一種古倫賓的提取方法

2023-05-20 12:46:01 3

專利名稱：一種古倫賓的提取方法
技術領域：
本發明屬於中藥有效成分提取分離技術，涉及一種古倫賓的提取方法。
背景技術：
金果欖為防己科植物青牛膽Tinospara sagittata(Oliv. )Gagncp.或金果欖 Tinosporacapillipes Gagnep.的乾燥塊根。青牛膽分布於陝西、長江流域各省至兩廣、西南各省區。金果欖分布於湖南、湖北、廣西、廣東、四川、貴州、雲南等省區。塊根含二萜類苦味素古倫賓(青牛膽苦素)、掌葉防己鹼，又含呋喃二萜苷——金果欖苷(異非洲防己苦素 4-β -D-葡萄糖苷)。05版《藥典》是以鹽酸巴馬汀為質量指標，而鹽酸巴馬汀在金果欖中的含量較少，且不是金果欖的特徵性成分，因此2010年版藥典將含量較高的古倫賓作為金果欖的指標性成分。古倫賓(Columbin)，又名青牛膽苦素、咖倫賓、黃藤內酯，是從金果欖中分離得到的二萜類成分。分子式C2tlH22O6，分子量358. 38，極苦的針狀結晶(甲醇)，mp. 195°C。幾乎不溶於水，Ig溶於30ml丙酮、50ml乙酸乙酯、75ml甲醇,溶於氯仿和二氯甲燒。藥理研究表明古倫賓具有顯著的抗炎活性，並且呈現量效關係能顯著的通過抑制結腸囊泡中的細胞再生來抑制氧化偶氮甲烷誘導的大鼠結腸癌；能夠抑制眼鏡蛇毒酸性磷脂酶A2催化的血紅細胞殼的水解作用；能夠抑制布氏錐蟲血流中膽固醇的攝入；能夠影響肝藥代謝酶來調節由環己巴比妥鈉或烏拉坦和α-氯醛糖混合物誘導的大鼠睡眠時間。口服古倫賓能夠劑量依賴的降低肝_7-alkoxycoumarin-0_dealkylas (ACD) ,ACD反映了 P450的活性。任平等還通過實驗發現咖倫賓具有酶促動力學代謝特性。目前，古倫賓的提取技術主要是乙醚索氏提取，該方法所得產品純度低，溶劑毒性較大。李泓波採用甲醇回流提取、溶劑萃取， 反覆常壓、加壓、正相及反相矽膠柱層析分離；史琪榮採用95%乙醇回流提取、氯仿和正丁醇萃取、反覆娃膠柱層析(幹法)、0DS-C18柱層析、半製備液相、PharmadexLH-20等色譜技術、重結晶等純化方法得到古倫賓。上述兩種工藝存在提取率低，工藝複雜、有機溶劑用量大、環境汙染嚴重、生產周期短等不足。

發明內容
本發明的目的在於提供一種古倫賓的提取方法，採用超臨界CO2提取、大孔樹脂柱層析、重結晶等步驟，從金果欖中提取分離純化得到較高純度的古倫賓，該方法提取的古倫賓純度高、環境汙染少、得率高、成本低，可擴大規模化生產。本發明是通過以下技術方案實現的一種古倫賓的提取方法，其特徵在於將金果欖塊根粉碎成粗粉，投入到超臨界CO2 萃取釜中，再加入適量有機溶劑作為夾帶劑，通入CO2作為提取介質，在萃取壓力15-30MPa， 溫度30-45°C條件下進行萃取，經1-4小時萃取後解析，解析壓力5-10MPa，溫度50-60°C， 收集萃取物，將萃取物加入到大孔吸附樹脂柱中，流速I. 0-2. OBV/h，先用2-5倍柱體積的水洗,棄去水洗液,再用3-6倍柱體積的20-30%乙醇洗脫，最後用40-100%乙醇洗脫，收集40-100%乙醇洗脫液，濃縮至小體積，結晶，乙醇重結晶。所述超臨界0)2萃取步驟中夾帶劑可選體積百分比為70-100%的丙酮、甲醇溶液， 加入量為藥材量的5-20%。所述超臨界CO2萃取步驟中CO2流速為15_30L/h。所述大孔吸附樹脂可選ADS-7、ADS-8、D101、AB-8、HPD100中的一種。本發明與現有技術比較，提取效率高、產品純度高、對環境汙染較少，製備量大，可擴大規模化生產。
具體實施例方式下面將結合具體實施例對本發明作進一步說明，下列實施例旨在舉例描述本發明，而不是以任何方式限制本發明。實施例I :將金果欖塊根藥材粉碎成20目粗粉，取2kg投入超臨界萃取罐內，加入體積百分比為80%的丙酮溶液作為夾帶劑，加入量為O. 12kg(原料重量的6% );在萃取壓力18. 5MPa、萃取溫度32°C、CO2流量18L/h的條件下萃取I小時；控制解析罐的壓力為
5.4MPa，溫度56°C，分離得萃取物；用I倍量60°C熱水溶解萃取物，上ADS-7大孔吸附樹脂柱,吸附流速I. 0-2. OBV/h,先用2倍柱體積的水洗，棄去水洗液；再用4倍柱體積50%乙醇洗脫，最後用90%乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液，將上述洗脫液減壓濃縮至小體積，結晶，再用乙醇重結晶2次，冷凍乾燥得產品20. 8g。經HPLC分析，古倫賓純度為98. 6%。實施例2 將金果欖塊根藥材粉碎成20目粗粉，取5kg投入超臨界萃取罐內，加入體積百分比為90%的甲醇溶液作為夾帶劑，加入量為O. 12kg(原料重量的10% );在萃取壓力22. 3MPa、萃取溫度45°C、CO2流量15L/h的條件下萃取3小時控制解析罐的壓力為
8.7MPa，溫度50°C，分離得萃取物；用I倍量60°C熱水溶解萃取物，上DlOl大孔吸附樹脂柱,吸附流速I. 0-2. OBV/h,先用3倍柱體積的水洗，棄去水洗液；再用6倍柱體積50%乙醇洗脫，最後用90%乙醇洗脫，收集90 %乙醇洗脫液，將上述洗脫液減壓濃縮至小體積，結晶，再用乙醇重結晶2次，冷凍乾燥得產品51. 2g。經HPLC分析，古倫賓純度為98. 0%。實施例3:將金果欖塊根藥材粉碎成20目粗粉，取5kg投入超臨界萃取罐內，加入體積百分比100%的丙酮溶液作為夾帶劑，加入量為O. 12kg (原料重量的12%);在萃取壓力27MPa、 萃取溫度35°C、CO2流量23L/h的條件下萃取2小時；控制解析罐的壓力為6. 3MPa，溫度 52°C，分離得萃取物用I倍量60°C熱水溶解萃取物，上AB-8大孔吸附樹脂柱，吸附流速
I.0-2. OBV/h,先用5倍柱體積的水洗，棄去水洗液；再用3倍柱體積50%乙醇洗脫，最後用 90%乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液，將上述洗脫液減壓濃縮至小體積，結晶，再用乙醇重結晶2次，冷凍乾燥得產品48. 6g。經HPLC分析，古倫賓純度為98. 4%。實施例4:將金果欖塊根藥材粉碎成20目粗粉，取20kg投入超臨界萃取罐內，加入體積百分比70%的丙酮溶液作為夾帶劑，加入量為O. 12kg(原料重量的18% );在萃取壓力15MPa、 萃取溫度43°C、CO2流量27L/h的條件下萃取4小時控制解析罐的壓力為5. OMPa，溫度60°C，分離得萃取物；用I倍量60°C熱水溶解萃取物，上ADS-8大孔吸附樹脂柱，吸附流速
I.0-2. OBV/h,先用6倍柱體積的水洗，棄去水洗液；再用5倍柱體積50%乙醇洗脫，最後用 90 %乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液，將上述洗脫液減壓濃縮至小體積，結晶，再用乙醇重結晶2次，冷凍乾燥得產品205g。經HPLC分析，古倫賓純度為99. I %。實施例5 將金果欖塊根藥材粉碎成20目粗粉，取20kg投入超臨界萃取罐內，加入體積百分比80%的甲醇溶液作為夾帶劑，加入量為O. 12kg(原料重量的20% );在萃取壓力 30. 5MPa、萃取溫度381、0)2流量20L/h的條件下萃取3小時；控制解析罐的壓力為lOMPa， 溫度54°C，分離得萃取物用I倍量60°C熱水溶解萃取物，上DlOl大孔吸附樹脂柱，吸附流速I. 0-2. OBV/h,先用3倍柱體積的水洗，棄去水洗液；再用4倍柱體積50%乙醇洗脫，最後用90 %乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液，將上述洗脫液減壓濃縮至小體積，結晶，再用乙醇重結晶2次，冷凍乾燥得產品198. 5g。經HPLC分析，古倫賓純度為98. 8%。
權利要求
1.一種古倫賓的提取方法，其特徵在於將金果欖塊根粉碎成粗粉，投入到超臨界CO2萃取釜中，再加入適量有機溶劑作為夾帶劑，通入CO2作為提取介質，在萃取壓力15-30MPa， 溫度30-45°C條件下進行萃取，經1-4小時萃取後解析，解析壓力5-10MPa，溫度50-60°C， 收集萃取物，將萃取物加入到大孔吸附樹脂柱中，流速I. 0-2. OBV/h，先用2-5倍柱體積的水洗,棄去水洗液,再用3-6倍柱體積的20-30%乙醇洗脫，最後用40-100%乙醇洗脫，收集 40-100%乙醇洗脫液，濃縮至小體積，結晶，乙醇重結晶。
2.根據權利要求I所述古倫賓的提取方法，其特徵在於，所述超臨界CO2萃取步驟中夾帶劑可選體積百分比為70-100%的丙酮、甲醇、乙醇溶液，加入量為藥材量的5-20%。
3.根據權利要求I所述古倫賓的提取方法，其特徵在於，所述超臨界CO2萃取步驟中 CO2 流速為 15-30L/h。
4.根據權利要求I所述古倫賓的提取方法，其特徵在於，所述大孔吸附樹脂可選 ADS-7、ADS-8、D101、AB-8、HPD100 中的一種。
全文摘要
本發明公開一種古倫賓的提取方法。本發明包括應用超臨界二氧化碳萃取和大孔樹脂分離純化聯合技術，以丙酮、乙醇或甲醇為夾帶劑，CO2為介質從金果欖中提取有效成分古倫賓；所得萃取物再通過大孔樹脂柱層析及重結晶等步驟獲得高純度提取物。與現有的有機溶劑提取方法相比，具有工藝簡單、時間短、純度高、對環境汙染相對較輕等優點。
文檔編號C07D493/18GK102603764SQ201110026209
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月25日 優先權日2011年1月25日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司