法測定乙醇的殘留量，每個樣品中都明顯低於100ppm。生成的安瓿製劑由硝酸水溶液、硝酸還原產物組成，其酸當量為5.50mol/l，並且硝酸還原產物的濃度(用亞硝酸根測定)為每ml溶液1.41mg亞硝酸根。
用類似方法但用不同濃度的乙醇和硝酸製得表1中所列製劑，並測得表中所示的濃度。
表1亞硝酸根乙醇濃度硝酸濃度濃度(mmol/l)(mol/l)(mg/ml)435.40.08436.40.09604.91.61605.41.41606.41.75865.43.201295.45.331296.45.14實施例2與實施例1相似，用1份(體積)70%的硝酸和1.453份(體積)的水製備6.4M硝酸溶液，並向此溶液中加入量為每l溶液60mmol的乙醇，將混合物分裝在安瓿中並升溫至室溫。形成的製劑其酸的當量為6.64mol/l，用亞硝酸根測定的硝酸還原產物的濃度為每ml溶液1.75mg亞硝酸根。
在精確測定範圍內，發現硝酸還原產物的濃度基本與硝酸的濃度無關(參見實施例1和表1)，這是高度過量的硝酸和乙醇完全氧化的基礎上所希望的。
用上述相同方法，但用不同濃度的乙醇(0-130mol/l範圍內)進一步製備製劑，並測定了每個製劑中以亞硝酸根衡量的硝酸還原產物濃度。所測亞硝酸根濃度作為乙醇濃度的函數以曲線形式示於圖2中。為了對比，還畫出了理論上可能的亞硝酸根濃度，這是在假定溶液中可以亞硝酸根測定的硝酸還原產物完全由硝酸與乙醇的反應中產生的情況下計算得到。
圖2表明測出的亞硝酸根濃度不隨著乙醇濃度上升而線性增長。在乙醇濃度低於45mmol/l時，只發現少量的硝酸還原產物;測得的亞硝酸根濃度明顯低於每ml0.1mg亞硝酸根，後者代表治療活性的開始。但乙醇濃度高於45mmol/l時，隨著乙醇濃度升高亞硝酸根濃度急劇升高，這表示亞硝氣在溶液中過飽和。
實施例3(頭髮實驗)與實施例1的方法相似，表2中所示濃度的硝酸和乙醇製備一系列製劑並檢查它們對人頭髮的作用。為此目的，淡黃色人發用1%(體積)丙酮水溶液洗滌再用水洗並乾燥。將用這種方法除去油汙的頭髮切細。然後每1ml製劑中加入10mg頭髮，用肉眼觀察顏色變黃和分解來評價其作用。顏色變化表示與製劑產生了化學反應，從而組織喪失其生命力但基本保持其解剖結構，除非發生分解作用，為了比較，同樣測試了市售製劑Solcoderm。
表2(人發)硝酸濃度乙醇濃度開始變黃分解(mol/l)(mmol/l)6.402h18h後5.408h18h後6.4262min18h後5.4262min18h後6.4602min不5.4602min不4.9602min不5.4862min不Solcoderm2min不設有加入乙醇的樣品在長時間後才變黃，然後頭髮分解，硝酸濃度降低也延遲變黃。使用6.4M或5.4M硝酸中每l26mmol的乙醇，結果迅速變黃，但最終也導致頭髮分解。用60或86mmol/l濃度的乙醇在所有測試的硝酸濃度下製得的樣品，頭髮迅速變黃而無分解。沒有觀察到樣品黃化作用的速度差別;從這一角度看證明頭髮試驗太不敏感。
因此，乙醇與硝酸反應產物的硝酸還原產物使與組織的反應加速很多，結果使作用明顯改進。另外，硝酸還原產物高於某一臨界值時，可抑制組織的分解，即在足量硝酸還原產物存在下能保證解剖結構的固定化(乾屍化)並降低付作用的危險。
實施例4(胃蛋白酶實驗)
與實施例1類似，用表3及圖4和5所示濃度的硝酸和乙醇製備一系列製劑，然後測試它們對胃蛋白酶溶液的作用。胃蛋白酶試驗被發展作為乾屍化第一步反應(與伯氨基和仲氨基反應，並由溶液變色來顯示)的模型，它使得比頭髮實驗中的變黃更精確地對此作用定量。
為進行胃蛋白酶實驗，在打開安瓿後正好1分鐘後向每1mg胃蛋白酶在1ml水中的溶液中加入100μl樣品。以後的反應通過用分光光度計測定混合物的時間依賴性變色來監檢。所測參數是波長438nm下從胃蛋白酶溶液中加樣後300秒內的光密度。在加樣後20秒後進行第一次測定。所測得光密度用方程式(1)評價(每個樣品為一曲線)y=a+bx+cx2(1)其中y為光密度，x為時間(秒)，計算出參數a、b、和c。變色的速度基本由參數b-在本發明場合下稱為「斜率b」-決定，因此它被作為此作用模型的量度。
樣品1-10的斜率b值示於表3中。為了對比，在胃蛋白酶實驗中還測試了市售製劑Solcoderm。
表3(胃蛋白酶實驗)樣品號硝酸濃度乙醇濃度斜率b(mol/l)(mmol/l)16.40024.9600.21235.9600.34446.4510.40455.4860.41166.4600.44373.41290.22384.41290.34095.41290.514106.41290.705Solcoderm0.316圖3表示所測樣品1-6作為時間函數的光密度(OD)曲線。
樣品1的結果證實了不加乙醇的製劑無效。樣品2-6顯示良好作用，並隨著硝酸濃度以及乙醇濃度的增加而明顯增加。
圖4表示用各種乙醇濃度和恆定的硝酸濃度5.4或6.4mol/l製得的製劑的斜率b值的曲線圖。從圖4可明顯看出，斜主b的值大致與所用乙醇濃度成比例。用5.4M硝酸得到的製劑，其曲線斜度較小;但這種結果可通過相應地提高乙醇濃度來彌補。
圖5表示用恆定乙醇濃度60mmol/l和各種4.4-6.4M範圍內的硝酸濃度製得製劑的斜率b值的曲線圖。從圖中可看出，在此濃度範圍內斜率b值隨著硝酸濃度上升大致呈直線增加。
實施例5(人體皮膚實驗)
為了估價在正常人皮膚上的付作用，將用硝酸(分別為6.4和5.4mol/l)和乙醇(分別為60和86mmol/l)按實施例1方法製得的兩種製劑、(作為對比)不加乙醇的相應硝酸或更大稀釋度的硝酸、及市售製劑Solcoderm施於前臂的下表面並作用5分鐘。硝酸濃度為5.4mmol/l或更低的樣品用量為40μl，其它樣品用量為20μl。觀察36小時內的作用並得到表4所示的圖。
表4
儘管施用2倍體積，5.4M硝酸比6.4M硝酸付作用小，特別是它不形成開放性創傷。隨著硝酸濃度進一步降低，還觀察到付作用繼續降低。特別是2.4M和1.4M碳酸不再產生水泡。Solcoderm產生與5.4M硝酸相似的反應。加入乙醇製得的兩個製劑與相應的純硝酸溶液相比，付作用明顯低，另外此付作用迅速消退;也就是說，這些製劑中與乙醇反應產生的硝酸還原產物將硝酸對正常組織的付作用抑制在實用範圍。另外，證明兩種製劑都顯著優於Solcoderm。
從5.4M硝酸和86mmol/l濃度的乙醇製得的製劑與純2.4M硝酸具有相似的低付作用。這使得應用安全，因為甚至在由於處理不當時硝酸還原產物降低或完全消失的情況下付作用還保持比較低。打開安瓿24小時後再將樣品(20μl)施於皮膚進行對照實驗。同樣觀察其在30小時內的作用，它引起帶棕色點的嚴重發紅並形成保持閉合的水泡。因為隨著硝酸濃度減低付作用還進一步減低，所以這種製劑也適合於治療皮膚和黏膜的表層大面積疾病。
實施例6與實施例1類似，用5.4mol/l濃度的硝酸和86mmol/l濃度的乙醇製得的製劑(測得亞硝酸含量3.20mg/ml)，檢查其從安瓿打開後30分鐘內在胃蛋白酶實驗中的作用。胃蛋白酶實驗按實施例4所述方法進行。結果列於表5。
表5打開後的時間斜率b斜率b佔原始(分)值的%數0.30.50610010.4839530.3927760.28957100.23947230.22144300.16733540.10220安瓿打開後幾分鐘到一小時內，優選半小時內施用此製劑可保證治療活性而基本無付作用。
實施例7用表6所示濃度的硝酸和乙醇如實施例1製備數種製劑，將安瓿封口後，在22℃貯存。在不同貯存時間後，用氣相色譜分析法測定製劑的乙酸含量。用酶學方法的對照檢測(Boehringer的乙酸實驗工具)結果與精確測量的範圍一致。
表6乙醇濃度硝酸濃度乙酸濃度在22℃下(mmol/l)(mol/l)(mg/ml)貯存時間435.40.5515月436.40.9319月604.90.6121天604.90.5916月605.40.9321天605.40.9016月606.41.6327天606.41.5616月865.41.5723小時865.41.5527天865.41.6313月1295.42.9214月1296.44.6321月結果證實在長期貯存後乙酸濃度保持恆定，並且所用乙醇濃度增加時乙酸濃度提高。但所測乙酸濃度低於所用乙醇濃度。用氯化鋇實驗檢測到二氧化碳是乙醇的另一反應產物。在整個反應溶液中，既沒有檢測到乙醇也沒有檢測到其它反應產物;換句話說，乙醇完全轉化為乙酸和二氧人碳。
實施例8與實施例1類似，5.4M硝酸與86mnol/l溶液的乙醇混合，將溶液分裝在一系列安瓿中。將安瓿中的溶液在各種溫度下貯存14天或一個月，然後檢查它們的乙酸濃度和硝酸還原產物濃度。結果列於表7中。結果證實所檢查貯存溫度範圍對製劑的組成無明顯影響。
表7亞硝酸根貯存條件濃度乙酸濃度(mg/ml)(mg/ml)14天22℃2.351.4230℃2.551.4240℃2.321.3950℃2.471.421月22℃2.371.4330℃2.221.4440℃2.271.4250℃2.811.40實施例9(治療普通疣和蹠疣)為了進行治療普通疣和蹠疣的臨床研究，用實施例1中描述的方法製備下列製劑
表8製劑乙醇濃度硝酸濃度(mmol/l)(mol/l)A605.4B865.4C1294.4用A-C中一種製劑治療總共26個疣(22個病人)，如果病人有兩個相似類型的疣，其中一個用Solcoderm治療以比較。用一小的薄的多孔塑料棒施加製劑，用小塑料棒將製劑逐滴分布在損害處，通過輕刺使其吸收在損害處。繼續這種治療直到患處變色為均一的黃色和/或到感覺到輕微的燒灼。製劑A-C均在約3-5分鐘內變色，Solcoderm在約10分鐘內變色。類似地，用製劑A-C發生熱感或刺痛(在約5-10分鐘)比用Solcoderm(在15-30分鐘內)快。因此用製劑A-C治療的時間明顯比用Solcoderm短。間隔4-8天重複治療一次或多次，直到損害完全痊癒。結果列於表9中。
表92次治療後2次治療後適應症/製劑總例數一次治療後痊癒沒完全治癒普通疣B4-22C7322蹠疣A5221B6132C4112
表9中所列例子中，2次治療後損害還沒有完全治癒，一個普通疣用製劑B治療第三次後痊癒，一個蹠疣用製劑B治療第三次後痊癒，另一個治療第4次後痊癒，一個蹠疣用製劑C治療第3次後完全癒合。其它例子在寫入此中間報告時還在治療中。
用對比製劑治療四個普通疣和兩個蹠疣，其中2個普通疣和一個蹠疣在一次治療後痊癒，2個普通疣和一個蹠疣在第二次治療後痊癒。
實施例10(治療腳真菌病)在一研究例中，用本發明製劑治療雙腳有腳真菌感染的病人，用實施例1類似方法從5.4M硝酸和每升溶液86mmol的乙醇製備該製劑。
一隻腳在第4和第5腳趾間有嚴重真菌感染，有暫時脫皮和嚴重發紅。當分開腳趾時殘留的薄皮脫落，引起出血。在用oxiconazole製劑(Oceral，Roche)治療不成功後，用約100μl本發明的製劑施於患處，病人感覺到皮膚損壞區域有幾秒鐘的短時刺痛灼燒感，皮膚損壞區周圍有限區域內變色為棕色。大部分其它感染皮膚和周圍的健康皮膚不變色或僅有輕微變黃。治療8小時後，治療皮膚還有嚴重發紅，病人還感覺有輕微的壓痛，但松馳時不再痛。患處隨後用傷口癒合軟膏(Solcoseryl軟膏，Solco Basel AG)治療過夜。3天後，典型腳真菌皮膚損害已經消失;皮膚表面硬且緊。7天後，感染區徹底痊癒，並且不復發。
另一隻腳有輕度真菌感染而無皮膚脫落。用本發明的製劑治療感染區，無痛感。7天後，患區徹底痊癒，並且同樣不復發。
實施例11(治療甲癬)在另一研究病例中，有甲癬的病人(右手指甲環、中部和外端均受感染)用本發明的製劑治療，後者用實施例1所述方法從3.4M硝酸和129mol/l乙醇製得。治療前，用amorohfine製劑(Locergl-Lack，Rocbe)治療，沒有觀察到真菌感染減小和指甲生長。
將本發明的製劑施於感染指甲上，幾分鐘後明顯變色為黃一棕色。病人無痛感，只是在一點有持續約3分鐘的輕度燒灼感，該從指甲床到正常皮膚過渡區皮膚有小損傷。3天後，特別嚴重感染的部分指甲破裂。每7天重複一次用本發明製劑的治療。只14天後，觀察到指甲有明顯改善(毀壞的程度減輕了)。2個月後，觀察到指甲生長;但與指甲床相連的指甲後部仍有感染，因為指甲床本身有真菌感染。因此，本發明製劑適合於治療表面甲癬病;但在指甲床感染的病例中，治療必須與口服抗真菌劑一起進行。
權利要求
1.基於含硝酸還原產物的硝酸水溶液、用於局部治療皮膚和黏膜表層病變及皮膚和治黏膜表層感染的製劑，其特徵在於該製劑包含1-5.5M硝酸水溶液、濃度相當於每毫升溶液中含0.1-6mg亞硝酸根的硝酸還原產物、和濃度不超過每升溶液170mmol的C1-C5烷酸。
2.權利要求1的治療皮膚和黏膜增生病變的製劑，其特徵在於其硝酸濃度為4-4.5M。
3.權利要求1的治療皮膚和黏膜真菌疾病的製劑，其特徵在於其硝酸濃度為1-4M。
4.權利要求1-3中任一項的製劑，其特徵在於硝酸還原產物的濃度相當於每ml溶液中1-5mg亞硝酸根。
5.權利要求4的製劑，其特徵在於硝酸還原產物的濃度相當於每毫升溶液中2-4mg亞硝酸根。
6.權利要求1-5中任一項的製劑，其特徵在於C1-C5-烷酸的濃度至少為每升5mmol。
7.權利要求6的製劑，其特徵在於C1-C5-烷酸的濃度為每升9-90mmol。
8.權利要求1-7中任一項的製劑，其特徵在於它所含C1-C5-烷酸為乙酸。
9.權利要求1-8中任一項的製劑，其特徵在於它存在於不透氣的容器中，優選在密封的安瓿中。
10.權利要求9的製劑，其特徵在於液體體積與容器總容積的比例不超過1∶2，優選1∶10到1∶5。
11.製備權利要求1-10的製劑的方法，其特徵在於1-5.5M硝酸水溶液與量為生升硝酸45-17-mmol的一級C1-C5-鏈烷醇反應。
12.權利要求11的方法，其特徵在於每升硝酸用60-90mmol的一級C1-C5-鏈烷醇。
13.權利要求11或12的方法，其特徵在於乙醇用作一級C1-C5-鏈烷醇。
14.權利要求11-13中任一項的方法，其特徵在於硝酸和一級C1-C5-鏈烷醇在低於反應溫度的溫度下混合，混合物在不透氣的容器中，優選在密封的安瓿中，將混合物加熱至反應溫度或以上。
15.權利要求14的方法，其特徵在於硝酸與乙醇在溫度不超過10℃下混合，將在氣密容器中的混合物加熱至20-40℃，優選室溫。
全文摘要
通過1－5.5M硝酸與每升硝酸45－170mmol的一級C
文檔編號A61K33/30GK1103291SQ9410672
公開日1995年6月7日 申請日期1994年6月22日 優先權日1993年6月23日
發明者M·格拉博, C·斯塔利, R·邁耶, R·格勞澤, M·韋納 申請人:索爾科巴塞爾公司